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- Du génome à la cellule
- Faire parler les génomesOdile Ozier-Kalogeropoulos
Institut PasteurUniversité Pierre et Marie Curie
E-mail :[email protected]
Cours « Bioinformatique et
analyse des données génomiques » Vendredi 25 mars 2005
Sfax
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Première partie
Du génome à la cellule
Odile Ozier-KalogeropoulosInstitut Pasteur
Université Pierre et Marie Curie
Cours « Bioinformatique et
analyse des données génomiques » Vendredi 25 mars 2005
Sfax
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Du génome à la cellule
• 1- L’ADN «la molécule-reine»• 2- La bioinformatique conduit à une représentation
virtuelle des génomes• 3- Les bases de la biologie moléculaire• 4- La démarche de la bioinformatique• 5- Le temps et le monde vivant• 6- Les virus : un monde hétérogène
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1- L’ADN «la molécule-reine»
• i. Structure
• ii. Séquençage
• iii. Etudes bioinformatiques des séquences d’ADN
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La structure en double hélice de la molécule d’ADNJames Watson and Francis Crick in 1953
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1- L’ADN «la molécule-reine»
• i. Structure
• ii. Séquençage
• iii. Etudes bioinformatiques des séquences d’ADN
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Comment séquence-t-on un génome ?
Une réponse rapide : en morceaux !
Room filled with sequencing machinesCourtesy of Celera Genomics
Lab technician working with sequencing machinesCourtesy of Celera Genomics
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Comment séquence-t-on un génome ?
Lab with sequencing machinesCourtesy of Celera genomics
Close up of capillaries from a capillary sequencing machine Courtesy of Celera Genomics
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Plate-forme Génomique, Institut Pasteur
Comment séquence-t-on un génome ?
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1- L’ADN «la molécule-reine»
• i. Structure
• ii. Séquençage
• iii. Etudes bioinformatiques des séquences d’ADN
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Longueur des génomes de quelques Eucaryotes
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2- La bioinformatique conduità une représentation virtuelle
des génomes
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Fragment d’une séquence d’ADN :
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Pasteur Genopole® Île-de-France, Plate-forme technologique 4 :Intégration et analyse génomiques
Représentation de génomes bactériens séquencés
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3- Les bases de la biologie moléculaire
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ADN
3-1 Le dogme central de la biologie moléculaire
ARN Protéine
3-1-1 Au niveau des molécules
1960
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ADN
3-1 Le dogme central de la biologie moléculaire
ARN Protéine
Transcription Traduction
3-1-1 Au niveau des molécules
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3-1 Le dogme central de la biologie moléculaire
(d’après Brown, 2002, in genomes)
En 1960 En 2000
3-1-2 Au niveau cellulaire
Transcription
Traduction
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3-1-3 Au niveau des organismes procaryotes et eucaryotes
Schéma simplifié
3-1 Le dogme central de la biologie moléculaire
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3-2-1 chez les bactéries
Une seule ARN polymérase chez E.coli :
- Découverte en 1958
- Contient 5 sous-unités
- Environ 7000 molécules par cellule
’
3-2 La machinerie transcriptionnelle
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3-2-2 chez les eucaryotes
Trois ARN polymérases
ARN polymérase Synthèse Constituants
I - ARN pré-ribosomique
Ensemble de12 sous-unités plus 2
autres polypeptides
II
- ARN messagers
- snoRNA*
Ensemble de12 sous-unités
III
-Les ARN de transfert
-ARN ribosomique 5S
-Petits ARN
Ensemble de12 sous-unités
plus 5 autres polypeptides
* : small nucleolar RNA
3-2 La machinerie transcriptionnelle
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3-3 La machinerie traductionnelle
3-3-1 Le ribosome est constitué
de deux sous-unités
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From Brown, 1999
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From Brown, 1999
Utilisation en
phylogénie moléculaire
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From Brown, 1999
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3-3-2 Le code génétique
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(Crick, 1960)
La traduction Acide aminé
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Amino Acid Three-Letter Abbreviation One-Letter AbbreviationAlanine Ala AArginine Arg RAsparagine Asn NAspartic Acid Asp DCysteine Cys CGlutamine Gln QGlutamic Acid Glu EGlycine Gly GHistidine His HIsoleucine Ile ILeucine Leu LLysine Lys KMethionine Met MPhenylalanine Phe FProline Pro PSerine Ser SThreonine Thr TTryptophan Trp WTyrosine Tyr YValine Val V
Le code génétique à une lettre est utilisé en bioinformatique
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4- La démarche de la bioinformatique
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ADN
4- La démarche de la bioinformatique
ProtéineDéduction
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3> 3>
2> 2>
1> 1>
<1 <1
<2 <2
<3 <3
Recherche des phases de lecture ouverte dans une séquence d’ADN procaryote (ou eucaryote sans intron)
logiciel DNA strider (C. Marck)
- 6 phases de lecture - codon ATG - codon stop
ADN
4- La démarche de la bioinformatique
ProtéineDéduction
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<3 <3
Recherche des phases de lecture ouverte dans une séquence d’ADN procaryote (ou eucaryote sans intron)
logiciel DNA strider (C. Marck)
- 6 phases de lecture - codon ATG - codon stop
ADN
4- La démarche de la bioinformatique
ProtéineDéduction
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1> 1>
<1 <1
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<3 <3
Recherche des phases de lecture ouverte dans une séquence d’ADN procaryote (ou eucaryote sans intron)
logiciel DNA strider (C. Marck)
- 6 phases de lecture - codon ATG - codon stop
ADN
4- La démarche de la bioinformatique
ProtéineDéduction
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7000
3> 3>
2> 2>
1> 1>
<1 <1
<2 <2
<3 <3
Recherche des phases de lecture ouverte dans une séquence d’ADN procaryote (ou eucaryote sans intron)
logiciel DNA strider (C. Marck)
- 6 phases de lecture - codon ATG - codon stop
ADN
4- La démarche de la bioinformatique
ProtéineDéduction
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ADN
4- La démarche de la bioinformatique
ProtéineDéduction
SPRIQAR
![Page 37: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/37.jpg)
5- Le temps et le monde vivant
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L’échelle du temps en milliards d’années
14
4,6
D’après Brown, 1999 in Genomes
10
3,5
5-1 Le temps
![Page 39: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/39.jpg)
L’échelle du temps en millions d’années
Millions d’années
D’après Brown, 1999 in Genomes
5-1 Le temps
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Woese, 2002, microbiol and mol biol Reviews, vol 68, p173
5-2 l’ADN est le support de l’information génétique dans les trois domaines du Vivant
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5-3 Schéma des cellules eucaryote et procaryote
Bactéries et Archées
![Page 42: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/42.jpg)
5-4 Particularités des Archées
• Glycoprotéines de la membrane cellulaire différentes des Bactéries et des Eucaryotes
• Protéines intervenant dans la réplication, transcription et traduction ressemblent à celles des Eucaryotes
• Protéines du métabolisme plus proches des Bactéries que des Eucaryotes
• Souvent présentes dans des milieux extrèmes (Méthanophiles, halophiles, thermorésistantes...)
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6- Les virus :
un monde hétérogène
![Page 44: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/44.jpg)
6-1 Les virus à ADN
![Page 45: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/45.jpg)
6-2 Les virus à ARN
D’après Flint et al, in Principles of virology
![Page 46: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/46.jpg)
6-3 Les virus sont présents dans les trois domaines du Vivant
5100 virus connusSeulement 36 ont été isolés d’Archées
G.Rice et al, 2004, PNAS, 101, p7716
Virus de Sulfolobus solfataricus
La capside est similaire à celle de virus de Bactérieset d’Eucaryotes
Ancêtre commun avant la divergence des trois domaines du Vivant ?
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Faire parler les génomes
Deuxième partie
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Faire parler les génomes• 1- Structure des génomes procaryotes et
eucaryotes• 2- Organisation en opéron des gènes
procaryotes• 3- Quelles informations sont contenues
dans les régions intergéniques ?
• 4- Les gènes codant des ARN
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1- Structure des génomes procaryotes et eucaryotes
Faire parler les génomes
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1-1 Contenu de fragments chromosomiques de quelques espèces
D’après Brown, 2002 in Genomes
IntronHuman pseudo-gene t tRNA
Exon orgene Genome wide repeats
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1-2 Eléments des génomes
Espèce Helicobacter pylori
(Bactérie)
Methanosarcina acetivorans
(Archée)
Saccharomyces cerevisiae
(levure, Eucaryote)
Homo
sapiens
(mammifère, Eucaryote)
Chromosome :
Nombre
Forme
Longueur centromère
1
Circulaire
Pas de centromère
1
Circulaire
Pas de centromère
2 x 16
Linéaire
110 pdb
2 X 23
Linéaire
>106 pdb
Gènes codant des protéines :
% du génomeLongueur moyenne d’un gène
% de gènes morcelés
91%
945 pdb
0
74%
936 pdb
0
72%
1450 pdb
4%
20%génome transcrit
1 à 4%
20000 pdb environ
≈100%
Gènes codant des ARN :
ARN ribosomiques
ARN de transfert
snARN
0,7%7 clusters 12 gènes seuls
1,5% 5%
262 copies
0,4%
1300 copies
Séquences répétées :
Hautement répétées
Moyennement répétées
0%
1% (17 éléments IS)
0%1,2% (30 copies de
Ty)
10%
44%
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1-3 Organisation du génome humain
(d’après Brown, 2002, in genomes)
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1-3 Organisation du génome humain
(d’après Brown, 2002, in genomes)
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1-3 Organisation du génome humain
(d’après Brown, 2002, in genomes)
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2- Organisation en opéron des gènes procaryotes
Faire parler les génomes
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2-1 Les opérons
Définition : gènes adjacents appartenant à la même unité de transcription
(transcription polycistronique)
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Laurence J.G, 2002, Cell, vol 110, p407
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2-2 L’exemple de l’opéron tryptophane
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Chaîne de biosynthèse du tryptophane chez E. coli
Xie et al, 2003, MICROBIOL AND MOLECULAR BIOLREVIEWS, 2003, Vol. 67 p.303–342
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Conservation de l’opéron tryptophanechez différentes bactéries
Xie et al, 2003, MICROBIOL AND MOLECULAR BIOLREVIEWS, 2003, Vol. 67 p.303–342
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Xie et al, 2003, MICROBIOL AND MOLECULAR BIOLREVIEWS, 2003, Vol. 67 p.303–342
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2-3 Les opérons dans leur ensemble
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Les opérons de la bactérie E. coli
Cherry, 2003, J. theor Biol, vol 221, p 401
4289 gènes
Transcription monocistronique :
1864
Nombre d’opérons :2528
soit environ 74% des gènes à transcription unique et en moyenne 1,70 gène par unité de transcription
Estimation
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26 génomes de Bactéries et d’Archées : La fraction de transcription monocistronique
augmente avec la taille du génome
![Page 65: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/65.jpg)
26 génomes de Bactéries et d’Archées : La fraction de transcription monocistronique
augmente avec la taille du génome
E.coli
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Plus les génomes sont grands, moins l’organisation des gènes
en opéron est présente
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3- Quelles informations sont contenues dans les régions
intergéniques ?
Faire parler les génomes
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1000
1000
2000
2000
3000
3000
4000
4000
5000
5000
6000
6000
7000
7000
3> 3>
2> 2>
1> 1>
<1 <1
<2 <2
<3 <3
Recherche des phases de lecture ouverte dans une séquence d’ADN procaryote
(ou eucaryote sans intron)
logiciel DNA strider (C. Marck)
- 6 phases de lecture- codon ATG- codon stop
Informations dans ces régions ?Promoteurs et terminateurs des gènes
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3-1 Identification des régions promotrices
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Chez les bactéries : séquences bien conservées dans l’ensemble des espèces
donc faciles à identifier
![Page 71: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/71.jpg)
Phase ouverte de lecture+1-35 -10
+1 : Démarrage de la transcriptionBoite -35 5’-TTGACA-3’Boite -10 (Pribnow box) 5’-TATAAT-3’
Promoteur d’un gène d’Escherichia coli :
![Page 72: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/72.jpg)
Chez les eucaryotes :séquences peu conservées
dans l’ensemble des espèces, donc difficiles à repérer
![Page 73: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/73.jpg)
E. coli
S. cerevisiae
H. sapiens
Représentation schématique de régions promotrices
From P. Thuriaux, 2004, in la Levure (Belin)
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3-2 Identification de régions promotrices par génomique comparative
Kellis et al, 2003, Nature, vol 423, p241-254
![Page 75: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/75.jpg)
Un exemple d’identification de régions promotricespar génomique comparative
• S. cerevisiae• S. paradoxus• S. mikatae• S. bayanus
(http://genome-www.stanford.edu/Saccharomyces/).
Quatre espèces de levures Saccharomyces
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Comparaison des génomes des quatre levures :Alignements des ORFs
ORFs avec homologues
ORFs sans homologue
Fragments de 50 kb
Un exemple d’identification de régions promotricespar génomique comparative
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Conservation des gènes et des intergènesentre S. cerevisiae et :
Identité
S. paradoxus
S. mikatae
S. bayanus
Gènes 90% 84% 80%
Régions inter-
géniques80% 70% 62%
Kellis et al, 2003, Nature, vol 423, p241-254
Un exemple d’identification de régions promotricespar génomique comparative
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Kellis et al, 2003, Nature, vol 423, p241-254
Un exemple d’identification de régions promotricespar génomique comparative
![Page 79: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/79.jpg)
52 régions régulatrices contenant des motifs distincts
identifiés chez ces levures Saccharomyces
Kellis et al, 2003, Nature, vol 423, p241-254
Un exemple d’identification de régions promotricespar génomique comparative
![Page 80: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/80.jpg)
3-3 Les facteurs de transcription chez les bactéries et les archées
-Perez-Rueda et al, 2000, NAR, vol 28, p1838, - Perez-Rueda et al, 2004, Computational Biology and Chemistry, vol 28, p341
Faire parler les génomes
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3-3-1 Quel est le rôle des facteurs de transcription ?
![Page 82: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/82.jpg)
Initiation de la transcription
![Page 83: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/83.jpg)
Facteur de transcription
Initiation de la transcription
![Page 84: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/84.jpg)
3-3-2 Facteurs de transcription chez E. coli
314 protéines régulatrices :- 35% activateurs- 43% répresseurs- 22% double fonction
-Perez-Rueda et al, 2000, NAR, vol 28, p1838,
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3-3-3 Distribution des facteurs de transcription chez les bactéries et les archées
75 familles dans 90 génomes
- Perez-Rueda et al, 2004, Computational Biology and Chemistry, vol 28, p341
Etude in silico
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Distribution des facteurs de transcriptiondans les génomes de bactéries et d’archées
Le nombre de facteurs de transcription augmente avec le nombre de gènes
Génome de bactérie ou d’archée
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Distribution des facteurs de transcriptiondans les génomes de bactéries et d’archées
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Distribution des facteurs de transcriptiondans les génomes de bactéries et d’archées
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Distribution des facteurs de transcriptiondans les génomes de bactéries et d’archées
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Certains sont universels,
d’autres sont spécifiques
à un groupe d’espèces
Distribution des facteurs de transcriptiondans les génomes de bactéries et d’archées
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4- Les gènes codant des ARN
http://www.sanger.ac.uk/cgi-bin/Rfam/genome_dist.pl
Faire parler les génomes
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4-1 Répartition des différents ARN dans le monde vivant
(d’après Brown, 2002, in genomes)
![Page 93: - Du génome à la cellule - Faire parler les génomes Odile Ozier-Kalogeropoulos Institut Pasteur Université Pierre et Marie Curie E-mail :odozier@pasteur.fr](https://reader036.vdocuments.pub/reader036/viewer/2022070308/551d9d7e497959293b8b6465/html5/thumbnails/93.jpg)
4-1 Répartition des différents ARN dans le monde vivant
(d’après Brown, 2002, in genomes)
ARN non codant
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4-1 Répartition des différents ARN dans le monde vivant
(d’après Brown, 2002, in genomes)
ARN non codant
Les petits ARN(small RNA)
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4-2 Les gènes codant des petits ARN (small RNA genes) sont difficiles à identifierde manière expérimentale et informatique
• Petite taille
• Pas traduit en protéine
• Mutants pas repérables (Phénotype ?)
• Jusqu’en 2000, seulement 10 gènes sRNA d’E.coli connus
• Entre 2000 et 2003 : 45 nouveaux gènes
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Comment essayer de les identifier ?
• Analyse de transcriptome par micro-arraysd’oligo-nucléotides dans les régions intergéniques (protéines)Tjaden B. et al, 2002, NAR, vol 30, p 3732
• Génomique comparative : séquences conservées entre espèces proches dans des régions apparemment sans gèneRivas E. et al, 2001, Current Biol, 11, p 1369
• Biais dans la composition des séquences (%GC riche)
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4-3 Les gènes codant des petits ARN
(small RNA genes) chez E. coli
Hershberg R et al, 2003, NAR, vol 31, p1813
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Localisation des gènes sRNA chez E.coli
Longueur des gènes sRNA
4-3-1
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Fonctions déterminées pour 13 des 55 gènes sRNA identifiés
-Appariements avec d’autres ARN
pour réguler leur stabilité ou traduction
- Liaison avec des protéines
pour réguler leur activité
4-3-2
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La régulation du gène RpoS (facteur par trois sRNA : Réponse à l’environnement
Repoila F et al, 2003, Mol Microbiol, vol 48, p 855
DsrA
RprA
Région 5’ du gène RpoS OxyS
4-3-3
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La régulation du gène RpoSpar trois sRNA : Réponse à l’environnement
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La régulation du gène RpoSpar trois sRNA : Réponse à l’environnement
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4-4 Conservation des gènes sRNA et des gènes adjacents dans différentes
espèces bactériennes
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Conservation des gènes sRNA et des gènes adjacents dans différentes espèces bactériennes
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Gaspin et Thébault, Biofutur, 251, janvier 2005, p33
4-5 Les ARN non codant sont universels
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En particulier, ils sont très nombreux chez les Eucaryotes
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Conclusion
De l’ADN «la molécule-reine»
au «small RNA world»
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Remerciements
Ahmed Rebai (Centre de Biotechnologie Sfax)Fredj Tekaia (Institut Pasteur)
Et merci pour votre accueil !