实验十动物病毒培养技术之

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含弘光大继往开来含弘光大继往开来

实验十动物病毒培养技术之实验十动物病毒培养技术之

-------- 鸡胚接种鸡胚接种



一、目的一、目的

11 、掌握鸡胚接种途径和接种方法。、掌握鸡胚接种途径和接种方法。

22 、了解新城疫病毒或鸭肝炎病毒在鸡胚、了解新城疫病毒或鸭肝炎病毒在鸡胚

（鸭胚）尿囊腔的增值过程，接毒和收（鸭胚）尿囊腔的增值过程，接毒和收

毒的方法。毒的方法。



二、原理：二、原理：病毒缺乏完整的酶系统，不能单独进行物病毒缺乏完整的酶系统，不能单独进行物

质代谢，必须在活细胞中寄生，由宿主细质代谢，必须在活细胞中寄生，由宿主细

胞提供病毒合成原料，能量与场所，而且胞提供病毒合成原料，能量与场所，而且

只能在易感的活细胞中才能寄生、繁殖。只能在易感的活细胞中才能寄生、繁殖。



动物病毒培养：动物病毒培养：可在自然宿主、实验动可在自然宿主、实验动

物、鸡胚或细胞培养中进行，以死亡、发物、鸡胚或细胞培养中进行，以死亡、发

病或病变等作为病毒繁殖的直接指标病或病变等作为病毒繁殖的直接指标。。



鸡胚（或鸭胚）培养法：鸡胚（或鸭胚）培养法：是为病毒和立是为病毒和立

克次氏体常用的活细胞培养方法之一，此克次氏体常用的活细胞培养方法之一，此

方法可用于某些病毒的分离、增殖、毒力方法可用于某些病毒的分离、增殖、毒力

滴定、中和试验及生产疫苗等。操作简便滴定、中和试验及生产疫苗等。操作简便

，来源易，本身少带病毒等特点。，来源易，本身少带病毒等特点。



鸡新城疫病毒鸡新城疫病毒（（ NDVNDV ））属于副粘病毒科，对外属于副粘病毒科，对外界抵抗力较强。实验室检验时病毒分离可用界抵抗力较强。实验室检验时病毒分离可用鸡胚鸡胚进行。进行。

鸭病毒性肝炎病毒鸭病毒性肝炎病毒（（ DHVDHV ））细胞培养困难，细胞培养困难，国际通用的检疫手段和诊断方法仍然是国际通用的检疫手段和诊断方法仍然是鸡（鸭）鸡（鸭）胚胚中和试验。中和试验。



三、鸡胚的结构和生长过程三、鸡胚的结构和生长过程



鸡蛋的结构鸡蛋的结构



受精蛋受精蛋



孵育周期孵育周期



鸡（鸭）胚结构鸡（鸭）胚结构



壳内的尿囊膜、血管、胚体壳内的尿囊膜、血管、胚体丰富的血管丰富的血管幼小的胚体幼小的胚体

不同日龄鸡胚状况不同日龄鸡胚状况



四、鸡（鸭）胚培养法准备四、鸡（鸭）胚培养法准备11 、器具：、器具：孵卵箱、检蛋灯（照蛋器）、蛋盘孵卵箱、检蛋灯（照蛋器）、蛋盘镊子、碘酊、注射器、针头、三棱针、眼科镊子、碘酊、注射器、针头、三棱针、眼科

剪、眼科镊、固体石蜡、酒精灯、无菌室。剪、眼科镊、固体石蜡、酒精灯、无菌室。病毒液、双抗病毒液、双抗



22 、鸡卵的选择与孵育：、鸡卵的选择与孵育：选卵：选卵：通常选用来亨鸡卵，因卵壳薄和色白，易通常选用来亨鸡卵，因卵壳薄和色白，易

于观察胚胎的生活情况。清水洗净受精卵卵壳，拭于观察胚胎的生活情况。清水洗净受精卵卵壳，拭干，放入孵化箱，干，放入孵化箱， 38-3938-39℃℃相对湿度相对湿度 45-60%45-60%，，孵育孵育 33 日后鸡卵每日翻动日后鸡卵每日翻动 1-21-2次。次。

检卵检卵（胚）：（胚）：受精卵受精卵，， 44 天后可见清晰的血管天后可见清晰的血管

小团，其中有鸡胚暗影。小团，其中有鸡胚暗影。未受精卵未受精卵，， 44 天后仅见卵天后仅见卵

黄黑影，可剔除。黄黑影，可剔除。死亡胚或濒死期胚死亡胚或濒死期胚，，鸡胚活动呆鸡胚活动呆

滞或不动，血管昏暗或模糊不清，应及时淘汰。滞或不动，血管昏暗或模糊不清，应及时淘汰。



33 、鸡胚（鸭）接种：、鸡胚（鸭）接种：接种途径：接种途径：卵黄囊接种卵黄囊接种

羊膜腔接种羊膜腔接种绒毛尿囊腔接种绒毛尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种



常见病毒用鸡胚培养的接种途径常见病毒用鸡胚培养的接种途径

接种途径接种途径绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜尿囊腔尿囊腔卵黄囊卵黄囊羊膜腔羊膜腔

新城疫病毒新城疫病毒 ++++++++ ++++++++

流感病毒流感病毒 ++ ++++++++ ++ ++++++++

传染性喉气管炎病毒传染性喉气管炎病毒 ++++++++

传染性支气管炎病毒传染性支气管炎病毒 ++++ ++++++++

狂犬病毒狂犬病毒 ++++

天花病毒天花病毒 ++++++ ++ ++注：注： ++++ +++ ++ +++++ +++ ++ + ，表示鸡胚组织对病毒敏感性的强弱，表示鸡胚组织对病毒敏感性的强弱



44 、收获、收获 24h24h 后死亡胚取出，最好置后死亡胚取出，最好置 4℃4℃冰箱中冷冰箱中冷

却却 44 小时，以免收获时出血。小时，以免收获时出血。用碘酊消毒气室端，然后用镊子击破气室端用碘酊消毒气室端，然后用镊子击破气室端

卵壳（胚壳），沿气室周围剪除胚壳，撕去卵壳（胚壳），沿气室周围剪除胚壳，撕去壳膜，无菌撕开尿囊膜。壳膜，无菌撕开尿囊膜。

用无菌玻璃吸管吸取尿液和羊水，置无菌瓶用无菌玻璃吸管吸取尿液和羊水，置无菌瓶中，备做血凝实验或其他实验用中，备做血凝实验或其他实验用



实验安排实验安排每人一枚鸡胚或鸭胚，只有其一。每人一枚鸡胚或鸭胚，只有其一。接种尿囊腔。接种尿囊腔。

每组一个照蛋器，轮流照蛋，画出气室，选定接种每组一个照蛋器，轮流照蛋，画出气室，选定接种

部位，标记好自己的名字。部位，标记好自己的名字。

每班放置在统一的蛋盘里，进行孵育。每班放置在统一的蛋盘里，进行孵育。

每班按时观察胚的生长和死亡情况，按要求收获尿每班按时观察胚的生长和死亡情况，按要求收获尿

液和羊水。液和羊水。



【【绒毛尿囊腔接种绒毛尿囊腔接种】】

11 、、 9-109-10 日龄鸡胚，照蛋以铅笔划出日龄鸡胚，照蛋以铅笔划出气室气室、、胚胎胚胎的位置。的位置。

22 、用、用碘酊碘酊在接种处的蛋壳上在接种处的蛋壳上消毒消毒，酒精棉脱碘，用，酒精棉脱碘，用三棱锥三棱锥

在酒精灯火焰烧灼消毒后，并在标记处在酒精灯火焰烧灼消毒后，并在标记处打孔打孔。。

33 、注射针头从小孔处插入、注射针头从小孔处插入 0.5cm0.5cm ，注射量，注射量 0.1-0.2mL0.1-0.2mL

。。

44 、注射后以、注射后以石蜡封闭石蜡封闭小孔，置孵育箱中小孔，置孵育箱中直立孵育直立孵育。。



【【接种后检查接种后检查】】

接种后接种后 24h24h 内内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原

因死亡，应该因死亡，应该弃去弃去。。

24h24h 后，后，每天每天照蛋照蛋 22 次次，如发现鸡胚死亡立即放人冰箱，于，如发现鸡胚死亡立即放人冰箱，于

一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死（标记）。死亡一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死（标记）。死亡

的鸡胚置冰箱中的鸡胚置冰箱中 4h4h 即可取出收获尿液和检查胚胎病变。即可取出收获尿液和检查胚胎病变。



鸡胚接种程序图鸡胚接种程序图

照蛋

白蜡封口接种种毒

胚、气室标记

打孔

胚壳消毒（碘酒、酒精）

孵育

end



卵黄囊接种卵黄囊接种



羊膜腔接种羊膜腔接种



尿囊腔接种尿囊腔接种 11



尿囊腔接种尿囊腔接种 22



绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种



初发育的受精卵初发育的受精卵



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