茄科枯萎病原菌致病性分化茄科枯萎病原菌致病性分化

及其与植株内生菌的相互关系及其与植株内生菌的相互关系

报告人：朱磊福建省农科院农业生物资源研究所福建省农科院农业生物资源研究所

农业微生物研究中心农业微生物研究中心

主要内容主要内容

前期已经开展的工作前期已经开展的工作

下一步实验计划下一步实验计划

前期已经开展的工作前期已经开展的工作

病原菌采集分离病原菌采集分离

枯萎病的发生

菌落形态

病原菌的鉴定病原菌的鉴定形态学

分子鉴定

ITS4/ITS5

FU3/FU4

FOF1/FOR1

53-6F/53-6R

Fusof/Fusor

FU3/FU4

Fu3:5’CCG AGT TTA CAA CTC CCA AA3’ ;Fu4:5’TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC3’

FOF1/FOR1

FOF1 ： 5′-ACA TAC CAC TTG TTGCCT CG-3′ ； FOR1 ： 5′-CGC CAA TCA ATT TGAGGA ACG-3′

茄科枯萎病原菌的茄科枯萎病原菌的 GFPGFP 基因标记基因标记

质粒质粒 PCT74PCT74 ，强组成型表达，强组成型表达 sGFPsGFP 的载体，采用真菌的载体，采用真菌

Pyrenophora tritici-repentisPyrenophora tritici-repentis 的的 ToxAToxA 启动子，同时具有潮霉素启动子，同时具有潮霉素

BB磷酸转移酶基因。磷酸转移酶基因。

原生质体 初生转化子

原生质体制备原生质体制备 : 20mg/ml Drease,20mg/ml : 20mg/ml Drease,20mg/ml 融壁酶，酶解消化融壁酶，酶解消化 3h3h

00 100100

200200 300300 400400

转化子对潮霉素（转化子对潮霉素（ μg·mLμg·mL-1-1 ）抗性水平分析）抗性水平分析

转化子的验证Hmb验证

3601

282

3602

282282

3606 3609 36123611

Hmb 200ug/mL

PCR验证PCR引物P28 ： 5/TAGTGGACTGATTGGAATGCATGGAGGAGT3/

P29 ： 5/GATAGAACCCATGGCCTATATTCATTCAAT3/

扩增片断大小为 417bp，区域为约 325 bp的启动子序列和约 90bp ToxA基因 5/端非翻译区。

分生孢子

分生孢子

菌丝菌丝

下一步实验计划下一步实验计划利用 GFP菌株跟踪观察病原菌在植株体内的侵染特性、致病机理

共聚焦激光扫描显微镜

能检测到单个标记 GFP菌株能消除杂散荧光等的干扰，图像更加清晰逐层扫描，可对活体、固定的细胞组织进行观察了解菌株在植物体表、体内的定制和基因表达情况

健康和发病状态的茄科植物内生菌群落分析 平板分离 PLFA 分析

健康和发病状态的茄科植物根系微生物群落分析 平板分离 PLFA 分析

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