开放实验

切花保鲜和采后生理

厦门大学生命科学学院

一一 .. 实验目的意义实验目的意义要求学生能运用已学的知识进行实验设计能根据自己的设计独立进行实验操作能独立解决实验中出现的问题能对实验现象和实验结果做出合理的解释能对实验数据进行科学的统计分析提高学生独立科研能力

二二 .. 实验原理实验原理1. 切花保鲜技术1.1 采收： 花期采收、蕾期采收（香石竹、月季、唐菖蒲、郁金香、菊

花） 剪取时间：清晨或傍晚 花枝留取高度：取决于吸水力，强高弱低

1. 2 采后预处理 采收→ 浸水 4h → 水中切除花梗 5cm → 捆扎→ 预处理

液处理→ 不透明塑料袋包裹→ 装入有孔纸箱→ 运输、贮藏

预处理液：– 香石竹： 10 ％蔗糖， 1000 ug/L 硝酸银溶液浸泡 10min– 月季： 2 ％蔗糖、 300 ug/L 8- 羟基喹啉溶液（或其硫酸盐、柠檬酸

盐 溶液）浸泡 10min– 唐菖蒲、郁金香、菊花： 1000 ug/L 硝酸银溶液处理 10min

1. 3 催花 催花液：蔗糖、杀菌剂、植物激素（或生长调节剂）

– 香石竹： 7 ％蔗糖、 25ug/L GA 、 300 ug/L 8- 羟基喹啉柠檬酸盐溶液

– 月季： 2 ％蔗糖、 25ug/L GA 、 300 ug/L 8- 羟基喹啉柠檬酸盐溶液

– 唐菖蒲、郁金香： 5 ％蔗糖、 25ug/L GA 、 300 ug/L 8- 羟基喹啉柠檬酸盐溶液

1. 4 延长花期 插瓶前花枝处理：

– 水下剪切：草本剪斜面；粗花枝或木本花切口剪十字型或多开 裂缝或敲碎

– 热烫法，灼伤法，温水浸泡法，末端击碎法，冷藏法，消毒法

1.5 营养保鲜法 营养物质：蔗糖、果糖、葡萄糖、无机盐等 杀菌防腐剂： VitC 、阿司匹林、水杨酸、高锰酸钾、硫酸铜、食盐、 硫磺、明矾、琥珀酸、丁醇、酒精、苯甲酸等 乙烯抑制剂：硝酸银、硫代硫酸银、醋酸银、硝酸钴、氨基氧乙酸、 硝酸钾（钙） 、高锰酸钾等 pH 3~4 ：用柠檬酸调节 可适当添加激素和氨基酸 日常用营养液配方： ( 水最好存放一昼夜或用蒸馏水）

– 阿司匹林 3 片， VitC2 片，溶于 1L 水中– 糖 20g, 8- 羟基喹啉 02~0.3g ，溶于 1L 水中– 糖 10g ，盐 10g ，溶于 1L 水中– 糖 20g ，硫酸铜 5g ，溶于 1L 水中

1.6 日常管理： 叶片不能浸在水中，每 2~3 天换水一次，茎部不新鲜切口要切除 摆放：不要放在成熟瓜果附近，阳光直射和烟熏的地方

2. SOD2. SOD 测定原理测定原理 检测 SOD 常用间接的化学方法　在反应系统中，存在　产生 O2

．体系（如核黄素照光或黄嘌呤 - 黄嘌呤氧化　　

　　　　　　　　　　酶等）　被氧化或还原后可检测的物质（如 NBT, 　 Cytc 或　　　　　　　　邻苯三酚，肾上腺素等 )

　　　通过光谱吸收，测定被氧化或还原后物质的变化 ,从而计算出 SOD 的活性。

　　　氮蓝四唑（ NBT ）光化还原的方法常用于植物组织的 SOD 活性测定和 SOD 同工酶带显示。

酶单位 / 样品量 =

3. 3. 丙二醛测定原理丙二醛测定原理 丙二醛 (MDA) 是常用的膜脂过氧化指标，

在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸 (TBA) 反应生成红棕色的三甲川（ 3,5,5 －三甲基恶唑 2,4 －二酮），其最大吸收波长在 532 nm 。可采用分光光度法计算 MDA 含量。

直线回归法： Y532 ＝－ 0.00198 ＋ 0.088D450

双组分分光光度计法 ： C1(mmol/L)=11.71D450

C2(umol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450

三三 .. 实验设计实验设计 选材 营养液的选择和配制（药品提前开出并上交） 实验操作设计及注意事项

– 材料的选择和处理– 实验组和对照组的设计

生理指标（ SOD和MDA）的测定（取样要科学）– 原理的理解– 所需仪器药品及药品配制– 详细的操作过程

数据的整理和分析结论

选

材

四四 .. 实验安排实验安排四人一组自行组合、设计、选材实验四周（保鲜液更换、形态观察、 SO

D 和 MDA 测定）数据统计分析，实验总结课堂汇报根据所提意见对实验总结进行修改，撰

写实验报告

五五 .. 结果与分析结果与分析定期记录形态色泽变化和花的落瓣情况。对测得的生理指标要进行科学计算和统计

分析。针对实验结果做出比较和总结分析，确定

保鲜效果。

六六 .. 注意事项注意事项6.1 保鲜过程中的注意事项选材要选取新鲜、健康的材料保鲜液配制注意试剂的理化特性及试剂间是否

存在化学反应准确计算试剂用量，避免浪费仪器使用时注意操作正确定期更换保鲜液，注意保鲜液的 pH 变化和染菌情况

测生理指标时注意采样的科学性

6.2 SOD6.2 SOD 测定注意事项测定注意事项用 PBS 研磨样品 ( 其它样品保存在 冰箱 ),离心后上 清液为粗酶液 (冰箱中保存 )

　研磨时 PBS不要超过 4.5mL 样品研磨完后配反应液 ,加样过程中注意避

光保存要做预实验确定酶液 加入量，酶液加入量以抑制率在 35%-65%为好

分装反应液 , 在每支试管中加入适量粗酶液(5-200uL), 在 316 光照 10-30min.

注意空白对照和最大照光 管的设置 .

6.3 6.3 测定测定 MDAMDA 时的注意事项时的注意事项 测定 MDA 时会受多种物质的干扰，其中最主要

的是可溶性糖，糖与 TBA 显色反应产物的最大吸收波长在 450nm处， 532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中 MDA-TBA 反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加 TBA 与蔗糖或 MDA 显色反应物在 532 、 450nm处的消光值，所以在蔗糖、 TBA 与 MDA 显色反应中需要有一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为 100～300ug/gDW ，根据植物样品量和提取液的体 积，加入 Fe3+ 的终浓度为 0.5nmol/L 。

七七 . . 思考题思考题通过本次实验 你体会最深的是什么？从中你

学到了什么？对开放性实验 你有何好的建议？

八八 .. 开放实验总结 开放实验总结1.查资料 , 设计实验 ( 确定材料 , 选保鲜液 ) 。 2. 取材 ( 新鲜、健 壮，生理 状态相近 )3. 配制保鲜液 试剂配制：溶解性、反应沉淀、禁止配母液 药品称量：保持桌面和天平整洁，注意腐蚀性4.日常管理要保 持实验 室的干净、整洁 注意仪器的开关，正常使用和维护5.SOD 和 MDA 测定原理要 清楚。采样时取 0.1-0.

5g, 注意采样的科学性。6. 保鲜结果

7.7. 实验报告撰写的科学性和 规范性实验报告撰写的科学性和 规范性条理不够清楚 , 照抄照搬现象严重实验设计 表述要一目了然，关键细节简单提及实验现象 描述最好采用比较 列表的形式 ,不要

记流水帐结果计算要采用标准 模式 酶活单位： U/mg Protein, U/g•NW 或 U/g•FW图表不规范结论太武断

SOD月季切花保鲜过程中 活性变化

0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

0 2 4 6 8 10 12ti me/d

(U/g.Fw)

酶活

"对照（蒸馏水处理）基本保鲜液

BA基本保鲜液＋６－BA+基本保鲜液＋６－ 物理处理