实验实验血液一般检查血液一般检查

上海交通大学医学院上海交通大学医学院丁磊丁磊

【【目的目的】】 掌握血涂片的制备和瑞氏染色掌握血涂片的制备和瑞氏染色

的方法。的方法。 掌握外周血各类细胞的形态特掌握外周血各类细胞的形态特

点。点。

【【器材器材】】 一次性消毒采血针、一次性消毒采血针、 75%75% 乙乙

醇棉球、载玻片、推片、吸耳球、醇棉球、载玻片、推片、吸耳球、显微镜。显微镜。

【【试剂试剂】】瑞氏染液瑞氏染液II 液液：：包含瑞氏染料包含瑞氏染料 1.0g1.0g 、纯甲醇（、纯甲醇（ AA

RR 级以上）级以上） 600.0ml600.0ml 、甘油、甘油 15ml15ml 。 。 IIII 液：液：磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（ pH6.4~6.8pH6.4~6.8 ））【【标本标本】】 EDTA EDTA 抗凝静脉血或外周血。 抗凝静脉血或外周血。

【【操作操作】】 （（ 11 ））采血采血：静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、：静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、

注射针头等在距载玻片一端注射针头等在距载玻片一端 1cm1cm 处加处加 11 滴抗凝血，滴抗凝血，如果使用手指采血则直接用洁净玻片蘸如果使用手指采血则直接用洁净玻片蘸 1 1 滴血。滴血。

（（ 22 ））推片推片：左手平执载玻片，或放在类似桌子等：左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从后方或前方接近血滴，使平坦地方，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈载玻片呈 30~4530~45 。。 角，轻压推片边缘将血液推制角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。尾清晰可见。

SMEAR

Drop of blood

Slide 1

Slide 2

On contact, slide 2 extends the drop along its 1” side

Slide 2

Pushing angled slide 2 along #1 smears the line of blood across slide 1

Slide 2

Lift away slide 2; dry #1; stain; coverslip

Smear

A few cells are damaged; smear is not evenly thick; & staining is uneven. Same apply to SPREADS

（（ 33 ））干燥干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。天气寒冷或潮湿时，应于 迅速干燥。天气寒冷或潮湿时，应于 37 ℃37 ℃温箱中温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。保温促干，以免细胞变形缩小。

（（ 44 ））标记标记：在载玻片的一端用记号笔编号。：在载玻片的一端用记号笔编号。（（ 55 ））染色染色：待血涂片干透后，用蜡笔在两端划线，：待血涂片干透后，用蜡笔在两端划线，

以防染色时染液外溢。然后将玻片平置于染色架上，以防染色时染液外溢。然后将玻片平置于染色架上，滴加染液（滴加染液（ II 液） 液） 3~5 3~5 滴，使其迅速盖满血涂片，滴，使其迅速盖满血涂片，约约 0.5~ 1min0.5~ 1min 后，滴加等量或稍多的缓冲液（后，滴加等量或稍多的缓冲液（ II II 液），轻轻摇动玻片或用吸球对准血片吹气，使染液），轻轻摇动玻片或用吸球对准血片吹气，使染液充分混合。液充分混合。

（（ 66 ）） 冲洗冲洗：： 5~10 min5~10 min 后用流水冲去染液，后用流水冲去染液，待干。待干。

（（ 77 ））结果观察结果观察：将干燥后的血片置显微：将干燥后的血片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处血细胞平铺的部分。界处血细胞平铺的部分。

细胞 大小细胞 大小中性粒细胞 中性粒细胞 10~15um 10~15um 嗜酸性粒细胞 嗜酸性粒细胞 13~15um13~15um嗜碱性粒细胞 嗜碱性粒细胞 10~12um10~12um单核细胞 单核细胞 15~25um15~25um淋巴细胞 淋巴细胞 6~15um6~15um

中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞

中性分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞

单核细胞单核细胞

小淋巴细胞小淋巴细胞

大淋巴细胞大淋巴细胞

大淋巴细胞大淋巴细胞

嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞

EosinophilEosinophil

嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞

drumstickdrumstick

假性假性 drumstickdrumstick

【【结果报告结果报告】】 细胞 计数 百分比细胞 计数 百分比%%中性粒细胞 正正 中性粒细胞 正正 嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞

描绘镜下所见外周血细胞形态描绘镜下所见外周血细胞形态

实验实验 (( 血涂片制备和染色）流程图血涂片制备和染色）流程图

干燥

标记

染色

冲洗结果观察

采血

推片