التقدير الكمي لألحماض األمينية

بواسطة نينهيدرين

دكتور ٌوسف الشرٌك

التجربة إجراء من الغرض• .نٌنهٌدرٌن تفاعل طرٌق عن كما األمٌنٌة األحماض كمٌة تقدٌر•

-:النظرٌة•

أربعة بها ترتبط كربون ذرة من األمٌنٌة األحماض تتركب•

-:التالٌة مختلفة مجامٌع

الكربوكسٌل مجموعة1.

األمٌن مجموعة2.

هٌدروجٌن ذرة3.

هذه وتختلف R باسم تعرف التً الجانبٌة مجموعة4.

باسم أٌضا وتعرف أخر، إلى حامض من المجموعة الطرفٌة المجموعات أو الجانبٌة بالسالسال

-:الحامض األمٌنً كالتالًوٌتركب •

األحماض األمٌنٌة من نوع ألفا مع نٌنهٌدرٌن وٌنتج عن تتفاعل•كثافة اللون تعتمد على )ذلك ظهور لون البنفسجً أو األزرق

-:كالتالً ( تركٌز الحامض األمٌنً فً العٌنة

Ruhemann's purple

عن للكشف المهمة التفاعالت من التفاعل هذا وٌعتبر• على المفصولة محالٌلها فً سواء األمٌنٌة األحماض

عند:مثل لها الكمً التقدٌر أو الكروماتوجرامات كما األٌونً التبادل الكروماتوجرافٌا بواسطة تقدٌرها

تقدٌر جهازAmino acid analyzer فً الحال هو األمٌنٌة األحماض

وهٌدروكسً البرولٌن مثل األمٌنٌة األحماض أما• اللون وتعطً نٌنهٌدرٌن مع تتفاعل فإنها برولٌن .المعقد األصفر

لون شدة لقٌاس Colorimeter كلورٌمتر ٌستعمل• .نانومتر 570 الموجً الطول عند التفاعل من الناتج

خطوات التجربة• المواد المستعملة•

%. 0.1محلول نٌنهٌدرٌن تركٌزه 1.

مل من محلول ألبومٌن 1ٌحتوي على ( 1)أنبوب إختبار2. .البٌض

الحامض % 0.5مل من 1ٌحتوي على( 2)أنبوب إختبار 3. .األمٌنً جالسٌن

الحامض % 0.5من مل 1ٌحتوي على( 3)أنبوب إختبار4. برولٌن األمٌنً

إلى % 0.1ٌضاف واحد مل من محلول نٌنهٌدرٌن تركٌزه 3و 2و 1األنابٌب االختبار

.تسجل النتائج فً جدول وٌستكمل االستنتاج لهذه التجربة•

النتائج•

المحلول اللون الناتج االستنتاج مالحظات

ألبومٌن البٌض

الجالسٌن

البرولٌن

2 تجربة• نٌنهٌدرٌن من إضافٌة كمٌات مع األمٌنٌة األحماض تسخٌن•

األمٌنٌة األحماض جمٌع مع بنفسجٌة نواتج إنتاج إلى ٌؤدي

.ألفا نوع من أمٌنٌة حرة مجموعة على تحتوي التً

تركٌز لقٌاس الناتج اللون كثافة تستخدم مناسبة ظروف تحت•

:التالٌة التجربة فً كما . الضوئٌة بالطرق األمٌنٌة األحماض

الالزمة المواد•

.جالسٌن األمٌنً الحامض من قٌاسً محلول1.

نٌنهٌدرٌن محلول2.

إٌثانول 350%.

.مقطر ماء4.

األجهزة• ذات حجم منها كل على ٌكتب 5 االختبارعددها أنابٌب من عدد تجهز•

و 0.6 و 0.4 و 0.2 ) قٌاسً األمٌنً الحامض من معروف تركٌز

الحامض لتحدٌد القٌاسً منحنى لتجهٌز وذلك ( مل 1.0 و 0.8

التركٌز مجهول األمٌنً

التركٌز مجهول األمٌنً حامض من مل 0.8 السادس األنبوب ٌحتوي•

(مقطر ماء ) المراقب عن عبارة السابع األنبوب•

ماصة

حمام مائً•

رقائق ألومونٌوم

الطرٌقة• الحامض من المناسب الجحم ٌنقل1.

إلى التركٌز المعروف األمٌنً المناسب األنبوب

األمٌنً الحامض من مل 0.8 ٌنقل2. األنبوب التركٌزإلى مجهول ..السادس

أنبوب إلى مقطر ماء مل 4 ٌنقل3. .المراقب

أنبوب كل إلى المقطر الماء ٌضاف4. .منهم لكل مل 4 إلستكمال التجربة

محلول من مل 1.0 ٌضاف5. األنابٌب )أنبوب لكل نٌنهٌدرٌن

.(السبعة

جٌدا مكوناته لخلط أنبوب كل هز6.

من األلومنٌوم رقائق من واحدة بقطعة األنابٌب جمٌع تلف7. . الجهات جمٌع

15 لمدة مائً بالحمام المغلً الماء فً األنابٌب جمٌع تضع8. .دقٌقة

.البارد الماء فً األنابٌب تبرد ذلك بعد9.

تركٌزه إٌثانول من مل 1.0 أنبوب لكل ٌضاف تبرٌدها وبعد10.50%.

الكلورٌمتر جهاز ضبط• فٌه الحامض تركٌز على أنبوب كل فً اللون كثافة تعتمد•

كالورٌمتر جهاز فً متر نانو 570 الموجً الطول على ٌقاس•

(0.00) الصفر على الجهاز ٌضبط• بعشرٌن األخرى المحالٌل قراءة قبل

من مل 1.0 بإضاف وذلك دقٌقة حجمها الكٌوفٌت إلى المقطر ماء على الجهاز ٌضبط تربٌع، ملم10

.الصفر

وٌضاف الكوٌفٌت من الماء ٌسكب• المراقب محلول من مل 1.0 إلٌها

قراءته وتأخذ

المراقب محلول من التخلص ٌتم• ألٌها وٌضاف القراءة أنبوبة وتغسل

0.2 تركزه المحلول مل 1.0

.المختلفة التركٌزات لقراءة مرة كل فً األخٌرة الخطوة تعاد•

فٌه تقابل نقطة مع (ص محور ) الموجً الطول نقاط تضع•

(س محور) التركٌز

مستقٌم خط لتعطً المنحمى على لعضها مع النقاط توصٌل ٌتم•

هو كما المنحنً من المجهول األمٌنً حامض تركٌز وٌحدد• .التالً الشكل فً موضح