Анаэробы

Методы выделения

чистой культуры

© Автор: Преподаватель высшей

категории Иванова И.Ф.

• Термин «анаэробы» ввел

Луи Пастер, открывший в 1861

году бактерии маслянокислого

брожения.

• Анаэробы — организмы,

получающие энергию при

отсутствии доступа кислорода

путем субстратного

фосфорилирования,

• Анаэробы — обширная группа

организмов, как микро-, так и

макроуровня

• анаэробные микроорганизмы —

обширная группа прокариотов и некоторые

простейших.

• макроорганизмы — грибы, водоросли,

растения и некоторые животные (большинс-

тво гельминтов (класс сосальщики,

ленточные черви, круглые черви

(например, аскарида)).

Особенности выделения

чистой культуры анаэробов• 1. Отсутствие О2 в питателных

средах и в окружающей среде

• 2. Внесение большого количества посевного материала в питатель-ную среду.

• 3. Длительность культивирования 24 - 48 часа

• 4. Температура культитвирования 37 - 40 град. С

• 5. Культура растет в глубине агара или в виде осадка на ЖПС.

Колонии напоминают снежинки, пушинки (S - форма) или чечевидные зерна (R форма)

Методы удаления кислорода

из питательных сред1. Кипячение. Непосредственно перед

посевом материала пробирки с питательными средами кипятят в водяной бане в течение 10—20 мин., быстро охлаждают, погружая в лед или подставляя под струю холодной воды, чтобы не дать ей насытиться кислородом воздуха, и используют для посева.

2. Использование редуцирующих веществ: глюкозы, аскорбиновой кислоты, цистеина, гликола,глютатиона.

3. Использование ткани паренхиматоз-ных органов(кусочки печени)

СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ

• Используют для культивирования и накопления анаэробов. Состоит из питательного бульона, 2% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода. Перед посевом среду прогревают на кипящей во-

дяной бане в течение 10-15

минут для удаления воздуха.

После посева среду залива-

ют небольшим слоем вазе-

линового масла. Выросшие

анаэробы вызывают помут-

нение питательной среды. В жидкие питательные среды помещают иногда пористые

вещества: вату, пемзу, которые адсорбируют на своей поверхности пузырьки воздуха

Для создания бескислородных

условий культивирования

используют :

• физические,

• химические

• биологические факторы.

• механические

Физические способы

культивирования анаэробов

• Способ Виньяля—Вейона.

• Метод Перетца — в расплавленный и

охлаждённый сахарный агар вносят

культуру бактерий и заливают под

стекло, помещённое на пробковых

палочках(или фрагментах спичек) в чашку

Петри.

Биологический методМетод Фортнера — посевы производят на чашку

Петри с утолщенным слоем среды,разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре.

Одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных.

Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробной микрофлоры,

а затем (после поглощения кис-

лорода) — рост аэробной резко

прекращается и начинается

рост анаэробной.

Химический метод(метод

Аристовского).• Материал, исследуемый на наличие анаэробов,

засевают на среду в чашки Петри и помещают их в

эксикатор, на дно которого кладут химический

поглотитель кислорода: гидросульфит натрия

или пирогаллол.

• В расширенную часть сосуда устанавливают на

подставке чашки с посевами.

• Прибор помещают в термо-

стат при температуре 37 °С

на 24—48 ч

Механический метод Выращивание

анаэробов в условиях вакуума.• Вакуумные условия для выращивания

анаэробов создают в анаэростатеИсследуемый материал или культуру микро-

бов засевают в пробирки с жидкой средой

или в чашки Петри с плотной питательной средой.

• Посевы помещают в анаэростат,

• затем присоединяют его к насосу и выкачивают воздух.

• Степень разреженности воздуха определяют по показаниям вакуумметра.

• Колонии анаэробов в вакуумных

условиях растут на поверхности

плотной питательной среды.

Питательные среды

• Тиогликолевая среда с мясным экстрактом

• Тиогликолевая среда - питательная среда для культивирова-

ния анаэробов, действующим началом которой является

натрия тиогликолат, обладающий выраженными

восстановительными свойствами.

• Содержит питательный бульон, 0,1% агара, 0,5%

глюкозы, 0,1% натрия тиогликолата и индикатор -

метиленовый синий или резазурин. Используют главным

образом для контроля стерилизации.Эту среду используют для культивирования широкого круга

аэробных и анаэробных бактерий:

1. Candida albicans

2. Clostridium sprogenes

3. Bacteroides vulgatus

4. Bacillus subtilis

5. Контроль (незасеянная среда)

СРЕДА ВИЛЬСОНА-БЛЕРА

(ЖЕЛЕЗО-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР) используется для выделения

анаэробных бактерий. Готовится из питательного агара, к

которому добавляют 1% глюкозы, хлорид железа и сульфит

натрия.

Анаэробные клостридии (Clostridium perfringens) образуют на

среде колонии черного цвета за счет образования соединений

железа с серой.