硕 士 研 究 生

开题报告

硕 士 研 究 生

开题报告

乳腺癌乳腺癌 HER-2HER-2 的表达与的表达与耐药相关机制的研究耐药相关机制的研究

广东医学院病理教研室

研究生：龚晓萌 导师：姜汉国 副教授

主要内容主要内容立题依据研究内容技术路线预期结果研究进度及实验安排经费预算

立 题 依 据立 题 依 据

乳腺癌的现状和耐药性的问题HER-2 的结构与功能HER-2 的表达与乳腺癌及耐药的关系PI3K 的信号传导途径

乳腺癌的现状

近 20年来，乳腺癌已经成为严重威胁妇女健康的主要疾病

全球每年发病患者超过 100 万

耐药性的问题耐药性的问题

乳腺癌的治疗主要手段是手术、放疗、 化疗以及内分泌治疗

乳腺癌是对化疗敏感的实体瘤之一 , 术后辅助化疗可以减少复发率

内在性和获得性的耐药常使化疗失败

多药耐药多药耐药多药耐药的概念多药耐药指肿瘤细胞接触了一种药物之后，

不但对该药耐药，而且对其他结构和作用机制不同的药物耐药

多药耐药的主要机制1 、转运蛋白的过表达 2 、细胞信号转导

通路的异常改变 3 、抗凋亡机制的参与

HER-2HER-2 的结构与功能的结构与功能

HER-2 原癌基因产物是 EGFR 家族中的重要成员

HER-2 受体由胞内区、胞外区、亲脂性的跨膜区和一段调节性羧基末端组成。

HER-2 受体具有酪氨酸激酶活性

HER-2HER-2 的表达与乳腺癌的关系的表达与乳腺癌的关系

HER-2 的过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、激素受体状态密切相关

HER-2 过表达的乳腺癌进展迅速，易转移和复发

HER-2HER-2 与耐药的关系与耐药的关系

乳腺癌的化疗药物大致包括烷化剂、蒽环剂、紫杉剂。紫杉剂是目前应用于临床的一线化疗药物

约 50%-70% 的肿瘤细胞对紫杉醇存在耐药

在乳腺癌， HER-2 的扩增被证实和紫杉醇的耐药有关

YU D 等的研究表明， HER-2基因高表达的乳腺癌细胞对 Taxol、 DDP等化疗药物，全反式维甲酸以及内分泌治疗药物具有很强的耐药性

但是 Konecny G 等得到了相反的结果，HER-2 基因高表达者反而对化疗敏感

PI3K-AKTPI3K-AKT 信号传导途信号传导途径径

Akt SignalingSIGMA-ALDRICH

其他方面的证据

郝赛汀（ Herceptin ）是一种靶向 HER-2 受体胞外段的单克隆抗体

将郝赛汀应用于阻断生长刺激细胞内信号转导能够降低放、化疗后的细胞修复能力，还可能增加细胞凋亡。

Witters 等研究均采用针对 HER-2 的细胞外区域的抗体处理 HER-2 的过表达乳腺癌细胞，使这种细胞对三苯氧胺（ TAM ）及纯雌激素拮抗剂的敏感性增加

1 、乳腺癌的耐药是否和细胞的凋亡有关系？

2 、乳腺癌的耐药是否和 HER-2 的过表达有关系？

2 、乳腺癌的耐药是否和 PI3K-AKT 途径有关系？

思考

可以假设：可以假设： HER-2HER-2 通过通过 PI3K-AKT-BPI3K-AKT-Bclcl-2-2 途径引途径引起起

细胞的凋亡减少，从而引起细胞耐药性的产生。细胞的凋亡减少，从而引起细胞耐药性的产生。

资料分组◆◆ 临床资料分组：分为乳腺癌、癌旁组织两组，每组各 30 例

◆◆ 乳腺癌细胞系：分为MCF-7 和 MCF-7/ADR两组

研究内容研究内容

临床部分

用免疫组化的方法检测乳腺癌及癌旁组织 HER-2 、PI3K、 AKT以及 Bcl-2的蛋白表达水平

体外实验

用免疫细胞化学的方法分别检测两种细胞株中的 HER-2 、PI3K 、 AKT 的蛋白表达水平及抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达。

用 Western-blot 方法分别检测两种细胞株中的 HER-2以及 Bcl-2 的蛋白表达水平以及 PI3K、 AKT的磷酸化的蛋白的水平。

用 RT-PCR 方法分别检测两种细胞株中的 HER-2 、 PI3K 、 AKT 、 Bcl-2 的 mRNA 水平。

流式细胞仪检测两种细胞株的凋亡指数。

技术技术路线路线图如下图如下：：

临床标本实验乳腺癌组织 癌旁组织

检测HER-2的表达

检测PI3K 、AKT 的表达

检测 Bcl-2 的表达

综合分析其三者相关性

MCF-7 乳腺癌细胞株 MCF-7/ADR 乳腺癌细胞株

流式细胞仪检测细胞的

凋亡指数

综合分析结果

免疫组化检测 HER-2 、PI3K 、 AKT 的蛋白含量及 Bcl-2的蛋白水平

RT-PCR 检测HER-2 、 PI3K 、 AKT 及Bcl-2 的 mRN

A 水平

Western 检测 HER-2 、 Bcl-2

以及磷酸化的PI3K 、 AKT及的蛋白水平

体外实验部分

检测方法检测方法• 用免疫组化的方法定性检测 HER-2 、 PI3

K 、 AKT 以及 Bcl-2 的蛋白含量

• 用 Western-blot 的方法检测 HER-2 、 Bcl-2 以及磷酸化的 PI3K 、 AKT 的蛋白含量

RT-PCR 的方法检测 HER-2 、 PI3K 、 AKT 以及 Bcl-2 的 mRNA 水平

用流式细胞仪检测细胞凋亡指数

预期结果预期结果

临床标本实验

• 临床标本中， HER-2 、 PI3K 、 AKT 、 Bcl-2在乳腺癌中高表达• 临床标本中， HER-2 、 PI3K 、 AKT 、 Bcl-2在乳腺癌中表达具有相关性

细胞实验细胞实验 流式细胞仪检测 MCF-7/ADR 细胞的凋亡比 MCF-7 的

凋亡少 免疫细胞化学的方法检测 HER-2 、 Bcl-2 、 PI3K 以

及 AKT 的蛋白表达在 MCF-7/ADR 中比在 MCF-7 中表达高

Western-blot 的方法检测 HER-2 、 Bcl-2 以及磷酸化的 PI3K 以及 AKT 的蛋白表达在 MCF-7/ADR 中比在 MCF-7 中表达高

RT-PCR 方法检测 HER-2 、 Bcl-2 、 PI3K 以及 AKT的 mRNA 表达在 MCF-7/ADR 中比在 MCF-7 中表达高

研究进度及实验安排研究进度及实验安排

2004. 11-2005.2 完成临床标本的收集2005. 3-2005.5 完成临床标本的检测2005. 6-2006.2 完成细胞的复苏培养及细

胞的各项指标的检测2006. 3-2006.4 撰写论文、准备答辩

经费预算经费预算◆Western blot ： 5000 元◆ 免疫组化： 3000 元◆ 细胞培养： 2000 元◆RT-PCR ： 4000 元◆ 其它： 1500 元 总计： 15500 元