实验 19 药物抗惊厥作用Experiment 19. The anti-convulsion function of drugs

药物对抗电刺激引起小鼠惊厥的作用

唐法娣（ fadit@zju.edu.cn)

浙江大学医学院2009.9

观察抗癜痫药 sodium phenobarbital （苯巴比妥钠）预防性对抗电刺激引起的小鼠惊厥作用。

实验目的

电惊厥法是利用电流刺激动物诱发惊厥，并利用这种实验模型来筛选抗癫痫大发作的药物。目前最常用的方法是最大电休克发作实验 (maximal electroshock seizure

test,MES) 。一般认为， MES 是癫痫大发作的实验模型，受试化合物若能明显对抗 MES ，则该化合物有可能发展成为在临床上治疗癫痫大发作有效的药物。

实验原理

1. 苯巴比妥能选择性地抑制癫痫灶中的异常神经元、防止或减少其过度放电，抑制病灶的点燃和传播。这种抑制作用与脑内抑制性递质 γ- 氨基丁酸的含量增高有关。

2. 动物实验表明苯巴比妥能提高电刺激大脑皮层运动区及间脑的最低阈值。

苯巴比妥 的作用机制

动物 : ICR 小鼠

药品： 0.5% sodium phenobarbital 溶液

仪器： JTC-1 型惊厥及痛觉实验交流电刺激器

1. 材料

• 将“输出电压”调到 20 伏• 刺激时间设为 0.5s

• 刺激周期设为单刺激• 如不发生惊厥，将输出电压增大，再试

2. 方法

2.1 准备

将输出电压调到 20 伏、时间 0.5s ，刺激周期设为单刺激 ( 第 1 次电惊厥试验 )

↓

挑选发生电惊厥反应的小鼠（用苦味酸标记 1 、 2 、 3------ ） ↙ ↘

ip 0.5% 苯巴比妥钠 0.1ml/10g ip 生理盐水 0.1ml/10g

↓ 15min

电惊厥试验 ( 第 2 次 )

↓

记录结果（ + 发生惊厥、 - 未发生惊厥）

2. 方法

2.2 实验流程

2.3 操作和观察

① 先将电惊厥仪输出线的鳄鱼夹尖端用生理盐水浸湿，一个夹子夹小鼠两耳根间的皮肤，另一个夹下颚部。

② 电惊厥刺激

惊厥指标： 双后腿强直

惊厥发生过程：

僵直屈曲期→ 后肢伸直期→ 阵挛期→ 恢复期

2. 方法

③ 将有电惊厥反应的小鼠 , 称体重后用苦味酸分别做记号 ,

编为甲、乙两组 , 甲鼠 ip 5g/L phenobarbital sodium 溶液0.1ml/10g ，乙鼠 ip 生理盐水 0.1ml/10g 。 注射 15min 后，按照各个小鼠第一次发生惊厥的电压，再次进行电惊厥实验，观察是否再次发生惊厥。 ④ 记录结果

2. 方法

3. 结果

表 1. 电惊厥实验结果汇总表

表 2. 苯巴比妥钠对电刺激引起小鼠惊厥作用的影响

4.讨论

思考题：电刺激引起小鼠惊厥的发生机制；分析苯巴比妥钠抗电刺激引起小鼠惊厥作用的机制。

注意事项

（ 1 ）实验前选择动物 , 电刺激后不产生后肢强直者不用于实验。

（ 2 ）注意安全

用右手从笼盒内将小鼠尾部捉住并提起，放在笼盖（或表面粗糙的物体）上，轻轻向后拉鼠尾，在小鼠向前挣脱时，用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，无名指、小指和手掌心夹住背部皮肤和尾部。

小鼠的捉拿方法

腹腔注射时，使小鼠头部朝下，将注射针与小鼠腹部皮肤呈90º；由下腹中线偏左或偏右约 1-2 mm处下针，约插入 3-5 mm即可开始将药剂注入腹腔。

腹腔注射

小鼠标记方法：

5

（6）1 2 （7）

背

（ 8） 3 4 （9）

10

实验 19. 药物对抗电刺激引起小鼠惊厥的作用

1. 摘要（结构式摘要 : 目的、方法、结果、结论）2. 材料和方法：2.1 材料：2.2 方法：3. 实验结果3.1 原始数据表

实验报告要求：

表 1. 电惊厥实验结果汇总表

实验小组

生理盐水组 　 苯巴比妥钠

惊厥 未惊厥 惊厥 未惊厥

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

3.2 统计结果

组别 动物数 惊厥百分率 X2 值 生理盐水组 苯巴比妥钠组

3.3 结果叙述

表 2. 苯巴比妥钠对电刺激引起小鼠惊厥作用的影响

4. 讨论 5. 参考文献[ 专著 ] 作者 . 书名 . 版本 ( 第一版略 ). 出版地：出版者 , 出版年 . 起 页－止页[ 期刊 ] 作者 . 文章题目 . 刊名 , 年 , 卷 ( 期 ): 起页－止页

统计：根据《生理科学实验教程 》 应用Excel 进行数据统计分析 p150 卡方检验（ X2)