زراعة انسجة

زراعة األنسجة النباتيةPlant Tissue Culture

النباتية األنسجة زراعةPlant Tissue Culture

داخل نباتي عضو أو نسيج أو خلية زراعة عملية هيومالئمة خاصة ظروف تحت و غذائي وسط في المعمل

. النباتي النسيج لنمو

الزراعة من النوع هذا يسمي التعريف هذا منطلق ومن: التالية باألسماء

النباتية - الخاليا (Plant Cell Culture)زراعةالنباتية - األنسجة (Plant Tissue Culture)زراعةالنباتية - األعضاء ( (Plant Organ Cultureزراعة

علي العلماء إتفق التقنية هذه مصطلحات إختالف ومع: وهي المجال هذا لوصف دقة أكثر تسمية

الدقيق Micropropagation اإلكثارهذا يومنا حتي شيوعا األكثر المصطلح .وهو

: العذائي الوسط ماهو

النبات نوع حسب المعمل في يحضر صناعي وسط هومحضر تشتريه األنسجة زراعة معامل وبعض فيه لينمويتكون وهو عالية، تكلفة ذات يكون ولكنه الشركات من

من:

الكبري- 1 الغذائية العناصرالصغري- 2 الغذائية العناصرالحديد- 3 مركباتالفيتامينات- 4النمو- 5 هرمونات6) سكروز- ) وكربوهيدراتوهو- ) 7 األوساط بعض في يستخدم المنشط الفحم

التاثير وتمنع الفينولية المركبات إزالة علي يعمل.) اإلنسجة علي السلبي

الهيدروجيني- 8 الرقم PHتعديل9) صلب- ) غذائي لوسط التحضر حالة في يضاف األجار

الغذائية األوساط من نوعان هنالك أن الي نشير كما:سائل - وسطصلب - وسط

: الغذائية األوساط أشهر من

وسكوج ) موراشيج العلمان بيئة & MurashigeتعتبرSkoog)MS

األنواع من العديد إلكثار المستخدمة البيئات أشهر منأوشرائها معمليا تحضيرها يمكن والتى النباتية

الخشبية النباتات وإكثار لزراعة تستعمل بيئة أيضا هناك)Woody Plant Medium)WPMوتسمى

معمل في الالزمة واألجهزة األدوات: األنسجة زراعة

أالمونيوم - ورققفازات- - ( بتري، أطباق مثل للحرارة، مقاومة زجاجيات

.... الخ زراعة أوني إختبار، (أنابيبحساس - ميزانمقطر - ماءاتوماتيكية - Micropipetteماصة

األنسجة- زراعة كابينةاللهب- بتركيز - للتطهير% 70كحول -) المغناطيسي ) المسخن هيتر

autoclave- التعقيم جهازوالحرارة الوتوكليفابالضغط

األدوات - لنقل متحركة طاوالتالمعقمة الزجاجيات .و

ومقصات - ومالقط مشارط فرن -لهب -

مرتين - ومقطر معقم ماءPh ال قياس جهاز

Laminar flow air 1- التعقيم كابينةحرارة- 2 درجة على للمحافظة هواء مكيف

. ثابتة الغرفةقفاز- - 3 ومالقط مشارط من زراعة أدوات

. للرأس- غطاء طبى1,5 . الكحول لرش سعة- - 4لتر بالستيك رشاشات

1أشهرها- ) 5 النباتية لألنسجة مطهرات

التجارى صوديوم % 5,5الكلوراكسهيبوكلوريت(-

Tween ناشرة 20مادةميكرسكوب- 6

مثل خاصة تكنيكات فى خاصة بصفة ويسخدممركزى -Centrifuge 7عزل طرد جهاز

Protoplast isolation البروتوبالست وزراعةأبيض- 8 بالطو

: الزراعة حجرة متطلبات

: واألقلمة الحفظ حجرة متطلباتفلورسنت بإضاءة أرفف

وفترات حرارة درجات تتطلب التى للمزارعحيث خاصة حضانات -Incubators 2إضاءة

الحضان . داخل ذلك فى التحكم يتمCell suspension cultures ضرورى وهو

الخلوى المعلق هزاز -Shaker 3لمزارع.Embryo cultures األجنة وزراعةحرارة- 4 درجة على للمحافظة هواء مكيف

. ثابتة الغرفةاإلضاءة- 5 شدة لقياس مقياس

عمل:مالإلي ينقسم األنسجة لزراعة النموذجي 5المعمل

: وهي غرف: الغسيل- غرفة أ

األدوات و والزجاجيات النباتية المستأصالت تغسلبها ويوجد الغرفة هذه في األولي الغسيل

الصابون.: الغذائية- األوساط تحضير غرفة ب

فيه نحتفظ دوالب حماية، كابينة علي وتحتويالهرمونات لحفظ ثالجة بالكيماويات،تعقيم جهاز المعقمة، ،( )والمستأصالت األوتوكليف

. الخ... مكيف: الزراعة- غرفة ج

لرش رشاشات الزراعة أدوات حماية، كابيناتمركزي،مكيف، طرد جهاز مجهر، الكحول،لهبالكلوراكس أشهرها النباتية لألنسجة مطهرات

- 5,5التجارى مادة % هيبوكلوريت صوديوم.Tween 20ناشرة

ال- غرفة :يحضتد المضيئة نحضانات فلورسنت، بإضاءة للمزارع Incubatorsأرفف

حيث خاصة إضاءة وفترات حرارة درجات تتطلب التىداخل ذلك فى التحكم يتم

هزاز المعلق Shakerالحضان، لمزارع وهوضرورىاألجنة Cell suspension culturesالخلوى Embryoوزراعةcultures .هواء مكيف

تحكم جهاز ثابتة، الغرفة حرارة درجة على للمحافظةفي اإلضاءة مدة ظبط جهاز الغرفة، حرارة بدرجة

الغرفة.: المظلمة- الغرفة ه

زجاج أرفف علي الغرفة هذه هذه يتحتوي في نحضن ة. الدرنات لتكوين لنشجعها النباتات الغرفة

منتظمة بصوره الغرف هذه تعقيم من والبد

: yالدقيق اإلكثار مراحل

1( النباتي/ المستأصل تأسيس ( Explantمرحلةالمعقمة :والزراعة

العالم هو المرحلة هذه حدد من أول سنة Murashigeإن1974.

صفات - ذات نبات إختيار المرحلة هذه في نراعي حيثالنشط النمو مرحلة وفي األمراض من خالي جيدة

األم النبات هو النبات هذا .ويكونالمراد - األجزاء السطحي تعقيم عملية نبدأ ذلك بعد

براعم، ) درنات، أوراق، كانت سواء طريقها عن اإلكثار. ( ..... بعناية بقصها وذلك الخ متوك عقد،

عملية - في الشروع وقبل ذكرها السابق األجزاء نأخذفطري مبيد في النباتية األجزاء بغمر نقوم التعقيم

) وعاء) في المستأصالت نضع ثم ، فطري مبيد محلوللمدة جاري ماء وهذه 30تحت ساعتان الي دقيقة

النسيج سطح علي الملوثات كمية من تقلل العمليةقبل ) والصابون بالماء المستأصالت غسيل يمكن النباتي

الجاري الماء تحت وضعه

.التعقيم - محلول في النباتي النسيج غمر يتم ذلك بعد

النسيج سطح علي الموجودة الملوثات لقتل وذلكإستعمال. مثال محلول % 50- 10النباتي من

علي Cloroxالكلوركس يحتوي من% 5.25-0.5الذيمن لمدة هيبوكلورايت الصوديوم دقيقة 30-5مادة

إستعمالها يتم التي المعقمة المحاليل أهم من وهو . النباتية االنسجه تعقيم في واسع نطاق علي

مثل - المنظفات والتي Tween-80 - Tween-20إضافة. التعقيم محاليل كفائت من تزيد ناشرة مواد تعتبر

النباتي - للنسيج السطحي التعقيم عملية تتم أن بعدمع مرتين والمقطر معقم بالماء النسيج غسيل يجب

المحاليل إزالة يتم حتي بالماء الغسيل تكرارعمليةالسابقة.

جهد طريق عن وذلك حدث إذا البيني التلوث معالجةمضادة( redox potentialالنزف ) مواد بإستعمال وذلك

لالكسدة.

من - المتضررة اإلنسجة حواف بإزالة نقوم ثمأجزاء الي النسيج تقسيم ويتم المنظفة المحاليل

من .1-0.5بمساحات مكعب سنتيمترالغذائي - الوسط في اإلجزاء بزراعة ذلك بعد نقوم

مدة تعديل مع الحضن غرفة في ووضعة المناسبالحرارة ودرجة اإلضاءة

وفي لهب بقرب حماية غرفة في العمل مراعاة والبدمعقمة معقمةوأدوات .ظروف

من - لمدة المزروعة األنسجة مراقبة أيام 5-3يتم . الستبعاده تلوث حدوث حال في لمعرفة

المرحلة - في اإلستزراع إعادة عملية إجراء يمكنمن بعد . 4-2الثانية اإلولي الزراعة من أسابيع

التضاغف/ 2 :Multiplication Stageمرحلة

في السريعة الزيادة هو المرحلة هذه أهدف ومنالناتجة الخضرية األجنة طريق عن النباتية عدداألعضاء

أو جانبية أفرع الي تتحول بدورها التي و الخاليا من. العرضية البراعم تكون

-: هي مراحل بثالثة النبيتات تمر المرحلة وهذه

الخاليا / من الخضرية األجنة علي الحصول أSomatic Cell Embryogenesis

الجانبية/ األفرع نمو تشجيع بEnhanced Axillary Development

العرضية/ األفرع تطور جAdventitious shoot Development

هذه في النمو هرمونات وتضافنوع حسب معينة بنسب المرحلة

. مضاعفته المراد والجزء النبات

السابقة - بالمراحل المرور بعدإعادةاإلستزراع بعملية Subنقوم

culturing وأوساط أوعية فيجديدة.

في - اع اإلستزر بإعادة نقوم حيثونفرغ اللهب قرب الحماية حجرة

الزجاجية االوعية من واحد وعاءبملقط النمو حديثة النبيتات بأخذ

في وزراعتها وتقطيعها معقمبنفس ونستمر الجديدة األوعيةحتي األوعية بقية مع الطريقة

عدد من مضاعف عدد علي نحصل. السابق األوعية

واألقلمة/ 3 المعمل في التجذير مرحلةIn Vitro Rooting and Conditioning:

تحفيزها - يتم المعمل في عليها المتحصل األفرع إنيتم حيث المرحلة هذه في األوعية داخل جذور لتكون

باالكسينات المرحلة هذه في الغذائية األوساط .تدعيممن - لمدة واحد جيل المرحلة هذه تستمر 4-2حيث

أسابيع.

األوعية/ 4 خارج والتجذير األقلمة مرحلةIn Vitro Rooting and Acclimatization

مناسب - وسط في األفرع وضع يجبللتجذير األوعية خارج نقلها يتم عندما

. وتطورها نموها ولدعم واألقلمةاألقلمة وسط بين الخلط ولتفادي

التجذير وسط علي نطلق سوف والتجذيرخليط أو التجذير خليط األوعية خارج

Rooting mixture or Soil mixtureالتربة التربة من يتكون عادة الخليط وهذا

ويدعم األشجار قلف مخلفات أو الصناعةمواد إضافة وأيضا السماد من بالقليل

. النبات لتربة لتالئم

: األنسجة زراعة تقنية فوائد1. أمراض/ من خالية نباتات إنتاج2. عالية/ وجودة أفضل صفات ذات نباتات إنتاج3. / معمليا الثانوية المركبات إنتاج

عالميا النباتات وتبادل نقل تسهيل4. وتحسينها/ النباتية الوراثية األصول حفظ

الفسيلوجية الدراساتتجري/ 5 التي البستانية الحاصالت لشتالت اإلكثار

. لها السريع اإلكثار نظم إليجاد البحوث من العديدللتحسين الخلوي واإلنتخاب الجسدية اإلختالفات

الوراثيأو/ 6 العالية اإلقتصادية القيمة ذات النباتات إكثار

. إنقراضها عدم علي والعمل اyلمعمل داخل الفعالةالتصدير/ 7 أو للمزارع وتحضيرها شتالت علي الحصول

للزراعات بالنسبة معين بموسم التقيد دونالموسمية.

الجسدي ) التهجين البروتوبالست somaticدمجHybridization)

) الوراثي ) التحوير الوراثية الهندسةتقنية/ 8 بحثية دراسة أنها علي وأخيرا أوال تعتبر وهي

. النبات علوم لدراسة بيولجية

: المعملية الزراعات أنواع

القمي/ 1 المرستيم culture of Meristem-tipزراعة

الطرفي/ 2 البرعم culture of Shoot-tipزراعة

الجانبى/ 3 البرعم )culture of Axillary )lateralزراعةbud

العقدة / 4 Single node cultureزراعة

البروتوبالست/ 5 Protoplast Cultureزراعةالخاليا/ 6 معلق Cell Suspension Cultureزراعةالمتوك/ 7 Onther Cultureزراعةاألعضاء/ 8 وزراعة كلس نسيج علي Overviewالحصول

of Callus )Tissue(and Organ Culture . الدقيق اإلكثار تقنيات من وغيرها

(autoclave)

Laminar flow air

نباتي جزء ) مستنبت)

Explant

جسدية أجنة تكونSomatic embryogenesis

التبرعم Organogenesisأو

بذري نباتأجنة) من

جنسية(

معادة نبيتات التكوين

Regenerants(Plantlets)

كالسCallus

خالياغير متمايزة

مراجع:األنسجة زراعة في علمية مقدمة مادة

توفيق / العزيز عبد عزه دكتور أستاذ) زينة ) ونباتات زهور بساتين أستاذ

http://rapidshare.com/files/23286890/006-Plant_Cell_and_Tissue_Culture.pdf.h tml

/http://rapidshare.com/files/23709809/

Plant.Tissue.Culture.Engineering-1402035942.pdf

زراعة انسجة

Education