Миронова Жанна Александровна...
DESCRIPTION
Санкт-Петербургский Государственный Медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Кафедра госпитальной терапии им. акад. М.В. Черноруцкого. Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ. Научные консультанты - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/1.jpg)
Миронова Жанна АлександровнаМиронова Жанна Александровна
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫМОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИУ БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙУ БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
Санкт-Петербургский Государственный
Медицинский университет им. акад. И.П. Павлова
Кафедра госпитальной терапии им. акад. М.В. Черноруцкого
Научные консультантыНаучные консультантыпрофессор Трофимов В.И.
чл.-корр. РАН, профессор Дубина М.В.
![Page 2: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/2.jpg)
АктуальностьАктуальность
Несмотря на выявление ключевых механизмов Несмотря на выявление ключевых механизмов развития БА, успехи фармакотерапии, ТРБА развития БА, успехи фармакотерапии, ТРБА остается наименее изученной, и ситуация с остается наименее изученной, и ситуация с контролем БА в мире и РФ остается нерешеннойконтролем БА в мире и РФ остается нерешенной
«…отличительным признаком ТРБА «…отличительным признаком ТРБА
является сложный контроль заболевания в является сложный контроль заболевания в связи со сниженной чувствительностью к связи со сниженной чувствительностью к терапии…»терапии…» ((Chung K.F., 2011)Chung K.F., 2011)
![Page 3: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/3.jpg)
Цель исследованияЦель исследования
Оценить значение Оценить значение
фармакогенетических факторов в терапиифармакогенетических факторов в терапии
глюкокортикостероидами и бета2-агонистамиглюкокортикостероидами и бета2-агонистами
у больных терапевтически резистентной БА у больных терапевтически резистентной БА
и разработать критерии прогнозирования и разработать критерии прогнозирования
терапевтической резистентности терапевтической резистентности
с учетом генетических маркеровс учетом генетических маркеров
![Page 4: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/4.jpg)
Задачи исследования Задачи исследования 1. Определить частоты аллелей, обусловленных мутациями С3435Т гена
множественной лекарственной устойчивости (MDR1); Gly16Arg и
Gln27Glu гена бета2-адренорецептора (ADRB2); Ile559Asn, Val729Ile,
Ile747Met, Asn363Ser, Arg23Lys гена глюкокортикоидного рецептора
(NR3C1); С–589Т гена интерлейкина 4 (IL4) и Arg130Gln (IL13) у
больных ТРБА и в контрольной группе.
2. Определить уровень экспрессии изоформ ГРα и ГРβ, кодируемых геном NR3C1 у пациентов с БА до и после терапии ГКС
3. Выявить вклад всех вышеперечисленных генетических детерминант в формирование патогенетических и клинических фенотипов БА, а также их ассоциацию с ответом на терапию глюкокортикостероидами
4. Разработать алгоритм диагностики, в том числе молекулярно-генетического исследования, для выявления маркерного профиля терапевтической резистентности у больных БА
![Page 5: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/5.jpg)
Общеклинические методы
• Анамнез, физикальное исследование
Лабораторная диагностика
• Клинический и биохимический анализ крови
• Цитологическое исследование мокроты
• Гормональное исследование
• Иммунологические исследования (IL4 и IL13 сыворотке крови (ИФА)
Функциональные показатели
• Спирография - исследование ФВД
Статистические методы (Statistica 6)
Методы исследованияМетоды исследования
![Page 6: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/6.jpg)
Методы молекулярно-генетического исследованияМетоды молекулярно-генетического исследования
ПЦР и рестрикционный анализ (ПЦР-ПДРФ)
ПЦР в режиме реального времени
(real-time ПЦР)
РНК
Периферическая кровь
кДНК
ДНК
Производство ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора», Россия
Амплификатор ABI 7000 («Applied Biosystems», США) Реагенты производства «Синтол», РоссияМетод TaqMan Эндогенный контроль: G-белок GNB2L1
Стабилизация внутриклеточной РНК, реагент «Среда-РНК»
Выделение РНК, набор реагентов «РИБО-золь-В»
Обратная транскрипция, набор реагентов «РЕВЕРТА-L»
![Page 7: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/7.jpg)
Обследованные лицаОбследованные лица
БАБА (n=122)(n=122)
((GINA 2008GINA 2008))
Группа контроляГруппа контроля ((nn=103)=103)
• возраст от 20 до 75 лет • отсутствие курения в анамнезе
• без бронхолегочной, аллергической, аутоиммунной и онкологической патологии
• с неотягощенной наследственностьюпо аллергическим заболеваниям
Гендерный состав больных БАГендерный состав больных БА
Мужчины30,3%
n=37
Женщины69,7%
n=85
Дизайн:Дизайн:случай- контрольслучай- контроль
• жители Северо-Западного региона• славянской национальности• не связанные узами родства
![Page 8: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/8.jpg)
Терапевтически резистентная БА (Терапевтически резистентная БА (ATS 2000ATS 2000))
Большие критерииБольшие критерии1. Потребность в применении ТГКС > 50% времени от длительности БА
2. Необходимость использования высоких доз ИГКС (беклометазон ≥1260 мкг/сутки, будесонид >1200 мкг/сутки, триамсинолон и флунизолид >2000 мкг/сутки, флутиказон пропионат >880 мкг/сутки)
Малые критерииМалые критерии1. Ежедневная потребность в длительнодействующих β-агонистах (ДДБА),
теофиллине, антилейкотриеновах препаратах
2. Ежедневные симптомы астмы, требующие применения короткодействующих β-агонистов (КДБА)
3. Сохраняющаяся бронхообструкция ( ОФВ1< 80%, дневная вариабельность ПСВ > 20% )
4. ≥ 1 вызова скорой помощи за последний год
5. ≥ 3 курсов терапии СГКС за последний год
6. Быстрое обострение БА при уменьшении на ≤ 25% дозы ИГКС или ТГКС
7. Жизнеугрожающие события, связанные с астмой в прошлом
![Page 9: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/9.jpg)
Распределение больных БА в зависимости от степени Распределение больных БА в зависимости от степени тяжести заболевания и терапевтической тяжести заболевания и терапевтической
резистентностирезистентности
БАБА
ТРБАТРБА ТЧБАТЧБА
12%(n=15)
45% (n=55)
43%(n=52)
83%(n=38)
ТРБА38% (n=46)ТЧБА
62% (n=76)
17%(n=8) 22%
(n=17)
58%(n=44) 20%
(n=15)
ТБА
СБА
ТЧБА
ЛБА
ТРБА
![Page 10: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/10.jpg)
ГенГен множественной лекарственной устойчивостимножественной лекарственной устойчивости
Ген MDR1
транспортныйбелок
Pgp-170
Эффлюкслипофильных
соединений
Апоптоз
Изменение pH внутри клетки
С3435Т MDR1
![Page 11: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/11.jpg)
%
%
p=0,007p=0,049
p=0,015
p=0,001
p=0,007p=0,008p=0,004p=0,005
Распределение генотипа Распределение генотипа 3435СС3435СС по гену по гену MDR1MDR1 у больных ТРБА и ТЧБАу больных ТРБА и ТЧБА
Распределение генотипа Распределение генотипа 3435ТТ3435ТТ по гену по гену MDR1MDR1 у больных ТРБА и ТЧБАу больных ТРБА и ТЧБА
![Page 12: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/12.jpg)
Влияние генотипа 3435СС по гену Влияние генотипа 3435СС по гену MDR1MDR1 на риск развития БАна риск развития БА
0 5 10 15 20 25
ТГКС>20мг/сут
ТРБА
ТБА
БА
OR=20,89 (95% CI 5,10–85,53)
OR=OR=6,126,12 (95% CI 2,42–15,48)
OR=OR=3,923,92 (95% CI 1,74 – 8,79)
OR=OR=5,225,22 (95% CI 2,11–12,92)
ТРБА
![Page 13: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/13.jpg)
ADRB2ADRB2 – – ген бета2-адренорецептораген бета2-адренорецептора
Ген ADRB2
2-адренорецептор
![Page 14: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/14.jpg)
Ассоциация аллельных вариантов Ассоциация аллельных вариантов Gly16ArgGly16Arg и и Gln27GluGln27Glu по гену по гену ADRB2ADRB2 с ОФВ с ОФВ11
у больных ТРБА и ТЧБАу больных ТРБА и ТЧБА
ТРБА
ТЧБА
47,40
76,22
57,81
75,11
52,77
77,02
0
20
40
60
80
ОФ
В1
, %
16GlyGly 16GlyArg 16ArgArg
56,96
71,68
51,97
78,47
52,18
76,57
0
20
40
60
80
ОФ
В1
, %
27GlnGln 27GlnGlu 27GluGlu
p<0,001 p=0,004
p<0,001 p=0,020
![Page 15: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/15.jpg)
Распределение аллельных вариантов Распределение аллельных вариантов Arg130GlnArg130Gln гена гена IL13IL13 у больных ТРБА и ТЧБА у больных ТРБА и ТЧБА
0
10
20
30
40
50
60
ArgArg ArgGln GlnGln
ТРБА
ТЧБАКонтроль
39,1 38,2
57,352,2
51,3
38,8 8,7 10,5
3,9
р=0,009
р=0,031Частоты аллеля 130Gln гена IL13
0
0,1
0,2
0,3
0,4
ТРБ
А
ТЧБ
А
Конт
роль
p<0,050p<0,050
0,34
8
0,23
3
0,36
2
![Page 16: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/16.jpg)
NR3C1NR3C1 – – ген глюкокортикоидного рецептораген глюкокортикоидного рецептора
9 экзонов
Изоформы ГР:
Р γ А α
Альтернативный сплайсинг
![Page 17: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/17.jpg)
Экспрессия изоформ глюкокортикоидного рецептораЭкспрессия изоформ глюкокортикоидного рецептора
у больных ЛБА и СБА в зависимости от терапии ГКСу больных ЛБА и СБА в зависимости от терапии ГКС
0
20
40
60
80
100
120
Эксп
ресс
ия Г
Р-ал
ьфа,
ед.
ЛБА СБА
0
5
10
15
20
25
30
35
Экс
пр
есси
я Г
Р-б
ета,
ед
.
ЛБА СБА
Экспрессия изоформы Экспрессия изоформы
ГРГРααЭкспрессия изоформы Экспрессия изоформы
ГРГР
4,2 8,81,3
105,431,8
20,6
11,9 1,5
До лечения ГКС
После лечения ГКС
![Page 18: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/18.jpg)
Молекулярно-генетические и клинические аспекты ТРБА
ГКТ:Длительная ГКТИГКС>1200 мкг
Высокие дозы ТГКС
ГКС-ассоциированные осложнения
IL4 -589T
Фатальные осложнения
(астматический статус)
Нейтрофильное воспаление
MDR13435C
кортизола
↑ потребности в КДБА
↑ экспрессии ГР
NR3C1 363SN
Отягощенная наследственность
ДН
ОФВ1, МОС75,SGaw
IL13130Gln
ADRB216Gly
ADRB227Glu
ТРБА
![Page 19: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/19.jpg)
Фенотип ТРБАФенотип ТРБА
НейтрофильноевоспалениеОжирение
ХОБЛ
ГЭРБ
ИБС
ГБ
Курение
Рестриктивные изменения
Частично обратимаябронхообструкция
Поздняя манифестация БА
Старший возраст
Женский пол
Плохой контрользаболевания
ТРБАТРБА
![Page 20: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/20.jpg)
Молекулярно-генетические механизмы развития Молекулярно-генетические механизмы развития ТРБАТРБА
ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯРЕЗИСТЕНТНОСТЬ
Факторы внешней среды(инфекция, аллергены, поллютанты)
Персистенциявоспаления
NR3C1
Лекарственные мишени: чувствительности к
глюкокортикостероидам
мРНК ГР α/
![Page 21: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/21.jpg)
Алгоритм диагностики ТРБААлгоритм диагностики ТРБА
Генетическое тестированиеПЦР
Ген MDR1 (3435C)Ген IL13 (130Gln)
Ген (-589Т)Ген ADRB2 (16GlyArg)Ген ADRB2 (27GluGlu)
ПЦР в реальном времениГен NR3C1 (изоформы ГР α/β)
Трудноконтролируемая БАДонозологическая диагностика БА
Персонифицированная терапия ТРБА
ГЕНОТИП
Стандартное клинико-лабораторное
исследование
Фенотип ТРБА
![Page 22: Миронова Жанна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ](https://reader035.vdocuments.pub/reader035/viewer/2022062721/56813896550346895da044e7/html5/thumbnails/22.jpg)
БлагодарюБлагодарю
за за внимание!внимание!