含量及有关物质分析方法验证的可接受标准

文章来源：药审中心 审评二部黄晓龙

本文介绍了在对含量及有关物质测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。

内容包括：准确度、线性、精密度、专属性、检测限、定量限、耐用性和系统适应性 。

1. 准确度含量： 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般

要求分别配制浓度为 80％、 100％和 120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 98.0%-102.0%之间， 9个回收率数据的相对标准差（ RSD）应不大于 2.0%。

有关物质： 验证时一般要求根据有关物质的定量限与质

量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为 0.2%，则可分别配制该杂质浓度为 0.1％、 0.2％和 0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算 9个回收率数据的 RSD。

准确度

可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在 80%-120% 之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至 70%-130% ，相对标准差应不大于 10% 。

准确度

2. 线性 含量： 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。

具体的验证方法为：在 80 ％至 120 ％的浓度范围内配制 6 份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（ X ），峰面积为纵坐标（ Y ），进行线性回归分析。

可接受的标准为：回归线的相关系数（ R ）不得小于 0.998 ， Y 轴截距应在 100 ％响应值的 2 ％以内，响应因子的相对标准差应不大于 2.0% 。

线性

有关物质： 在定量限至一定的浓度范围内配制 6 份浓

度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（ X ），峰面积为纵坐标（ Y ），进行线性回归分析。

可接受的标准为：相关系数（ R ）不得小于 0.990 ， Y 轴截距应在 100 ％响应值的 25％以内，响应因子的相对标准差应不大于 10% 。

线性

3. 精密度 含量： 1 ）重复性

配制 6 份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得 6 份供试液含量的相对标准差应不大于 2.0% 。

2 ）中间精密度 配制 6 份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12 个含量数据的相对标准差应不大于 2.0% 。

有关物质： 1 ）重复性

　　配制 6 份杂质浓度（一般为 0.1% ）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得 6 份供试液含量的相对标准差应不大于 15% 。

2 ）中间精密度　　配制 6 份杂质浓度（一般为 0.1% ）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得 12 个含量数据的相对标准差应不大于 20% 。

精密度

4. 专属性 含量： 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主

成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于 2.0 。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于 980 。

有关物质： 可接受的标准为：空白对照应无干扰，该

杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小于 2.0 。

5. 检测限 含量： 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3 。

有关物质： 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 3 。

6. 定量限 含量： 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10 。

另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测 6 份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于 2.0% 。

有关物质： 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于 10 。

另外，配制 6 份最低定量限浓度的溶液，所测 6 份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于 2.0% ，峰面积的相对标准差应不大于 5.0% 。

7. 耐用性 含量： 分别考察流动相比例变化 ±5 ％、流动相 p

H 值变化 ±0.2 、柱温变化 ±5℃ 、流速相对值变化 ±20 ％时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于 2.0 ，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（ n=6 ）的相对标准差应不大于 2.0% 。

有关物质： 分别考察流动相比例变化 ±5 ％、流动相 pH

值变化 ±0.2 、柱温变化 ±5℃ 、检测波长变化 ±5nm 、流速相对值变化 ±20 ％以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0 ，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离；各条件下的杂质含量数据（ n=6 ）的相对标准差应不大于 2.0% ，杂质含量的绝对值在 ±0.1 ％以内。

耐用性

8. 系统适用性 含量： 配制 6 份相同浓度的供试品溶液进行分析，

主峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0% ，主峰保留时间的相对标准差应不大于 1.0% 。另外，主峰的拖尾因子不得大于 2.0 ，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。

有关物质： 配制 6 份相同浓度的杂质溶液进行分析，

该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于 2.0% ，保留时间的相对标准差应不大于 1.0% 。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于 2.0 ，理论塔板数应符合质量标准的规定。

系统适用性

9. 溶液稳定性 有关物质： 按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品

溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（ 4℃ ）中，在 1 、 2 、 3 、 5 和 7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。　　可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对值应不大于 2.0% ，杂质含量的绝对值在 ±0.1 ％以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。

化学药品溶出度方法研究文章来源：审评二部 唐素芳

化学药品普通口服固体制剂溶出度方法验证易忽视的几个问题

文章来源：审评四部审评八室 郑国钢

溶出度研究试验主要包括以下内容：

（ 1 ）溶出介质的选择 （ 2 ）溶出介质体积的选择 （ 3 ）溶出方法（转篮法与桨法）的选择 （ 4 ）转速的选择 （ 5 ）溶出度测定方法的验证 （ 6 ）溶出度均一性试验（批内） （ 7 ）重现性试验（批间）

（ 1 ）溶出介质的选择

溶出介质通常采用水、 0.1mol/L盐酸溶液、缓冲液（ pH 值 3～ 8 为主）。对在上述溶出介质中均不能完全溶解的难溶性药物，可加入适量的表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（ 0.5% 以下）等，应有文献依据，并尽量选用低浓度，必要时应做生物利用度考察。

（ 2 ）溶出介质体积的选择

溶出介质的体积需使药物符合漏槽条件，大杯法（第一、二法）常用体积为 500 、 900和 1000ml ，小杯法（第三法）常用体积为 100～ 250ml 。部分品种为满足在溶出量测定时药物浓度的需要，可采用低于上述限度范围的溶剂。

漏槽条件即做溶出的最佳条件，是指药物所处释放介质的浓度远小于其饱和浓度，生理学解释为药物在体内被迅速吸收，制剂的体外包括释放度等测定需要模仿体内生理条件的，满足药物溶解 -吸收的过程，漏槽条件起到了修正作用，一般释放介质的体积为药物饱和溶液所需介质体积的 3～ 5倍。

溶出介质体积的选择

（ 3 ）转篮法与桨法的选择

一般情况下，片剂多选择桨法，转篮法多用于胶囊剂或漂浮的制剂，研究资料应进行两种方法的对比试验，以确定最佳方法。

（ 4 ）转速的选择 目前，各国药典中收载的溶出度测定方法中的转速，大部分在 50～ 100转 / 分。转篮法以 100转 / 分为主；桨法以 50转 / 分为主。一般认为桨法 50转 / 分相当于转篮法 100转 / 分。转速的设置与具体品种有关，通常，药物制剂的溶出速度随着转速的增加而增大。转速过快，可能会导致对不同制剂溶出行为的区分能力差，所以不推荐选择过高转速。转速的选择应以能区分不同处方和生产工艺的产品为宜， 如确实需要选择高转速，应进行充分的验证。

（ 5 ）溶出度测定方法的验证

方法学验证内容与含量测定基本相同。应该注意的是，在方法学验证中，试验所用的溶媒应为溶出介质，即应考查辅料、胶囊壳在溶出介质中的干扰，药物在溶出介质中的线性、回收率及稳定性等。

应该注意的问题：1. 对于溶出度，范围规定为限度的 ±20 ％

（回收率高、中、低常设为 50 ％、限度浓度、100 ％）。

2. 测定干扰 2% 以下可忽略不计， 2～ 5% 可考虑在限度上适当提高，超过 5% 以上测定方法不可取，如是空胶囊产生的应进行囊壳的消除试验。如空胶囊干扰大于标示量的 25% ，实验无效，如干扰不大于标示量的 2% , 可忽略不计。

溶出度测定方法的验证

3.滤膜吸附的验证 一般认为吸附量在 2% 以下时可忽略不计，超过 2% 时应考虑选用其他滤过方法或更换适宜的溶出介质。

溶出度测定方法的验证

（ 6 ）取样点和限度的确定

通过溶出度均一性试验（ 考察同一批样品的溶出曲线）和重现性试验（ 考察至少 3 批样品的溶出曲线），确定合理的溶出度测定取样点和限度。为避免多次取样造成的误差，测定溶出曲线时取样点不宜过多，通常为 5～ 6个点，小规格的制剂因采用 100～ 250 ml 溶出介质，所以溶出曲线一般可选 3～ 4 个时间点。限度应综合考虑溶出曲线拐点和一般性要求。

总结及个人观点：

1. 在进行分析方法的验证时，首先还是要参考中国药典和指导原则，文章中提到的试验方法和可接受标准也是专家的一些经验总结，我们在进行研究时应根据具体的项目分析参考。

2. 在耐用性试验时，文中要求每个条件下各测试两次，且每次要平行测定 6 份样品？

3. 在进行溶出度测定方法的选择时，仅考虑不同条件下单点的溶出度是不合适的，应结合溶出曲线的测定结果来确定。

个人建议：（ 1 ）桨法和篮法均考查 50 、75 和 100rpm 。（ 2 ）将溶出曲线测定放在溶出度测定方法验证之前进行。

总结及个人观点

现场考核中的几个问题：1. 资料中溶液配比 80 ： 20 应改为比号 80 : 20 。

2. 线性试验中含量或有关物质浓度的溶液应设计在线性的中间点上。 3. 需对溶出介质体积的选择进行考察

4. 精密度试验做的不够全面

5. 经咨询审评中心李超科长获知，湖南省局审评科会对申报资料中的附图全部看一遍，发现有问题的将不通过检查，近二个月以来已有两家因为图谱有造假情况而未通过检查，且要求问题企业就此事向省局做全面汇报。

现场考核中的几个问题