致命的吸引力 – 酵素免疫分析法

ELISA PLATE 大解密！

– 選 對 好 幫 手 讓 您 的 實 驗 變 彩 色 – 黃華盈 撰

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　酵素連結免疫吸附分析法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ELISA）或稱酵素免疫分析法（Enzyme-linked

immunoassay；EIA）都是所謂的專一性抗原抗體反應試驗，利用抗原抗體之間所擁有的專一鍵結特性對樣本檢體進行檢

測，配合酵素連結進行呈色反應，而達到快速檢測篩選的目的。依據不同實驗條件的選擇，除了可進行特定抗原或抗體是

否存在之定性分析，樣本的定量分析更是不成問題。所以科學家們衍生研發出多種類型 ELISA 檢測方式，主要以間接法（

Indirect ELISA）、三明治法（Sandwich ELISA）、競爭法（Competitive ELISA）三種為主，想必大家對這些方法一定

熟到不能再熟了！所以不在此贅述原理（圖一）。

；

　本文主要要幫大家介紹這些檢測方法所需要的工具們，俗話說的好「工欲善其事，必先利其器」，要做好實驗，工具當

然也是很重要的！其實，在 ELISA 當中最常遇到的實驗問題就是高背景值、實驗再現性不佳、樣本濃度過高或過低、樣本

來源及種類不一等等；這些問題常常讓實驗者感到非常困擾，往往每次都是勞師動眾、勞民傷財且耗工費時，最後的問題

的癥結點與解決辦法都不太一樣，是否大家會覺得這真是個很讓人百思不解的矛盾實驗呢？事實上這些問題也可以變得很

簡單，我們可以由實驗的三大基本要素幫您直接分析並解決這些惱人的困擾。

（a）間接免疫分析法 Indirect ELISA

（b）三明治法 Sandwich ELISA

（c）競爭法 Competitive ELISA

wash

wash

wash

wash

wash

wash

wash

wash

coating抗原

coating抗體

專一性抗體偵測

專一性抗體偵測

酵素標定二抗連結

酵素標定二抗連結

酵素標定二抗

偵測專一性抗體

呈色

呈色

呈色將抗原與抗體反應後之混合物

加入抗體coated分析盤中進行競爭

圖一：三種常見免疫分析法原理。（a）間接法 Indirect ELISA；（b 三明治法Sandwich ELISA； c 競爭法Competitive ELISA。） （ ）

05

　首先，我們需要一個好的固相支持物 — 「免疫分析盤」。大家可能都不知道一個好盤子會對實驗的結果造成什麼樣的影

響吧！現在就來幫大家揭開免疫分析盤的神秘面紗。一個好盤子需要：

當燈光美氣氛佳的時候不需要其他電燈泡干擾，還要有點黏又不會太黏－選擇最適類型的免疫分析盤，能讓

您贏在起跑點。

致命的吸引力，對您的愛永遠不嫌多也不嫌少！ 要有超優吸附能力，才能把所有您欲 coating 的抗原（抗

體）通通抓住。

－

特別的愛留給特別的你 特別的樣本就需要有特別的免疫分析盤。－

1.

2.

3.

不要為了節省成本而犯了實驗中的大忌，無形中浪費了您的 buffer、substrate、抗體，甚至是寶貴檢體樣本與時間！

所以選用正確的免疫分析盤能讓您避免實驗背景值干擾的問題：

高 binding capacity，只要需要把 blocking 動作做完全之後就可以將您實驗的 standard curve 拉的非常漂亮，讓您用

簡單的內插法就可以對您的樣本進行精準定量分析，樣本內 target 濃度再高或再低都不怕！

我們都知道，實驗總是處處驚奇，所以各式各樣您能想到的檢體我們也需要準備不一樣的特殊免疫分析盤來解決您的

需求。舉凡樣本為血漿、血液、體液、尿液等等都可以找到專屬的大盤子小盤子以及特殊表面處理盤，如標準 96、

384、1536 孔盤以及 Immobilizer Amino plate、Streptavidin-coated plate、Glutathione-coated plate、Immobilizer

Nickel-Chelate plate 和 CovaLink surface plate。

選擇具有低背景值特性的純淨非再生樹脂製作免疫分析盤；

不同表面處理的分析盤會因為所裸露出的基團不同而有親水性程度上的差異，進而影響蛋白質吸附效果，如圖所示。

依據您欲 coating 的蛋白質種類選擇適當親水程度的表面分析盤，才能有最佳親和力（Binding Affinity）表現，避免

非專一性物質吸附干擾實驗結果。

H OHOH

O C

Hydrophobic Hydrophillic

O

到這邊大家應該對一個好盤子有了簡單的了解，最後不免俗的，好

康一定要報給大家知道！好東西也要跟好朋友分享！所以在這邊要

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適用於含血清樣本可以降低背景值干擾！

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Glutathione

Strept

avid

in

CovaLink

(Electrophile

) Ni-chelate

Biotin

- R

GST - RR - NH2

R - CO

OH

Poly-His - R

pH 9.6

pH 7.5

+GAH

+ED

C PS

Amino

R - S

H