实验三 dic 的造病和实验室检测
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实验三 DIC 的造病和实验室检测. 【 目的要求 】 1. 通过 DIC 动物模型的复制,了解 DIC 的病因及发 病机制。 2. 观察急性 DIC 各期血液凝固性的变化,并分析这 些变化的原因及其病理意义。 3. 了解 DIC 的诊断标准,熟悉常用的实验室检查指 标及其意义。. 【 实验动物 】 家兔,体重 1.5 ~ 2.0 kg 。 【 药品与器材 】 1% 普鲁卡因,血小板稀释液,兔脑匀浆, 4% 肝素。. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
实验三 实验三 DICDIC 的造病和实验室检测的造病和实验室检测
【目的要求】1. 通过 DIC 动物模型的复制,了解 DIC 的病因及发
病机制。
2. 观察急性 DIC 各期血液凝固性的变化,并分析这
些变化的原因及其病理意义。
3. 了解 DIC 的诊断标准,熟悉常用的实验室检查指
标及其意义。
【实验动物】【实验动物】 家兔,体重 1.5 ~ 2.0 kg 。
【药品与器材】【药品与器材】 1% 普鲁卡因,血小板稀释液,兔脑匀浆, 4% 肝素。
兔手术台,显微镜,离心机, 721 型分光光度计,水浴箱、手术器械,微量加样器,动脉插血小板计数板,注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。
【实验步骤】 1. 称重、麻醉和固定家兔
1% 普鲁卡因作颈部局部麻醉,颈前正中切口。分
离家兔一侧颈总动脉,动脉插管,备放血用。
2. 取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各 3 个,分别做
好标记。
3. 正常血标本各项指标的的制备
■ 用玻璃纸,接兔血 1 滴,并立即取 10l 血放入 2.0
ml 血小板稀释液内充分混匀,作血小板计数。
■ 分别在肝素抗凝管内放入兔血 1.5ml ,在枸橼酸钠
抗凝管放入兔血 3.5ml 。迅速混匀后,离心、取上
层血浆,另置入干净小试管,并加上标记。 ( 肝素抗凝所制备的血浆用以测定 Fbg;枸橼酸钠 抗凝所制备的血浆用以测定 PT和 3P试验)
4. DIC 的造病:取兔脑匀浆,以 8ml/ Kg 体重剂量,
经耳缘静脉以 1ml/min 的速度匀速推注。
5. 兔脑匀浆注射完毕后,立即采集血样和 30 或 45min
后采血样一次。进行 BPC, PT 测定, 3P 试验和
Fbg 含量的测定。 【附录】【附录】1. 血小板计数( BPC )
将试管内已稀释血液滴到计数板上静置 10min ,
用高倍镜计数。准确数出计数板中央 l 大方格的血
小板数,乘以 2000 就是每立方毫米的血小板数。
2 .凝血酶原时间( Prothrombin Time 简称 PT )
■ 取被检血浆 0.lml ,置于试管内, 37℃水浴预温。
■ 加入 P 试液 0.2ml ,并轻轻地侧动试管,至液体停止
流动或出现颗粒为止,记录 PT 测定值(秒)。
■ 重复 3 次测定,取平均值作为测定结果。3 .血浆鱼精蛋白副凝试验( 3P 试验)
■ 取被检血浆 0.5ml ,置于试管内, 37℃水浴 3min 。
■ 加入硫酸鱼精蛋白液 50l ,混匀, 37℃水浴 15min 。
观察有无白色纤维或凝块出现。
如纤维或凝块出现为阳性;无纤维或凝块为阴性。
4 .纤维蛋白原定量(饱和氯化钠法)
■ 实验管:取血浆 0.5ml ,加入饱和 NaCl 4.5ml ,充分
混匀,置 37℃水浴 3min ,取出后再次摇匀。
■对照管:取生理盐水 0.5ml ,加入饱和 NaCl 4.5ml,
同上操作。
■选用波长 520nm ,以对照管试液调零点,然后测定
被检样品试液的光密度。测定光密度值
0.5× 1000 = mg%纤维蛋白原含量
【注意事项】1 .采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。
2 .注射兔脑匀浆前,做好第二次采血的准备工作。
3 .静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关
键,故密切注意动物的反应。
【思考题】1 .静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔 DIC模型?
试述其发生机制。
2 .讨论急性 DIC 产生的原因、机制及各项结果间的
关系。
【实验结果记录】
表 2-3-2 DIC 实验指标的测定记录项 目 注射前 注射后(立即) 注射后( 30/60min ) BPC
PT(sec)
3P 试验Fbg 量
表 2-3-1 注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察 注兔脑匀浆前 注兔脑匀浆后腹式呼吸 一般状态
血小板计数血小板计数
1010 倍镜下倍镜下
4040 倍镜下倍镜下
凝血酶原时间测定凝血酶原时间测定
TF+ CaTF+ Ca2+2+ + + 被检血浆,测定凝血时间,使凝血酶被检血浆,测定凝血时间,使凝血酶
原变为凝血酶,再进一步促进纤维蛋白形成。原变为凝血酶,再进一步促进纤维蛋白形成。
正常值:正常值: 12~1412~14 秒秒
3P3P试验试验
纤维蛋白单体 FM可与纤维蛋白(原)的降
解产物 X片段形成可溶性复合物 SFMC,当加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的
FM游离,重新聚集,即血浆重凝固。
意义:反映纤溶功能
1. 1. 来源:来源:肠粘膜肥大细胞,是一种酸性粘多糖;肠粘膜肥大细胞,是一种酸性粘多糖;2. 2. 作用:作用: AA、加速、加速 AT-IIIAT-III 、、 HC-IIHC-II 的作用,也影响的作用,也影响 TFPITFPI 、、 PCPC作用;作用;
BB、增强、增强 ECEC的抗凝和纤溶功能;的抗凝和纤溶功能; CC、与血小板结合,抑其表面凝血酶生成;、与血小板结合,抑其表面凝血酶生成;3. 3. 清除:清除: 细胞清除和体液中和。细胞清除和体液中和。
肝素(肝素( heparinheparin ))