جزازبندگی پیش یزدان مجوی مزن دست درنیک وبد جز بدوی

1

هیبریداسیون سوماتیکی درونی انبه از طریق امتزاج

پروتوپالست

تهیه کننده: مریم تهرانچی:استاد راهنما

2

مقدمهدرخت انبه بومی مناطق هند و برمه ،ویکی از مهم •

ترین محصوالت درختی در مناطق استوایی و بدون

یخبندان میباشد

ازمهمترین مشکالت پیش روی تولیدات این •

درخت ،کمبودپایه های خوب،ریزش

زیادمیوه،طوالنی بودن دوره نونهالی،باال بودن

هتروزیگوتی و تولید کم بذر میباشد.

امتزاج هیبریدی پروتوپالست شرایطی فراهم میکند •

که ازطریق امتزاج سیتوپالسمی و ژنتیکی،مشکالت

اصالح گیاهان را برطرف کرد. 3

هدف این مقاله توضیح روش های •

PEM نوعی روش امتزاج(

پروتوپالست(و پروتوپالست برگی

درهیبدریداسیون امتزاج سوماتیکی

صرف نظراز هرگونه اهداف

ترکیب 3اصالحی ژنتیکی برای

’Tommy Atkins)+مادری

‘Kensington Pride و ),’

‘(Haden ‘+ ‘Kensington

Pride( و )Keitt+Kensington

pride.4 ( میباشد

مواد و روش ها

به وسیله ی تیغ Haden ‘+ ‘Kensington Pride‘ هفته ای رقم 2ابندا برگ های •

( بریده،ضدعفونی ،کوبیده شده است.mm 0.5 تا0.2به صورت نوارهای باریک)

های)توده های PEMبرای بدست آوردن •

جنینی(باکیفیت بدون و

لکه های سیاه،محیط کشت به صورت پی درپی

به محیط های فرعی تازه ودر کشت

منتقلD-4-2 فرعی آخربه سوسپانسیون بدون

و کشت گردید.جداسازی پروتوپالست

5

)واحد 50g میکرومتری عبورداده و با 250سپس محیط سوسپانسیون رااز شبکه های •

سانتریفیوژ(در دقیقه سانتریفیوز کرده تا توده های سلولی را به شکل

PEM .دراورد

سپس محلول هضم کننده دیواره سلول•

درصد،1/5 حاوی مانیتول،سلوالزPH 5.8 با

درصد وPEM0.75درصد ، 1همی سلولز

درصد با فیلتر استرلیزه 1.5ماکروزیم

میکرومترفیلتر0.22

آماده و اضافه گردید.

6

رقم انجام شد و به طور خالصه 3در ادامه امتزاج پروتوپالست برای هر•

با نسبت PEMسوسپانسیون پروتوپالست مذکور،تدریجی باسوسپانسیون

درصد تدریجا اضافه شده و در PEG40 ترکیب شد.سپس ماده 1به 2

دقیقه آنکوبات شد.20دمای اتاق به مدت

7

IPDبعد از امتزاج ،پروتوپالست ها داخل آلژینات کلسیم در ظروف •

جایگذاری شده سپس درمحیط کشت مایع حاوی ml 4به توان 10*2.5

میلی گرم کینتین قرارداده شد.3.5 و D-4-2 میلی گرم برلیتر 1

محیط کشت شامل محیط های •

MS و B5 به اضافه برخی مواد

آلی بود

8

نتایج’ Haden’, ‘Tommy Atkins’ and ‘Keittبازده ی عملی پروتوپالست از برگ های ارقام •

’ حاصل شد.Kensington Pride خورشی رقم PEMو

تایی پروتوپالست ها طی فرایند مشاهد شد2 درصد امتزاج 18تا •

در امتزاج PEMباالترین مقدار تولید •

Haden’ + ‘Kensington Prideارقام ‘

بود4

جوانه3 گیاهچه ی ریشه دارشده فقط 50از•

درخاک توانستند جوانه انتهایی تولید کنند.

9

بیشترین مقادیر ریز کالوس های حاصل در محیط های کشت •

’,Tommy Atkins’ +‘Kensington Prideفرعی برای رقم

Haden ‘+ ‘Kensington Prideوکمترین آن برای رقم شماره

بود.

محیط کشت متوالی 2 انتخاب شده درPEMازبین تمامی •

عدد ازانها قادر به تکثیر بودندکه منجربه242جامد،فقط

جنین زایی،بلوغ جنین شدند

جوانه زنی آنها در حالت این •

ماه بود.3ویترو در مدت

10

fushin drop

Micro Callus Obtained

Tetraploid Pem line Somatic Hybrid

sub2 sub1 Pem line plant

Kensington Pride’ + ‘Haden’ 10 1500 138 27 4 3

Kensington Pride’ + ‘Tommy Atkins’ 10 1200 50 6 0 0

Kensington Pride’ +’ Keitt’ 10 1320 54 8 0 0

Total 30 4020 242 41 4 3

11

بحثدراین تحقیق ایجادهیبرید های سوماتیکی درونی انبه در فرم گیاهچه های این ویترو •

محقق شد.

اکثرگیاهان هیبریدی از طریق روش امتزاج پروتوپالست ایجاد شد.•

81 درصدی داشت این تحقیق موفقیت 10تا5نسبت به دیگرتحقیقات که موفقیتی •

درصدی داشت که رضایت بخش بود.

،مقدارکمتری از میکروکلنی PEMعالرقم مقداربیشتر پروتوپالست برگی نسبت به •

در تقسیم سلولی استPEMهای برگی تشکیل شد که به خاطر توانایی بیشتر

مزدوج می یابد.که روش الکتریکی PEGپروتوپالست معموال ازروش های الکتریکی یا •

عالرقم سمیت سلولی وازبین بردن PEGدرباز زایی گیاه موثر بوده و روش

پروتوپالست طی مرحله ی شستن ،در فرایند امتزاج بسیار موثر تر بود.12

چکیده

امتزاج پروتوپالستیک در سطح ارقام انجام شد.پروتوپالست جدا شده ی آنزیمی •

و توده ی پیش جنینی Tommy Atkins’, ‘Keitt’ and ‘Hadenاز برگ رقم گلخانه ای

‘Kensington.استفاده شد

پروتوپالست ها مزدوج شده در آلژینات کلسیم جاگذاری شده و در مایع محیط •

کشت قرار داده شد.

را آزاد PEM هفته دانه های آلژیناتی دیپلریمریزه شده و میکروکلنی های 4بعداز •

میکند.

جدا شده و برای PEM محیط کشت متوالی توده های دارای رشد سریع 2بعداز•

استفاده شدند.PEMآنالیز

13

منابع

15

با سپاس و تشکر ویژه از شما

16