风湿病的常用免疫学检查风湿病的常用免疫学检查及临床应用及临床应用

概 述概 述多数风湿病的发病机制都与免疫失调有

关， 因此检测自身抗体（抗细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白。）、补体、 淋巴细胞及其它免疫学成份有助于许多疾病的诊断、治疗和疗效判断。

对检验结果的判断必须密切结合临床，并进行综合分析。

抗核抗体抗核抗体 (ANA(ANA ））

是指抗细胞核成分的抗体，换言之是指一组对细胞核内 DNA 、 RNA 、蛋白质、或这些物质的分子复合物的自身抗体。

一、核的组成及其抗原性 一、核的组成及其抗原性 细胞核是由核膜、核仁、染色质和核液组成。 核膜为双层脂质结构， 膜孔和内层的蛋白具有

抗原性，间接免疫荧光 检查出现周边核染色。 核仁抗原包括核糖体蛋白、 U3 及 Th 小 RNA s ，

PM-Scl 抗原和核仁的 Ku 蛋白及增殖细胞核抗原（ PCNA ）。

染色质是由 DNA 和组蛋白组成，它排列的基本结构亚单位为核小体

数百种非组蛋白， 它们具有结构维持、基因表达及酶的作用，都是免疫反应潜在的目标，

二、检测方法二、检测方法

对流免疫电泳（ＣＩＥ）间接免疫荧光（ＩＦ）放射免疫（ＲＩＡ）免疫印迹（ＩＢＴ）酶联免疫吸咐试验（ＥＬＩＳＡ）

三、抗核抗体的种类三、抗核抗体的种类及临床意义 及临床意义

1954 年 Hargrave 发现 SLE 病人血液中的 LE 细胞 , 它是抗核抗体谱检查的起源 , 它所针对的核抗原是 DNA- 主蛋白 (DNP) ，目前已采用了简易和迅速的抗 DNP抗体测定取代 LE 细胞的检查。它的阳性率在未治 SLE 中 50-85 ％（＋）， RA 10 ％（＋）， PSS 、 PM/DM 及药物过敏等均有（＋）。

（一）分型 （一）分型 H ．均质型：与组蛋白和抗 DNA 抗体有关，见于 SLE,

药物性狼疮 S ．斑点型： 与抗 ENA 抗体有关，见于 CTD P ．周边型 与抗 DNA 抗体有关，见于 SLE C ．着丝点型 与 DNA 蛋白结合体有关，为 CREST

综合征的标记性抗体 N ．核仁型 与抗 4-6sRNA 有关，见于 PSS  不同的底物 ANA的阳性率不同。

国际以国际以 Hep-2Hep-2 作为基质作为基质 ━━━━━━━━━━━━━━ SLE PSS ━━━━━━━━━━━━━━ HEP-2 95 ％ 70 ％ 鼠肝 85 ％ 50 ％ ━━━━━━━━━━━━━━

（二）分类 （二）分类 1 、 ds-DNA 检测

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ Farr （ RIA ） 结合力＞ 20 ％（＋） ＞ 30％ SLE

TE （马疫锥虫） 1 ： 5 （＋） 1 ： 10 SLE

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

抗 ds-DNA 抗体是 SLE 的重要抗体。

40-60 ％的 SLE 抗 ds-DNA

抗体阳性 , 特别是活动性 SLE 和狼疮肾，

其它风湿性疾病则阳性率很低。

22 、抗、抗 HistonHiston 抗体 抗体 不同疾病中的阳性率（ ELISA ）

药物性狼疮 约为 95 ％ SLE 50 － 70 ％ PM/DM 13 ％ RA 23 ％ 服 INH 53 ％ SS 30 ％ 服他巴唑 20 ％ PSS 27 ％ 服苯妥因钠 18 ％

33 、抗、抗 ENAENA 抗体 抗体

常见七种常见的 ENA 抗体α-SM （病人名） α-J0-1 （病人名 John ）α-RNP （ nRNA ） α-PM-1 （ polymyositi

s ）α-SS-A （ 病 名 ） α-Scl-70 （ sclerederm

a ）α-SS-B （病名）

抗抗 SmSm 抗体 抗体 仅在 SLE 中出现的阳性率为 25 ％左右，

它是 SLE 的标记性抗体， 它对早期，不典型 SLE 及治疗缓解后 SLE 的回顾性诊断有很大帮助

抗抗 nRNPnRNP 抗体 抗体 在多种风湿病中出现，常与双手肿胀，雷诺氏现象，指端硬化相关。当抗 nRNP 阳性而同时抗 dsDNA阴性，则肾病发生率较低。在 METD 中几乎 100 ％阳性

抗抗 SS-A/RoSS-A/Ro 抗体 抗体 在原发 SS 中 70-80 ％（＋）， SLE 40

％（＋）， RA 20 ％（＋）。以鼠肝为底物的 ANA 检测中，抗 SS-A 抗体常呈阴性反应， 用免疫印迹法检测时它可与60KD 和 52KD 两条蛋白多肽反应，作者及一些文献都认为 60KD 的多肽在 SLE 中较 SS更多见。进一步的研究表明抗SS-A 抗体与新生儿狼疮，先天性房室传导阻滞，光敏感相关。

抗抗 SS-B/LaSS-B/La 抗体 抗体 在原发 SS 中 50-60 ％（＋）， SLE 10

％（＋）故有人称抗 SS-B 抗体是 SS 的标记性抗体。

抗抗 RIBRIB 抗体（抗体（ ribosome RNribosome RNP) P)

在 SLE 中 24 ％（＋），且常常在活动期SLE 中存在，但不随病情的缓解而消失， 可持续 1~2 年。抗 RIP 抗体与 LN 和 NP较密切 , 有报导说与在 RIP 阳性的 SLE中 37% 发生 NP ，而 RIP阴性的 SLE 中仅次 16% 发生 NP ，两者有显著差异

抗抗 PCNA(proliferating cell nuclPCNA(proliferating cell nuclear antigen)ear antigen) 抗体 抗体

针对的是 36Kd 的 DNA 聚合酶副蛋白，在 SLE 中 2-10 ％（＋ ), 而在其它结缔组织病中阴性。

抗抗 Pm-1Pm-1 抗体 抗体 在 PM/DM 中 8-15 ％ (+) , 在 PSS 中 3

％ (+) 。在 PM 与 PSS 重叠且伴有肾炎的病人中，阳性率可高达 80%

抗抗 Jo-1Jo-1 抗体抗体在 PM 中 25-30 ％（＋ ) ，合并肺间质病变时其阳性率可高达 60% ，被视为 PM的标记性抗体。如患者有发热，对称性关节炎，“工艺手”，雷诺氏现象及肌炎并肺间质病变，抗 Jo-1 抗体常阳性，此时称之为抗 Jo-1 抗体综合症

抗抗 Scl-70Scl-70 抗体抗体在 PSS 中 30~40 ％（＋ ) ，是 PSS 的标

记抗体。有报道抗 Scl-70 抗体阳性的 PSS患者肺纤维化的发生率是抗 Scl-70 抗体阴性患者的 10倍。

抗抗 KuKu 抗体抗体在 SLE, MCTD, PSS 中 30-50 ％（＋），

DM 中仅 5 ％（＋）。

抗抗 KiKi 抗体和抗抗体和抗 Mi-2Mi-2

抗 Ki 抗体在 SLE 中 8-20 ％（＋） , 其价值不明。在其它风湿病中仅很低的阳性率。

抗 Mi-2 抗体在 PM 中 5 ％（＋）

抗 抗 RA33RA33 抗体抗体在 RA 中 36% （ + ），尤其是早期 RA

血清中。有人随访了 抗 RA33 抗体阳性又未能确诊的关节炎，结果大部分病人在 8~24个月后均发生典型的 RA 。另需注意的是 u1RNP可能与 RA33 有交叉反应，且抗 RA33 抗体的消长与病情和用药无关。 （ 1989 年 Hassfeld首次报道）

总之检测抗核抗体的意义就在于帮助一些疾病的诊断（有些抗 核抗体有较高诊断特异性），观察治疗反应，判断疾病的活动性。（不同抗体不同对待，如 RNP,Sm就与活动性无关）。

疾病与抗核抗体关系疾病与抗核抗体关系 A － dsDNA SLE A-sm SLE A-scl-70 PSS A-Centromere CREST A-Jo-1 PM A-Pm-1 PM/DM A-SSB SS A-SSA SS. SLE A-RNP MCTD. CTD A-P 蛋白 SLE

抗磷脂抗体（抗磷脂抗体（ APL)APL) 抗磷脂抗体包括狼疮抗凝因子和一组抗负电磷脂抗体

目前应用最多的是抗心磷脂抗体 (AcL) ，它有 IgG 、 IgM 和 IgA 三种成份， IgG更具特异性，而 IgA最不具特异。 Acl 与 HLADR 、 DQ 及 C4 有关。在 SLE患者的 AcL 阳性率是 33 － 44 ％（ ELISA 法），在合并有网状青紫或中枢神经病变的 SLE 其阳性率达 80 ％ 或 90 ％，在其它风湿病，如 PSS 、 RA 、 SS 和 MCTD 中阳性率分别是 23 ％、 15 ％、 10 ％和 14 ％。 AcL 与反复动脉、静脉血栓、习惯性流产、血小板减少以及神经系统症状密切相关，是诊断抗磷脂抗体综合征（ APS ）不可缺少的指标。（ 1957 年 Conley 首次报道）

抗内皮细胞抗体（抗内皮细胞抗体（ AECAAECA ））

是一种针对内皮细胞膜蛋白的抗体。在 SLE 中的阳性率约 14-85 ％， 也可出现于 RA 、 MCTD 、 SS 以及一些血管炎疾病如Wegener's肉芽肿、 多 动脉炎、 Behcet's 病以及 kawasaki疾病中。 IgG 、 IgM 亚类的 AECA 与疾 病活动性显著相关， AECA 与血管损伤密切相关，尤其是肾脏累及时。当血管炎发作缓解，则 AECA滴度下降。

抗中性粒细胞浆抗体抗中性粒细胞浆抗体 (ANCA)(ANCA) 是一种与中性粒细胞或单核细胞胞浆中的溶酶体酶起

反应的抗体。 ANCA 可分为胞浆型 ANCA(cANCA)和核周型 ANCA(pANCA) ，其滴度常与病情活动相关cANCA 抗原主要为颗粒中的蛋白酶－３（ PR 3 -protlinase ）， pANCA 抗原主要为髓过氧化酶（ Hyploperoxidase,MPO) 。８０％韦格氏肉芽肿病人血清中有 cANCA ，特异性为 90 ％。 少数巨细胞动脉炎、大动脉炎、过敏性紫癜、白细胞破碎性皮肤性血管炎和白塞病等 cANCA也可阳性。 pANCA 不如 cANCA 具有诊断特异性，在镜下多动脉炎、 Churg-sttrauss 及其它自身免疫性疾病（硬化性胆管炎、溃疡性，结肠炎、肝炎、狼疮、类风关、干燥等）中均能出现。

ANCA可能参与血管炎的发病。

类风湿因子类风湿因子 (RF)(RF)

RF 是抗人或动物 IgG 分子 FC片段的抗体，它不仅能与变性的 IgG 反应， 也能与自身的或异体的 IgG 反应， 还能与其它抗原如核蛋白发生交叉反应。按照抗免疫球蛋白类型分为 IgM-RF ， IgG-RF和 IgA-RF 三种，后种分子不易于其它非相关抗原反应，故特异性较强，具有更高的诊断价值。

如今最常用于检测 RF 的方法仍是乳胶凝集法 (IgM 型 ) ， RA 患者中阳性率 可达80 ％，如乳胶法 RF阴性，临床高疑 RA ，可用 ELISA 测 IgG 和 IgA 型 RF 。 一般抗体滴度越高，关节外的表现越重，疾病越活动，预后越差。在 5 ％的正常老人，其它风湿病、细菌性心内膜炎、结核、肝炎、肺纤维化等多种疾病中都可出现不同比例、低滴度的 RF 阳性（除干燥综合征症为高 滴度）。此外 RF 检测是划分血清阴性关节炎是重要标准。

淋巴细胞分型淋巴细胞分型 (lymphocyte typ(lymphocyte typy)y)

淋巴细胞由 T 、 B 二类组成，它们是免疫反应中的重要物质基础。在免疫系统中， B 淋巴细胞执行特异体液免疫功能，T 淋巴细胞则执行特异 细胞免疫和免疫调节功能。因此这二类细胞的数目及功能异常均可导致免疫学异常。

淋巴细胞表面表达多种蛋白分子，有些只暂时出现在细胞发育的某一阶段，有些表达于全部细胞表面，有些分子只表达于特定功能亚群的 T 或 B 细胞表面，故称之为分化抗原。 这些分子均可被相应单克隆抗体识别，从而将 T 、 B 淋巴细胞分成许多成熟度和活性不同的亚型。

部分分化抗原命名的部分分化抗原命名的 TT 、、 BB 细细胞胞

分化抗原 分子量 分布及特点 意 义 CD1 21/48 不成熟 T 细胞 血液病↑ CD3 20/20/25 成熟 T 细胞 自身免疫病、 SLE 、 RA↑ CD4 55 辅助 T 细胞 免疫活跃↑、免疫缺陷↓ CD8 30/45 杀伤 /抑制 T 细胞 SLE↓ CD25 50-55 IL-2受体 α链 自身免疫病↑ CD45RO 80 记忆 T 细胞 同上，尤其是 RA CD19 95 早期 B 细胞 急性淋巴细胞白血病↑ CD21 140 略成熟 B 细胞 自身免疫病↑ CD22 135 成熟 B 细胞 , 与 T 同上 细胞有协同作用

细胞因子细胞因子 (cytokine)(cytokine)

细胞因子是活细胞分泌的具有生物活性的多肽/ 蛋白产物，是免疫调节中不可缺少的物质，同时也参与炎症反应。根据来源分成淋巴因子 和单核因子两类，其中以 T 细胞产生最多，研究结果最明确， 生物学意义最明显。如 IL1-15 、IF2 ，单核因子主要指 IL1 、 IL6 及 TNF 。

共同 的特性是：多效性、多源性、快速反应性及致热原性。

细胞因子与意义细胞因子与意义

细胞因子 来源 意 义 IL-1 单核、胶质、 T 细胞、内皮 诱导 IL-2 、活化淋巴细胞、 致炎、抗癌 IL-2 THS 细胞、胸腺细胞 促进细胞因子、 IgG 分泌、活 化NK 和巨噬细胞、剌激T 、 B 细胞增殖 IL-6 单核、内皮细胞、瘤细胞 诱导B 细胞增殖、致炎、抗癌 TNF 单核、内皮 抗肿瘤、致炎 IF(αβγ) 白细胞、成纤维细胞、 抗病毒、抗癌及免疫调节 T 细胞 CSF(6 类 ) 淋巴细胞、骨髓细胞 促进血细胞及组织细胞生长