Лабораторная диагностика туберкулеза

Н.В. СвечниковаВрач бактериолог

БУЗ Орловской области ОПТД

Род Mycobacterium включает в настоящее время около 100 видов, как патогенных,

так и непатогенных.

Большинство из представителей этого рода относятся к сапрофитным микроорганизмам, и лишь незначительное их число имеет клиническое значение.

К патогенным видам относятся возбудители туберкулеза у человека и

животных, а также возбудитель проказы.

Остальные представители рода Mycobacterium относятся либо к так называемым атипичным микобактериям, либо являются сапрофитами, которые широко распространены в природе.

Атипичные микобактерии, классифицируемые как нетуберкулезные, вызывают в организме людей и животных те или иные патологические изменения, и по биологическим качествам и клинической значимости занимают среднее место между типичными микобактериями туберкулеза и сапрофитными микобактериями.

Разделение клинически значимых микобактерий на

комплексы: комплекс M. tuberculosis - комплекс бактерий,

вызывающих туберкулез (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. africanum, M. microti, M. canetti)

комплекс M. avium (M. avium, M. intracellulare)

комплекс M. Fortuitum

комплекс M. terrae

Микобактерии туберкулеза относятся к роду Mycobacterium.

Характерной особенностью микроорганизмов, относящихся к этому роду, является наличие чрезвычайно устойчивой к внешним воздействиям гидрофобной клеточной стенки.

Ее высокая гидрофобность в значительной степени обусловлена наличием остатков миколовых кислот в ее пептидогликолипидном слое.

Характерными особенностями микобактерий туберкулеза

являются:

Способность к кислотоустойчивому окрашиванию (используется при специфической окраске диагностического материала при микроскопии)

Устойчивость к кислотам и щелочам (используется при селективной обработке диагностического материала с целью элиминации нетуберкулезной микрофлоры перед посевом)

Длительный цикл развития

Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к воздействию факторов окружающей среды - холоду, теплу, влаге, свету.

Однако некоторые виды физического и химического воздействия приводят к гибели микобактерий.

0

10000

20000

30000

40000

50000

Кашель Разговор ПениеКоли

чест

во а

эроз

ольн

ых

част

ицОбразование аэрозоля при кашле, разговоре, пении.

На сегодняшний день микробиологические методы исследования являются

основными в диагностике туберкулеза.

Основными методами выявления возбудителя туберкулеза являются традиционные микробиологические методы - микроскопия мазка и культуральные исследования (посев).

Бактериологическая диагностика ТБ у впервые выявленных больных

(Орловская обл., 2011 г.)

(265 впервые выявленных случаев туберкулеза легких)

3%

22%

28%

47%

М+П+ М+П- М-П+ М-П-

Характеристика микроскопического метода

исследования

Микроскопические методы исследования играют очень важную роль в выявлении и

диагностике туберкулеза:

Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом проста, достаточно эффективна, экономически выгодна, так как не требует особого оборудования и химических реактивов.

Преимуществом бактериоскопического метода исследования является также быстрота получения результата.

Данный метод позволяет в короткие сроки выявить наиболее эпидемически опасных больных туберкулезом.

Первичное выявление больных туберкулезом в РФ методом Циля-Нильсена осуществляется как в клинико-

диагностических лабораториях общей лечебной сети, так и в учреждениях противотуберкулезной службы.

Основная масса впервые заболевших туберкулезом выявляется по обращаемости, т. е. среди лиц, обратившихся за медицинской помощью из-за появившихся различных клинических симптомов. В связи с этим при наличии у больного кашля, выделения мокроты и лихорадочного состояния в течение 3-х и более недель необходимо проведение микроскопического исследования мазка мокроты, окрашенного по методу Циля-Нильсена в клинико-диагностических лабораториях и больницах общего профиля.

Микроскопия КУМ

Чувствительность 25-65% случаев с посевом+

Специфичность > 98%

Порог обнаружения 5-10 x 103 КУМ/мл

Кумулятивная отдача микроскопии мазка КУМ

> 95 %

1й мазок КУМ 80-82 %

2й мазок КУМ 10-14 %

3й мазок КУМ 5-8 % Важно исследовать 3 образца!

Цель диагностики туберкулеза – своевременное выявление очага инфекции

К основным задачам учреждений ОЛС относятся:

•заподозрить туберкулез

•качественно организовать сбор диагностического материала до начала лечения

•организовать трехкратное исследование мокроты методом микроскопии в КДЛ

•своевременно направить материал для культуральной диагностики в специализированное противотуберкулезное учреждение

Причины низкой чувствительности методов микроскопического

исследования

1. необоснованность назначения 2. низкое качество диагностического

материала 3. плохая подготовка мазков мокроты 4. ошибки в их окрашивании 5. неисправный или плохого качества

микроскоп

Качество диагностического материала

Результативность бактериоскопического исследования непосредственно зависит от качества диагностического материала, поэтому необходимо строго следить за тем, чтобы в лабораторию на исследование была доставлена мокрота, а не слюна

Материал в виде слюны следует выбраковывать на этапе сбора мокроты, слюна не должна поступать в лабораторию и подвергаться микроскопическому исследованию

ЗАВИСИМОСТЬ ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО РЕЗУЛЬТАТА МИКРОСКОПИИ МАЗКА ОТ КАЧЕСТВА ИССЛЕДУЕМОГО ОБРАЗЦА

Амбулаторная служба *

Вид образца

Всего % Положи-тельные

%

Слюна 1125 32.9 21 1.8

Слизь 1707 49.9 68 3.5

Слизисто-гнойная

583 17.2 220 37.7

L.POLLAK & R.URBANCZIK, Bol Inform Inst Nac Tuberc (Caracas) 2:1969,5 - 8

Сбор диагностического материала.

Сбор мокроты для исследования на кислотоустойчивые микобактерии - весьма ответственный этап диагностической процедуры, от четкости проведения которого во многом зависит результат исследования.

Контейнеры для сбора мокроты

Режимы обследования

Существует несколько схем организации обследования пациента методом микроскопии при выявлении туберкулезной инфекции

Желательно собирать утреннюю порцию мокроты в течение трех дней последовательно

Подбор пациентов для обследования.

Целесообразный подбор пациентов для обследования (при наличии у них симптомов, подозрительных в отношении туберкулезной инфекции) позволяет значительно повысить эффективность микроскопического исследования

При правильном подборе групп подозреваемых на туберкулез для обследования методом микроскопии эффективность выявления в лаборатории составляет 5-20%, то есть из 100 обследованных выявляется 5-20 положительных по мазку пациентов

Группы пациентов, подлежащих обследованию в первую очередь:

С симптомами кашля более 3-х недель С субфебрильной температурой В состоянии пониженного питания Дети и подростки из групп риска по заболеванию

туберкулезом (IV и VI группы диспансерного учета) С рентгенологическими изменениями в легких

ТОЛЬКО ПРИ НАЛИЧИЕ КАШЛЯ С МОКРОТОЙ!!!

Это крайне важно с эпидемической точки зрения, так как больной с неустановленным диагнозом

“туберкулез” наиболее контагиозен

Наличие туберкулеза легких с положительным мазком в зависимости

от длительности кашля пациентаД.Р. НАГПОЛ и другие, ВОЗ/TБ/Информация для лаборантов / 68.63

Длительность кашля

Кол-во человек Количество случаев ТБ легких с положит. мазком

< 14 дней 241 1

> 14 дней 381 43

Эффективность работы ОЛС в Эффективность работы ОЛС в выявлении больных туберкулезом с выявлении больных туберкулезом с

бактериовыделением.бактериовыделением.

32,2%

43,8% 45,8%49,3%

44,4%48,4%

51,8%55,3% 54,6%

57,1%

48,2%

55,1%

42,8%

1999г. 2000г. 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011

Доля впервые выявленных больных туберкулезом легких с микроскопией плюс, выявленных в учреждениях ОЛС

Из микробиологических методов диагностики основным остается диагностика туберкулеза с использованием стандартных питательных сред:1. Ливеншнейна-Йенсена2. Финн - 2

Учет результатов посева.

Интенсивность роста обозначают по 3-х балльной системе

(1+) — 1 – 20 КОЕ (“скудное” бактериовыделение);(2+) — 21 – 100 КОЕ (“умеренное” бактериовыделение);(3+) — > 100 КОЕ (“обильное” бактериовыделение).

Непременным условием для бактериологической лаборатории

является определения ЛЧ к стандартизированным препаратам

первого ряда: H,R,E,Sи

второго ряда:K,Cap,OFL

Ускоренные методы лабораторной диагностики туберкулеза и лекарственной

устойчивости Автоматическая система BACTEC MGIT 960 Анализатор GeneXpert ПЦР диагностика

Автоматизированная система BACTEC MGIT 960.

Анализатор GeneXpert

Анализатор GeneXpert

Благодарю за внимание!