صبغ والكشف المجهري للبكتيريا

األستاذ الدكتور يوسف محمد الشريك

صبغ والكشف المجهري للبكتيرياMicroscopy and Staining

المجهرتحتالشرائحفحص•-:المجهرتحتالشرائحفحصمنالهدف•:حجمهالضآلةالمجردةبالعينتريالالتيالميكروباتعنللكشف•

متعددةنوعمنأصغرأنهابحيثprokaryoticالخليةوحيدةنوعمنالبكتيرياخليةتعتبر1.

.Eukaryoticالخاليا

-.التاليةالضوئيالمجهرتحتالبكتيريةالخالياعنللكشفطريقتانتوجد2.

طريقةWet mount.

المجهر،تحتالبكتيريةعنللكشفاستعماال،أكثرالطريقةهذهوتعتبرالبكتيرية،اللطخةصبغ

بينبهاالتفريقيمكنمميزاتهاأهمومنوالميتة،الحيةالبكتيرياتبينأنهايمكنعيوبهاومن

ةالطريقبهذهويمكنوغيرها،(شكل)وتنظيماتهاكرويةأوعصويةالبكتيرياأشكال

.الجراملصبغةالسالبةأوالموجبة،البكتيريابينالتفريق

الكشفبخاصزيتمعمكبرةعدسةيستعملالمجهرتحتالبكتيريةخالياعلىللكشف1.

.Oil immersion

-:وهماالحيةالبكتيريةعنالكشفلتجهيزطريقتانهناك•

Wetالمبتلةأوالرطبةطريقة1. mount.

Hangingالمعلقةالنقطةطريقة2. drop

Wet mountطريقة الرطبة أو المبتلة •

تيريكا علكى تطبق هذه الطريقة لدراسة شككل وترتيكا الخاليكا البكتيريكة، واختبكار اكدرة البك•

-:الحركة، ومن ها الطرق التالية

مككل مككن المككاة، لمككدة أسككبوع ابككل ةجككراة التجربككة، مككع الككتخلص مككن 600ينقككع التككبن فككي 1.

.الفقاايع الهوائية

بعكاده، يعمل ةطار مربع فكي منتصكف الشكريحة النظيفكة، مكن الهكالم النفطكي ، بحيكث تككون أ2.

.نفس أبعاد الشريحة الزجاجية الرايقة

ة توضككع اطككرة واحككدة، مككن محلككول نقككع التككبن، فككي منتصككف الشككريحة الزجاجيكك1.

.الرايقة

اة تقلككا الشككريحة الزجاجيككة، التككي تحتككوي علككى ا طككار ، ويلصككق األخيككر بغطكك2.

. الشريحة الزجاجية الرايق، المحتوية على اطرة ماة التبن بحذر

.تقلا الشريحة بحيث يصبح غطاة الشريحة الزجاجية ةلى أعلى3.

علكى توضع الشريحة تحت المجهكر، لدراسكتها، مكع تقليكل كميكة الضكوة السكااط ،4.

.العدسة العينية

، ثككم بعدسككة اوتهككا ( 10X)تحديككد األحيككاة الدايقككة، فككي العينككة بعدسككة اوتهككا 5.

(40X ) مع تعديل اوة ا ضاةة، عند كل تغيير العدسة ، .

د وجو: يالحظ وجود أنواع مختلفة، من األحياء الدقيقة، في عينة التبن، مثل•

.( 2) و ( 1)بكتيريا عصوية، أو كروية وغيرها، كما هو موضح في جدول

أشكال مختلفة من البكتيريا الكروية( 1)جدول

أشكال المختلفة من البكتيريا العصوية( 2)جدول

-:ومن أهم عيوا هذه الطريقة ما يلي•

.تتعرض الشريحة لسرعة الجفاف، مما اد يؤثر على حركة البكتيريا1.

. قد يتعرض الفاحص لبعض األمراض من بعض أنواع البكتيريا الممرضة•

طريقة النقطة المعلقة الختبار ادرة البكتيريا على الحركة•

-:هدف ومبادئ هذه الطريقة مثل الطريقة الرطبة، ومن أهم مميزاتها التالية•

مراابة حركة البكتيريا في نقطة معلقة داخل تجويف زجاجي مغلق1.

.نادراً ما يحدث جفاف للشريحة2.

.بقاة الخاليا في حالة نشطة لمدة أطول من الطريقة الرطبة3.

طريقة العمل•مكككع غطائهكككا بالمكككاة السكككاخن Depression Slideتنظكككف الشكككريحة ذات التجويكككف تنظيفكككاً جيكككداً 1.

.والصابون زالة المواد الدهنية العالقة بها

طة توضع أربعة نقط من الماة أو الفازلين أو الهالم النفطي علكى ككل زاويكة مكن غطكاة الشكريحة بواسك2.

.ناال البيئة

.توضع اطرة من البيئة البكتيرية في وسط غطاة الشريحة الزجاجية الرايقة. 3

فيقطرةللمقابالالتجويفيكونبحيث،الرايقةالزجاجيةالشريحةغطاةعلىالشريحةتوضع.4

.يفالتجومنتصففيالبكتيريةالبيئةنقطةوجودعلىالحفاظمعبسرعةالشريحةتقلا.5

الشريحةمعملتصقاالغطاةيكونبحيثالتجويف،وسط

لككيال، تفحككص النقطككة المعلقككة تحككت المجهككر، مسككتعمال العدسككة الصككغيرة القككوة ، ثككم يخفككض المكثككف ا6.

.ويقفل الحجاا جزئياً لتقليل ا ضاةة للتمكن من رؤية العينة بوضوح

.تعدل حافة الشريحة لوضع حافة النقطة في وسط مجال المجهري7.

يدر، علكى غير العدسة الصغيرة ةلى كبيرة القوة، ثم ةلى الزيتية، بعكد وضكع نقطكة زيكت السك8.

.غطاة الشريحة

طة المكثكف، تفحص حافة العينة، مع تحريك الضابط الدايق ببطة، مع تعديل ا ضاةة، بواس9.

.حتى ترى البكتيريا بشكل واضح

.احظ حركة البكتيريا، عند حافة النقطة المعلقة10.

.ة حركتهاتدون المالحظات برسم شكل البكتيرية، وطريقة تجميع الخاليا البكتيرية ونوعي11.