天津市药品检验所 天津市药品检验所 黄志东黄志东

微乳液相色谱法在药物分析中的应用

主要讨论的内容主要讨论的内容 ::1.1. 微乳液的定义、结构与特征及其制法微乳液的定义、结构与特征及其制法2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素 3.3. 微乳液相色谱的应用微乳液相色谱的应用4.4. 展望 展望

1.1. 微乳液的定义、结构与特征及其制法微乳液的定义、结构与特征及其制法1.1 1.1 定义定义 由表面活性剂、助表面活性剂由表面活性剂、助表面活性剂 (( 通常为醇类通常为醇类 )) 、油、油 (( 通常通常为为碳氢化合物碳氢化合物 )) 和水和水 (( 或盐水或盐水 )) 在合适的比例下自发形成的热力在合适的比例下自发形成的热力学学稳定、各向同性、 低黏度、外观透明或半透明、粒径在稳定、各向同性、 低黏度、外观透明或半透明、粒径在 1010 ～～100nm100nm 的分散体系。的分散体系。

1.1. 微乳液的定义、结构与特征及其制法微乳液的定义、结构与特征及其制法1.2 1.2 结构与特征结构与特征 结构：结构： 根据连续相和分散相的成分，均一单分散的微乳液又可分根据连续相和分散相的成分，均一单分散的微乳液又可分为水包油为水包油 (O/W)(O/W) 即正相微乳液即正相微乳液 (( 也就是正相微乳液与过量的水相也就是正相微乳液与过量的水相共存共存 )) 和油包水和油包水 (W/O)(W/O) 即反相微乳液即反相微乳液 (( 也即反相微乳液与过量油也即反相微乳液与过量油共共存存 )) 。。 微乳液具有及其多变的微观结构，而且随着客观条件的改微乳液具有及其多变的微观结构，而且随着客观条件的改变，不同类型的微乳液之间可以相互转变。 变，不同类型的微乳液之间可以相互转变。

1.1. 微乳液的定义、结构与特征及其制法微乳液的定义、结构与特征及其制法1.2 1.2 结构与特征结构与特征 特征：特征： 微乳液的粒径介于胶束和宏观乳液之间微乳液的粒径介于胶束和宏观乳液之间 ,, 乳液一般大于乳液一般大于 100100nmnm ，胶束则小于，胶束则小于 10nm10nm ；用电子显微镜观察微乳液时，发现颗粒；用电子显微镜观察微乳液时，发现颗粒越细越细 ,, 分散度越窄分散度越窄 ,, 而一般的乳液的粒径分布较宽，既颗粒大小而一般的乳液的粒径分布较宽，既颗粒大小非常悬殊；微乳液一般为澄清、透明或者半透明的分散体系，非常悬殊；微乳液一般为澄清、透明或者半透明的分散体系，有的有乳光，而一般的乳液通常为不透明的乳白色；微乳液稳有的有乳光，而一般的乳液通常为不透明的乳白色；微乳液稳定性好，长时间放置也不会分层和破乳定性好，长时间放置也不会分层和破乳 ,, 若将其放在若将其放在 100100 个重力个重力加速度的超速离心机中旋转几分钟也不会分层，而乳液则会分加速度的超速离心机中旋转几分钟也不会分层，而乳液则会分层；微乳液具有超低界面张力的性质。 层；微乳液具有超低界面张力的性质。

1.1. 微乳液的定义、结构与特征及其制法微乳液的定义、结构与特征及其制法1.3 1.3 制法制法 首先要通过三元相图找出微乳区域，从而确定各成分的用首先要通过三元相图找出微乳区域，从而确定各成分的用量范围。确定各组分比例后，再行制备。量范围。确定各组分比例后，再行制备。 微乳液的制法有两种微乳液的制法有两种 :: 一种是把烃、水、乳化剂混合均匀，一种是把烃、水、乳化剂混合均匀，然后向该乳液中滴加醇，在某一时刻体系会突然间变得透明，然后向该乳液中滴加醇，在某一时刻体系会突然间变得透明，这样获得了微乳液，即这样获得了微乳液，即 SchulmanSchulman 法；另一种是把烃、醇、乳化法；另一种是把烃、醇、乳化剂混合为乳液体系，向该乳液中加入水，体系也会在瞬间变成剂混合为乳液体系，向该乳液中加入水，体系也会在瞬间变成透明，即透明，即 ShahShah 法。还有文献报道另一种方法是不加醇，而是加法。还有文献报道另一种方法是不加醇，而是加入某种强极性单体，如丙烯酰胺、三甲基氯化铵等，在选择适入某种强极性单体，如丙烯酰胺、三甲基氯化铵等，在选择适当乳化剂的情况下，也能得到微乳液。文献报道将混合后的微当乳化剂的情况下，也能得到微乳液。文献报道将混合后的微乳体系超声乳体系超声 30 min30 min ，有助于促进各成分的分散，制得的微乳更，有助于促进各成分的分散，制得的微乳更加稳定。实验发现，除超声外，有的微乳体系需要静置足够的加稳定。实验发现，除超声外，有的微乳体系需要静置足够的时间才能形成（与温度有关）。为了防止油相的挥发，混合应时间才能形成（与温度有关）。为了防止油相的挥发，混合应该在密闭容器中进行。该在密闭容器中进行。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.1 2.1 特点特点 微乳液相色谱通常分为微乳液相色谱通常分为 O/W(O/W( 正相微乳液相色谱正相微乳液相色谱 )) 和和 W/O (W/O ( 反反相微乳液相色谱相微乳液相色谱 )) 两种模式。两种模式。 以微乳作为流动相的以微乳作为流动相的 HPLC HPLC 的特点是：微乳能对疏水性组分的特点是：微乳能对疏水性组分增溶增溶 ,, 有利于复杂样品有利于复杂样品 ((溶解度、酸碱性和极性差别很大的药物溶解度、酸碱性和极性差别很大的药物 ))的分离分析，应用范围宽； 用常用流动相通常需要进行梯度洗的分离分析，应用范围宽； 用常用流动相通常需要进行梯度洗脱的样品，用微乳流动相等梯度洗脱即可完成分析， 降低了分脱的样品，用微乳流动相等梯度洗脱即可完成分析， 降低了分析成本，缩短了分析时间 ；以微乳为流动相，可控操作参数较析成本，缩短了分析时间 ；以微乳为流动相，可控操作参数较多，容易改善溶质的保留行为，提高了分离度。 此外，微乳的多，容易改善溶质的保留行为，提高了分离度。 此外，微乳的光学透明性可以使用紫外末端吸收波长光学透明性可以使用紫外末端吸收波长 ((最低可达最低可达 190nm)190nm) 分析无分析无生色团的样品。 微乳流动相对温度变化不敏感，色谱峰重现性生色团的样品。 微乳流动相对温度变化不敏感，色谱峰重现性好。 好。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.2 2.2 分离机制分离机制 使用微乳做流动相时使用微乳做流动相时 ,, 表面活性剂分子单体可以吸附在固表面活性剂分子单体可以吸附在固定定相表面。溶质在修饰后的固定相、水相和微乳液滴三相间转移相表面。溶质在修饰后的固定相、水相和微乳液滴三相间转移 ,,类似于胶束液相色谱类似于胶束液相色谱 (MLC)(MLC) 中的三相平衡。但由于微乳中的助表中的三相平衡。但由于微乳中的助表面活性剂和油相分子可以置换吸附在固定相表面的表面活性剂面活性剂和油相分子可以置换吸附在固定相表面的表面活性剂 ,,所以，两种色谱的三相平衡基础是不同的。所以，两种色谱的三相平衡基础是不同的。 以胶束为流动相的以胶束为流动相的 HPLCHPLC，表面活性剂在固定相表面上形成，表面活性剂在固定相表面上形成吸附层，因此，传质速率低，柱效较低。微乳吸附层，因此，传质速率低，柱效较低。微乳 HPLCHPLC的分离机制的分离机制与胶束色谱相同，但由于加入的助表面活性剂从固定相表面上与胶束色谱相同，但由于加入的助表面活性剂从固定相表面上释放表面活性剂，加速传质，克服了胶束流动相的缺点，溶质释放表面活性剂，加速传质，克服了胶束流动相的缺点，溶质或从水相或从固定相分配进入含油液滴，更有利于提高色谱的或从水相或从固定相分配进入含油液滴，更有利于提高色谱的分离能力。 分离能力。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.1 2.3.1 对于对于 O/W O/W 型微乳液相色谱 型微乳液相色谱 2.3.1.1 2.3.1.1 表面活性剂的浓度和类型表面活性剂的浓度和类型 在微乳形成的浓度范围内在微乳形成的浓度范围内 , , 随着表面活性剂浓度的增加随着表面活性剂浓度的增加 , , 微微乳液滴的体积增加。但吸附有表面活性剂单体的固定相性质不乳液滴的体积增加。但吸附有表面活性剂单体的固定相性质不受其浓度影响，因此不影响溶质与固定相的相互作用，只影响受其浓度影响，因此不影响溶质与固定相的相互作用，只影响那些与微乳液滴有相互作用的溶质那些与微乳液滴有相互作用的溶质 ,, 即亲脂化合物的保留降低即亲脂化合物的保留降低 ,,而不分配进入油滴的亲水性成分不受影响。改变表面活性剂类而不分配进入油滴的亲水性成分不受影响。改变表面活性剂类型，会使固定相吸附层的性质和微乳液滴的大小及表面电荷均型，会使固定相吸附层的性质和微乳液滴的大小及表面电荷均发生变化，从而改变溶质和微乳及溶质和固定相之间的分配，发生变化，从而改变溶质和微乳及溶质和固定相之间的分配，影响分离的选择性；离子型表面活性剂的电荷性质还影响溶质影响分离的选择性；离子型表面活性剂的电荷性质还影响溶质与液滴、溶质与固定相吸附层之间的静电相互作用与液滴、溶质与固定相吸附层之间的静电相互作用 ,, 而且带正、而且带正、负电荷的表面活性剂与固定相的结合作用有可能不同，对离子负电荷的表面活性剂与固定相的结合作用有可能不同，对离子型化合物的分离影响较大。与本清源型化合物的分离影响较大。与本清源 SDSSDS 相比相比 ,,当使用非离子型当使用非离子型的吐温类做表面活性剂时，含羧基类化合物的保留增加。使用的吐温类做表面活性剂时，含羧基类化合物的保留增加。使用DTABDTAB 等阳离子表面活性剂时中性化合物峰型变差，洗脱顺序也等阳离子表面活性剂时中性化合物峰型变差，洗脱顺序也与用与用 SDSSDS 时不同。 时不同。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.1 2.3.1 对于对于 O/W O/W 型微乳液相色谱 型微乳液相色谱 2.3.1.2 2.3.1.2 助表面活性剂的浓度和类型 助表面活性剂的浓度和类型 助表面活性剂一般为短链醇，常用的有丙醇、丁醇、戊醇助表面活性剂一般为短链醇，常用的有丙醇、丁醇、戊醇和丙二醇等。助表面活性剂含量增加对组分保留的影响不及表和丙二醇等。助表面活性剂含量增加对组分保留的影响不及表面活性剂，但其类型不同对分离的选择性影响较大。丁醇可以面活性剂，但其类型不同对分离的选择性影响较大。丁醇可以在微乳油滴与外层水相的界面上进行分布，使微乳体积增加，在微乳油滴与外层水相的界面上进行分布，使微乳体积增加，但可能存在容量的限制但可能存在容量的限制 ,, 低于最大量时低于最大量时 ,,对组分保留影响不大；对组分保留影响不大；超过此限量时，由于丁醇不能再与液滴结合而进入水相，增加超过此限量时，由于丁醇不能再与液滴结合而进入水相，增加了流动相中有机相的比例，使疏水性物质的洗脱加快。在了流动相中有机相的比例，使疏水性物质的洗脱加快。在 3.3%3.3%SDSSDS 、、 0.8%0.8% 辛烷和丁醇组成的微乳里辛烷和丁醇组成的微乳里 ,,丁醇的最大容量可能是丁醇的最大容量可能是 9%;9%;而在而在 2.85%SDS2.85%SDS 胶束溶液中，丁醇的最佳含量是胶束溶液中，丁醇的最佳含量是 5%(w/w)5%(w/w) 。。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.1 2.3.1 对于对于 O/W O/W 型微乳液相色谱 型微乳液相色谱 2.3.1.3 2.3.1.3 油相的浓度和类型 油相的浓度和类型 油相对中性疏水物质的影响较大。一方面，油相的加入可油相对中性疏水物质的影响较大。一方面，油相的加入可以增加流动相中有机相的比例，使保留时间缩短；另一方面，以增加流动相中有机相的比例，使保留时间缩短；另一方面，油相分子也可以部分分配到固定相上油相分子也可以部分分配到固定相上 ,,使固定相的极性也变小使固定相的极性也变小 ,,因而使得化合物保留和选择性的变化更复杂。由于油相在水包因而使得化合物保留和选择性的变化更复杂。由于油相在水包油型微乳中所占比例较小油型微乳中所占比例较小 ((＜＜ 1%)1%) ，油相在色谱分离中的作用，油相在色谱分离中的作用还还有待深入考察。无疑，油相的加入对增加疏水性化合物的溶解有待深入考察。无疑，油相的加入对增加疏水性化合物的溶解性是有显著作用的，因而对强疏水性的化合物的洗脱有利。性是有显著作用的，因而对强疏水性的化合物的洗脱有利。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.1 2.3.1 对于对于 O/W O/W 型微乳液相色谱 型微乳液相色谱 2.3.1.4 2.3.1.4 水相水相 pHpH 值和离子强度 值和离子强度 对于弱酸弱碱性化合物，对于弱酸弱碱性化合物， pH pH 值影响其解离型和游离型的平衡关系，因值影响其解离型和游离型的平衡关系，因而影响其在固定相和流动相的分配。 对酸类来说，而影响其在固定相和流动相的分配。 对酸类来说， pH pH 降低时游离型比例增降低时游离型比例增大，保留时间延长，这与常规液相结果是类似的，而中性化合物如萘则不受大，保留时间延长，这与常规液相结果是类似的，而中性化合物如萘则不受pHpH变化的影响。变化的影响。 水相中离子强度大有利于较高水含量的微乳的形成。有人用水相中离子强度大有利于较高水含量的微乳的形成。有人用 SDS-SDS- 丁醇丁醇 --辛烷辛烷 -0.01 mol/L -0.01 mol/L 硼酸钠微乳体系做流动相硼酸钠微乳体系做流动相 , , 在梯度洗脱方式下分离一系列在梯度洗脱方式下分离一系列碱性药物。在水含量较高的起点，产生很强的紫外吸收信号碱性药物。在水含量较高的起点，产生很强的紫外吸收信号 , , 表明两相混合表明两相混合时引起了微乳结构的破坏。用时引起了微乳结构的破坏。用 0.5 mol/L NaCl0.5 mol/L NaCl溶液代替水后溶液代替水后 ,,噪音信号降低噪音信号降低 ,,表明微乳保持稳定。表明微乳保持稳定。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.1 2.3.1 对于对于 O/W O/W 型微乳液相色谱 型微乳液相色谱 2.3.1.5 2.3.1.5 固定相的影响 固定相的影响 固定相的填料类型、孔径大小、柱子长短都会对分离产生影响。据报固定相的填料类型、孔径大小、柱子长短都会对分离产生影响。据报道，由于胶束的直径与普通液相填料的孔径相当，胶束溶液做流动相时道，由于胶束的直径与普通液相填料的孔径相当，胶束溶液做流动相时 ,, 在在填料的孔隙内部停留的溶质不易洗脱填料的孔隙内部停留的溶质不易洗脱 ;; 使用大孔径的色谱柱填料可增加胶束使用大孔径的色谱柱填料可增加胶束溶液的洗脱能力溶液的洗脱能力 ,,使用短柱或渗透性更好的整体柱能增加洗脱速度而不影响使用短柱或渗透性更好的整体柱能增加洗脱速度而不影响柱效。微乳液滴的直径比胶束大柱效。微乳液滴的直径比胶束大 1010倍左右倍左右 (( 这与油相的加入量有关这与油相的加入量有关 ),),固定相固定相的孔径对分离效率的影响可能更为明显。的孔径对分离效率的影响可能更为明显。 AltriaAltria等 联合应用微乳流动相和等 联合应用微乳流动相和整体柱对药物进行分离，表明整体柱可以减少柱后压整体柱对药物进行分离，表明整体柱可以减少柱后压 ,,增加流速以缩短分离增加流速以缩短分离时间。但整体柱应用于时间。但整体柱应用于 MELCMELC，其在柱效方面的变化尚需进行深入研究。，其在柱效方面的变化尚需进行深入研究。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.1 2.3.1 对于对于 O/W O/W 型微乳液相色谱 型微乳液相色谱 2.3.1.6 2.3.1.6 其它因素其它因素 MELC MELC 对于样品溶剂和柱温变化不太敏感，但柱温升高一般可加快溶质对于样品溶剂和柱温变化不太敏感，但柱温升高一般可加快溶质的质量转移，提高分离效率。加入离子对试剂或环糊精等的质量转移，提高分离效率。加入离子对试剂或环糊精等 ,, 可改变分离的选可改变分离的选择性。采用梯度洗脱方式，能使被测物涵盖更大的极性和溶解性范围择性。采用梯度洗脱方式，能使被测物涵盖更大的极性和溶解性范围 ,, 分析分析速度也加快速度也加快 ,, 适于复杂样品的分离。而且因为增加微乳液滴的浓度不会改变适于复杂样品的分离。而且因为增加微乳液滴的浓度不会改变固定相的结构和组成，使用微乳做流动相进行梯度洗脱时固定相的结构和组成，使用微乳做流动相进行梯度洗脱时 ,, 两次进样之间不两次进样之间不需要再平衡，比有机溶剂需要再平衡，比有机溶剂 // 水系统的梯度分离节省时间。水系统的梯度分离节省时间。 有报道研究了在辛伐他汀的杂质色谱分离过程中有报道研究了在辛伐他汀的杂质色谱分离过程中 ,, 微乳流动相的结构和微乳流动相的结构和界面性质对其所产生的影响界面性质对其所产生的影响 :: 色谱分离优化过程中使用具有最小粒径和薄膜色谱分离优化过程中使用具有最小粒径和薄膜厚度厚度 ,,最低表面张力的微乳最低表面张力的微乳 ,, 结果发现溶质和固定相之间的疏水性相互作用、结果发现溶质和固定相之间的疏水性相互作用、微乳流动相的微观结构特性对分离辛伐他汀和杂质的色谱行为产生显著影微乳流动相的微观结构特性对分离辛伐他汀和杂质的色谱行为产生显著影响。响。

2.2. 微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素微乳液相色谱的特点、分离机制和影响因素2.3 2.3 影响因素影响因素2.3.2 W/O2.3.2 W/O 微乳液相色谱微乳液相色谱 尽管尽管 MELCMELC的第一篇文献报道采用的是的第一篇文献报道采用的是 W/OW/O 型微乳做流动相型微乳做流动相 ,,到目前为止，到目前为止，W/O MELCW/O MELC的研究很少，可能与其粘度大，柱压过高有关。的研究很少，可能与其粘度大，柱压过高有关。 BerthodBerthod等研究等研究 5050种不同组成比例的种不同组成比例的 AOT-AOT-水水 --庚烷微乳体系对庚烷微乳体系对 4-4-硝基苯甲酸和硝基苯甲酸和 4-4-硝基苯酚的保硝基苯酚的保留行为的影响时，发现两者的保留因子与微乳的理化结构参数留行为的影响时，发现两者的保留因子与微乳的理化结构参数 MW/AOT(MW/AOT( 水与水与AOTAOT的摩尔比的摩尔比 ))紧密相关。最近紧密相关。最近 ;Altria;Altria等以等以 SDS-SDS-庚烷庚烷 -- 戊醇戊醇 --醋酸钠缓冲液组醋酸钠缓冲液组成的成的 W/OW/O 型微乳体系为对象，较为系统的研究了微乳的组成和柱温、流速等型微乳体系为对象，较为系统的研究了微乳的组成和柱温、流速等操作参数对萘、操作参数对萘、 4-4-羟基乙酰基苯酮、对乙酰氨基酚和烟酰胺分离的影响羟基乙酰基苯酮、对乙酰氨基酚和烟酰胺分离的影响 .. 结结果发现庚烷相对于己烷和十二烷，可在相对短的时间给出最好的分离果发现庚烷相对于己烷和十二烷，可在相对短的时间给出最好的分离 ;;助表助表面活性剂面活性剂 (( 醇类醇类 )) 碳链长度增加，保留时间和分离度都增加碳链长度增加，保留时间和分离度都增加 ;;表面活性剂种类表面活性剂种类影响分离选择性影响分离选择性 ,, 中性表面活性剂和离子型表面活性剂混合使用可降低前者中性表面活性剂和离子型表面活性剂混合使用可降低前者极性头部基团的排斥作用极性头部基团的排斥作用 ,,产生更大的液滴产生更大的液滴 ,,使水溶性溶质更容易进入水核，使水溶性溶质更容易进入水核，保留时间降低；在形成稳定微乳的条件下保留时间降低；在形成稳定微乳的条件下 ,, 水含量变化对保留因子和分离度水含量变化对保留因子和分离度影响不大，但水含量高时微乳体积大影响不大，但水含量高时微乳体积大 ,,粘度大，柱压增加；低流速和高柱温粘度大，柱压增加；低流速和高柱温可改善分离。可改善分离。

3.3. 微乳液相色谱的应用微乳液相色谱的应用3.1 3.1 复杂混合物的分离复杂混合物的分离 由于微乳体系对亲脂性和亲水性化合物均有较强的溶解能由于微乳体系对亲脂性和亲水性化合物均有较强的溶解能力，溶质与微乳液滴及固定相吸附层之间存在着疏水、氢键、力，溶质与微乳液滴及固定相吸附层之间存在着疏水、氢键、静电等多种作用力，静电等多种作用力， MELCMELC适用于复杂混合物的分离。有人用适用于复杂混合物的分离。有人用 2%2%SDS-10%SDS-10% 丁醇丁醇 -1%-1% 辛醇辛醇 -- 含含 0.3%0.3%三氟乙酸的三氟乙酸的 0.02 mol/L0.02 mol/L磷酸溶液磷酸溶液体体系，系， 10 min10 min 内分离了内分离了 99种化合物，包括种化合物，包括 44 种碱性的抗高血压药物种碱性的抗高血压药物（阿替洛尔、醋丁洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔）、（阿替洛尔、醋丁洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔）、 44 种酸性的非种酸性的非甾体抗炎药物（呋塞米、布美他尼、布洛芬、奈普生）和甾体抗炎药物（呋塞米、布美他尼、布洛芬、奈普生）和 11 种中种中性化合物萘。性化合物萘。 MarshMarsh等使用等使用 3.3%SDS-6.6%3.3%SDS-6.6% 丁醇丁醇 -0.8%-0.8% 辛醇辛醇 -0.05%-0.05%三氟乙酸微乳体系，用等度洗脱方式成功分离了三氟乙酸微乳体系，用等度洗脱方式成功分离了 44 个中性（倍氯个中性（倍氯米松、氟地松、氢氯噻嗪、芘）、米松、氟地松、氢氯噻嗪、芘）、 33 个碱性（地喹氯铵、阿替洛个碱性（地喹氯铵、阿替洛尔、布比卡因）、尔、布比卡因）、 22 个酸性（头孢氨苄、亚叶酸钙）和 个酸性（头孢氨苄、亚叶酸钙）和 11 个两性个两性化合物（灰黄霉素）。分析时间为化合物（灰黄霉素）。分析时间为 14min14min 。以上混合物均为标准。以上混合物均为标准混合物，实际样品的分析尚未见报道。混合物，实际样品的分析尚未见报道。

3.3. 微乳液相色谱的应用微乳液相色谱的应用3.2 3.2 制剂分析制剂分析 　　 　　 稳定性考察是制剂分析中的一个重要内容，所建方法要能够将合成的或稳定性考察是制剂分析中的一个重要内容，所建方法要能够将合成的或降解的杂质从主成分峰和辅料峰中分开。降解的杂质从主成分峰和辅料峰中分开。 MELCMELC在稳定性研究中的潜力已被多在稳定性研究中的潜力已被多种化合物的测定所证实。种化合物的测定所证实。 MarshMarsh等使用质量分数在等使用质量分数在 0.02110.0211 ～～ 0.0775g/L0.0775g/L内的内的 55种样品溶液进行线性试验，线性良好。两种 种样品溶液进行线性试验，线性良好。两种 500 mg 500 mg 萘普生片的分析结果是萘普生片的分析结果是527.89527.89和和 502.84mg502.84mg。此外，他们用梯度方法分离了过期变质的雷尼替丁、强。此外，他们用梯度方法分离了过期变质的雷尼替丁、强烈破坏的甲氧萘丙酸以及沙美特罗和氟地松混合样品烈破坏的甲氧萘丙酸以及沙美特罗和氟地松混合样品 , , 所有杂质与主药峰和所有杂质与主药峰和辅料峰分离良好。辅料峰分离良好。 El SherbinyEl Sherbiny 等用等用 0.15 mol/L SDS- 10%0.15 mol/L SDS- 10% 丙醇丙醇 - 1% - 1% 辛醇辛醇 --0.02%0.02%磷酸磷酸 (0.3%(0.3%三乙胺三乙胺 , pH 7.0), pH 7.0) 微乳分离了氟桂利嗪和它的微乳分离了氟桂利嗪和它的 44 个降解产物。个降解产物。MalenovicMalenovic等采用全因素设计，得到优化的微乳体系等采用全因素设计，得到优化的微乳体系 2.2%SDS- 7%2.2%SDS- 7% 丁醇丁醇 - 1%- 1% 辛辛醇醇 -89.9% Na2HPO4(0.025 mol/L, pH 7.0),-89.9% Na2HPO4(0.025 mol/L, pH 7.0), 用其分离了辛伐他汀和它的６个用其分离了辛伐他汀和它的６个相关杂质，所用色谱柱为相关杂质，所用色谱柱为 X Terra(4.6mm×50mmX Terra(4.6mm×50mm ，， 3.5μm)3.5μm) 。。

3.3. 微乳液相色谱的应用微乳液相色谱的应用3.3 3.3 分析水不溶性化合物的能力分析水不溶性化合物的能力 　　　　 疏水性强的化合物由于在水中溶解度低疏水性强的化合物由于在水中溶解度低 ,,当采用反相当采用反相 HPLCHPLC分析时，会受分析时，会受到许多限制。微乳流动相虽然含有高比例的水到许多限制。微乳流动相虽然含有高比例的水 ,,但微乳液滴的疏水性环境能但微乳液滴的疏水性环境能够溶解不溶于水的组分。以够溶解不溶于水的组分。以 SDS-SDS-正丁醇正丁醇 -- 辛醇为微乳流动相辛醇为微乳流动相 ,1.5ml/min,1.5ml/min 的流的流速，采用速，采用 Phenomenex Luna C18(4.6mm×100mmPhenomenex Luna C18(4.6mm×100mm ，， 3μm)3μm)柱柱 ,,对数种疏水性化对数种疏水性化合物进行分析。其中疏水性较强的蒽、萘、芘和硫酸氯喹可在合物进行分析。其中疏水性较强的蒽、萘、芘和硫酸氯喹可在 13min13min洗脱。洗脱。对含有对含有 BDPBDP、对羟基苯甲酸丁酯、、对羟基苯甲酸丁酯、 FPFP、芘和羟萘沙美特罗等不溶性化合物的、芘和羟萘沙美特罗等不溶性化合物的混合物也成功地进行了分离，分析时间仅为混合物也成功地进行了分离，分析时间仅为 10min10min 。增加表面活性剂和助表。增加表面活性剂和助表面活性剂的含量，使油的含量从面活性剂的含量，使油的含量从 0.8% 0.8% 增加到增加到 2%2%，微乳流动相的疏水性则更，微乳流动相的疏水性则更强，能够较快地洗脱水不溶性化合物。使用这种组成的微乳，强，能够较快地洗脱水不溶性化合物。使用这种组成的微乳， BDPBDP可在可在 3min3min内洗脱，而油的含量为内洗脱，而油的含量为 0.8% 0.8% 时，时， BDPBDP在在 6.2min6.2min才能被洗脱。才能被洗脱。

3.3. 微乳液相色谱的应用微乳液相色谱的应用3.4 3.4 生物样品分析生物样品分析 尽量简化样品的前处理步骤一直是生物样品分析工作者们努力的方向之尽量简化样品的前处理步骤一直是生物样品分析工作者们努力的方向之一，而直接进样分析的方法无疑是最简单最受欢迎的。直接进样不但可以节一，而直接进样分析的方法无疑是最简单最受欢迎的。直接进样不但可以节省大量分析时间和样品及溶剂的用量，也可减少实验误差，提高测定结果的省大量分析时间和样品及溶剂的用量，也可减少实验误差，提高测定结果的准确度。由于微乳可溶解蛋白，用微乳做流动相时可以实现直接进样分析生准确度。由于微乳可溶解蛋白，用微乳做流动相时可以实现直接进样分析生物体液样品的目标。物体液样品的目标。 JancicJancic等采用等采用 1.0%1.0% 二异丙基醚二异丙基醚 -2.0%SDS-6.0%-2.0%SDS-6.0% 丙醇丙醇 -91%-91% Na2HPO4(0.025 mol/L, pH 2.8)Na2HPO4(0.025 mol/L, pH 2.8) 微乳体系和微乳体系和 Backerbond ENV (150mm×4.6Backerbond ENV (150mm×4.6 mm, 5 μm)mm, 5 μm) 色谱柱，将血浆样品经简单稀释后，直接进样，分离测定了佛色谱柱，将血浆样品经简单稀释后，直接进样，分离测定了佛西诺普利的代谢产物佛西诺普利拉。所建方法满足西诺普利的代谢产物佛西诺普利拉。所建方法满足 FDAFDA 生物样品分析方法确生物样品分析方法确证的要求，测定的血浆药物浓度范围为证的要求，测定的血浆药物浓度范围为 0.4 0.4 ～ ～ 27 mg/L27 mg/L。。 EI SherbinyEI Sherbiny 等用等用2%SDS-10%2%SDS-10% 丁醇丁醇 -1%-1% 辛醇辛醇 -0.02 mol/L-0.02 mol/L磷酸溶液（含磷酸溶液（含 0.3% 0.3% 三乙胺三乙胺 ) ) 微乳，将血微乳，将血浆和尿中的布美他尼和醋丁洛尔简单稀释浆和尿中的布美他尼和醋丁洛尔简单稀释 (1∶1)(1∶1)并离心后，直接进样，荧光并离心后，直接进样，荧光法检测，血浆和尿中的布美他尼和醋丁洛尔的检出限法检测，血浆和尿中的布美他尼和醋丁洛尔的检出限 // 定量限分别是定量限分别是 0.020.02 和和0.1 mg/L0.1 mg/L、、 11 和和 5 mg/L5 mg/L。值得注意的是，这种直接进样方法虽然简单，但因。值得注意的是，这种直接进样方法虽然简单，但因为没有样品浓缩过程，只有在样品浓度较高时才能采用。 为没有样品浓缩过程，只有在样品浓度较高时才能采用。

4.4. 展望展望 微乳体系可看做是一种修饰后的胶束溶液，即亲脂性的油相溶解在胶束微乳体系可看做是一种修饰后的胶束溶液，即亲脂性的油相溶解在胶束里。同里。同 MLC(MLC( 胶束液相色谱胶束液相色谱 )) 一样，一样， MELC MELC 也具有许多优于普通色谱的特点，也具有许多优于普通色谱的特点，如如有机溶剂用量较少，低成本，低污染；对亲水性和亲脂性化合物都具有较强有机溶剂用量较少，低成本，低污染；对亲水性和亲脂性化合物都具有较强的溶解能力，在一种色谱条件下能够同时分离酸性、碱性和中性化合物；梯的溶解能力，在一种色谱条件下能够同时分离酸性、碱性和中性化合物；梯度洗脱不需要柱的再平衡过程；血浆样品可直接进样分析等。此外，与 度洗脱不需要柱的再平衡过程；血浆样品可直接进样分析等。此外，与 MLCMLC相比，相比， MELCMELC 中可调节的操作参数更多，分离机制更加复杂，可为复杂混合物中可调节的操作参数更多，分离机制更加复杂，可为复杂混合物的分离提供多种选择方案；在的分离提供多种选择方案；在 O/W O/W 微乳体系中，油相的加入使微乳的结构较微乳体系中，油相的加入使微乳的结构较刚性的胶束松散，液滴尺寸增加，亲脂性物质更容易进入微乳内核，因而洗刚性的胶束松散，液滴尺寸增加，亲脂性物质更容易进入微乳内核，因而洗脱更快；微乳中的助表面活性剂也可以置换吸附在固定相上的表面活性剂，脱更快；微乳中的助表面活性剂也可以置换吸附在固定相上的表面活性剂，由表面活性剂的吸附所引起的胶束液相色谱的柱效降低可能在微乳体系下得由表面活性剂的吸附所引起的胶束液相色谱的柱效降低可能在微乳体系下得到改善。作为常规色谱的补充，它的优势在于对于复杂组分的分离分析，特到改善。作为常规色谱的补充，它的优势在于对于复杂组分的分离分析，特别是对于疏水性物质的增溶作用，使其在多组分分离分析中具有广阔的应用别是对于疏水性物质的增溶作用，使其在多组分分离分析中具有广阔的应用前景。但对其分离机制的研究还只是初步的探讨，未能从分子作用机制的基前景。但对其分离机制的研究还只是初步的探讨，未能从分子作用机制的基础上加以解释。因此，础上加以解释。因此， MELCMELC 在分离机制、微乳组成及其理化结构对分离的影在分离机制、微乳组成及其理化结构对分离的影响、组分的定量保留与结构关系以及中药分离等方面都存在很大的研究空间响、组分的定量保留与结构关系以及中药分离等方面都存在很大的研究空间 ..此外，由于微乳的类生物膜结构，预计其在药物膜通透性和活性预测方面也此外，由于微乳的类生物膜结构，预计其在药物膜通透性和活性预测方面也能发挥重要的作用。由于微乳只在特定的相图区域内形成，确定微乳的处方能发挥重要的作用。由于微乳只在特定的相图区域内形成，确定微乳的处方组成是制备微乳流动相的难点，而大量表面活性剂造成的微乳液相色谱与质组成是制备微乳流动相的难点，而大量表面活性剂造成的微乳液相色谱与质谱检测器的不兼容性是谱检测器的不兼容性是 MELCMELC 在检测方面的一个主要的局限。在检测方面的一个主要的局限。