临床检验学基础 第 讲 授课教师:熊立凡

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临床检验学基础 第 讲 授课教师:熊立凡. 羊水检验. 羊水检验概念. 羊水 ( amniotic fluid ) 妊娠时羊膜腔中液体 来源 妊娠早期:母体血浆经胎膜透析 胎儿脐带、胎盘表面羊膜及 未角化胎儿皮肤产生透析液 妊娠中晚期:胎尿(主要来源) 动态平衡 胎儿与母体之间. - PowerPoint PPT Presentation

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Page 1: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

临床检验学基础

第 讲

授课教师:熊立凡

Page 2: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

羊水检验

Page 3: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

羊水检验概念•羊水( amniotic fluid ) 妊娠时羊膜腔中液体

•来源 妊娠早期:母体血浆经胎膜透析 胎儿脐带、胎盘表面羊膜及 未角化胎儿皮肤产生透析液 妊娠中晚期:胎尿(主要来源)

•动态平衡 胎儿与母体之间

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Page 5: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

   适应证高危妊娠有流产、早产、死胎史者疑胎儿遗传性疾病者亲代有代谢性缺陷病者曾分娩过染色体异常婴儿者高龄孕妇确定性连锁遗传病携带者胎儿性别者疑母儿血型不合者妊娠早期受大剂量电离辐射者曾患严重病毒感染性疾病者检查宫内胎儿有无感染者

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   标本采集和理学检验标本采集羊水标本由妇产科医师采集

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标本项目 标本要求

妊娠 16 ~ 20周

诊断胎儿遗传性疾病或性基因羊水 20 ~ 30ml

妊娠晚期 判断胎儿成熟度及疑有母婴血型不合羊水 10 ~ 20ml

标本送检 立即,或 4℃冰箱保存,小于24h

标本处理 1000 ~ 2000r/min , 离 心10min 后,上清液作生化检查

中期妊娠羊水细胞

作染色体核型分析或先天性代谢缺陷病检查

晚期妊娠羊水沉淀物

作脂肪细胞及其他有形成份检查

穿刺时间取决于羊水检查的目的 ( 表 ) :

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项目 病理颜色透明度正常:妊娠早期:无色透明或淡黄色妊娠晚期:略混浊

黄绿色或深绿色:胎儿窘迫,羊水含胎粪金黄色:母儿血型不合,羊水因大量胆红素脓性混浊臭味: 羊膜腔感染黄色粘稠:胎盘功能减退、过期妊娠

比密:足月妊娠 1.007 ~ 1.025

酸碱度: 7.20 ~ 7.60

妊娠后期渗透压: 230 ~ 270mmol/kg

粘度: 1.75 ~ 1.85

表 羊水理学检查

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16 周:约250ml足月: 800ml~ 1200ml

羊水过多( polyhydramnios )>2000ml :① 胎儿畸形:胎儿神经管缺陷:无脑儿、脑膨出、脊柱裂。消化道畸形:食管或小肠闭锁② 胎盘脐带病变:胎盘绒毛血管瘤、脐带帆状附着③ 孕妇及胎儿其他疾病:糖尿病、 ABO 或 Rh 血型不合④ 多胎妊娠⑤ 特发性羊水过多:原因不明,孕妇、胎儿及胎盘均无异常2 .羊水过少( oligohydramnios) 妊娠晚期羊水量< 300ml①胎儿畸型:胎儿先天肾缺如、双肾发育不全、尿道闭锁② 过期妊娠:胎盘功能减退③ 胎儿宫内发育迟缓

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羊水化学检查水分 98% ~ 99%有机物和无机盐: 1% ~ 2%有形成分:少量白细胞、胎儿上皮细胞

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表 化学检查项目检查项目 妊娠期 临床意义

电解质( mmol/L )

足月妊娠钠 34 ~ 41钾 6.5 ~ 6.7氯 108 ~ 110钙 2.25 ~ 2.5镁 0.41 ~ 8.82

气体PO2 ( mmHg )

早期 PCO233 ~ 55 ( 4.4 ~7.3kPa )

后期 PCO242 ~ 55 ( 5.6 ~7.3kPa )

蛋白质 36 ~ 40 周:达最高超过预产期:下降,故可用

作诊断过期妊娠的指标。为母体血清蛋白的

1/20 。 60% ~ 70%为清蛋白。

增高:前清蛋白来自胎儿并随胎龄的增长而增高。重症母婴 Rh 血型不合、死胎及无脑儿时

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检查项目 妊娠期 临床意义

脂肪 脂肪: 500mg/L , 50% 脂肪酸,磷脂 30 ~ 45mg/L

妊娠后半期:胆固醇 0.52 ~ 2.48mg/L甘油三脂 68μmol/L

胆红素 28 周前:多为未结合胆红素 随着胎儿肝脏发育成熟未结合胆红素减少而结合胆红素增加

葡萄糖 2.02 ~ 2.76 mmol/L37 周后:轻度降低

来自母体,可以反映胎儿肾成熟程度

代谢产物肌酐、尿酸、尿素

评价胎儿肾成熟度的指标。

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检查项目 妊娠期 临床意义

甲胎蛋白 16 ~ 20 周: 40mg/ L32 周:为 25mg/ L

增高:主要见于开放型神经管畸形

酶:γ-谷胺酰转移酶、肌酸激酶、胆碱脂酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等。酶主要来自破坏的羊水细胞和少量来自胎儿,常用于胎儿遗传性代谢

缺陷病产前诊断

1. 激素:2. 蛋白激素、前列腺素、甲状腺激素、甾体激素,等3. 来自胎盘及胎儿

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胎儿成熟度检验目的:决定选择高危妊娠有利分娩时机;降低新生儿死亡率方法:监测羊水成份变化,评价相关器官功能状况

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胎儿肺成熟度检查羊水泡沫试验( foam stability test 或 shake test )

检测原理 羊水中肺泡:表面活性物质和磷脂经振荡后所形成的泡沫,在室温下可保持数小时。

检测特点 最常用床边试验,是间接估量羊水磷脂的方法。操作简单、报告迅速

临床应用 阳性:两试管液面均有完整泡沫环,表示 L/S≥2 、胎儿肺已成熟。两管均无泡沫环,示胎儿肺未成熟

第 1 管液面有完整泡沫环,表示 L/S < 2

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薄层色谱法卵磷脂( lecithin , L )与鞘磷脂( sphingomyelin , S )比值测定( L/S )

检测原理 肺泡表面活性物质能维持肺泡的稳定性。34 周前:卵磷脂与鞘磷脂含量接近。35 周后:卵磷脂合成明显加快, 37 周时,达高峰。求出 L/S 的比值。

检测特点 临床最早评估胎儿肺成熟度状态的实用化学分析方法,准确性较高,至今仍为参考方法;但费力、耗时

临床应用 L/S≥2 ,提示胎儿肺已成熟。L/S 1.5 ~ 1.9 ,为临界值, IRDS 发生率为 50%。注意:①当母体无糖尿病: L/S > 2 时,对预测无 IRDS 的可能性为 95% ,表明 L/S 诊断特异性高;L/S < 2 时,对预测发生 IRDS 的可能性为 25% ,表明 L/S 诊断灵敏度很低②当母体有糖尿病:即使 L/S > 2 时,仍可发生 IRDS 。

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磷脂酰甘油测定( phosphatidyl glycerol , PG )

检测原理 磷脂酰甘油是肺泡表面活性物质磷脂成份之一,约占羊水中总磷脂的 10% 。妊娠 35 周后羊水中出现磷脂酰甘油,含量随妊娠时间而增加。检测方法:酶法、快速胶乳凝集试验测定

检测特点 直接检测羊水中卵磷脂和磷脂酰甘油;灵敏度和特异性高。

临床应用 PG阳性,提示胎儿肺已成熟,新生儿一般不会发生IRDSPG阴性,即使 L/S 比值≥ 2 ,仍可能发生 IRDS 。

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羊水吸光度测定

检测原理 检测特点

羊水磷脂类物质含量与其浊度之间呈正比,磷脂类物质越多,则吸光度越大。

间接估量羊水磷脂,其他羊水成分浊度的影响。

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荧光偏振微粘度测量法( microviscosity test by fluorescence

depolarization method ) 检测原理 检测特点

根据较高的表面活性物质可产生较低的偏振值的原理,测定羊水肺泡表面活性物质。

价廉、准确。灵敏度 87% ,特异性 92% 。

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新生儿特发性呼吸窘迫综合征( idiopathic respiratory distress syndrome , IRDS )肺泡表面活性物质卵磷脂缺乏,是新生儿严重疾病之一。主要见于 37 周前早产儿、剖宫产儿、糖尿病产妇或妊娠高血压综合征的初生儿

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胎儿肾发育成熟检测项目

检验项目 临床意义羊水葡萄

糖测定( amnioti

c fluid glucose, AFG)

羊水葡萄糖主要来源母体血浆、部分来自胎尿。< 0.56mmol/L ,提示胎儿肾发育成熟> 0.80mmol/L ,提示胎儿肾不成熟妊娠 24 周, AFG达峰值约 2.29 mmol /L。当胎儿肾逐渐发育成熟 ,肾小管重吸收葡萄糖作用增强,胎儿尿排入羊水的葡萄糖减少。随胎龄增加,胎盘通透性降低,母体血浆进入羊水的葡萄糖减少, AFG逐步降低。

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胎儿肝成熟度检测项目

检测原理 临床意义用分光光度计测定

羊水中胆红素吸光度:羊水胆红素浓度与胎儿肝脏酶系统发育成熟程度有关。

A450 :< 0.02 :胎肝成熟

0.02 ~ 0.04 :肝成熟可疑 > 0.04 :胎肝未成熟。随胎儿肝脏酶系统发育成熟,羊水未结合胆红素逐渐减少,结合胆红素逐渐增多。

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胎儿皮肤成熟度检查检测原理 临床应用

羊水脂肪细胞百分率随胎龄增加而增高。羊水沉淀物用硫酸尼罗蓝水溶液染色,镜检脂肪细胞的百分率(脂肪细胞染成桔黄色、无核,其他细胞呈蓝色)

脂肪细胞百分率:> 20% ,胎儿皮肤成熟10% ~ 20% ,胎儿皮肤成熟可疑< 10% ,胎儿皮肤未成熟脂肪细胞来自胎儿皮脂腺及汗腺脱落细胞。随胎龄增加,胎儿皮脂腺逐渐发育成熟,脂肪细胞出现率增高。 1.36mmol/L硫酸尼罗蓝,

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胎儿唾液腺成熟度检查检验原理 临床应用

羊水唾液腺型淀粉酶活性在妊娠 36 周后显著增高。用

Somogyi 法检测

羊水淀粉酶> 120 U/ L为成熟。羊水胰腺型同功酶活性在妊娠过程中无明显变化。妊娠 28 周左右,羊水唾液腺型淀粉酶活性快速增高。妊娠 36周后,其活性显著上升。

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先天性遗传性疾病产前诊断产前诊断( prenatal diagnosis )=出生前诊断( antenatal diagnosis )=宫内诊断 (intrauterine diagnosis) 检查目的判断胎儿有无先天性遗传性疾病,以确定是否进行选择性流产检查方法影像学、生物化学、细胞遗传学、分子生物学等技术

Page 26: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

产前诊断疾病种类:染色体病

染色体异常 染色体疾病常染色体数目异常

常染色体多 1条染色体称为三体

先天愚型( 21-三体综合征)

常染色体结构异常

染色体缺失、重复、倒位及易位

性染色体数目异常

性染色体数异常

先天性卵巢发育不全症( 45 , XO )

Page 27: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

产前诊断疾病种类:染色体病

染色体异常 染色体疾病单基因遗

传病仅有 1对基因发

生突变或异常,多为酶缺陷引起代谢紊乱、代谢中间产物累积

用生化方法可诊断 300 多种先天性代谢缺陷病。用羊水细胞诊断 80 多种先

天性代谢缺陷病。

多基因遗传病

2对以上基因发生突变。占产前诊断的 40% ~50%

先天畸形如唇腭裂和畸形足、脊柱裂、无脑儿、神经管畸形、幽门狭窄;

先天性心脏病先天性髋关节脱位,等

Page 28: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

染色体核型分析是产前诊断染色体病主要方法染色体细胞制备培养时间:胎儿羊水细胞 9 ~ 12d绒毛细胞 7 ~ 14d胎儿血细胞 24 ~ 48

原位杂交技术或引物原位 DNA 合成技术, 1h可获染色体核型分析准确结果

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先天性遗传性疾病产前诊断性连锁遗传病 (sex-linked inheritance disease) :多为 X 连锁隐性遗传病,临床常见有血友病甲、血友病乙、 G-6-PD 缺乏症等。如:父亲为 X 连锁隐性基因携带者,母亲为正常,则男性胎儿正常,女性胎儿全为 X连锁隐性基因携带者如:母亲为 X 连锁隐性基因携带者,父亲为正常,则男性正常胎儿和患儿各占 50% ,女性正常胎儿和基因携带者各 50%

Page 30: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

X 染色质检查( examination of X chromatin , Barr test )

羊水细胞染色 硫瑾或甲苯胺蓝

可数细胞 胞核大、核膜完整,染色质均匀,结构清晰

X 染色质( Barr 小体)

呈深蓝色染色质块,位于可数细胞核膜内缘处。计数 100个可数细胞核中与核膜相贴的 X 染色质,计算百分率。

女胎≥ 6% ,男胎≤ 5%

非可数细胞 细胞核固缩,染色较深,结构不清

Page 31: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

Y 染色质检查( examination of Y chromatin )

染色法 阿的平荧光染色法

显微镜检查

Y 染色质呈闪亮荧光弧状小体,直径约 0.3μm ,边缘清晰,荧光亮度强于其周边核染色质。计数 100个核质均匀、核膜完整的可数细胞,计算 Y 染色体细胞百分率。男胎≥ 5% ,女胎< 4%

Page 32: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

性别基因诊断 目的:羊水细胞性别检查复杂,干扰因素多。基因诊断可提高正确性、可靠性。性别基因诊断最常用方法

Y 特异DNA探针

Y 染色体特异的 SRY 基因区域( sexdeterminating region of Y chromosome )

聚合酶链反应(PCR)

目前认为, SRY是睾丸决定因子的最佳候选基因

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神经管缺陷产前诊断1 .甲胎蛋白 (AFP)测定:神经管缺陷产前诊断最常用方法来源 AFP 主要在胎儿肝脏和卵黄囊合成,部份来自胎儿胃

肠道、羊膜及绒毛膜细胞,随胎儿尿液排入羊水

正常妊娠 16 ~ 20 周羊水中达 40mg/L20 ~ 22 周逐步下降32 周后降至 25mg/L至妊娠足月

无脑儿、脊柱裂等开放性神经管缺陷胎儿

胎儿血 AFP是羊水 AFP 的 150 ~ 200倍。患儿:可使羊水中 AFP 含量高于正常妊娠羊水中10倍以上。

母血筛查 诊断开放性神经管缺陷,准确率 90%以上

其他 AFP增高疾病

胎儿脑积水、先天肾脏病及糖尿病,先兆子痫等所致胎盘功能不足、流产、死胎等

Page 34: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

2 .羊水胆碱酯酶测定

羊水总胆碱酯酶测定 (total cholinesterase , TChE)

正常妊娠 妊娠 12 周,羊水 ChE活性明显增高开放性神经管缺陷胎儿

胎儿脑脊液和血液:直接渗入羊水,羊水 ChE活性明显增高。

羊水真性胆碱酯酶测定 (actual cholinesterase ,AChE)

检测方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。筛诊阳性率可达到 99.5%

活性增高 有助于确诊胎儿开放性神经管畸形。其他:严重先天畸形、流产、胎儿脐疝等

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粘多糖沉积病产前诊断发病机制 细胞溶酶体酸性水解酶先天性缺陷临床表现 肝脾肿大、智力障碍、骨骼畸形等最佳方法 测定培养羊水细胞内酸性水解酶活性

常用方法甲苯胺蓝

定性试验

正常妊娠早期:弱阳性正常妊娠中、后期:阴性。阳性:提示胎儿患有粘多糖沉积病

糖醛酸半定量试验

肌酐中糖醛酸含量反映酸性粘多糖的多少正常妊娠 16 ~ 20 周:含量为 3.3 ~

7.0mg/mgCr 。增高:提示胎儿患粘多糖沉积病

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胰腺纤维囊性变产前诊断γ-谷氨酰转移酶( γ-GT )测定

产前早期诊断胰腺纤维囊性变的最佳指标正常妊娠 14 ~ 15 周:为母体血清 10 ~ 100倍。

随着胎龄增长, γ-GT 活性逐渐下降。

30 ~ 40 周:为妊娠 15 周的 1/40 。胰腺纤维囊性变

胎儿妊娠 15 周,羊水 γ-GT 活性明显降低

其他疾病 21三体或 18三体综合征畸胎碱性磷酸酶 (ALP)测定正常妊娠 19 周左右, ALP活性最高。

29 周后 ALP活性稳定在产前水平。胎儿胰腺囊性变 ALP活性明显降低

Page 37: 临床检验学基础 第   讲 授课教师:熊立凡

羊水细胞内酶分析先天性代谢缺陷病:系因基因突变导致某种酶的缺失多数先天性代谢缺陷病:尚无有效的治疗方法(除苯丙酮尿症、肝豆状核变性等可通过控制饮食和药物治疗外)

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分子生物学技术在产前诊断中应用DNA探针技术:单股 DNA 小片段以放射性同位素、酶、荧光素或化学发光物标记后,同被检 DNA 中的同源互补系列杂交,从而检出所要查明的 DNA (基因)。

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常用检测基因方法1 .核酸分子杂交法

点杂交 一般用于多拷贝基因的探测或筛选。如 Y 基因探针胎儿性别诊断

Southern印迹杂交

最常用核酸分子杂交法:( 1 )限制酶图谱法:用于基因缺失或突变涉及限制位点改变的基因诊断。如 β珠蛋白生成障碍性贫血,纤维囊性变等可用限制酶图谱法。

( 2 )寡核苷酸直接探测法:用于探测点突变或框架位移。

( 3 )限制内切酶片段长度多态性( restriction fragment length polymorphism , RFLP )分析法:用于基因突变位点不清,分子病理学改变复杂的遗传病的基因探测。

2 .聚合酶链反应PCR具有快速、简便、灵敏度和特异性高的特点

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