جارختسا نازیم هسیاقم و یلکایشیرشا یماگیروا...

لهللهلشمهسلل ل رواوگانهسر لل لپژوهشلل لست لل ل-فصللامه علما لل

ل425ل-414صلله عللللل،4931تهب للنه للللل،41شلل ها للللل،چهللها سلله لل

41/41/4939:لتللهاتدلپلل تا ل–ل49/44/4935:لتللهاتدلیاتهفلل

گتاگ ل،یگسشگه لگصههه ل،ماو یگسشود لل،ست لشمهس لناو ،سوت مد ل ؤو ل وهتبهت *

و مقایسه میزان استخراج یاکلیشیاشر تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سویه اوریگامی

آن با دو روش اولتراسونیک و انجماد و ذوبل

ل:مرضییییییییه سیییییییوار

ل:*لسید حمید زرکش اصفهانی

ل

ل[email protected]للل،لگتلللاگ للل،لیگسشلللگه لگصلللههه لللل،لکهاشمهسللل لگاشلللدل رواوبرو لللو لل

ل[email protected]للل،لگتلللللللاگ للل،لیگسشلللللللگه لگصلللللللههه للل،لیگسشلللللللرهالگت وسو لللللللو

ل

كیدهچ

ل55آ رملعلولوس ل و ولو لولدویلللللگسلردلل434اشلنعلگسل لکلعلیگاگ لللللهوا و لاشدلگس هس لتل لپلاوتنرتلتل لللل:مقدمه

گتل لللگتتلهوا و لیگاگ لکهابایهله لن لنای لل،ل ه لول نموعلهوا و لاشدلست ن هه للبعلما لفعه ر .لگس کراویگ نو ل

تبلدت لللصلمعن لسوتاکربللهه لپاوتنرتلباگ لتو ردلبره ل گسنههی لگسلل4394گسلگوگخالسه ل.ل یالپزشو لولبروتومو و ت

سلاو لوولویلیگایللللگسلنراگ لپلاوتنرتلیاو لللگسلطاف ل شلوتت لکلعلیالل.ل رارهایلیالا لشد لگس لچمدلصمع لبعلت

.لگسل لههلسرهسلبعلتجهرزگتلخهصللعلشویلکعلیالب رها لگسلگتتلاو گاگتبهمثلشد لگس لکعلچمدتتلاو لباگ لگتتلکهال

هلد لگتلتللل.لسلات لولگاسگ لیر ل لبلاگ لتراتلبلسلاو لیگاسلدلللللللسرلهسلبلعلتل لاو لللل،لپژوهشگاگ طه عهتلبرشناگ هلیال

شللدلگس للهس لتوتاکرللبلول مهت للعل رللزگ لگسللنراگ لآ لبللهلاو لگسج للهیلول و لولاو للللتو رللدلهوا للو لال،پللژوه

للل.لللگس ل هکارشتگشالگو ناگسوسر لیالسوتعلگواتگه ل

بهلوکنوالوهو ل لهوا و لاشدلگس لهس لتاگس لهوا لللل هکارشتگشال ل نعدلسوتعلگواتگه للههلساو ل:ها مواد و روش

هوا لو لاشلدلگس لهس لسوتاکرلبلتو رلدلولبلهلیولاو لگسج لهیلول و لولللللللللIPTGولگ مهلبهللLBشد لولبهلکش لیال رطل

بلتتلبااسل للللبتتلولوسنا لیگت،لباگیفوای،ل لگالتزگلههلاو گسنراگ لولسپسلگتتلپاوتنرتلبهلگسنههی لگسل،لگو ناگسوسر

لللل.لشد

بلتتلسشله للللبتتلولوسلنا للسنهتجلوهص لگسلیگتم لتاگس هوا لکای لبهکنا لبهلکهاگت لبهالت لگسجه لناف لولل:نتایج

لگسج لهیلول و لولللهلهللبهلگسنراگ لپاوتنرتلبلهلاو ل.لدشیگیلکعلپاوتنرتلهوا و لاشدلگس هس لسوتاکربلبعلخوب لتو ردل

کعل رلزگ لپلاوتنرتلگسلنراگ لشلد لیاللللللشدهه لگالتزگلولباگیفوایل شرصللگو ناگسوسر لولبااس لسنهتجلوهص لگسلاو

هل لگسلدگس لپلاوتنرتلگسلنراگ لشلد لیالاو لللللللک لهبر لول و لآه نعلبرشلنالگسلگسج لهیلول و لسلات لولللللاو لگسج هی

لللل.لگو ناگسوسر لگس

باگبالبوی ل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لیالاو لگسج هیلول و لآه نعلولاو لگو ناگسلوسر للل:گیر بحث و نتیجه

یر ل للل وگای لکعلگ وه لگسنههی لگسلتجهرزگتلخهصلولناگ یال،لسشه لیهمد لگتتلگس لکعلاو لگسج هیلول و لآه نع

لللل.لگس وهتگزتتل مهسب لباگ لگتتلاو ل،ل ث لگو ناگسوسر لووویلسدگای

،لبللتتلیگت،لگسج للهیلول و ،لگو ناگسللوسر ،لهوا للو لاشللدلگس للهس لسوتاکرللبل،لگواتگلله ل:هییا کلییید واژه

بتتلوسنا

4931لتهب نه ل،41 ش ها لللل،چهها سه للللل،ههلشمهس ل رواوگانهسر لست لپژوهش ل-فصامه علما لل415

مقدمه.

گ لبللعلممللوگ لتلل للن للنای بللعلطللوالل4 هکارشللتگشال

ل رنالل للهللهل لومبللعلگانهسر لل ل للد لبللاگ ل طه عللعللل

،ل هکارشللتگشاللمتو لبالگتلتل.لشویل نهبو ر لگسنههی ل

لبللاگ لتو رللدلپللاوتنرتلسوتاکرللبلبللهل مللهیتالبللهاللوللبرشللنا

گسلنههی لللهله للمال ل لک لسرزلکهابایلیگایلکعلگسللههلهزتمع

سللهو ل،ل لاشللدلهللهلگسآ لسللهو لکشلل لولوتژنلل ل

،لیسنوها ل سنرو لویالیسناسلبوی لگبلزگال اولو لآ لل

،ل هسملدلنارووستتسلرو لل)لتوگسهت لتغرراگتلپسلگسلتاو لعل

توللل لگسل(.ل5ولل4)لگسللل (لسلللو هرد ل لی لهلللهلپروسلللد

ت لکعلگ اوس ل وایلسرلهسلگسل لهوا لو لاشلدللللللههلپاوتنرت

گ للپپنرلدلتل لاشلنعللللگتتلهوا و لت لپا ل.گس ل5گس هس

کراویگ نللو لگسلل لکللعل55گسللردآ رمعلبللهلوس لل434شلله ل

هارو لل للچهللهالسللهخنهال،سللو هرد لیگاگ لیوپروسللدلی

گ للنایلولیولوهتگه لفعه لباگ لگتصه لبلعلنراسلد لللاگس

لسلو هتوتاو لدلد للللههلگتتلهوا و لتوسطلساو .لگس

هوا لو لاشلدلگس لهس لللل.لهرپوفرزلواوت لتاشل ل ل لشلویللل

بللالاو للگثللاسملل ل ه لل لیالاشللدلسللو هتر لگسلطاتلل ل

(.ل1لول9)لکابوهرللداگتلول رپللدلیگای،ل نهبو ر لل لپللاوتنرت

،ل هم لولکوتهه لیلدلللسمصلگتتلهوا و لبعلکمدلک بویلته

ولسهاسهت ل ز تلکارعلل1سمداو لپاگیاوتا ،ل9سمداو لتاسا

لبللاگ لیا لله لسللمداو لتوسلل ل،ه چمللرت.لشللویل لل مجللال

هوا لو للل مبل لگصلا لل(.ل9ل-2)لگسل لل لؤثالسرزلل2یس ل چل

هوا لو لاشلدلللل،گس لهس لل لهلهللگسلنههی للبلاگ للاشدلگس لهس ل

گسلگوگخلالسله للل.لگس لبهکنا لتو ردلشد لتوسطلسوتاکرب

لبلللاگ لتو رلللدللسوتاکرلللبلبرللله ل گسلللنههی لگسلل4394

رارلهای لللچمدلصمع لتبدت لبعلت لصمعن ل لههلپاوتنرت

،لپللسلگسلتو رللدلپللاوتنرتلهللد لگسلطافلل ل.لشللد لگسلل

ت ل،لیگخ لساو للشد لتو ردگسنراگ لپاوتنرتلسوتاکربل

و اللعلل ل رناهلل لگسلهللهلاو لکللعلگسلل اواللعل هلل لل

ههلباگ لگتتلگ اللآسزت ولل لبا لههلیسنگه ،ل گو ناگسوسر

ل هکارشللتگشالهلهلیالتراتلبللللگتلتلاو ل.لشلویللگسنههی ل

ههلسرهسلبعلتجهرلزگتلخلهصلللله نمدلگ هلباگ لگسجه لآ لثاؤ

تول لل.لسدگاسدگس لکعلنهه لگویهتلگتتلتجهرزگتلووویل

ل.گس گو ناگسوسر ل،لت لکعلب رهال ندگو لگس لههلگسلاو

یالگتتلاو لگ وگ لصوت لبهلفاکهسسلبهاللبهمثل رزلشد ل

تلل لپللاو لللگتللتلگ للوگ لبللعلوسللراعل.شللویلهللهل لل لسللاو

،لکعلیالیسنگه لگو ناگسوسر لتعبرعلشلد لگسل لل،لگاتعهش

یالبعلوتلژ لل،لب رها لگسل وگایلیا.لشویلههلوگایل لبعلس وسع

بعل،لههلستهیلگس لههلولس وسعلت لکعلتعدگیلآس هت لههل طه عع

سات لوگاسگ لیر لسرهسلگس لکعلتول لل،لت لاو لسهی

.لگسل لل9هلهلگسلنههی لگسلاو لگسج لهیلول و للللگسلگتتلاو

گسج للهیلول و لتلل لاو ل نللدگو لبللاگ ل رللزلکللای لللل

لپاوکلهاتوت لولتوکلهاتوت لگسل لکلعلبلعلیولللللللهلهللساو

یال.لشلویللگسج هیلو و لسات لولآه لنعلگسجله ل ل للللشو

ههلل لتدلو نوا لشد لساو لههلگتتلاو لتشور لکات نه

یاولللعلل99هلللهلیالی للله لللیگی لآ لیلللاگال،ولیالسههتللل

باگ لکهاآ لدلشلد للل.لشویلبهمثل رزساو ل ناگیللسهسن

،لب نعلبعلسلوعلس وسلعلل،لسرو لگسج هیلو و لگتتلاو لبهتد

سلوسر للکلعلگو ناگللگسلآسجه(.ل3لول8،ل4)لچمدبهالتواگاشوی

لولیالگتللتلاو لتلل لاو لخللو لول للوایلیبللو لگسلل

،ل(43)لشویلپاوتنرتلبهکنا لگسنراگ ل لیاصدل84تماتبهل

ااسل لکهاآ لدلبلوی لاو للللببلعل مولوالللپژوه لیالگتتل

گبنللدگلپللاوتنرتلهوا للو لاشللدلگس للهس للل،لگسج للهیلول و

ل،تو ردلولسپسل هکارشتگشال8سوتاکربلیالسوتعلگواتگه

و لل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لیالیولاو لگسج هیلو

ل.لشدولگو ناگسوسر ل مهت عل

ل419لللل.ل.ل.لوتو ردلهوا و لاشدلگس هس لسوتاکربلیالسوتعلگواتگه لگشاتشرهکا لول مهت عل رزگ لگسنراگ لآ لبهلیولاو لگو ناگسوسر ل

ها مواد و روش .لل

ل بیان هورمون رشد انسانی در سویه اوریگامی .

لیالگتللتل طه عللعلسللوتعل:لسییویه باکتریییایی و وکتییور

(Novagen USA) E. coli Origami (DE3)ولل pTrcHis/ZRG pTrcHis Topo, Invitrogenوکنلوال

USAپاو وتلوال،لوهو ل لهوا لو لاشلدلگس لهس للللtrc3ل،

بلعل مولوالبرله لللل،لIPGT44باگ لگ مهءلتوسلطل44لlacOتوگ

ل.لشدهوا و لاشدلسوتاکربلگس هس لتهرعل

هیییا و غربیییالگر سیییلو ترانسفورماسییییون .

E. coliگسلبللهکنا ل: rhGH حییاو ژن. اوریگییامی

Origamiرواو رنللالگسلل2تهرللعلولل49 ل للنعدلهللهلسللاو ل

پتس رد لکعلوهو ل لهوا و لاشلدلگس لهس لگسل لبلعللللل

ل نعدشد لبهکنا لگضهفعلولبلعلللههل رنالساو ل رواول544

ولبلهلوگایلکلای لشلورلسلا هت لوللللللشلدلآاگ ل رالو لل

للهلهللسلاو لل.واگات لم لتاگس هوا هسرو لگسجه لناف

تاگس هوا لشد لبعل مووالدابله گا لاو ل لرطلکشل لللل

ل(.ل44لول44)لسرارتلکش لیگی لشدلوهو لآ پ

لکاوس : بیان پروتئین نوترکیب هورمون رشد انسانی

یاولعللل99 لهت لیالللLB41گسنره لشد لیال لرطلکشل للل

لناگیلکش لیگی لشدلولپسلگسلگتتلکعل رزگ لو لسهسن

(ODل)للوالالبللال رنللالل رالل ل4اسللردلبللهل اللو لل4/ بللعل

گ مهلولبعل دتل(لIPTG)لنهالکنوستد-D-βگتزوپاوپر لترول

ل544نلاگیلبلهلشلر لللللیاوعلسلهسن لل52سهم لیالی ه لل2

پسلگسلگسووبهسرو لو لساو ل.لشدیوالبالییرمعلگسووبعل

ل(.ل44لول44)لآوا لشدلههلتوسطلسهسناتهرو لو لبهکنا

لیز سیلولی و مقایسیه اسیتخراج پیروتئین محلیو .

پلسلل: تولید با دو روش انجماد وذوب و اولتراسیونیک

بلعلل،لکش لولگ ملهلبرله لپلاوتنرتلسوتاکرلبل لوایلسولالللللللگس

مووالبااس ل رزگ لتو ردلپاوتنرتلیالبلهکنا لول مهت لعللل

رزگ لگسنراگ لآ لیالیولاو لگو ناگسوسر لولگسج هیلول

گسللنراگ لگتللتلپللاوتنرتلبللهلگتللتلیولاو لگسجلله لللل،ل و

ت لاو ل ندگو لباگ ل رزلساو لگو ناگسوسر ل.لناف

گسنههی لگسلگتتلاو لبلعلللههلپژوه گس لگ هلیالب رها لگسل

لکوشل للپلژوه لبعله لرتلخلهطالیالگتلتلللل،لصافعلسر

و لباگ لگسنراگ للتهلاو لیتگا ل هسمدلگسج هیلولشد

کعللگتتلما کالگس لبعللشهته .لشویپاوتنرتلوهتگزتتل

گ لگس لبلاگ لهلالسلعلللللت عت لآس هت ل مهلپژوه گتتل

ولگسلتوی لساو لوهص للشداو لت لآس هت لگسنره ل

بایگشلنعلوللل رنال رواول44بهکنا لبعل رزگ لباگبالولبعل مدگال

.لتراتبلشد

گسج هیلول و للشو گتتلاو لبعلیول: انجماد و ذوب

ل.لشدآه نعلولگسج هیلول و لسات لگسجه ل

PBS رواو رنلالگسلبلهفالللل444: انجماد و ذوب سیری

1X42آوا لشلد لوهصل لگسلبرله للللل لو ل للهلهللبعلبلهکنا لل

ثهسرعلیاو لظا لل4 بعل دتللگفزوی لولوته لوهو لس وسع

ل99ییرمللعلیالی لله لل42بللعل للدتلل،تللدلخشلل لولسللپس

کلعلبعلدللللباگ لبااس لگتت.لناگیلیاگالیگی لشدلیاوعلسهسن

یسل للعلبلل رلزگ لپلاوتنرتللل،لبهالتواگالگتتل اگول للگسلچمد

بهالتواگالشد لولبعدلگسلهالل آ د لبرشنالگس لگتتل اگو ل

ولل 4 اواللعل رللزگ لپللاوتنرتلبللعلاو لسللمج لباگیفللوایل

ل(.ل45لول4)لنرا لشدلگسدگس ل49گالتزگ

PBS رواو رنلالگسلبلهفالللل444ل:ذوب آهسته انجماد و

1Xآوا لشد لوهص لگسلبره لگفزوی لل لو لههلبعلبهکنا ل

یاوللعلل54ل مهلل لیاو لفاتللزاللولوتلله لوللهو لس وسللعلل

ل42بلعل لدتلللل،ییرمعلولسپسل94تهل54ناگیلبعل دتللسهسن

بلاگ لل.لناگیلیاگالیگی لشدلیاوعلسهسن ل99ییرمعلیالی ه ل

رلزگ لل،لکعلبعدلگسلچمدبهالتولاگالگتلتل اگول للللبااس لگتت

بلهاللل یسل لآ لد لبرشلنالگسل لگتلتل اگول لللللللعلپاوتنرتلب

تواگالشد لولبعدلگسلهلال اوالعل رلزگ لپلاوتنرتلبلعلاو لللللل

ل(.ل45لول4)لنرا لشدلسمج لباگیفوایلولگالتزگلگسدگس


رواو رنللالگسلپالل لبللهکنا لل44گبنللدگل: اولتراسییونیک

بلعلآ لگفلزوی لوللللPBS 1X رواو رنلالبلهفالللل444،لبایگشنع

گ لسلوسرور لللثهسرلعلل94یالسعلسوبل لللاو لتدلیاگالیگی لو

پاوتنرتلگسنراگ لشد لبلعلاو ل علا للللسپسل رزگ ل.شد

ل(.ل49لول8)لنرا لشدلباگیفوایلولگالتزگلگسدگس

ل444،لپسلگسلگو ناگسلوسر ل: با معرف برادفورد تحلیل

رنال علا لباگیفلوایلگضلهفعللللل را ل2 رنالگسلس وسعلبعلل رواو

ل نللالسللهسول232وولل لآ لیالطللو ل للو لباگیفللوایللشللد

رنلالآ ل مطلالسرلزلبلعلللللل رواول444ل،ه چمرت.لخوگسد لشد

رنال علا لباگیفلوایلگفلزوی لولللللطوالودگنهسعلبعلپمجل را

باگ لتهرعل م م لگسنهسدگایل.لشدباگ لصهالکای لگسنههی ل

شاک للBSAل ل رنا لآ بو رتلسا لنهو لههلگسلداو

باگ لگتتلکهالگبندگل او لدارظلتل لل.ل ارلگسنههی لشد

سلپسلگسلگتلتللل،لسلهخنعللBSA رنلالگسلللنا لیال رال لل رواو

سهخنعلل رنالنا لیال را ل رواول24تهل44 لههل او لداو

رنالل را ل2 لگسنهسدگایلبهللههل رواو رنالگسلداو ل444.لشد

گسل او لباگیفوایلتاکربلولکه تًل راو لشدلولول لل

لباگ لتهرعلس وسعلشههدل مه .لههلیالطو ل و لثب لشدلآ

(Blankل)رنالگسلل را ل2الآ ل مطالبهل رنل رواول444 مدگال

ل(.ل41)ل او لباگیفوایلتاکربلشد

یالگتلتلآس لهت لگسلتل لسلهسدوتچللللل: با االییزا تحلیل

گالتزگ لخهسگ لبلهلگسلنههی لگسلآسنل لبلهی لگو رلعلبلالمارلعلللللللل

ل7F8ل وسوکاوسله لبلهی لللهوا و لاشدلگس هس لشه لآسنل ل

،لبللهی لهدتللعلگسلطللا لپاوف للوالاتچللهایلاگسللللآسنلل )

ولآسنلل لبللهی لثهسوتللعلبروترمللعل(لشللهرادلگسگا للنه یگسشللگه ل

بهی لهدتعلگسلطلا لپاوف لوالاتچلهایلللللآسن )ل10A7شد

گسنههی لول رزگ لپلاوتنرتلل(لیگسشگه لشهرادلگسگا نه ،لاگس

بلهی لگو رلعلللل رنالگسلآسنل لل رواول44.لشدتو ردلشد لبااس ل

7F8ولیالهلالللشلد لکابمهتلگضهفعلل رنالبهفالب ل را ل44بعلل

بهی لاترنلعللل رنالگسل او لآسن ل رواول444چهه لپار ل

نللاگیللیاوللعلسللهسن ل1یالی لله للسللهم ل51ولبللعل للدتل

پللسلگسلش نشللولم لل للل،لیال اواللعلبعللدل.لگسووبللعلشللدل

یال.لگسجله لنافل لللسلهم لل51بلعل لدتلللل48سلهس لل دوی

،لبللهی لثهسوتللعلآسنلل ،لهللهل اگولل لبعللد لبللعلتاترللبلس وسللع

Streptavidin-HRPل،TMB Solution43شللللاک ل)ل

شلللاک ل)لStop Solutionول(لگتلللاگ ،لسلللرنو نرتل

هلهلیالللگفزوی لولو لسلوا لس وسلعلل(لگتاگ ،لسرنو نرتل

ل(.ل42)ل نالخوگسد لشدلسهسول124طو ل و ل

بلاگ لتیترلدللل: بیالت و وسیترن بالت با دات تحلیل

سههت لتو ردلپاوتنرتلسوتاکربلبره لشلد لوتعرلرتلوتژنل لللل

بلهی لللبلهلآسنل للل59بلتتللولوسنا ل55بتتلیگتلاو آ لگسل

،لبلتتللبلاگ لگسجله لیگتلل.لضدلهوا و لاشدلگسنههی لشلدل

ساو لوهص لکلعللللمصها ،لساو لپسلگسلتراتبلیتوگا

وهو لپاوتنرتلسوتاکربلگس لبعلکهد لسرناوساو زلگسنمه ل

ل رنالل لهوا للو لاشللدلگس للهس للللهللهلایلل .لیگی لشللد

ولمصها لسلاو للسوتاکربلتجها لبعلمموگ لکمنا ل ثب ل

بهکنا لکعلفهیدل لهوا و لاشدلگس لبعلمملوگ لکمنلا للل

کمنلا ل ثبل لوللل،ل رنالگسلس وسلعلل رواول5.ل مه لگسنههی لشد

ولپلسلگسلللکمنا ل مه لبعلکهد لسرناوساو زلگسنمه لیگی لشد

سهس لل دویلل اواع،لههلبالاو لکهد لخش لشد لس وسع

شرالخشل لللکهد لسرناوساو زلبهلیاگالیگی لآ لیال او

لپلسلگسلسلعلبلهالش نشلولللل.لتعل دتلیولسلهم لگسجله لشلدللل

کهدلل لسرناوسللاو زلبللعل للدتلیولسللهم لیال جللهواتلللل

هلزگاگسللبلعللل4بهی لضلدهوا و لاشلدلگس لهس لایل للللللآسن

بعللدلپللسلگسلللیال اواللع.لشللدلیللاگالیگی ل10A7بللهی لآسنلل

سوب ناگ ل،ل55بهی لثهسوتعلش نشولکهد لسرناوساو زلبهلآسن

.لشلدلبلعلکهدل لسرناوسلاو زلگضلهفعللللللTMB (HRP)لآسلزت ل

بلتتلسرلزلپلسلگسلگسجله لگ وناوفلواسلللللللباگ لگسجه لوسلنا ل

للهلهللبهسلدل،لیاصلدلل44لSDS-PAGEههلبالاو ل للس وسع

بعلکهد للآ د لگسلاسو لبهکنا لیس لپاوتنرم لوهص لبع

اگو لبعد له هسمدل اگو لشلا لل.لشدلسرناوساو زل منم


ولل44)لگسجله لنافلل لبلتتلللیگی لشلد لیالبلهاللبلاگ لیگتللل

ل(.ل44

نتایجل.

گواتگه لساو ل نعدلتهرعلللگسسوتع: ترانسفورماسیون

کدکممللد لبللاگ لللpTrcHisTopoبللهلپتس رللدللل،ولسللپس

rhGHگتتلسوتعلبلهلکلهاگت للل شههد لشدلکعللولتاگس هوا ل

تصلوتا لگسلاشلدلللل4شلو للل.بهالت لتاگس هوا لشد لگس

بروترل لللولهو لآسنل للگتتلسلوتعلبلالاو ل لرطلکشل للللل

سللرارتلولتناگسللهتوارتلبللاگ لگواتگلله لاگلسشلله للللآ پلل

ل.لیهدل

نتایج اسیتخراج پیروتئین بیه روش انجمیاد و ذوب .

رواو رنالگسلل444پسلگسلهالبهالتواگال :سری با برادفورد

گتلتلل.ل رنلال علا لباگیفلوایلسلمجرد لشلدلللللل را ل2س وسعلبهل

و ل.لسمجدلشد لاگل ل لگسنراگ لههلاو لک لپاوتنرت

هللهلیالطللو ل للو لباگیفللوایلثبلل لولطبلل لس للویگاللس وسللع

.لشلدلنلا لتبلدت للللبلعلداول ل رولاوللل(ل5لشو )لگسنهسدگای

یهمد لگتتلگس لکعلتلهلتولاگاللللسشه لبعلیس لآ د س ویگال

بهلگفزگت لتواگال رزگ لپلاوتنرتلبرشلنا لگسلنراگ لللل،لپمج

شد لگ لهلپلسلگسلآ ل رلزگ لپلاوتنرتلگسلنراگو لکلهه للللللل

ل.ل(9شو )لتهبدل

ل لگواتگه لهه لتاگس هوا لشد لسوتعلکاوس تصوتا لگسلل-4لشو

ل

لل نالسهسول232س ویگالگسنهسدگایلآ بو رتلسا لنهو لیالطو ل و لل-5شو

y = 0.0102x

R² = 0.9811

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1

1.1

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

لل و لطویال لوا لسو

232

لل ناهسوس

مدگالپاوتنرتلبالو بل رواونا

4931لتهب نه ل،41 ش ها لللل،چهها سه للللل،ههلشمهس ل رواوگانهسر لست لپژوهش ل-فصامه علما لل 41

لللسات لبهلاو لباگیفوایلگسنراگ لشد لبعدلگسلتعدگیلیفعهتل نههوتلگسج هیلول و لس ویگال رزگ لپاوتنرتل-9شو ل

ل.لتهبدلگفزگت لتهفنعلولگسلچاخعلپمج لبعلبعدل رزگ لپاوتنرتلگسنراگو لکهه ل ،ل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لتهلتواگالپمج لبهلگفزگت لتواگا

ل

لل لگالتزگلههلس ویگالگسنهسدگایلداو ل-1شو ل

ل

نتایج استخراج پیروتئین بیه روش انجمیاد و ذوب .

بلهی لگخنصهصل للللیالگتلتلاو لگسلآسنل للل:سری با االییزا

هوا للو لاشللدلگس للهس لبللاگ لبااسلل ل رللزگ لگسللنراگ للل

هوا و لاشدلگس هس لپسلگسلهالبهالچاخعلگسج هیلول و ل

ههلبعلشو للگسلس وسعگالتزگلباگ لهاکدگ ل.لسات لگسنههی لشد

ههلیالطو ل لو لللتواگالیوتهت لگسجه لناف لولو لآ

شلو لل) نالخوگسد لولبالگسهسلس ویگالگسلنهسدگایلللسهسول124

نا لتبدت لشدلکعلسنهتجلبعلیسل لآ لد للللبعلداو لسهسو(ل1

سشه لیگی لگس لکلعل رلزگ لگسلنراگ لپلاوتنرتلتلهلتولاگاللللللل

دل رللزگ لپللمج لگفللزگت لتهفنللعلگ للهلگسلچاخللعلپللمج لبللعلبعلل

ل(.ل2شو ل)تهبدللپاوتنرتلگسنراگو لکهه ل

ل

0

2

4

6

8

10

12

14

16

یواشش یواپمج یواچهها یواسو یوایو یواگو

ا لونوال ربو بالد للشگ راسنتلگوتنرلپا اود

رنا ل راهالیال

تعدگیلیفعهتلگسج هیلول و لس وسع

R² = 0.9877

y = 6.6154x - 2.7505

0

5

10

15

20

25

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4

رنا ل رایالا لونلسهسبو بالتلوتنرلپا اود

سهسو نال124و لسوا لیالطو ل و ل


لللس ویگال رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لبعدلگسلتعدگیل نههوتلگسج هیلول و لسات لبهلاو لگالتزگل-2شو ل

ل.لتهبدلکهه ل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لتهلتواگالپمج لگفزگت لتهفنعلگ هلگسلچاخعلپمج لبعلبعدل

للس ویگال رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لبعدلگسلتعدگیلیفعهتل نههوتلگسج هیلول و لآه نعلبهلاو لباگیفوایل- شو ل

.لتهبدلسنهتجلگتتلس ویگالسشه لیهمد لگتتلگس لکعل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لتهلچاخعلسو لاولبعلگفزگت لولپسلگسلآ لکهه ل ل


یالگتتلاو لسرزله هسمدلاو لگسج هیلل:آهسته با برادفورد

ههلبهل عا لباگیفوایلسمج لشلد لولللس وسع،لول و لسات

هلهلللبلاگ لیگی ل،لنلا للههلبعلداو ل رواولپسلگسلتبدب لیگی

سشله لیگی لگسل لکلعل رلزگ لللللس ویگالاس لشلدلکلعلسنلهتجلللل

پاوتنرتلتهلتواگالسو لاوسدلگفزگتش لیگشلنعلولپلسلگسلآ للل

ل(.ل شو ل)لتهبدلکهه ل


یالگتللتلاو لپللسلگسلگسجلله لگالتللزگلبللهل: آهسییته بییا االیییزا

لشلو لبهی لگخنصهص لضدلهوا و لاشدلگس هس لبلعلللآسن

س وسعلبعدلگسلهالتواگالولتبدت لول للل لیوتهت لباگ لها

گتتلسنهتجلبعلیس لآ د ل،لنا لههلبعلداو لسهسولسوا لس وسع

آه نعل رزگ للبهلسعلبهالتواگالچاخعلگسج هیلول و ل.گس

شلو لل)لهوا و لاشدلگس هس لبرشنا لگسنراگ لشد لگس

سنهتجلگتتلس ویگالسشله لیهملد لگتلتلگسل لکلعل رلزگ للللللل(.ل9

هلچاخعلسو لاولبعلگفزگت لولپسلپاوتنرتلگسنراگ لشد لت

ل.لتهبدلگسلآ لکهه ل

0

2

4

6

8

10

12

گو یوا یواشش یواپمج یواچهها یواسو یوایو

بالد للشگ راسن لگ هسدلگساش ل ووا له

اود

رنا ل رایالا لونلسهسبو

تعدگیلیفعهتلگسج هیلول و لسات

0

5

10

15

20

25

30

1 2 3 4 5 6

ا ونوال ربو بالتلوتنرلپا اود

ل رنا ل رایال

تعدگیلیفعهتلگسج هیلول و لآه نع


للس ویگال رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لبعدلگسلتعدگیلیفعهتل نههوتلگسج هیلول و لآه نعلبهلگالتزگل-9شو ل

ل

اولتراسیونیک بیا نتایج استخراج پروتئین بیه روش .

سنلهتجلوهصل لگسلگسجله لسلعلسوبل لسلوسرور للللللل: برادفورد

کللای لتللوی لسللاو لبللهکنا لولبااسلل ل رللزگ لپللاوتنرتلل

گسنراگ لشد لبلهلباگیفلوایلسشله لیهملد لگتلتلگسل لکلعلللللللل

ل 28/5وللل لسلللوا لآ لیالطلللو ل لللو لباگیفلللوایللل

ل(.ل8شو ل)لگس نا لل رواو

ل

لس ویگالبااس ل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لگسلاو لل-8شو ل

و لباگیفوایللو لسوا لس وسعلیالطو .لگو ناگسوسر لبهلباگیفوای

.لگس ل رنالیال را ل رواونا ل 28/5

نتایج استخراج پیروتئین بیه روش اولتراسیونیک بیا .

یالگتللتل اواللعلگسلکللهالسرللزلپللسلگسلسللعلسوبلل لللل: االیییزا

رزگ لهوا و لاشدلگس لهس للسوسرور لکای لتوی لساو ل

ول للل.گسنراگ لشد لگسلبهکنا لبلهلگالتلزگلسلمجرد لشلدلللل

ل(.ل3شو ل)لبویلسهسونا ل93/54سهسو نالل124سوا لآ لیال

ل

ل

لس ویگالبااس ل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لگسلاو لل-3شو ل

ل124و لسوا لیالطو ل و ل.لگالتزگللبهلاو لگو ناگسوسر

ل.لبویلنا لسهسول93/54سهسو نال

0

5

10

15

20

25

گو یوا یواشش یواپمج یواچهها یواسو یوایو

یالا لونلسهسبو بال ل هسدلگساش ل ووا له

اود

رنا ل را

تعدگیلیفعهتلگسج هیلول و لآه نع

26.1

26.2

26.3

26.4

26.5

26.6

26.7

26.8

باگیفوای

رنا ل رایالا لونوال ربو بالتلوتنرلپا اود

21.15

21.2

21.25

21.3

21.35

21.4

21.45

21.5

21.55

گالتزگ

یالا لونلسهسبو بال ل هسدلگساش ل ووا له

اود

رنا ل را


لگسج هیلول و لآه نعلولگسج هیلول و لسات ،لگو ناگسوسر ل مهت عل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لبهلسعلاو ل-4ودو ل

داو لپاوتنرتلسمج لشد لبهلباگیفوای داو لهوا و لاشدلسمج لشد لبهلگالتزگ

گو ناگسوسر رنالیال را ل رواونا ل 28/5ل رنالیال را لسهسونا ل93/54

گسج هیلول و لآه نع رنال رواونا لیال را ل81/59ل رنالسهسونا لیال را ل99/54

لگسج هیلول و لسات رنال رواونا لیال را ل1/41ل رنالیال را لسهسونا ل8/29

ل

مقایسه میزان پروتئین اسیتخراج شیده بیا دو روش .

پلسلگسلگسجله لگسلنراگ لللل: اولتراسونیک و انجماد و ذوب

پاوتنرتلبعلیولاو لگو ناگسوسر لولگسج هیلول و لبعلیول

یالگتلتللل رزگ لپلاوتنرتلگسلنراگو لل،لآه نعلولسات لشو

سشه لیگی لل4کعلگتتلسنهتجلیالودو للشدیولاو ل مهت عل

ل.لشد

یالسنلللهتجلسشللله لیگیلل:بیییالت وسیییترنبیییالت و دات

ههلبلعلکهدل لسرناوسلاو زلولللللپسلگسلگسنمه لس وسعل،بتتلیگت

پاوتنرتلبلعلخلوب لتو رلدلللل،لگضهفعلکای لسوب ناگ لآسزت

پللسلگسلگسجلله لگ وناوفللواسل ل(.ل44شللو ل)لشللد لگسلل

گسجله لسلهتاللللیوبعد لولگسنمه ل لبعلکهدل لسرناوسلاو زلولل

کراویگ نلو للل55یالسهورلعللت للههلبهسد،ل اگو لوسنا لبتت

ظههالشدسدلکعلسشه لیهمد لتو ردلپاوتنرتلهوا لو لاشلدللل

ل(.ل44شو ل)لگس هس لبهلوس لص ر لگس ل

لایت لگو لگسلس لچپلبعل.لبتتلسنهتجلوهص لگسلیگتل-44لشو

ولل4/44،ل4/444،ل4/4444 للههلاگس لبعلتاتربلکمنا ل ثب لبهلای

للوهص لگسلبره للههلایت لیو لس وسع،لکمنا ل مه

لگسلس لاگس لایت لگو ل.لبتتلسنهتجلوهص لگسلوسنا ل-44لشو

للههلایت لسو لتهلههن لس وسع،لایت لیو ل هاکا،لکمنا ل ثب

للوهص لگسلبره ل

گیر بحث و نتیجه .

سشه لیگی لشدلکعلپلاوتنرتلسوتاکرلبللللپژوه یالگتتل

گسج هیلللتوگ لبهلاو لسهی لاگل ل هکارشتگشالبره لشد لیال

کعلطر لوسرع للگسلآسجه.ل و لبعلخوب لگسنراگ لکایلو

ل هکارشللتگشالشللد لیالل لسوتاکرللبلتو رللدلهللهلگسلپللاوتنرتاو ل،لشلوسدللیگخ لساو له نمدلولبعلخها لتاش لس ل ل

گسج لللهیلول و لتللل لولللهتگزتتلسلللهی لولگاسگ لبلللاگ ل

ل لپالهزتمعلودگسهس لپلاوتنرتلگسلبلهکنا لگسل للللههلاو

گسلنراگ لپلاوتنرتلسوتاکرلبلتو رلدلشلد لگسللللللباگ ل(.ل45)

بللهکنا لچمللدتتلاو لووللویلیگایلکللعلسللوعلول رللزگ لللل

پاوتنرتلگسنراگ لشد لب لنگ لبلعلآسلربلوگایلشلد لبلعلللللل

هللهلیتللوگا لکه لل لللاو لاخلل یالب.لسللاو لیگایلللیتللوگا

شللویلولپللاوتنرتلسرنوپتسلل لولپللاوتنرتلللتراتللبل لل

ههلدشلهللل یالتعدگی لگسلاول.شوسدلپتس لخها ل لپا


شلویلولفملطلپلاوتنرتلللللخهاو لگسلدشلهلیگخال لولدگل ل لللل

یالاو لگسج لهیلول و لل.لشو لپتس لگسنراگ ل لپا

،لبعلخها لشد لهالیولپلاوتنرتللشویلولیتوگا لتراتبل

لول42،ل45)لشلویلل ل ل مجلاللپتسل لللسرنوپتس لولپلا ل

طوالکعلنهنعلشلدلبلاگ لگسلنراگ لپلاوتنرتلگسلللللله ه (.ل 4

ههلسرلهسلللآ لبرشنا لستهی لووویلیگایلگ هللههلبهکنا لاو

گتلتلیالوله لگسل لکلعلبلاگ للللللل؛بعلتجهرزگتلخهصلیگای

لوتللژ آس هتشللگهه لبللعللهلله لپللژوه لگسلباخللگسجلله ل

ههلستهیللسهس لکعلیالآ لتعدگیلآس هت ل لبهرمعلههلآس هت

تول لگسلل.لگ وه لگسنههی لگسلگتتلتجهرزگتلاگلسدگات ،لگس

شویلاو لگو ناگسلوسر لللگسنههی ل لبرشنات لکعللههلاو

سرلهسللیر ل للللگتتلکعلبعلتجهرزگتلنلاگ لللبالللگس لکعلمتو

گ للوگ لصللوت لیالگتللتلاو لسرللزل وللتلگسلل لبللعل،لیگای

شویلکلعلگتلتللل مجالفعه لشد لپاوتنرتللشد لولدرالیسهتوا

لول49،ل45)ل شو لیالاو لگسج هیلول و لوولویلسلدگایلل

تلگسلنراگ لشلد لیاللل رلزگ لپلاوتنرلللپلژوه لیالگتتل(.ل48

او لگسج للهیلول و لبللهلاو لگو ناگسللوسر لیالسللط لل

یالگتتلآس هت لهوا و لاشلدلل.لآس هتشگهه ل مهت علشد

کلعلبلهللل،لگس هس لسوتاکربلتو ردلشد لیالسلوتعلگواتگله لل

بهلسلعلل،لبتتلتو ردلآ لتهتردلشدلبتتلولیگتلگسجه لوسنا

گسج للهیلول و لسللات لولگسج للهیلول،لاو لگو ناگسللوسر

شلد لبلهللللل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ ول و لآه نعلگسنراگ ل

لعبللسنلهتجلل.لنرا لشدلاو لگالتزگلول عا لباگیفوایلگسدگس

سشه لیگی لگس لکعلیالاو لگسج لهیلول و لللیس لآ د

بللهالسللرو لولیالاو لگسج للهیلولل2گسلگسجلله للپللسسللات ل

رلزگ لبرشلنا لللبلهالگسجله لسلرو للللل9گسللپلسل و لآه نعل

بهل مهت علسنهبجلبدس لآ د ل.لپاوتنرتلگسنراگ لشد لگس

شرصلشد لگس لکعل رزگ لپاوتنرتللگسلگالتزگلولباگیفوای

لک لهبر لگسنراگ لشد لیالاو لگسج هیلول و لآه لنعلل

گسلطافل لل.لیولباگبالاو لگسج هیلول و لسات لبوی لگس

رللزگ لپللاوتنرتلگسللنراگ لشللد لگسلاو لگسج للهیلول و ل

ه نعلتماتبهل شهبعل رزگ لپاوتنرتلگسنراگ لشد لگسلاو لآ

ل59گتتلیالوه لگس لکعل لهاتجل.لگو ناگسوسر لبوی لگس

وله وهاگ لبهلگسلنههی لگسلاو لگسج لهیلول و لتوگس لنمدلللل

سوتاکرلبلیالللشلو لاگلکعلبلعللل51اترموئردللپاوتنرتلنراسد

بهلداط لیولباگبلالس لب للل،لتو ردلکای لبویسدلگشاتشرهکا ل

،لپللاوتنرتلگسللنراگ لشللد لبللهلاو لگو ناگسللوسر للللبللعل

تلوگ لیالللیهلدلکلعل ل للللگتتلسنهتجلسشه ل .لگسنراگ لکممد

رنا لگ وه لگسلنههی لگسلاو لللهه لما وگای لکعلبعل

گو ناگسللوسر لوتللهلیتگللالتجهرللزگتلالس لبللاگ لتراتللبل

گسلاو لگسج لهیللتلوگ للل ل ل،لساو لبهکناتهت لووویلسدگای

گسلنههی لل،لولگاسگ لگسل لو و لآه نعلکلعلاوشل لسلهی لللل

تل لهل لیگایلگسلو العلللللههلگ بنعلگتتلاو ل دویت .لکای

تهلل8ت لبهلوس لبرتللههلگتتلکعلبرشنالباگ لگسنراگ لپاوتنرت

ل(.ل48)لکراویگ نو لویگاگ لبره لبهاللیهب لگسنههی لگس ل53

لReferences

(1) Benov L., Al-Ibraheem J. Disrupting

Escherichia coli: A comparison of methods.

Journal of Biochemistry and Molecular

Biology 2002; 35 (4): 428- 31.

(2) Waegeman H., De Lausnay S., Beauprez

J., Maertens J., De Mey M., Soetaert W.

Increasing recombinant protein production

in Escherichia coli K12 through metabolic

engineering. BioTechnology 2013; 30 (2):

255- 61.

(3) Ghasemi F., Zomorodipour A., Shojai S.,

Ataei F., Khodabandeh M., Sanati MH.

Using L-arabinose for production of human

growth hormone in Escherichia coli,

studying the processing of gIII: hGH

precursor. Irania journa of Biotechnology

2004; 2 (4): 250- 60.


(4) Sonoda H., Sugimura A. Improved

solubilization of recombinant human growth

hormune inclusion body produced in

Escherichia coli. Bioscience, biotechnology,

and biochemistry 2008; 72 (10): 2675- 80.

(5) Vance ML., Mauras N. Growth hormone

therapy in adults and children. New England

Journal of Medicine 1999; 341 (16): 1206-

16.

(6) Shin N., Kim DY., Shin CS., Hong MS.,

Lee J., Shin HC. High-level production of

human growth hormone in Escherichia coli

by a simple recombinant process. Journal of

biotechnology 1998; 62 (2):143- 51.

(7) Sanchez‐ Ortiga R., Klibanski A., Tritos

NA. Effects of recombinant human growth

hormone therapy in adults with Prader‐Willi

syndrome: A Meta‐Analysis. Clinical

endocrinology 2012; 77 (1): 86- 93.

(8) Mehigh R. Lysis of E. coli for the

purification of soluble recombinant proteins

using CelLytic-B and CelLyticB II.

Molecular Biology 2000- 2001; 16- 17.

(9) Feliu JX., Cubarsi R., Villaverde A.

Optimized release of recombinant proteins

by ultrasonication of E. coli cells.

Biotechnology and bioengineering 1998; 58

(5): 536- 40.

(10) Rezaei M. Production of recombinant

human growth hormone from eukaryotic and

prokaryotic cell. Isfahan: Isfahan univ.;

2011.

(11) Shiva SH. Production of recombinant

human growth hormone in some probiotic

bacteria. Isfahan: Isfahan univ.; 2013.

(12) Johnson BH., Hecht MH. Recombinant

proteins can be isolated from E. coli cells by

repeated cycles of freezing and thawing.

Biotechnology 1994; 12 (13): 1357- 60.

(13) Shrestha P., Holland T.M., Bundy BC.

Streamlined extract preparation for

Escherichia coli-based cell-free protein

synthesis by sonication or bead vortex

mixing. Bio Techniques 2012; 53:163- 74.

(14) Bradford MM. A rapid and sensitive

method for the quantitation of microgram

quantities of protein utilizing the principle

of protein-dye binding. Analytical

Biochemistry 1976; 72; 248- 54.

(15) Wilkinson1 IR., Ferrandis E., Artymiuk

PJ., Teillot M., Soulard Ch., Touvay C., et

al. A ligand-receptor fusion of growth

hormone forms adimer and is a potent long-

acting agonist. Nature medicine 2007; 13

(9): 1108- 13. (16) Quan S, Hiniker A., Collet JF., Collet A.,

Bardwell J.C.. Isolation of bacteria envelope

proteins In: Delcour A.H. editor. Bacterial

Cell Surfaces. New York: Springer Science+

Business Media, Humana Press; 2013. p

359- 66.

(17) Okungbowa FI., Ghosh AK., Chowdhury

R., Chaudhuri P., Basu A, Pal K.

Mechanical lysisCandida cells for crude

protein and enzymatic activity estimation:

Comparison of three methods. World

Journal of Medical Sciences 2007; 2 (2):

101- 4.

(18) Mojsin M., Nikevi G., Grujicic NK.,

Savic T., Petrovik I., Stevanovic M.

Purification and functional analysis of the

recombinant protein isolated from E. coli by

employing three different methods of

bacterial lysis. Journal of the Serbian

Chemical Society 2005; 70 (7): 943- 50.

(19) Nouri Gharajelar S., Ahmadi M.,

Hosseini B. Cloning and expression of the

immunogenic moiety of Pseudomonas

aeruginosa exotoxin A. Bilogical Journal of

Microorganism 2013; 1 (4) :7- 14.

1. Eshershia coli 2. Human growth hormone 3. Turner syndrome 4. Prader willi syndrome 5. Carpal tunnel syndrome 6. Ultrasonic 7. Freeze/thaw 8. Origami (DE3) 9. Trc promoters 10. Laco sequence 11. Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside 12. Transformation

http://link.springer.com/search?facet-creator=%22Anne+H.+Delcour%22


13. Competent cells 14. Luria broth 15. Phosphate buffered saline 16. Bradford assay 17 . ELISA 18. Blocking 19. 3,3,5,5-Tetramethylbenzidine 20. Dot Blotting 21. Western Blotting 22- Sheep anti-mouse IgG HRP conjugate, Amersham,

1/1000 dilution 23. Marija Mojsin 24. Retinoid X receptors (RXRs)

Biological Journal of Microorganism, 4th Year, No. 14, Summer 2015 13

Production of recombinant human growth hormone in Eschericia coli strain

Origami and comparing freeze/ thaw and sonication methods for proteins

extraction

Marzieh Savari

M.Sc. of Microbiology, University of Isfahan, Iran, [email protected]

Sayyed Hamid Zarkesh-Esfahani *

Associate Professor of Immunology, University of Isfahan, Iran, [email protected]

Abstract

Introduction: Human growth hormone (hGH) is a single-chain polypeptide derived from

pituitary gland that participates in a wide range of biological functions and has therapeutic

applications. The hormone consists of 191 amino acid residues (22kD) which folds into a four-

helix bundle structure with two disulfide bridges. Due to the complication of internal cell

protein extraction, several methods have been established for this purpose that most of them

need special instruments. Thus, in the preliminary studies, scientists need a quick and simple

method for cell disruption and protein extraction. The aim of the present study was production

of hGH in E.coli and comparison between the freeze/thaw and Sonication method for protein

extraction from cells.

Materials and methods: The competent cells of E. coli Origami (DE3) were transformed using

plasmid containing human growth hormone gene and then cultured in LB medium. After IPTG

induction, the hGH was extracted using various methods including bacterial lysing, freeze/thaw

and sonication methods and then extracted protein was assessed using ELISA, Bradford, dot

blot and Western blotting.

Results: According to our findings, bacterial transformation showed high efficiency of

transformation. Furthermore, the results of dot blot and Western blot showed production of

recombinant hGH at high levels. Protein extraction measurement using ELISA and Bradford

methods indicated that the proportion of the extracted protein in the slow freeze/thaw method

was higher than the fast freeze/thaw method and was almost equal to sonication method.

Discussion and conclusion: The extracted protein levels in both of the slow freeze/ thaw and

ultrasonic methods was equal, which introduces the slow freeze/thaw method as an excellent

substitution for ultrasonic method when special instruments are not available.

Key words: Origami (DE3), Recombinant human growth hormone, Ultrasonic, Freeze/ thaw,

dot blot, Western blot

* Corresponding author Received: February 2, 2014 / Accepted: June 25, 2014

جارختسا نازیم هسیاقم و یلکایشیرشا یماگیروا...

Documents