关于氨基酸的定量分析

03 化学 3 班杨曦

03081095

　氨基酸的分析方法

化学分析法——甲醛滴定法 甲醛滴定法用于氨基氮的测定 , 可以测出样品中总氨基酸的含量 , 其原理是在中性或弱碱性水溶液中 , 氨基酸的 α— 氨基与醛类反应生成

Schiff 碱 :α— 氨基酸与甲醛反应生成亚甲基亚氨基衍生物

　 亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定 , 从而得

到样品中总氨基酸的含量。 但是，甲醛法准确度差 , 终点较难掌

握。 我们还学过凯氏定氮法，测定样品中

总氮的含量。虽然准确度高 , 但操作步骤复杂 , 试剂耗量多 , 测定周期长。

R C COO

NH3

H

HCHO OH R C COO

N

H

CH2

　 茚三酮是一种能使氨基酸生成在可见光区

有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮混合 , 经加热反应后 , 一级胺与之生成蓝紫色化合物 , 二级胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测 , 检测波长分别为 570nm 和 436nm 。

C

C

COH

OH

O

茚三酮

分光光度法——茚三酮法 (nin - hydrin) :

亮黄色化合物

C

C

COH

OH

C H

R

H3N

C

C

COH

H

CO2NH3

COOH

RCHO H

C

C

C

N

O

O

O

O

O

O

C

C

C OH

OH

O

O

C

C

C

H

O

O

C

C

C

N

O

O

紫色化合物

衍生反应

溶液的 pH pH5 - pH6 的弱酸性 130 ℃

茚三酮衍生显色反应的灵敏度可达2 ×10 - 10 ～ 5 ×10 - 10mol/ L , 衍生物稳定性较好。衍生剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测

但是，衍生反应条件要求较高 , 需附设加温衍生装置 , 仪器造价高并专一性强。分析时间长 , 分析成本高 ,工作效率低。

羊毛水解液中氨基酸含量的测定• 氨基酸总的含量可以

用甲醛滴定法

—NH2 与甲醛结合 , 其碱性消失。这样就可以用碱来滴定— COOH 基 , 并用间接的方法测定氨基酸的含量。

• 不同种类的氨基酸需要用不同的方法来测定，例如：

　用三硝基苯磺酸法测定赖氨酸……

　 L - 胱氨酸含量的测定 水解液—中和—沉淀过滤—粗品—酸溶—除 Fe 等杂

质—脱色—中和—沉淀过滤—干燥—精制品。

　 溴能将胱氨酸氧化成α- 氨基 -β- 磺基 - 丙酸 ,

过量的溴又将碘化钾中碘离子氧化成游离碘 , 用碘量法测定碘的量 , 从而可进行L - 胱氨酸的间接测定。 HO2S —CH2 —CHNH2 —COOH

C

COOH

H2N

H2C

H

S S CH2

C H

COOH

H2N

• 氢氧化钠溶液 :10 g/ L , 盐酸 , 碘化钾溶液 :450 g/ L ,

• 用时配制 , 溴液 : C(Br2) = 0.1 mol/ L , 称取溴酸钾 3 g ,

• 溴化钾 15 g , 加水溶解成 1 000 mL , 置于棕色瓶中保存，

• 淀粉溶液 :5 g/ L ,

• 新鲜配制 , 硫代硫酸钠标准滴定溶液 : C(Na2S2O3) = 0.1 mol/ L 。

KBrO3 + 5KBr + 6HCl ——3Br2 + 6KCl + 3H2O

S —CH2 —CHNH2 —COOH

5Br2 + ︱ + 6H2O

S— CH2— CHNH2 —COOH

——2HO2S —CH2 —CHNH2 —COOH+ 10HBr

Br2 + 2KI—— I2 + 2KBr

I2 + 2Na2S2O3—— 2NaI +Na2S4O6

• 称取干燥后的试样 0.13 g ( 精确至 0.000 2 g) , 加氢氧化钠溶液 10 mL 移入 100 mL 容量瓶中 , 加水稀释至刻度 , 摇匀。

• 吸取该溶液 25.0 mL 于碘量瓶中 , 加溴液 50.00 mL , 加盐酸 10 mL , 立即加盖 , 摇匀，于暗处放置 10 min

• 再在冰浴中冷却 3 min 以上 , 加碘化钾 5mL , 立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色 , 加入淀粉溶液 2 mL , 继续滴定至蓝色消失为终点 , 同时做空白试验。

1 2( ) 0.02403100

25100

v v cx

m

V1 ——— 空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴 定溶液的体积 / mL ; V2 ——— 试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液 的体积 / mL ; C ——— 硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度 / mol/ L ; m ——— 试样的质量 / g ; 0. 024 03 ——— 与 1. 00 mL 硫代硫酸钠标准滴定溶液 [ C(Na2S2O3) = 1. 00 mol/ L 相当的 , 以 g 表示的 L -胱氨酸的质量