قسم الكيمياء الحيوية

هد ال ل لت د دولت على سالمه.د

الكيمياء الحيوية ستاذا الكيمياء الحيوية ستاذا

1المحاضرة الثالثة

االساس العلمي لالختبارات المناعية، ة ھي اختبارات بيوكيميائية ،ھي اختبارات بيوكيميائية ة تستخدم لقياس مستوى مواد معينة في السوائل الحيوي تستخدم لقياس مستوى مواد معينة في السوائل الحيوي

::تعتمد المقايسة المناعية على تعتمد المقايسة المناعية على ) ) ،لعاب،لعابدموعدموعسيرم، البول ،سيرم، البول ،: : مثلمثل(( ا او فيروسات او (ارتباط انتجين بجسم مضاد د يكون بكتري حيث ان االنتجين ق

).بروتين وتدعي ھذه الثالثة مولدات المضاد ففي اى أختبار مناعي يجب أن يكون ھناك تفاعل بين االنتجين والجسم المضاد

-:ويكشف عن ھذا االختبار بعدة طرق وتقنيات مناعية منھا التلزن-أAGGLUTINATION وينقسم الى:- التلزن المباشر -١DIRECT AGGLUTINATION اما ان يكون على شريحه او في انبوبة

ل٢ ال PASSIVEالتلزن AGGLUNTINATIONتشف ال ف ل ال التالزن ف ع التلزن السلبي-٢PASSIVE AGGLUNTINATION ويعرف التالزن السلبي في المستشفيHEAM AGGLUTINATION راء ات دم حم ن كري ارة ع و عب ى RBC`Sوھ دمص عل م

.سطحھا اما انتجين او جسم مضاد٣-HETERO AGGLUTINATION اط االجسام المضادهحيث ان بعض ه لالرتب ا القابلي لھ

ا ات يكون لھ بأكثر من جسم مضاد واحد ويستخدم ھذا التكنيك في حالة وجود مجموعه من االنتيجينن ار الكشف ع ل أختب أثير مث ب ونفس الت ن Venereal Disease Research (Venereal Disease Research)نفس التركي ر ب ل ير س و ب ي ر )س e e ea sease esea c( e e ea sease esea c

LaboratoryLaboratory )VDRLVDRL () وث ر بح لية مختب راض التناس من )األم ذي يتض وال.والھربس الكشف عن مجموعة االمراض المسببه للحميات مثل الزھري

المضاد الجسم أو الضد ، المناعة علم في•Antibody)( حرف شكل على بروتين ھوY

فياألخرىالجسدية والسوائلالدمفيويتواجد.الفقاريات

ئةتتك لنالضز تال ةال الق القريبةالبروتينسالسل مننوعينمنالضدجزيئةتتكون•بالثقيلة واألخرى بالخفيفة إحداھا توصف بعضھا من

Antibodyعلىللتعرفالمناعةجھازقبلمناستخدامهيتم• م اي زبلنا ىرا جھوالفيروسات البكتيريا مثل وتحيدھا األجنبية األجسام

المناعيجلوبيولينالاسمالضدعلىيطلق• ق ينمىي وبيو يج)immunoglobulin( .

بمستضد ويرتبط مضاد جسم كل ويحيط• خالل تحركه او تكاثره من فيمنع)(Antigenمعين المفتاح بين للتفاعل مشابه تفاعل وھذا ؛ الجسملقالالضدأنإذالقفل تضدت كانإذاإالال

3كانإذاإالبالمستضد يتعلقالالضدأنإذوالقفل، .وظيفته يعكس تركيبي مظھر لهشكله بنفس

يميھم اثارةوبالتحديد للجسمالمناعيالجھازاثارةعنمسؤولجسمھو•المضادة األجسام

يب ھذه ومثلالحيوانات،فيحقنھاعنداألضدادإنتاج تحرضسكرياتأوروتيناتب– جرضريورو ليويھإ و أن يمكن لذلك المستخدم المستضد مع نوعي بشكل تتفاعل أن يمكن األضدادالمستضد ذلك لكشف تستخدم

:Antigen حاالت•:إماAntigenيكون :إماAntigenيكون

.الھرمونات مثل طبيعي بشكل الجسم في موجود•هت ن ةاالتفالفت الذHCGثالض الذيHCGھرمون:مثالمرضيةحاالت فيالجسمفيتصنيعهيتم•

في إفرازه يمكن كما،الحمل أثناء طبيعي بشكل المشيمة خاليا من يفرزالرجالعندحتالسرطاناتأنواعبعض .الرجالعند حتىالسرطاناتأنواعبعض

.المخدرات مثل العادية األحوال في موجود غير•

:التالي النحو على تقسيمھا يمكن المناعية االختبارات من مختلفة أنواع ھناكاألجسامأواألنتيجينمنعنهالكشفالمرادالشقأساسعلى:أوال األجسامأو األنتيجينمنعنهالكشفالمرادالشقأساسعلى:أوال

المضادةAntigenاألنتيجيناختبارات• tests)( ر gيجينب )(

معين ميكروب وجود عن للكشف يجرى مناعي اختبار أي على تطلق طاعون فيروس عن الكشف مثل حيوانية بعينة به خاصه أنتيجينات أوال ت افتتطل(ثةفالل ات ةأ )ةا ) نوعيةمناعية أجسامتوافرتتطلب(روث عينةفيالصغيرةلمجتراتل

ات ا ااخت ةاأل ضا Aال tib d t t )( Antibody المضادةاألجساماختبارات• tests)( خاصه مناعية أجسام وجود عن للكشف يجرى اختبار أي على تطلق

ب انمصلفمعينبميكر ائلأ(الحي كما")الحليبمثلأخرىس كما.)الحليب مثلأخرىسوائلأو(الحيوان مصلفيمعينبميكروب توافر وتتطلب( "بالبروسيال لإلصابة المصلي التشخيص حالة في

.)ميكروبيةأنتيجينات5

(

:على أساس طريقة إجراء االختبار:ثانيا : أولية اختبارات -1

ز اتت ت نناألولالتفاعلعنالكشفعلقد هاألنت ا ةأ ع الن .النوعية وأجسامهاألنتيجينبيناألوليالتفاعلعنالكشفعلىبمقدرتھاتتميز : وھي متطلبات ولھا ......البوليستيرين،،النشافورقمثلسطحعلىمثبتاالتفاعلشقيأحديكونأن- ونن يرينورقلحىب ليي ي ......بو ( التفاعل شقي أحد يكون أن - )المضادة األجسام غالبا ( معلما معين بمادة )موصوما

Western (ELISA اإلاليزا اختبارات ) أ :أمثلة Blots. (أ Fluorescence)(FAT المناعيالتألقاختبار)ب antibody technique

المشعة النظائر على المعتمدة المناعية االختبارات ) جـ (Radioimmunoassay "RIA") (Radioimmunoassay RIA )

ثانوية اختبارات - 2المضادةأجسامهواألنتيجينبينالتفاعلتبعياتعنالكشفعلىإجرائھافيتعتمد ھي ي نىإجر ج ويجينبينلب: :أمثلة

) (Agglutinationالتالزن اختبارات ) أ )(Precipitationالترسيباختبارات)ب )(CFT المتمم تثبيت اختبار )جـ

ل التطبيقالعلماألساسحيثمنالمناعيةلالختباراتمبسطشرحيلفيماسنتنا6

التطبيقوالعلمي األساسحيثمنالمناعيةلالختباراتمبسطشرحيليفيماوسنتناول . والتقييم

التحاليل المناعية المرتبطةالتحاليل المناعية المرتبطة

Direct ELISA Indirect ELISA

Sandwich Competitive

ELISAELISA ELISA

::تنقسم إلىتنقسم إلى قياسات مناعية مباشرة قياسات مناعية مباشرةDirect ELISADirect ELISA والتى تنقسم الى والتى تنقسم الى::

ة ةق ق قياسات مناعيةقياسات مناعيةSandwich ELISA Sandwich ELISA ھذه التقنية تستخدم لقياس تركيز مادة جزيئية مثل الھرمونات ھذه التقنية تستخدم لقياس تركيز مادة جزيئية مثل الھرمونات

كالسيرم الحيوي السائل في كالسيرموالعقاقير الحيوي السائل في تقاس..والعقاقير الجزيئية المادة تقاسھذه الجزيئية المادة ھذه يرم يوي ل ي ير يرمو يوي ل ي ير س..و ي جزي س ي جزي التي ارتبطت التي ارتبطت AntibodyAntibodyعن طريق معرفة كمية األجسام المضادة عن طريق معرفة كمية األجسام المضادة

AntigenAntigenب ب ة ناع ات ا ةق ناع ات ا Cق titi ELISAC titi ELISA قياسات مناعيةقياسات مناعيةCompetitive ELISACompetitive ELISA

مباشرة غير مناعية مباشرةقياسات غير مناعية Indirectقياسات ELISAIndirect ELISA ر ب ير ي ري ب ير ي Indirect ELISA Indirect ELISAي وقياس تركيزه في وقياس تركيزه في AntibodyAntibodyعندما يكون المطلوب الكشف عن عندما يكون المطلوب الكشف عن

..العينة ففي ھذه الحالةالعينة ففي ھذه الحالة1 Mi ll l t i b t d ith ti h d1. Micro-well plates are incubated with antigens, washed

up and blocked with BSA.2. Samples with antibodies are added and washed.3. Enzyme linked secondary antibody are added and3. Enzyme linked secondary antibody are added and

washed.4. A substrate is added, and enzymes on the antibody elicit a chromogenic or fluorescent signal.

((Sandwich ELISA )Sandwich ELISA )

..ه ه تكون جدران الويالت مغطاة باالجسام المضادة الخاصة باالنتيجين المراد الكشف عن وجوتكون جدران الويالت مغطاة باالجسام المضادة الخاصة باالنتيجين المراد الكشف عن وجو - - عند اضافة العينة الى الويل تقوم االجسام المضادة الموجودة على جدران الويل باالرتباطعند اضافة العينة الى الويل تقوم االجسام المضادة الموجودة على جدران الويل باالرتباط --

العينة ف جد اذا العينةباالنتيجن ف جد اذا ..باالنتيجن اذا وجد فى العينةباالنتيجن اذا وجد فى العينةباالنتيجنالخرى الغريبة الخرى الغريبة اا يتم غسيل الويل للتخلص من االجسام المضادة غير المرتبطة واالنتيجناتيتم غسيل الويل للتخلص من االجسام المضادة غير المرتبطة واالنتيجنات --

جدار الويل يسمى الجسم المضادجدار الويل يسمى الجسم المضاد ويتبقى االنتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود علىويتبقى االنتجين المطلوب مرتبط بالجسم المضاد الوجود علىباالنتجين باالنتجينالمرتبط المضاد((المرتبط والجسم االنيجين المضادمعقد والجسم االنيجين antibodyمعقد antigen complexantibody antigen complex(( ))antibody antigen complexantibody antigen complexمعقد االنيجين والجسم المضادمعقد االنيجين والجسم المضاد((المرتبط باالنتجينالمرتبط باالنتجين

يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل ھذا الجسم المضاد الثانى مع يتم اضافة جسم مضاد أخر يكون مميز او معلم بواسط انزيم يتفاعل ھذا الجسم المضاد الثانى مع -- ..معقد االنتيجين والجسم المضادمعقد االنتيجين والجسم المضاد

المرتبطة-- غير المضادة االجسام من للتخلص أخرى مرة الغسيل عملية المرتبطةتكرر غير المضادة االجسام من للتخلص أخرى مرة الغسيل عملية بتكرر ر ير ا ة م ا ن االج ص رى رة أ يل ي ا برر ر ير ا ة م ا ن االج ص رى رة أ يل ي ا .. رر يقوم االنزيم المرتبط فى الجسم المضاد يقوم االنزيم المرتبط فى الجسم المضاد ) ) substratesubstrate((يتم اضاف الخطوة االخيرة وھو مركب يتم اضاف الخطوة االخيرة وھو مركب - -

Stop Stopيتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى يتم وضع محلول لوقف التفاعل يسمى - - الثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لونالثانى بتحويلة من مادة عديمة اللون الى لونsolutionsolution

..يتم القراءة على جھاز قراءة االليزا عند الطول الموجى المناسبيتم القراءة على جھاز قراءة االليزا عند الطول الموجى المناسب - -

( )

10

Y Y Y Y Y YWell with antibodies and BSA added Y Y YWell with antibodies

antigen binding sites

Well with antibodies and BSA added Y Y YWell with antibodies,BSA, and test sample

1-Well in a microtiter plate

antigen binding sites , p

Antibody structure Y Y YWell after washes with

wash bufferwash buffer

Well after adding substrate

Y Y YSecondary antibody linked to an enzynme is added to the Y Y Y

Color developed due to the formation of a

substrate

11١١

ywellY Y Y

Well after removing excess antibody

absorbance is read by fiberoptic multichannel

spectrometer.١١

ELISA Reader

لل ذ تتناسب قوة امتصاص ھذا اللون مع•.تركيز االنيجين المجھول فى العينة

اتات تان ا ة زا ال ت ك كل مع كل كيت اليزا عدة استاندراتوياتى•بتركيزات متدرجة معلومة يتم ) غالبا ٦(

رسمعمله يتم ثم المطلوب االختبار onمع n

m

مع االختبار المطلوب ثم يتم رسمعمله: منحنى قياسى يمثل العالقة بين

Concentration التركيزAbs

orpt

io

Co ce a oيز رabsorbanceقوة االمتصاص

ويتم حساب النتائج من ھذا المنحنى

A

Concentration ng/ml

12

Competitive ELISA

13

In Directالمباشرةطريقة االليزاغير Elisa ير يز رري ب

اش ال ا االل ا ط ف نفس خطوات االليزا المباشرة •ولكن فى ھذة الطريق نبحث

لة المجھ المضادة ا االج عن االجسام المضادة المجھولةعنفى العينة فتكون جدران

باالنتيجناتالالوي مغطاة ت ت مغطاة باالنتيجنات الالويالخاصة باالجسام المضادة

المراد الكشف عنھاوباقى الخطوات ھى نفسھا •

عولعل اشھر االمثلة لھذا النوع االليزا الخاصة بالكشف عن االجسام المضادة بفيروس سى

14

Immunoblot (western blot)u ob ot ( este b ot)ھي طريقة اكتشاف بروتين معين في عينة أو مستخلص أنسجة، وھي من •

المخبرية الحيوية .التقنيات الحيوية المخبريةالتقنياتويستخدم ) electrophoresis(تفصل البروتينات بواسطة االلكتروفيريس•

)(SDS-PAGEعادا )(عادة ما يكون الغشاء مصنوعا من مادة (نقل البروتينات إلى غشاء •

(النيتروسيليلوز nitrocelluloseأوPVDF ( حيث يتم التحقق)االكتشاف (الھدف وتين للب مخصصة أضداد تخدا ھذابا عن يكشف والت البحث موضع موضع البحث والتى يكشف عن ھذا .باستخدام أضداد مخصصة للبروتين الھدف

)system colour(االرتباط بنظام لونى

15

Western blottingWestern blotting

١٦١٦1616

Colorimetric detectionاالكتشاف اللونية Chemiluminescenceاإلضاءة الكيميائيةل

نظير مشع:االكتشاف المشعRadioactive detection ععالكتشاف الفلوريFluorescent detectionمثل صبغة فلوريسينية:لكائن دقيق معين، وذلك باستخدام مصل معد بسيط على ذلك، ھو التحديد المجھري في نسيجمثال تحت ضوء األشعة فوق البنفسجية fluoresces الكائن الدقيق، ويعلم بصبغة تومض ضد

١٧١٧

= (Immunofluorescence)التألق المناعيFluorescence antibody technique "FAT"

أجسام• استخدام يتم المناعي التألق اختبار في في اختبار التألق المناعي يتم استخدام أجسام•مضادة مرتبطة ولكن ليس بإنزيم وإنما بمادة

و ھي مواد كيميائية fluorochromeتسمى المرئية غير البنفسجية فوق األشعة تمتص األشعة فوق البنفسجية غير المرئيةتمتصوتعيد بثھا في التو في صورة ضوء مرئي

يختلف لونه باختالف المادة ومن أشھر الموادFl i i thi t (FITC)– Fluorescein isothiocyanate (FITC)

– Rhodamine isothiocyanate (RITC)بينما تنتج أخضرحيث تنتج األولى ضوء•

أ ة ةلث أش فFluorochrome جج

عند وضعھا في مسار أشعةحمرالثانية ضوء أ).المجھر المؤلق(فوق بنفسجية

االختبار• من نوعان :وھناك

Labeled Anti-Ig

UnlabeledAb ر ب ن اال ن و :وھ

-Direct FAT - -Indirect FAT

Ab

18Ag

Tissue Section

Competitive Labeled Immunoassays ( RIA)( RIA)

عل ن ج انت ن الكشاف(التناف ھ عل)الج غ ن ج انت وانتيجين غير معلم)الجوھر الكشاف(التنافس بين انتيجين معلم-على كمية محددة من االجسام المضادة ) المريض (

Concentration determined from a standard curve using known amounts

19of unlabeled Ag

االختبارات المناعية المعتمدة على النظائر المشعة(R di i "RIA")(Radioimmunoassay "RIA"):

ھي اختبارات تشخيصية تجرى في أنابيب اختبار •.بإستخدام نظائر مشعة طبية

فقط• تعتمد ال أنھا ھو االختبارات ھذه مايميز ھذه االختبارات ھو أنھا ال تعتمد فقطمايميزعلى الدقة العالية، وإنما على ميزة عدم تعرض

. المريض إلى اإلشعاعبأحد)األجسام المناعية أو(نيتم ربط األنتيجي• ي ي م ي(ي )م

).١٢٥I(النظائر المشعة مثل اليودتمتاز االختبارات المناعية اإلشعاعية بحساسيتھا •

الفائقة، ولھذا تستخدم في تقدير الھرمونات ض الك ا الت ات ف ات واإلنزيمات وفيروسات التھاب الكبد وبعضاإلنز

.البروتينات المصلية وبعض األدوية ومواد أخرىيعتمد الفحص على التنافس الحاصل في أنبوبة •

المشع المعلمة األنسولين جزيئات بين االختبار بين جزيئات األنسولين المعلمة المشعاالختبارجزيئات و )المضاف إلى أنابيب الفحص(

.الموجود في نموذج الدم(األنسولين المستضد

20

االختبارات المناعية الثانوية: ثانياAالتال ا ا A(اخت l ti ti t t( A-اختبارات التالزن)Agglutination tests(

المناعي• التراصالتالزن أنتيجيناتاو و مناعية أجسام بين والتشابك االتحاد عند يحدث ي صزن ر يجي و ي و م ج ب بين ي و. عن طريق محددات أنتيجينية سطحية) غير ذائبة(مجسمة

البكتيريا و الفطريات و :من أنواع األنتيجينات التي تناسب ذلك النوع من التفاعالت •ال ال ا ك كذلك ا ل .اءاألوليات وكذلك كريات الدم الحمرااأل

:ومن أنواع اختبارات التالزن المناعي •الشأ Slide)ال(التالزن aggl tination Slide agglutination)السريع(التالزن الشريحي-أ

)Slow agglutination(التالزن البطئ -ب

21

Agglutination R tiReaction

الشريح Slide(التالزن agglutination( )Slide agglutination(التالزن الشريحي

أ ة ا ز ة ش ل األنت نقطة ل ال نقطة خلط ت يتم بخلط نقطة من المصل مع نقطة من األنتيجين على شريحة زجاجية أو•).rocking(بورسلين بيضاء يتبع ذلك تحريك الشريحة

الشريحة• قاع على األنتيجين من تجمعات بتكوين اإليجابي التفاعل على يستدل على التفاعل اإليجابي بتكوين تجمعات من األنتيجين على قاع الشريحةيستدل. دقائق ٣خالل

ييمكن استعمال اختبار التالزن الشريحي لتصنيف معزوالت بكتيرية لمعرفة•.E. coloiكما ھو الحال مع السالمونيال و ) serotype(ضربھا المصلي

ل ف ك ل ا ا أ ل الل لال ا أ يستخدم أيضا لالستدالل على وجود أجسام مضادة لميكروب معين في مصل•اختبار روزبنجال لتشخيص البروسيالالحيوان و من أشھر ذلك

معظم• فإن لذلك و النتائج قراءة لتسھيل ملونا البكتيري األنتيجين يكون أن يفضل يفضل أن يكون األنتيجين البكتيري ملونا لتسھيل قراءة النتائج و لذلك فإن معظم •أنتيجينات التالزن الشريحي تباع ملونة من قبل الشركات

23

Slide Agglutination TestSlide Agglutination Test

24

Tube Agglutination TestTube Agglutination Test

25

B : اختبارات الترسيب المناعي)Immunoprecipitation(

أنتيجينات بين يحدث الترسيب فإن التالزن من العكس غير(ذائبةعلى يجي يب ي بين ر إن زن ن س ير (بى عند مركب غير ذائبو أجسامھا المضادة وذلك بتكوين ) مجسمة

التركيز األمثل للتشابك و على حسب طريقة إجراء االختبار فإن أشھر :أنواع الترسيب المناعي ھيأوفيه يتم إضافة مستخلص األنتيجين المراد :الترسيب الحلقي -أ

أ ة ة الكشف عنه بحرص على جدار أنبوبة صغيرة محتوية على أجسام أ) Ascoli(مضادة نوعية مع عدم الخلط مثل اختبار أسكولي

اك األنث . لتشخيص األنثراكسلتشخ).equivalence zone(تتكون حلقة بيضاء في مكان ما عند التقاء السائلين : immunodiffusionاختبارات االنتشار المناعي-ب•

وفيھا يتم استعمال وسط شبه صلب مثل األجار ويسمح فيه بانتشار ث أ أ

26:أحد شقي التفاعل أو كالھما مثل

Precipitation ReactionsPrecipitation Reactions

Ouchterloney’sاختبار أوكترلوني -١-الثنائ( االنتشا ا )اخت )اختبار االنتشار الثنائي(

حيث يوضع كل من األنتيجين الذائب والمصل في فتحات •أجار في معمولة منظم%)١~(متقابلة ملح محلول في في محلول ملح منظم%) ١(متقابلة معمولة في أجار

ويسمح لكليھما باالنتشار نحو بعضھما وتكوين خط .فيما بينھما equivalenceترسيب في منطقة

اآلخر• الشق بمعلومية التفاعل شق أحد تعريف يمكن الطريقة وبھذه وبھذه الطريقة يمكن تعريف أحد شقي التفاعل بمعلومية الشق اآلخر •مثل (وبھذا االختبار أيضا يمكن التعرف على عالقة أنتيجينات •

مختلفة ببعضھا وذلك بوضعھا في فتحات ) معزوالت لفيروس واحمضادة أجسام على تحتوي مركزية فتحة مقابل طريقمتجاورة عن م ج ى وي زي ر بل ور ريق.ج ن

متشابھة (شكل خطي الترسيب يمكن معرفة العالقة بين الفيروسات )..تماما، متشابھة جزئيا أو ليست لھا عالقة ببعضھا

28

ضع• ت ليجف يترك ث األجار مع المضادة ا األج تخلط فيه وفيه تخلط األجسام المضادة مع األجار ثم يترك ليجف و توضع•عينة األنتيجين الذائب في فتحات باألجار حيث ھي التي ستنتشر فقط

خط معھا ن فتك باألجار المضادة األجسا لتقابل دائرة شكل على شكل دائرة لتقابل األجسام المضادة باألجار فتكون معھا خطعل.دائري على بعد معين يزيد كلما زاد تركيز األنتيجين بالعينة

زات ك ت ا ل ط ا نت قا أنت ت ا ق ك ويمكن قياس مستوى أنتيجين معين بمقارنته بضوابط لھا تركيزات•معلومة و ذلك بمعلومية نصف قطر الدائرة و لذلك فإنه يطلق على

ات ا االخت الن R(ذلك di l i diff i( من)Radial immunodiffusion(ذلك النوع من االختبارات Radius وھو نصف قطر الدائرة.

29

الفطرية Innateالمناعة ImmunityThe المتمم النظام – Complement Systemتالنظات اأال ةأن نا ةال ةأالط ٣تكالفط Innate Immunityالمناعة الفطرية ٣٠منيتكون وھو ،الفطريةأوالطبيعيةالمناعة أنواعأھممنالمتممالنظاميعتبر

المتمم النظام نشاط إن . الخاليا بعض سطح على أو المصل في يوجد ) أنزيم( بروتينھر وتعطيلتحليل النھايةفيتسببوالتيالحيويةالكيميائيةالتفاعالتمنكمجموعةيظھر ينوي ي ييويي ييببو ييھ و النظام عناصر تبقى ) الغريبة األجسام وجود عدم ( النشاط ھذا وبدون . الغريبة الخاليا التفاعالت من عددا فإن المتمم النظام تفعيل وعند .اإلنسان دم في خاملة كأنزيمات المتممزثلتنتقداألخ ف زات ازنأ ناال اال ةالخال فا ةالل ازالتائ ال والجھازالتائية اللمفاويةالخاليا المناعيالجھازمن أجزاءتحفيزمثلتنتجقداألخرى

تصميم في الخصائص ھذه استغالل وتم .البائية اللمفاوية الخاليا المكتسب المناعييسمىالميكروبيةاألمراضمنعديدلتشخيصيستخدمالكفاءةعالاختبار ر ملب ضنييص ي روبي ر ىي ي.)CFT( المتمم تثبيت اختبار

C :اختبار تثبيت المتمم(Complement fixation test “CFT

تشمل على (المكمالت تطلق على مجموعة من البروتينات من مصل دم اإلنسان •ة ا ال ا ل ل )ال

(Complement fixation test CFT

) .الجلوبيولينات المناعية immunological medicalواختبار تثبيت المكمل ھو اختبار المناعية الطبية •

ن تضد أ ددة ضادة ال ا األ د ن للكشف ا تخدا ا كن التي يمكن استخدامھا للكشف عن وجود األجسام المضادة محددة أو مستضد معين الت. في مصل المريض

وأجسامه• األنتيجين معقد بين التفاعالت فقط تنشط بأنھا المتمم عناصر وتتميز وتتميز عناصر المتمم بأنھا تنشط فقط التفاعالت بين معقد األنتيجين وأجسامه•لتتفاعل فيما بينھا في سلسلة من التفاعالت تنتھي ) (Ag-Ab complexالمضادة

ين.بتكوين مركب يؤدي تدمير جدار الخاليا المحتوية على األنتيجين ي ى وي ي ر ير ي يؤ ر وين

المكمالت• االجسامCOMPLEMENTSوتسمى وظيفة تكمل النھا االسم بھذا ى م COMPLEMENTSو ج ي ل و ھ م بھ :المضادة، الخطوات األساسية الختبار تثبيت متمم ھي كما يلي 31

C :اختبار تثبيت المتمم(C l t fi ti t t “CFT(Complement fixation test “CFT

32

Complement Fixation

– Ag mixed with test serum to be assayed for Ab

• Methodology

g ed t test se u to be assayed o b– Standard amount of complement is added– Erythrocytes coated with Abs is addedy y– Amount of erythrocyte lysis is determined

Ag No Ag

Patient’sserum

Ag

Ag

Two-dimensional (2D) immunoelectrophoresis(crossed immunoelectrophoresis )(crossed immunoelectrophoresis,)

is a particularly useful technique for the quantitation ofis a particularly useful technique for the quantitation of one or more proteins in a mixture of proteins and the analysis of the composition of protein mixturesanalysis of the composition of protein mixtures.

h h d f l l h The method consists of two sequential electrophoretic steps: 1.  The first dimension, during which the protein mixture to be analyzed is separated by electrophoresis in an agarose gel.  

2.  The second dimension, during which the separated proteins are electrophoresed at right angles into a freshly applied layer of agarose containing a predetermined amount ofapplied layer of agarose containing a predetermined amount of antibody. 

ImmunoelectrophoresisImmunoelectrophoresis

Lateral flow test, IMMUNOSTRIP

Control line. Antibodies anti-IgG adsorbedg

Test line. Antibodies anti-

Antibodies anti-antigen conjugated with enzyme

antigen adsorbed

• Immunochromatography (Lateral Flow)

• Biochemical components are separated across an absorbent membrane into discrete distinct regions.

Lateral Flow test,IMMUNOSTRIP

The antibodies are binded to their antigen in the sample and the complex antigen-antibody moves by

capillarity towards the reaction lines.

Lateral Flow test,IMMUNOSTRIP

Antigen binds to the antibodies that are in the test

Free antibodies bind to the antibodies anti Ig present in theantibodies that are in the test

line.antibodies anti-Ig present in the control line.

hCG(Pregnancy test( للحمل الدمفحص • Most chemical tests for pregnancy

look for presence of the beta subunit of human chorionic gonadotropin(hCG )i bl d i(hCG )in blood or urine

•hCGيظھر في )ى بروتين (ھرمون عن عبارهحدوث عند وبعداخصابالبول يوم١٢البويضة يوم١٢البويضة وبعد اخصابالبول عند حدوث

ويكون بكمية كبيرة ). الحمل( االخصابمن بداية . للحمل االوليوخاصة في الشھور

تكون• دائما الفحص الشھورالحوجهوھذا في له له في الشھورالحوجهوھذا الفحص دائما تكونله الحوجهال تكون االخيرهولكن في الشھور االولي، في بعض الحاالت الخاصة اال كثيره

ويمكن عمله في،ان ھذا الفحص نوعي وحساس • ييالبول والدم في نفس الوقت ولكن في حالة الدم بعد

.فصل البالزما عن الخالياوداما يفضل ان يأخذ البول الصباحي الن به كمية •

ال ة فhCGك ل ال أخذ hCGكبيرة من الھرمون ويجب أخذ البول في ,اناء يكون نظيف وجاف

يجب مالحظة تاريخ صالحية الشريط قبل عمل •الفحص

3939

.الفحص

Rapid test for drugs of abusep g

4040

THANKS……

41