第三章药物的杂质检查

中国药科大学药分教研室

第三章药物的杂质检查

Test for purity



第三章药物的杂质检查 Test for purity

概述一般杂质检查

特殊杂质检查


有效性针对某些药效进行检查的项目

如 Al(OH)3的制酸力，反映主要质量；

明胶的凝冻度，控制物理性能；利福平的结晶度，影响生物利用度

均一性含量均一性 “ ”如含量均匀度试验

一、概述


安全性

进行异常毒性、热原、降压物质和无菌等项目

纯度要求

对杂质限量进行检查

一、概述


O CH3 HCl

N

CH3

O

O

N

CH3

OCH3 HCl

O CH3 HCl

O

N

C2H5

例：纯度要求Pethidine Hydrochloride盐酸哌替啶

无效异构体 I 无效异构体II


二、杂质来源与种类 source and sorts of impurities

(C6H10O5)x + H2OH+

(C6H10O5)y C12H22O11

2C6H12O6

H2O, H+

µí ·Û ºý ¾« ÂóÑ¿ÌÇ

ÆÏÌÑÌÇ

1. 制备过程中产生

酸度：水解试剂带入乙醇中不溶物：水解中间体 (糊精 ) SO3

2-：产品用 H2SO3漂白

可溶性淀粉：水解不完全


2.贮藏过程中产生

外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、微生物等引起药物产生

例如：麻醉乙醚醛及有毒的

过氧化物

O


(1)一般杂质：在多种药物中普遍存在的杂质。 (Cl- SO4

2- Pb As Fe)

有害杂质 ( Pb As ) 信号杂质（ Cl- SO4

2-）：考察生产工艺，

反映药物的纯度水平 (2)特殊杂质：个别药物的生产及贮藏中引入的杂质。

杂质的种类


杂质的限量：药物中所含杂质的最大允许量。

限量表示 (g/g) ：百分之几（ %）百万分之几（ 10-6）

限量检查：检查所含杂质是否超过杂质限量的规定，通常不要求测定其准确含量。

3、杂质的限量检查（ limit test）


杂质限量检查方法

取一定量 (C·V) 与被检杂质相同的纯品或对照

品配成对照品溶液，与一定量 (S)药物供试溶液在相

同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是

否超过规定。


NaCl对照液葡萄糖

稀硝酸 10ml硝酸银 1ml

稀硝酸 10ml硝酸银 1ml

对照液浊度 > 供试液浊度


杂质限量的计算：

式中： L 杂质的限度（%）

C 对照液浓度（ g/ml ）

V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量 (g)

注意 : 单位统一

=杂质最大允许量杂质限量供试品量

杂质对照液浓度其体积

供试品量

100%C V

LS


例 1 ：

对乙酰氨基酚中氯化物的检查：样 2.0g 溶于 100ml水中，取 25ml检查 Cl-，与标准 NaCl溶液 (10μg/ml) 5ml对照液相比，不得更深。

C= 10μg/ml

V=5.0ml

S= 25 2.0 100=0.5g

610 5.0 10100% 0.01%

0.5L


第二节一般杂质检查方法

条件：硝酸酸性条件（稀硝酸 10ml）反应试剂：硝酸银试液 1.0ml

杂质对照： NaCl (10µg/ml)

灵敏度范围： 50~80 g / 50ml

讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。

白色浑浊药物： AgClAgNOCl 3HNO3

一、氯化物（ Chloride ）检查原理：

白色浑浊）（对照： AgClAgNO,NaCl 3HNO3 Vc


1. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。

2. 平行操作原则。

3. 若供试品有色，需经处理后方可检查。

注意：


）干扰及排除

（ 1）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，

可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检

查。

（ 2）内消色法：倍量法

供试品有色处理方法


二、重金属（ Heavy Metals ）的检查

1 、第一法硫代乙酰胺法适用对象：溶于水、稀酸和乙醇的药物

原理： Pb2+ + 醋酸盐缓冲液 + 硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) PbS (黄 ~棕黑 )

条件：介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml

试剂：硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) 2ml

杂质对照液： PbNO3 (10µg/ml)

灵敏度范围： 10~20 g / 27ml


葡萄糖中重金属的检查：样 4.0g溶于 23ml水，加入 2ml 缓冲盐，依法检查，其重金属不得超过百万分之五，取

标准铅（ 10μg/ml）， v=?

C= 10μg/ml L= 5 10-6 S=4.0g

66 10 10

5 104.0

V

V = 2.0 ml

例 2：


注意：供试品如有色，需经处理后方可检查。

1. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他

无干扰的有色溶液。

2. 内消色法。

3. 改用第四法，微孔滤膜过滤法。


第二法：含芳环或杂环的有机药物

如苯佐卡因、甲硝唑

第三法 : 溶于碱的药物或在稀酸产生

沉淀的药物

如磺胺类、巴比妥类

第四法：铅斑法


C 垫圈 (外径 10mm,内径 6mm)

D 滤膜 (直径 10mm,孔径 3.0µm)

E 辅助滤板

CD

A

B

F

E

滤器下部

滤器上盖

连接头

微孔滤膜过滤法检查重金属装置


三、砷盐 (arsenic)

第一法古蔡氏法 Gutzeit

第二法 Ag-DDC法

白田道夫法 Bettendorff

国内外常用方法：


古蔡氏法：

SbH3+HgBr2→SbH2(HgBr)+HBr 锑斑

-

-

34

3233

3

AsO

AsHHOAs

As

砷斑 2HgBr

棕黄

Ag 吡啶

DDCAg- 红色胶态

Zn+HCl


白田道夫法

AsAs 2SnCl3HCl


检查砷盐仪器装置

8cm

18cm

有孔玻璃旋塞

导气管

AsH3发生瓶


二乙基二硫代氨基甲酸银法

Ag-diethyldithiocarbamate

Ag-DDC法

C2H5

C2H5N C

S

SAg


四、干燥失重（ loss on drying）

恒温干燥干燥剂干燥

减压干燥热分析法 thermal analysis,TA

干燥失重物主要指水分 (结晶水或吸附水 ) 或挥发性物质


在程序控制温度下 ,测量物质的质量

与温度关系的方法

热重分析法 thermal gravimetric analysis,TGA :

差示热分析法

在程序控制温度下 ,测定供试品与参比物质之间的温差 (ΔT)随温度变化的函数关系

differential thermal analysis,DTA:


草酸钙 (CaC2O4·H2O)的热重曲线ΔG1

ΔG2

ΔG3

10008006004002000

W

T1

T2

T3

398

838

635478

134

226

T( )℃

在温度 T1 时 CaC2O4·H2O CaC2O4+H2O

在温度 T2 时 CaC2O4 CaCO3+CO

在温度 T3 时 CaCO3 CaO+CO2


··

·

样品参比

加热炉

至信号放大器

加热器导线

炉温控制器

⑴热差曲线的直线

⑶吸热峰⑵放热峰

⑶⑴⑵

T( )℃

△T

热差曲线示意图

差示热分析仪主要结构简图


盐酸多巴酚丁胺的 DTA-TGA曲线

100

90

80

70

60

DTA

T(/min)

℃196℃

233℃


15 /min Program℃

1、纯双氯青霉素转变成液态并降解

2、加入乳糖

3、加入硬脂酸镁

4、加入硬脂酸，主成分峰消失

5、单加入硬脂酸，主峰亦消失

℃0 100 200

△T

12

3

45

DTA扫描图


甲磺酸二氢麦角毒碱的 DSC-TGA曲线

℃50 100 150 200

DSC

TGA


t(min)

△T

不纯物质的 DSC图


不同纯度苯甲酸的 DSC曲线

温度

97.2%

98.6%

标准品


温度 ( )℃50 80 110 140 170 200 230 260 290

15.00

0.00

7.50

盐酸舍曲林晶型Ⅰ的 DSC曲线m

cal/

sec


温度 ( )℃

50 80 110 140 170 200 230 260 290

5.00

0.00

2.50

mca

l/se

c 盐酸舍曲林晶型Ⅲ的 DSC曲线


有机溶剂残留量测定法

有机溶剂限度 ,% 限度 ,% 苯 0.01 0.0002

氯仿 0.005 0.006

二氧六环 0.01 0.038

二氯甲烷 0.01 0.06

吡啶 0.01 0.02

甲苯 0.01 0.089

环氧乙烷 0.001 0.001

Ch.P(95) Ch.P(2000)


六、有机溶剂残留量测定

色谱系统与系统适用性试验

System Suitability Tests; SSTs

以直径为 0.25~0.18mm的二乙烯苯 -乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为 80~170℃；并符合下列条件：

⑴用待测物的色谱峰计算的 N应大于 1000；

⑵内标物与待测物的两个色谱峰的 R≥1.5；

⑶每个标准溶液进样 5次，所得待测物与内标物峰面积之比的 RSD≤5%；

若以外标法测定，所得待测物峰面积的 RSD≤10%


嗅味及挥发性的差异

颜色的差异

溶解行为的差异

旋光性质的差异

吸附或分配性质的差异

对光选择吸收性质的差异

第三节特殊杂质检查

物理性质上差异：


酸、碱性质的差异

氧化还原性的差异

杂质与一定试剂产生沉淀

杂质与一定试剂产生颜色反应

杂质与一定试剂反应产生气体

化学性质上差异：


旋光性质的差异

Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：＋ 186°～ 198°

黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇）

化合物浓度% ℃温度 [а]D

黄体酮 1～ 1.4 20～ 25 +193°±4°

醋酸双烯醇酮 0.9 20 -31°±2°

醋酸妊娠烯醇酮～ 1 常温 +20°±2°


220 260 300 nm

肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线

HO

HOO

C CH2NHCH3HO

HOOH

CH CH2NHCH3

λmax310nm


吸附或分配性质的差异薄层色谱法 TLC

一般要求：颗粒直径 10~40µm薄层涂布：无粘合剂含粘合剂：常加入 10~15% 煅石膏 (CaSO4·2H2O,180℃烘 4h) 或 0.5~0.7%羧甲基纤维素钠水溶液

原点至溶剂前沿的距离原点至斑点中心的距离

fR

比移值


常用方法：

杂质对照品法

供试品自身对照法

对照药物法


供试品 10µl N-甲基哌嗪10µl

50mg/ml 50µg/ml

枸橼酸乙胺嗪I2蒸气显色

N

N

CH3

CONC2H5

C2H5


规定：

如显杂质斑点，不得多于 2个，其颜色与对照品主斑点相比较，不得更深。

地塞米松磷酸钠地塞米松 20mg/ml 0.20mg/ml


如有 1~2个杂质点超过时，应不得深于 0.01%对照液的主斑点。

其中有 1个杂质点应不深于 0.002%供试品的主斑点。

“氨苯砜中检查有关”物质规定：

0.01%供试品100µg/ml 1%供试品

10mg/ml

0.002%供试品20µg/ml


分类柱填充剂流动相正相色谱硅胶极性小的有机溶剂

极性化学键合硅胶正己烷 ,氯仿 ,二氧六环等

反相色谱十八烷基硅烷键合硅胶甲醇 /水乙腈 /水四氢呋喃 /水

离子对色谱 ODS RP流动相中加离子对试剂

离子交换色谱离子交换填料电解质水溶液

排阻色谱

凝胶渗透有机凝胶有机溶剂

凝胶过滤玻璃微孔球水溶液

高效液相色谱法 HPLC


主要方法：峰面积归一化法不加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。

内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。

外标法测定供试品中某个杂质或主成分的含量：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。


Ⅰ Ⅱ供试品供试品 +内标

内标峰

内标峰

杂质

杂质

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