PVUנושא המחקר: משך הזמן האופטימלי לפעילות אנזים ההגבלה II.

של יצור אחר. DNA של יצור אחד לתוך DNAשיבוט הינו החדרת מקטע של משותף לכל עולם החי והצומח. כדי DNAהשיבוט אפשרי משום שמבנה ה

להחדיר גן לחיידק משתמשים בנשא- גורם שיעביר את הגן לתוך החיידק, הגורם שאנו נשתמש בו קרוי פלסמיד. על מנת להפריד את הגן הרצוי

כולה משתמשים באנזים הגבלה. אנזים הגבלה הוא DNAממולקולת ה של ווירוס DNAאנזים שמקורו בתאי חיידקים )תפקידו בחיידקים הוא לחתוך

שנכנס לתקוף אותם- ז"א שהוא מהווה את מערכת הההגנה של החיידק( ופעולתו היא חיתוך קשרים פוספודיאסטריים )הקשר שבין סוכר של

( DNAנוקלאוטיד אחד לזרחה של הנוקלאוטיד השכן בתוך אותו גדיל בבמקומות ייחודיים לכל אנזים הגבלה. המקטע שאותו חותך כל אנזים

הגבלה נקרא "אתר ההכרה" שלו. ישנם שני סוגים של חיתוך ע"י אנזימי הגבלה: חיתוך חלק בציר הסימטריה, וחיתוך מדורג. החיתוך המדורג יוצר

שנחתך. חיתוך DNA"קצוות דביקים" ז"א קצוות חופשיים חד גדיליים של ה שונים אשר נחתכו באותו אנזים DNAכזה מאפשר התחברות של קטעי

הגבלה, ולכן הוא מתאים לפרויקט שלנו.

שאלת המחקר:?PVU IIמהו משך הזמן האופטימלי לפעילות אנזים ההגבלה

:השערת המחקר ככל שמשך החיתוך ארוך יותר כך יחתכו יותר פלסמידים )פעילות האנזים

תהיה יעילה יותר(.

אילה שקד ומיכל צ'מקה בשעת ביצוע הניסוי.

- המשתנה הבלתי תלוי הוא משך החיתוך והוא נמדד בדקות ע"י שעון.

- המשתנה התלוי הוא כמות המקטעים שנחתכים – נמדד ע"י עובי הבנד.

בקרה:

שלם.PBSK הרצנו פלסמיד 9בבארית מס'

המשתנים:

אינקובאטור

אמבט מים חמים עם אפנדורפים בתוכו

מגש עבודה עם פיפטורים ושעון עצר

תיאור ויזואלי של מערכת הניסוי וסביבת העבודה

עיבוד נתונים:השפעת משך החיתוך על יעילותו

מקרא עובי יחסי של הבנד:- ללא בנד.0- בנד דק.1- בנד בעובי בינוני.2

משך 6020100החיתו

ך )דקות(

ממוצע 21.500עובי בנד

יחסי*

תיאור מילולי של התוצאות. הפלסמיד לא נחתך כלל.0בזמן דקות מתחילת זמן החיתוך עדיין לא נראה שהפלסמידים 10לאחר נחתכו. דקות מעט מן הפלסמידים נחתכו.20לאחר דקות מספר גדול יותר של פלסמידים נחתכו.60לאחר

השפעת משך החיתוך של פלסמיד PBSK:על יעילות החיתוך 0 - זמן 2 +1בארית דקות10 3+4בארית דקות20 5+6בארית דקות60 - 7+8בארית שלםPBSK - 9בארית - סמן גודל10בארית

תוצאות הרצת הפלסמידים בג'ל אלקטרופורזה

דיון בתוצאות ומסקנות:

על פי הניסוי משך הזמן האופטימלי לאנזים לחתוך את הפלסמידים הוא דקות. בזמן זה עובי הבנד של החלק החתוך של הפלסמיד הוא המירבי 60

מבין הזמנים שבדקנו. על פי התוצאות שלנו, אנחנו ממליצות לבצע את דקות.60החיתוך במשך

הצעות לשיפור הניסוי:

בניסוי שלנו ביצענו שתי חזרות בלבד. עדיף לבצע יותר חזרות על מנת לקבל תוצאות מהימנות יותר.

דקות 5כמו כן, כדאי לבדוק את החיתוך בהפרשי זמנים יותר קצרים ) דקות, על מנת לדעת מה משך החיתוך 60 דקות ל20למשל(, בעיקר בין

הקצר ביותר שבו כל הפלסמידים נחתכים.

רשימת מקורות:

מאמר: "הנדסה גנטית- איך ולמה?"-

www.amalnet.k12.il/sites/genetic/default.asp מתוך

מאמר: "חיתוך באנזימי הגבלה"-

/www.amalnet.k12.il/sites/genetic מתוך

תודות:

תודה רבה לד"ר מרטין גולדווי על תרומתו הרבה לפרויקט הביוטק, הן בהיבט -המדעי וביצירת הקשר עם מפעל "אתרוג".

תודה לאנשי מפעל "אתרוג" שאפשרו לנו לסייר ולהכיר את המפעל ותרמו את -הג'לים להרצת הפלסמידים.

תודה לדורית מגלי שהנחתה אותנו לכל אורך הפרויקט.-

תודה לצביה פיזם שסייעה לנו והנחתה אותנו.-

תודה רבה ללבורנטיות של בית הספר יהודית רייש ואיילת בן-ציון. -