алеся обзор pадифарм рус

Радиохимия, 2011, т. 53, N 4, c. 289–300

1 Радиохимия, т. 53, вып. 4, 2011 г.

Открытие в опухолевых клетках рецепторов, спо-собных взаимодействовать с природными пептидами, а также развитие химии и технологии синтетических пептидов обусловили появление новых РФП – мече-ных пептидов (РФП второго поколения). На сего-дняшний день самое большое внимание в этой облас-ти уделяется получению аналогов соматостатина, бомбезина и аннексина V.

В последние десятилетия магистральным путем развития ядерной медицины является использование в качестве носителя радионуклидов биологически активных молекул (биомолекул), таких как антитела, пептиды, энзимы, лиганды рецепторов и др. Это по-зволяет планировать, какой орган/ткань/процесс бу-дут исследоваться или подвергаться радиационному воздействию в терапевтических целях. Данный под-ход в полной мере относится и к основному нуклиду радиофармацевтики – 99mTc, обладающему оптималь-ными характеристиками для применения в ядерной медицине (Т1/2 = 6.02 ч, Еγ = 140 кэВ) [1]. Более 80% всех диагностических РФП, используемых в клини-ках по всему миру, содержат 99mTc. В силу особенно-стей химических свойств 99mTc введение данного ра-дионуклида в биомолекулу, с одной стороны, наибо-лее химически сложно, а с другой – допускает боль-шее разнообразие вариантов. Основным способом введения радиометаллов в биомолекулы является использование специальных молекул, содержащих в себе функциональные группы двух типов: способных образовывать прочные соединения с металлом и свя-зываться с молекулой-носителем. Настоящий обзор посвящен такого рода соединениям, используемым для введения 99mТс в биомолекулы, а также наиболее часто исследуемым биомолекулам.

Химия радиофармпрепаратов (РФП) на основе 99mTc начинается с водного раствора Na99mTcO4, в форме которого 99mTc элюируется из генератора [2]. Ион пертехнетата 99mTcO4

– заряжен отрицательно, и эффективных методов присоединения его к пептидам и подобным молекулам не существует. Таким обра-зом, необходимо восстановить семивалентный 99mTc до более низкой степени окисления, чтобы создать стабильный комплекс 99mТс с пептидом.

Как правило, для получения РФП на основе ком-плексов 99mTc используют два методических подхода. Первый – это одностадийная реакция, в которой по-лученный из генератора элюат 99mTcO4

– добавляют во флакон с соответствующим лигандом (-ами) и восста-навливающим агентом. После этого сосуд выдержи-вают при комнатной или повышенной температуре необходимое время. Другой подход состоит в перво-начальном восстанавлениии пертехнетат-аниона в присутствии слабого лиганда, который только стаби-лизирует Тс в необходимой степени окисления, а за-тем этот промежуточный комплекс вводят во взаимо-действие с «сильными» лигандами. В результате обра-зуется термодинамически стабильный комплекс Тс в заданной степени окисления. Такой процесс называ-ют «трансхелатированием», или «обменным мечени-ем» [2]. Этот вариант получения РФП менее удобен для использования в клинических условиях, но иногда является единственно возможным, например в случае мечения с помощью трикарбонилтехнеция [3].

После восстановления степень окисления 99mТс в полученном комплексе равна от +1 до +6 и зависит от

289

Новые радиофармпрепараты на основе 99mTc с применением бифункциональных хелатирующих агентов

© А. Я. Марук*, А. Б. Брускин, Г. Е. Кодина

Федеральный медицинский биофизический центр им. А. И. Бурназяна Федерального медико-биологического агентства России, Москва, ул. Маршала Новикова, 23; e-mail: [email protected]

Получено 21.06.2010 УДК 546.718:616-073.916

В настоящее время основным радионуклидом для приготовления радиофармпрепаратов (РФП) во всем мире является 99mTc, обладающий оптимальными ядерно-физическими характеристиками и высо-кой доступностью. Для введения этого радионуклида в биомолекулы (пептиды, антитела и др.) исполь-зуется несколько подходов, один из которых связан с применением так называемых бифункциональных хелатирующих агентов (БХА). Эти соединения способны как связывать 99mТс, так и присоединяться к биомолекулам. Среди БХА на сегодняшний день наиболее часто используются ДТПА, MAG3 и HYNIC. В обзоре содержится описание и сравнение этих соединений в качестве БХА, а также краткое описание и сравнение наиболее часто применяемых пептидов, с которыми эти агенты используются. Обсуждают-ся также литературные данные по выбору солиганда при использовании HYNIC.

Ключевые слова: технеций-99m, радиофармпрепараты, бифункциональные хелатирующие лиганды.

1. Особенности радиофармацевтической химии технеция

А. Я. Марук и др. 290

природы восстанавливающего агента, природы ли-ганда(ов) и условий реакции [2, 4]. Такое разнообра-зие возможных степеней окисления вместе с рядом различных структурных модификаций (координа-ционное число изменяется от 4 до 7 [2]) обусловлива-ет богатство координационной химии технеция. Это часто не позволяет достаточно хорошо контролиро-вать степень окисления и стабильность комплексов, но, с другой стороны, такое разнообразие открывает большие возможности для модификации комплексов Тс, их структуры и свойств (таких как суммарный заряд комплекса, липофильность и т.п.) [5]. Эти воз-можности можно реализовать путем выбора системы лигандов или через использование донорных атомов, имеющих высокое сродство к определенным степе-ням окисления Тс, а также с помощью специально подобранных функциональных групп. Для приготов-ления РФП обычно используют соединения 99mTc со степенью окисления +1, +3, +4, +5 [4], применяя при этом в качестве восстанавливающего агента SnCl2.

Наиболее типичные случаи конфигурации цен-тральных групп и координационной сферы, характер-ные для комплексов восстановленного технеция, изо-бражены на рис. 1 [4, 6, 7].

Структура I (рис. 1) – «голый» атом Тс, напрямую связанный с гексадентатным БХА. Степень окисле-ния Тс – +3 или +4, а донорными атомами могут быть атомы азота иминов или сочетание атомов азота аминов и атомов кислорода фенолятов. Комплексы Тс такого типа стабильны благодаря хелатному или макроциклическому эффекту (образованию одного или более циклов с участием атома металла и части молекулы лиганда. В данном случае количество таких циклов максимально). Кроме того, при исполь-зовании полидентатных хелатирующих агентов коли-чество изомеров, которые могут различаться по липо-фильности и биораспределению, минимально [2]. Для предотвращения изомерии в качестве БХА для обра-зования таких соединений рекомендуется использо-вать ДТПА и производные бороновых кислот с об-щей формулой R–B(OH)2 [2, 4]. Координационный полиэдр может быть октаэдром [2 + 4] или тригональ-ной призмой [3 + 3]. Примерами соединений типа I являются XII и XIII (рис. 2).

Рис. 1. Варианты координации восстановленного Tc при при-соединении к пептидам.

Структура II (рис. 1) – наиболее часто используе-мая форма 99mTc в РФП на основе оксотехнеция [Тс=О]3+. При этом Tc(V) с атомом O и четырьмя ко-ординирующими атомами органического лиганда (как правило, N, S или O) образует комплекс с квад-ратно-пирамидальной структурой. Соединения типа II образуют очень устойчивые комплексы с сильны-ми хелатирующими агентами в водных растворах, часто с тетрадентатными лигандами, где четыре пози-ции X2Y2 могут занимать как одинаковые, так и раз-ные гетероатомы в различных соотношениях (не обя-

зательно 2 : 2): N4 – полипропиленаминоксим, N3S – триамидотиолы, N2S2 – диамидодитиолы, моноами-домоноаминодитиолы, диаминодитиолы.

При этом структура каркаса [TcOX2Y2]– допускает образование цис- и транс-изомеров из-за различной ориентации функциональных групп относительно связи Тс=О. Именно к группе комплексов с [Тс=О]3+ относятся соединения MAG3 (см. ниже) и аналогич-ные ему соединения. Другими примерами соедине-ний типа II являются XIV–XXII (рис. 2).

Синтезированы, но не выделяются в отдельный класс аналогичные типу II соединения с участием атома серы на месте кислорода. В качестве частного примера можно рассмотреть комплексы, содержащие ион [TcS5]–, где сера занимает все координационные позиции вокруг атома технеция (XXIII на рис. 2) [7].

В некоторых условиях соединения типа II склон-ны к образованию комплексов, содержащих фраг-мент [O=Tc–O–Tc=O]4+ с мостиковым атомом О [7].

Пятивалентный Tc в виде диоксoтехнеция [О=Тс=О]+ – тип III (рис. 1, 2) – образует октаэдриче-ские комплексы с полидентатными лигандами, связы-ваясь с донорными атомами азота аминов и атомами серы тиоэфиров, а также с атомом фосфора фосфино-вых групп. Атомы лигандов, как правило, занимают экваториальные позиции октаэдров, а вершины за-нимают атомы О группы [О=Тс=О]+. Отмечается, что в таких комплексах длина связи Tc=O (1.75 Å) значительно больше, чем обычно (1.65–1.70 Å), в том числе в ионе оксотехнеция [7]. Примерами со-

+ –

1*

291

Рис. 2. Синтезированные и изученные примеры комплексов с технецием [24].

единений типа III являются XXIV и XXV (рис. 2). Комплексы типа III способны к ступенчатому вос-

становлению, например с этиленбис(диметилфос-фином) (dmpe), по следующей схеме:

где в соединении VIII степень окисления технеция +5, в X – +3 и в XI – +1.

Значительно реже используется нитридотехнеций, включающий в себя соединения технеция в двух сте-пенях окисления: [Tc≡N]2+ (тип IV, рис. 1), содержа-

щий Тс(V), и [Tc≡N]3+ (тип V, рис. 1), содержащий Тс(VI). Такие комплексы обладают высокой основно-стью (по Льюису) и так же, как и соединения оксо-технеция, хорошо взаимодействуют, например, с бо-роновыми кислотами. [Tc≡N]3+ с хорошим выходом образует шестикоординированные катионные ком-плексы с дифосфиновыми кислотами. Аналогичные комплексы с [Tc≡N]2+ нейтральны и по структуре схожи с комплексами оксотехнеция [Тс=О]3+. Приме-рами соединений типа IV и V являются XXVI и XXVII (рис. 2) соответственно.

Соединения трикарбонилтехнеция [Tc(CO)3]+ (тип VI, рис. 1), где Тс находится в степени окисле-ния +1, являются основой многих комплексов, полу-чаемых в водных растворах. Самыми известными и устойчивыми среди них являются [TcCl3(CO)3]2– и [Tc(H2O)3(CO)3]+. Возможны также различные комби-нации органических и неогранических лигандов, та-кие как [TcCl(CNBut)2(CO)3] и [Tc(CNBut)3(CO)3]+, а также образование полиядерных комплексов с помощью водородных и гидроксильных мостиков:

Новые радиофармпрепараты на основе 99mTc

+ –

+ –


[Tc3(μ-H)3(CO)12], [Tc2(μ-OH)3(CO)6]–, [Tc3(μ-OH)3· (μ3-OH)(CO)9]–, [Tc4(μ3-OH)4(CO)12]. Получение три-карбонильных комплексов относительно несложно при использовании боранокарбонатов [7].

Соединения [Tc-HYNIC] (тип VII, рис. 1) рассмат-ривают отдельно [4] от других типов комплексных соединений технеция. Так как лиганд HYNIC (производное 2-гидразиноникотиновой кислоты, HY-drazino NICotinic acid) может образовывать только одну или две координационных связи, для таких со-единений требуется использование солиганда(ов). Реальная координация Тс в соединениях с HYNIC однозначно не ясна, так как возможны несколько ти-пов координаций. Наиболее вероятной степенью окисления Тс, определенной с помощью масс-спектрометрии, называют +5 [8].

2. Основные пептиды Открытие в опухолевых клетках рецепторов, спо-

собных взаимодействовать с природными пептидами, а также развитие химии и технологии синтетических пептидов обусловили появление новых РФП – мече-ных пептидов. В случае технециевых препаратов эти соединения иногда называют «РФП второго поколе-ния» [7]. При этом под «РФП первого поколения» подразумеваются комплексные соединения 99mТс с такими простыми лигандами, как метоксиизобутили-зонитрил, димеркаптоянтарная кислота, производные иминодиуксусной кислоты и т.п., биологическое по-ведение которых было непредсказуемо на стадии по-лучения препарата. Использование в качестве носите-ля радионуклида биомолекулы с известными биоло-гическими свойствами позволяет осуществлять более или менее целенаправленное конструирование новых РФП. На сегодняшний день самое большое внимание в этой области уделяется получению аналогов сома-тостатина, бомбезина и аннексина V.

Бомбезин – амид тетрадекапептида Руг–Gln–Arg–Leu–Gly–Asn–Gln–Trp–Ala–Val–Gly–His–Leu–Met–NH2 – впервые был выделен из кожи лягушки Bombina bombina. Он обладает биологической актив-ностью как в центральной нервной системе, так и в желудочно-кишечном тракте, известен как эффектив-ный терморегулятор. Была выявлена роль бомбезина в стимуляции роста раковых клеток кишечника [9].

Аннексин V – антикоагулянтный белок плазмы с высокой степенью связывания с фосфолипидами. В ядерной медицине используется для визуализации тромбов и процесса апоптоза.

Соматостатин – эндогенный пептидный гормон, содержащий 14 аминокислот (рис. 3), с коротким биологическим периодом полураспада (около 2 мин), поэтому сам по себе он не может быть хорошим диаг-ностическим агентом. Соматостатин обнаружен как в центральной нервной системе (ЦНС) (гипоталамус,

кора головного мозга, мозговой ствол), так и перифе-рийных тканях (желудочно-кишечный тракт, подже-лудочная железа). Соматостатин имеет большое сродство к специфическим рецепторам, в большом количестве присутствующим в опухолевых тканях [10]. Именно соединениям аналогов соматостатина с 99mTc в первую очередь посвящен настоящий обзор.

Начиная с 80-х гг. велись работы по поиску анало-гов соматостатина, более устойчивых в организме. Наиболее успешным результатом этих поисков стал октреотид [D-Phe–Cys–Tyr-D–Trp–Lys–Thr–Cys– Thr(ol), ОС]. Именно он был использован для создания первого коммерчески реализованного препарата на основе 111In-Октреоскана (111In-ДТПА–октреотид). 111In-Октреоскан нашел применение в клинической практике, но имеет некоторые недостатки, в основном связанные с ядерно-физическими характеристиками 111In. Успешное использование 111In-Октреоскана сти-мулировало поиск аналогичного препарата с 99mTc.

Эпидермальный фактор роста (EGF, Epidermal Growth Factor) состоит из 53 аминокислот, молекуляр-ная масса около 6 кДа. Впервые изолирован из слюн-ных желез мыши, принадлежит к группе факторов роста (цитокины). Относится к наиболее стабильным из всех изученных белков. Присутствует в клетках всех тканей организма, регулирует рост клеток. Число рецепторов EGF варьирует от одного клеточного типа к другому. Наибольшее число рецепторов выявлено в эмбриональной ткани и пролиферирующих клетках эпителия. Рецепторы EGF являются одной из самых популярных мишеней в ядерной онкологии.

Меланоцитстимулирующие гормоны (МСГ, мела-нотропины, melanocyte-stimulating hormones, MSH) – пептидные гормоны средней доли гипофиза. Сущест-вуют три основные разновидности МСГ: α, β и γ, ко-торые образуются путем расщепления общего белка-предшественника – проопиомеланокортина. МСГ стимулируют синтез пигментов меланинов в коже и сетчатке глаза, являются перспективным вектором в радионуклидной диагностике и лечении меланом.

Рис. 3. Формула соматостатина.

3. Бифункциональные хелатирующие агенты Для конъюгации в последнее время часто исполь-

зуются бифункциональные хелатирующие агенты (БХА), т.е. вещества, способные и хелатировать ме-таллы, и присоединяться к биологически активным

293

Рис. 4. Мечение биомолекул с помощью БХА. а – «pre-label-ing», б – «post-labeling».

a

б

Биомолекула



Биомолекула Биомолекула

Диангидрид диэтилентриаминпентауксусной ки-слоты – пожалуй, первый БХА [12]. ДАДТПА взаи-модействует с концевой и/или аминогруппой пептида с образованием амидных связей [13]

3.1. ДТПА и ее аналоги

При этом ангидридные кольца раскрываются с об-разованием поливалентных групп, способных хелати-ровать металлы, в том числе и 99mTc. Связь металла с органическим лигандом в таких комплексах имеет до-норно-акцепторную природу (с помощью неподелен-ных пар кислорода и азота ДТПА) и довольно прочна. Молекула ДТПА имеет 8 потенциальных координаци-онных центров для связывания металла (3 атома N и 5 – O). Кроме того, ДАДТПА способен модифициро-вать аминосодержащие полимеры, такие как поли-L-лизин. Получающиеся хелатирующие полимеры обла-дают большим количеством центров, чем в случае при-соединения ДТПА к пептиду [14]. Следует отметить, что комплексы металл–(ДТПА–пептид) обычно менее стойкие, чем металл–ДТПА. Для преодоления этого недостатка предложено использовать 2-метил-, 2-бен-зил- и 2,3-циклогексил- (CHX) производные [15].

Были разработаны и исследованы (в том числе для Тс) еще несколько БХА, аналогичных ДТПА (рис. 5) [13].

Рис. 5. Аналоги ДТПА: XXVIII – DOTA, XXIX – NOTA, XXX – NOTP, XXXI – TETA, XXXII – DTTA, XXXIII – DFA (дефероксамин).

«post-labeling» (рис. 4, б) сначала осуществляется син-тез конъюгата биомолекулы с БХА, а затем – присоеди-нение этого конъюгата к восстановленному 99mTc (в одну или две стадии, как описано выше). Этот метод более удобен и распространен в медицинской практике.

соединениям, не вызывая при этом изменения белка или пептида [11]. В таких конъюгатах БХА выполняют ту же роль, что и группировки, обозначенные символа-ми X и Y на рис. 1. Отличие БХА от других органиче-ских молекул, способных связывать металлы, состоит в том, что в БХА также присутствуют и группировки, позволяющие присоединить радиоактивную метку практически к любому пептиду, что открывает боль-шие возможности для создания новых РФП.

Существуют два подхода к мечению биомолекул с помощью БХА [4] (рис. 4): так называемые «pre-labeling» (preformed chelate approach) и «post-labeling» (indirect labeling). «Pre-labeling» (рис. 4, а) включает в себя связывание 99mTc с БХА с последую-щим присоединением этого комплекса к биомолеку-ле (отдельная стадия процесса) [11]. Этот метод счи-тается более химически определенным, а также био-молекула не подвергается воздействию условий, не-обходимых на стадии хелатирования. Однако этот метод слишком неудобен для рутинного применения в медицинской практике. При использовании метода

NH NH



Для синтеза меченых соединений проводится ак-тивация 6-гидразиноникотиновой кислоты и присое-динение защитной группы. Как правило, для этого используются N-гидроксисукцинимид и ди-трет-бутилдикарбонат соответственно. Методика этих процессов подробно описана в работы [19].

Мечение конъюгатов с 99mTc-HYNIC. В публи-кациях МАГАТЭ [21] предлагается использовать три солиганда для мечения пептидов 99mTc: трицин (XXXVI), трицин/никотиновую кислоту (НК) и ЭДДА (XXXVII) (рис. 7). Считается, что при этом в случае трицина и ЭДДА атом Тс, как правило, коор-динирует одну молекулу солиганда [8, 22]. Некото-рые авторы также предполагают использование глю-когептоната в качестве солиганда [6, 11], но значи-тельного развития эти методы еще не получили.

Структура конъюгатов с 99mTc-HYNIC. Струк-тура конъюгатов 99mTc-HYNIC однозначно не опреде-лена. Существуют предположения о том, что структу-ра связывания Тс с HYNIC соответствует схеме б на рис. 8, а не схеме а (рис. 8), как было показано выше (рис. 1).

В работе [8] был проведен масс-спектромет-рический анализ соотношения Тс, HYNIC и солиган-дов (трицин, трицин/НК, ЭДДА) в их соединениях и сравнение этих соотношений с аналогичными при использовании HYBA (п-гидразинобензойной кисло-ты). HYBA отличается от HYNIC отсутствием атома N в цикле. Было обнаружено, что при использовании

3.2. Меркаптоацетилтриглицил (MAG3)

Tc-MAG3 (Tc-МАГ3) является представителем РФП первого поколения. Исходным соединением для его получения является S-бензилмеркаптоацетил-триглицин, который теряет бензильную группу в про-цессе высокотемпературного синтеза. Этот препарат был специально разработан для изучения выводящей функции почек вместо о-иодгиппурана. Предполагае-мая структура 99mTc-MAG3 и его аналогов показана на рис. 6 [17]. Впоследствии было предложено использо-вать S-ацетилмеркаптоаце-тилтриглицин для введе-ния в пептиды в качестве комплексообразующей (хелатирующей) группы [18].

4. Гидразиноникотиновая кислота (HYNIC)

4.1. Краткая характеристика и синтезы

Аналоги ДТПА в основном используются для хе-латирования трехзарядных ионов металлов, таких как In, Y, Ga, лантаниды. В качестве примера их успеш-ного использования можно привести БХА LiLo – 1,3-бис{N-[N-(2-аминоэтил)-2-аминоэтил]-2-аминоаце-тамидо}-2-(4-изотиоцианатобензил)пропан-N1,N1, N2,N3,N6,N7,N8,N8-октауксусную кислоту [16].

Рис. 6. Комплексы Tc с димеркаптидами: XXXIV – [Tc]DADS, XXXV – Tc-CO2DADS, XXXVI – Tc-MAG3.

6-Гидразиноникотиновая кислота (HYNIC) связы-вается с атомом металла (99mTc) по гидразидной груп-пе, а через карбоксилат происходит связывание со свободной аминогруппой биомолекулы. HYNIC был впервые использован в 1990 г. для мечения поликло-нального IgG с помощью 99mTc для визуализации оча-гов инфекционного воспаления и показал вполне удовлетворительные результаты [19]. С помощью гель-проникающией ВЭЖХ было показано [20], что 99mTc, связанный с помощью HYNIC, выводится из организма (мышей) в неизмененной форме.

Синтез HYNIC. 6-Гидразиноникотиновую кисло-ту в лабораторных условиях можно получить воздей-ствием на 6-галогензамещенную никотиновую кисло-ту 85%-ным раствором гидразин-гидрата с последую-щим нагреванием на водяной бане при 100°С в тече-ние 4 ч [19]

Рис. 7. Структурные формулы соединений, наиболее распро-страненных в качестве солигандов при синтезе коньюгатов технеция с помощью HYNIC: XXXVII – трицин {N-[2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил]глицин}, XXXVIII – ЭДДА (этилендиаминдиуксусная кислота), XXXIX – TPPTS (натрия трифенилфосфин-3,3',3"-трисульфонат), XL – ISONIC (изоникотиновая кислота), XLI – PDA (2,5-пиридин-дикарбоновая кислота).

Рис. 8. Варианты связывания технеция с молекулой HYNIC.

а б

295

HYBA в процессе комплексообразования участвует большее количество молекул солигандов, что указы-вает на то, что азот гетероцикла способен координи-ровать Tc. В пользу этого предположения говорят также результаты структурного исследования соеди-нений аналога HYNIC – гидразинопиридина – с ме-таллом [23]. В этих соединениях металл имеет коор-динацию 6, где атом металла различными способами связан с молекулами трифенилфосфиновых лиган-дов, хлорид-ионами и одной или двумя молекулами гидразинопиридина через один или два атома азота, как уже описано выше (рис. 9).

Кроме того, ВЭЖХ-анализ, проведенный в рамках работы [8], показал, что в случае использования HYBA количество различных конъюгатов больше, чем для HYNIC. И хотя структура этих различных соединений остается неизвестной, разница в их коли-честве сама по себе позволила авторам сделать вывод о том, что присутствие атома N в гетероцикле делает связывание более жестким и стабильным.

В той же работе [8] обсуждается количество моле-кул солигандов, участвующих в образовании ком-плекса с [Tc–HYNIC], на основании данных масс-спектроскопии. Сообщается, что это количество мо-жет быть различным. Например, в случае использо-

вания трицина в качестве солиганда, по данным рабо-ты [8], при любых условиях синтеза может координи-роваться только одна молекула трицина. В то же вре-мя при использовании сочетания трицин/НК в ком-плексе также присутствует одна молекула трицина, а молекул НК в зависимости от условий реакции мо-жет быть как одна, так и две. Таким образом, коорди-нация молекул солигандов и то, по каким именно ато-мам образуются связи с Тс, также остаются не до конца ясными. Некоторые возможные варианты ко-ординации, предложенные авторами работы [8], представлены на рис. 10. На основании работы [24] делается предположение и о том, что в некоторых случаях боковые группы аминокислот также способ-ны образовывать связь с атомом Тс. Такую роль мо-гут играть, например, глутамат или гистидин [8, 25]. Это предположение было подтверждено в работе [25] с помощью ВЭЖХ-МС. Авторы изучили ряд пепти-дов, как содержащих, так и не содержащих гистидин. Конъюгаты HYNIC c пептидами, имеющими в своем составе гистидин, находящийся на расстоянии не бо-лее двух аминокислот от N-конца, к которому при-соединяется HYNIC, связываются с атомом Тс так, что в комплекс входит только одна молекула трицина в качестве солиганда. А в случае если пептид не со-держит гистидин или если гистидин находится на расстоянии от HYNIC большем, чем две аминокисло-ты, то атом Тс координирует две молекулы трицина. Кроме того, исследование стабильности конъюгатов с различными пептидами показало, что связывание атома металла с гистидиновыми группами повышает устойчивость комплекса и способствует образованию меньшего количества изомеров. Отмечается, что схо-жим образом ведут себя глутаминовые группы в со-ставе пептидов, но в этом случае в отличие от гисти-дина увеличения стабильности не отмечается.

Авторы работы [26], изучая схожие закономерно-сти, на основании данных ТСХ и ВЭЖХ делают предположение о том, что эффективность мечения 99mTc зависит от того, к какой аминокислоте непо-средственно присодиняется HYNIC: например, амино-кислоты, содержащие ароматическое кольцо, увели-чивают электронодонорную способность аминогруп-пы молекулы HYNIC по отношению к металлу, что должно благоприятно сказываться на связывании.

Рис. 9. Варианты связывания шестикоординированного атома металла с молекулами гидразинопиридина при участии трифе-нилфосфиновых лигандов и хлорид-ионов [18].

Рис. 10. Возможные варианты координации Tc при коньюгации с HYNIC с использованием трицина и никотиновой кислоты в качестве солигандов, предложенные авторами работы [17].

4.2. Соединения 99mTc-HYNIC с различными пептидами и солигандами. Их химические

и фармацевтические свойства

При создании новых РФП необходимо найти ба-ланс многих факторов, среди которых условия прове-дения и выход реакции мечения, стабильность мече-ного соединения при хранении и в организме, сродст-во к целевым органам и тканям, пути и скорость вы-ведения препарата из организма.



Методики мечения биомолекул с помощью 99mTc-HYNIC и разных солигандов во многом похожи меж-ду собой [19]. При этом радиохимический выход при использовании всех считающихся на сегодняшний день наиболее перспективными солигандов (трицин, ЭДДА, трицин/НК) в большинстве случаев достигает не менее 90% [20, 21, 27–35]. Стабильность получае-мых комплексов также находится на удовлетвори-тельном уровне: они сохраняются в физиологических условиях (в свежей сыворотке крови человека) не менее 4 ч и, как показывают многие исследования, за 24 ч разлагаются лишь на несколько процентов [21, 27, 28, 33]. Исследования стабильности комплексов 99mTc-HYNIC с модельными пептидами в цистеине показали, что в этих условиях комплексы HYNIC бо-лее стабильны, чем аналогичные соединения с ДТПА и MAG3 [36]. Наиболее сложной задачей является правильно подобрать пептид и солиганд так, чтобы биораспределение соответствовало требованиям, предъявляемым к РФП.

В работах [10, 37–39] было проведено мечение аннексина V с помощью HYNIC, но последние дан-ные [3, 40] показали, что такой комплекс уступает аналогичному комплексу на основе трикарбонила 99mTc в химической стабильности, кроме того, конъю-гат 99mTc-HYNIC–аннексин V образуется в виде не-скольких трудноразделимых изомеров, что является его существенным недостатком.

В связи с успешным клиническим применением 111In-Октреоскана значительный интерес представля-ет исследование конъюгатов с октреотидом (XLII, рис. 11). Было проведено сравнение биораспределе-ния 99mTc-HYNIC–октреотида (солиганды – трицин и ЭДДА) с препаратом Октреоскан [41]. Эксперимен-тальные данные [41] показали, что коньюгаты 99mTc-HYNIC–октреотида гидрофильны, т.е. выводятся че-рез почки и слабо задерживаются другими органами. При этом концентрация в почках изменяется во вре-мени, как показано ниже. Концентрация накопленной радиоактивности в почках мы-шей (% от введенной дозы) в зависимости от времени при внутривенном введении конъюгатов 99mTc и Октреоскана

Препарат 4 ч 24 ч 99mTc-октреотид–HYNIC–трицин 11.5 4.7 99mTc-октреотид–HYNIC–ЭДДА 9.1 2.3 Октреоскан, 111In 22.8 4.3

Первоначальное накопление препарата 99mTc-ок-треотид–HYNIC–трицин (через 4 ч) в почках по срав-нению с препаратом 111In оказалось в два раза ниже. Но через 24 ч оно оказалось даже несколько выше, чем в случае с Октреосканом. При использовании 99mTc-октреотид–HYNIC–ЭДДА накопление радиоак-тивности в почках через 4 и 24 ч оказалось в два раза меньше по сравнению с Октреосканом. При этом во

Рис. 11. Октреотид (XLII) и его аналоги: TOC (XLIII) и Ва-преотид (XLIV).

всех остальных исследованных тканях и органах ко-личество радиоактивности значительно ниже, и толь-ко в опухолевых тканях эти величины оказались сравнимыми по величине (см. ниже).

Концентрация накопленной радиоактивности в опухоле-вых тканях мышей (% от введенной дозы) в зависимости от времени при внутривенном введении коньюгатов технеция и Октреоскана

Препарат 4 ч 24 ч 99mTc-октреотид–HYNIC–трицин 2.5 1.7 99mTc-октреотид–HYNIC–ЭДДА 2.2 0.9 Октреоскан, 111In 3.0 0.9

Были разработаны несколько аналогов октреоти-да, такие как Вапреотид и ТОС (рис. 11). Исследова-ния [28, 30, 34] показали, что при одновременном введении препаратов с блокирующими дозами неме-ченых пептидов уровень радиоактивности в рецеп-тор-специфичных к соматостатину тканях уменьша-ется по сравнению с неблокированными образцами. Такие результаты подтверждают, что накопление ме-ченых препаратов действительно происходит по ожи-даемому механизму – через связывание пептидов с определенными рецепторами. При этом авторы рабо-ты [34] отмечают, что в разных тканях блокирование происходит с разной эффективностью. Например, в опухолевых тканях и поджелудочной железе крыс эффективность связывания уменьшилась на 91% (так, для опухолевых тканей эффективность мечения упа-ла с 1.3 до 0.1% введенной активности, а для подже-лудочной железы – с 3.7 до 0.3%), тогда как для же-лудка и надпочечников это изменение не так велико.

TOC – ближайший аналог октреотида, в котором по сравнению с октреотидом только одна группа Phe5 заменена на Tyr5 (XLIII, рис. 11), – демонстрирует наиболее многообещающие результаты. В исследова-нии [29] было показано, что скорость выведения из организма и туморотропность конъюгатов 99mTc-HYNIC–TOC значительно выше, чем конъюгатов с октреотидом. Так, неспецифическое накопление сни-жается приблизительно от 4 до 7 раз в зависимости от используемых солигандов и условий. Так же как и соединения октреотида, исследованные соединения ТОС демонстрируют высокую гидрофильность и со-ответственно выведение через почки [21, 27–31]. При

297

этом результаты работы [29] показывают, что ско-рость выведения 99mTc-HYNIС–ТОС с трицином в качестве солиганда за 24 ч примерно на 20% выше, чем с ЭДДА. С другой стороны, исследователи [30] сообщают о наибольшей остаточной активности как раз в случае использования трицина в качестве соли-ганда. В описанном случае остаточная активность в основном сосредоточена в крови, мышцах и печени. Авторы работы [30] объясняют это тем, что трицин способствует высокому связыванию меченого био-коньюгата с плазмой крови.

Вапреотид (Vapreotide, RC-160) – октапептид, близкий по составу к ТОС, но с заменой одной груп-пы Thr на Val и, что важнее, заменой концевой груп-пы Thr–OH на Trp–NH2 (XLIV, рис. 11). Возможно, именно поэтому коньюгаты Вапреотида проявляют более липофильные свойства [29]. Многие исследова-тели при рассмотрении соединений 99mTc-HYNIС–Вапреотид отмечают наибольшую концентрацию радиоактивности через несколько часов (от 1 до 24 ч) в печени, причем она значительна уже через 2 ч после введения [20, 28]. В то же время есть данные, свиде-тельствующие о преобладании почечного выведения над выведением через печень, хотя концентрация ра-диоактивности в печени даже по этим данным значи-тельна [29, 30]. Также имеются сообщения о меньшей туморотропности препаратов с Вапреотидом по срав-нению с ТОС [29, 30].

Сравнительные данные по биораспределению не-которых конъюгатов 99mTc-HYNIС представлены в таблице.

Клинические исследования 99mTc-трицин–HYNIС–TOC [42] показали, что такой препарат обладает ту-моротропностью не меньшей, чем 111In–Октреоскан, и максимальное связывание 99mTc-трицин–HYNIС–TOC с опухолевыми тканями происходит даже быст-рее. Но выведение препарата из организма происхо-дит очень медленно, вызывая излишнюю дозовую нагрузку на пациента. Тем не менее в последних ис-следованиях различных коньюгатов 99mTc-HYNIC с биомолекулами, такими как моноклональные антите-ла [33], аннексин V и иммуноглобулины [40], а также пептиды [43], многие исследователи предпочитают использовать в качестве солиганда именно трицин, объясняя это не только хорошей туморотропностью, но и коммерческой доступностью и наименьшей ток-сичностью [40].

В работе [44] показано, что ЭДДА, будучи исполь-зованной в качестве солиганда, дает наибольшее со-отношение [накопление в опухолях]/[накопление в крови] по сравнению с этим соотношением у трицина и трицина/НК при использовании как ТОС, так и Ва-преотида. При этом отмечается, что ТОС значительно превосходит Вапреотид по всем показателям биорас-пределения. Предпочтение ЭДДА перед другими со-лигандами отдают и авторы работ по исследованию комплексов 99mTc-HYNIC с пептидами, содержащими RGD-последовательность (L-аргинин, глицин, L-ас-парагиновая кислота) [22, 35], а также некоторыми другими пептидами [26, 44]. В работе [22] было пока-зано, что конъюгаты с ЭДДА демонстрируют значи-тельно более низкое неспецифическое накопление в почках при величинах накопления в опухолях, анало-гичных таковым для конъюгатов с трицином. Были проведены клинические исследования препарата 99mTc-HYNIC–ЭДДА–TATE (TATE – октреотат – еще один аналог TOC, где одна группа треонинола заме-

Сравнение биораспределения некоторых коньюгатов 99mTc-HYNIС через 4 ч после внутривенного введения, в про-центах от введенной активности на грамм ткани Орган/ ткань

99mTc-HYNIС–Вап-реотид–трицин

99mTc-HYNIС–Вапреотид–ЭДДА

99mTc-HYNIС–TOC–трицин

99mTc-HYNIС–TOC–ЭДДА

99mTc-HYNIС–ок-треотид–трицин

99mTc-HYNIС–октреотид–ЭДДА

Опухоль 3.5 ± 0.5а [30] 2 ± 1а [30] ~1а [27]

10 ± 1а [30] ~3.5а [40]

10 ± 2а [30] ~3а [40] ~2.5а [40] 2 ± 1а [40]

Почки ~6б [20]

8 ± 1б [28] 13 ± 2а [29]

11 ± 5а [30]

~1в [21] ~9а [27]

~14б [27] 15 ± 3а [30] 11 ± 1а [40] ~2.5г [41]

5 ± 1а [30] 9 ± 1а [40]

13 ± 2б [28] 11.5 ± 1а [40] 9 ± 1а [40]

Печень ~26б [20]

10 ± 2б [28] 16 ± 5а [30]

8 ± 1а [30]

~0.2в [21] ~2а [22] ~2б [27] ~2а [30] ~1а [40]

~13.5г [41]

~1а [30] ~1а [40]

~3б [28] ~2.5а [40] ~1а [40]

а Мыши с перевитыми опухолями, б здоровые мыши, в здоровые крысы, г клинические испытания.

При сравнении данных по биораспределению 99mTc-HYNIС–Вапреотида с различными солиганда-ми был сделан вывод о наилучшем выведении и ту-моротропности коньюгатов с трицином [30].



нена на треонин) [44], показавшие следующие ре-зультаты. Соотношения [специфическое накопление]/[неспецифическое накопление] в разных случаях со-ставили от 2.7 до 4.5 для планарной сцинтиграфии и от 7.6 до 12.3 для однофотонной эмиссионной томогра-фии (ОФЭКТ). Кроме того, наблюдалось быстрое вы-ведение радиоактивности через почки. В работе [45] описаны клинические испытания 99mTc-HYNIC/ЭДДА–TOC, показавшие возможность использования этого препарата для диагностических целей.

В работе [34] изучен конъюгат 99mTc-HYNIC с мо-дифицированным октреотидом, причем в качестве солиганда использовали и трицин, и ЭДДА (соотношение в реакционной смеси трицин : ЭДДА = 3 : 1). Авторы работы [34] обозначили полученный комплекс [99mTc/EDDA/tricine/HYNIC]–NATE (NATE = Nal3,Thr8-октреотид), но не привели никаких теоре-тических или аналитических данных о том, каково соотношение молекул солигандов и как должно про-исходить связывание в таком комплексе. Тем не ме-нее по результатам работы [34] сообщается, что такой комплекс (или смесь комплексов) является многообе-щающим визуализирующим агентом.

Отдельно скажем о результатах исследования коньюгатов с трицином/НК. Эти солиганды, исполь-зованные вместе, показали худшие характеристики биораспределения, чем комплексы ЭДДА и трицина, в случае использования со всеми пептидами, несмот-ря на то что туморотропность всех трех видов конъю-гатов, как правило, сравнима. Соединения с трици-ном/НК в качестве солигандов значительно быстрее разлагаются, чем аналогичные соединения с трици-ном и ЭДДА [27], а также показывают большее не-специфическое накопление [30]. Тем не менее, такие коньюгаты с одновременным использованием двух солигандов продолжают считаться перспективными [8], и в последнее время ведется поиск конъюгатов с сочетаниями солигандов, аналогичными сочетанию трицин/НК. Для это вместо НК исследуют аналоги пиридина или фосфины, такие как трифенилфосфин-3,3',3"-сульфонат натрия (TPPTS), изоникотиновая кислота (ISONIC) и пиридин-2,5-дикарбоновая ки-слота (PDA) [46]. Но оптимального сочетания соли-гандов такого рода, лучших, чем трицин/НК, для ме-чения биомолекул все еще не найдено: например, в присутствии TPPTS при нагревании происходит раз-рушение дисульфидных мостиков пептидов [6].

5. Сравнение бифункциональных хелатирующих агентов

Многими исследователями [36, 47] было отмече-но, что для конъюгатов 99mTc с небольшими пептида-ми с помощью БХА их радиохимические характери-стики и биораспределение изменяются в зависимости от метода мечения (т.е. используемого БХА и даже

условий мечения [35]) в большей степени, чем от вы-бранного пептида. Возможно, это правило соблюда-ется только для небольших модельных пептидов за счет сопоставимости их размера с размером молекул БХА [44], но литературных данных о сравнительных исследованиях различных БХА с несколькими боль-шими пептидами нами не обнаружено. В любом слу-чае это означает, что выбор БХА должен являться первой стадией планирования создания каждого но-вого конъюгата 99mTc с пептидами. Было проведено несколько исследований, сравнивающих наиболее многообещающие БХА (ДТПА, MAG3, HYNIC).

Авторы работы [36] изучили конъюгаты 99mTc-ДТПА, -MAG3, -HYNIC (в качестве солиганда ис-пользовали трицин) с двумя схожими небольшими пептидами. По данным работы [36], выход мечения (44–88%), а также стабильность в плазме крови чело-века (не менее 85% до 24 ч при 37°С) для всех конъю-гатов оказались удовлетворительными и примерно одинаковыми. В рамках того же исследования было обнаружено, что в условиях, близких к физиологиче-ским, конъюгаты с ДТПА и MAG3 обладают пример-но одинаковой стабильностью, тогда как стабиль-ность конъюгата HYNIC значительно выше. Кроме того, в работе [36] было исследовано биораспределе-ние коньюгатов 99mTc с тремя БХА на здоровых мы-шах, в котором наиболее многообещающие результа-ты показали соединения с HYNIC в качестве БХА.

В работе [47] было изучено биораспределение конъюгатов аналогичного использованным в работе [36] модельного пептида (62 аминокислоты) с 99mTc с помощью четырех БХА. В качестве БХА были ис-пользованы ДТПА, MAG3, MAS3 (меркаптоаце-тилтрисерин), HYNIC. По данным работы [47], выве-дение из плазмы крови со всеми четырьмя БХА при-мерно одинаково. При измерении радиоактивности в отдельных органах обезьян и мышей наименьшее накопление в печени и наибольшее накопление в поч-ках показали MAS3 и HYNIC.

При мечении более крупных биомолекул – ДНК [48] – было обнаружено, что эффективность присое-динения 99mTc с помощью ДТПА, MAG3 и HYNIC составляет соответственно <10, 40 ± 5 и 60 ± 7.5%. Следует отметить, что многие исследователи согла-шаются с тем, что в группе ДТПА, MAG3 и HYNIC наибольшую эффективность мечения показывает по-следний [29–31]. Накопление в клеточной опухоле-вой культуре со временем изменяется для этих БХА следующим образом: ДТПА > HYNIC > MAG3. В такой же последовательности убывает и выведение из клеточной опухолевой культуры со временем, т.е. удерживание в опухолевых клетках имеет обратную накоплению зависимость: MAG3 > HYNIC > ДТПА. Исследование биораспределения [48] показало ре-зультаты, сходные с результатами [47].

Список литературы

299

По данным исследований [29, 30, 35, 36, 38] по мечению пептидов 99mTc, коньюгаты с MAG3 в значи-тельном количестве [35] или практически полностью [36, 38] выводятся через печень в отличие от конью-гатов с HYNIC.

Кроме того, HYNIC показывает значительно более высокое накопление в опухолевых тканях (были про-ведены эксперименты на мышах с перевитыми опу-холевыми тканями), чем MAG3: 2.4–9.6 и 0.2% от вве-денной активности соответственно [36].

6. Заключение Рассмотрены литературные данные по синтезу и

анализу искусственных аналогов соматостатина, ме-ченных 99mTc с помощью HYNIC, а также ДТПА и MAG3 в качестве БХА. Обнаруженные во всех рас-смотренных исследованиях различия в поведении коньюгатов в связи с использованием каждого БХА однозначно говорят о том, что выбор БХА должен являться первой стадией планирования создания каж-дого нового коньюгата 99mTc с пептидами. За биоло-гически активную основу для создания таких конъю-гатов часто берут октреотид, хорошо показавший се-бя в фармацевтике (и радиофармацевтике в частно-сти) в качестве более долгоживущего аналога сомато-статина. Было выяснено, что для создания конъюга-тов с 99mTc октреотид недостаточно эффективен, и он был модифицирован. Рассмотрены свойства наиболее удачных результатов таких модификаций – пептиды Вапреотид (RC-160) и TOC, лучшим из которых по фармацевтическим свойствам признан ТОС.

При сравнении ДТПА, MAG3 и HYNIC боль-шинство исследователей сходятся на предпочтении HYNIC двум другим БХА, обусловленном не толь-ко более подходящими фармакокинетическими свойствами, но и более простой методикой синтеза. Тем не менее данные по биораспределению конъю-гатов всех трех БХА все еще остаются противоречи-выми.

Литературные данные по выбору солиганда при использовании HYNIC неоднозначны. Большинство исследователей сходятся на том, что комбинация трицин/НК меньше всех оправдала возложенные на нее ожидания. Некоторые исследователи сходятся во мнении, что трицин обладает лучшей фармакокине-тикой, чем ЭДДА, но есть и обратные данные.

В случае выбора HYNIC в качестве оптимального БХА, судя по данным специфического биораспреде-ления, необходима не только экспериментальная про-верка данных по известным солигандам (в основном трицин и ЭДДА), но и поиск новых. При этом в каче-стве пептида, как уже было сказано выше, наиболее целесообразно использовать тирозин-октреотид.

[1] Schwochau K. Technetium Chemistry and Radiopharmaceuti-cal Applications. Weinheim (Germany), Wiley–VCH, 2000. 446 p.

[2] Welch M. J., Redvanly C. S. Handbook of Radiopharmaceuti-cals. Radiochemistry and Applications. New York (USA): Wiley, 2003. 848 p.

[3] Tait J. F., Smith C., Gibson D. F. // Bioconjugate Chem. 2002. Vol. 13. P. 1119–1123.

[4] Liu S., Edwards D. S., Barrett J. A. // Bioconjugate Chem. 1997. Vol. 8. P. 621–636.

[5] Mendez-Rojasy M. A., Kharisov B. I., Tsivadze A. Yu. // J. Coord. Chem. 2006. Vol. 59, N 1. P. 1–63.

[6] Liu S. // Chem. Soc. Rev. 2004. Vol. 33. P. 445–461. [7] Alberto R. // Comprehensive Coordination Chemistry II.

2004. Vol. 5. P. 127–270. [8] King R. C., Surfraz B.-U., Biagini S. C. G. et al. // Dalton

Trans. 2007. N 43. P. 4998–5007. [9] Hirai M., Ishizuka J., Hirai A. et al. // Life Sci. 1993. Vol. 53.

P. 1859–1965. [10] Blankenberg F. G., Strauss H. W. // Quart. J. Nucl. Med. Mol.

Imag. 2007. Vol. 51. P. 99–110. [11] Abram U., Alberto R. // J. Braz. Chem. Soc. 2006. Vol. 17,

N 8. P. 1486–1500. [12] Hnatowich D. J., Layne W. W., Childs R. L. // Int. J. Appl.

Radiat. Isot. 1982. Vol. 33. P. 327–332. [13] Hermanson G. T. Bioconjugate Techniques. Rockford, Illinois

(USA): Elsevier, 2008. 2nd ed. 1202 p. [14] Trubetskoy V. S., Torchilin V. P. // Anal. Biochem. 1995.

Vol. 229, N 2. P. 345–347. [15] Liu S., Edwards D. S. // Bioconjugate Chem. 2001. Vol. 12.

P. 7−34. [16] Subramanian R., Colony J., Shaban S. et al. // Bioconjugate

Chem. 1992. Vol. 3, N 3. P. 248–255. [17] Fritzberg A. R., Kasina S., Eshima D., Johnson D. L. //

J. Nucl. Med. 1986. Vol. 27. P. 111–116. [18] Winnard P., jr., Chang F., Rusckowski M. et al. // Nucl. Med.

Biol. 1997. Vol. 24. P. 425–432. [19] Abrams M. J., Juweid M., tenKate C. I. et al. // J. Nucl. Med.

1990. Vol. 31. P. 2022–2028. [20] Yokoyama A., Horiuchi K., Arano Y. // 99mTc Labelled Pep-

tides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 65–81.

[21] Obenaus E., Crudo J., Edreira M. et al. // 99mTc Labelled Peptides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 17–27.

[22] Wang J., Kim Y.-S., Liu S. // Bioconjugate Chem. 2008. Vol. 19. P. 634–642.

[23] Hirsch-Kuchma M., Nicholson T., Davison A. et al. // Inorg. Chem. 1997. Vol. 36, N 15. P. 3237–3241.

[24] Liu S., Edwards D. S., Looby R. J. et al. // Bioconjugate Chem. 1996. Vol. 7. P. 63–71.

[25] Surfraz M. B.-U., King R., Mather S. J. et al. // J. Inorg. Biochem. 2009. Vol. 103. P. 971–977.

[26] Miranda-Olvera A. D., Ferro-Flores G., Pedraza-López M. et al. // Bioconjugate Chem. 2007. Vol. 18. P. 1560–1567.

[27] Mikolajczak R., Markiewicz A., Deptula C. Z. // 99mTc La-belled Peptides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 93–101.

[28] Gano L., Patrício L. // 99mTc Labelled Peptides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 103–113.



[38] Blankenberg F. G., Katsikis P. D., Tait J. F. et al. // J. Nucl. Med. 1999. Vol. 40. P. 184–191.

[39] Rottey S., Loose D., Vakaet L. et al. // J. Nucl. Med. Appl. Mol. Imag. 2007. Vol. 51. P. 182–188.

[40] Biechlin M.-L., Bonmartin A., Gilly F.-N. et al. // Nucl. Med. Biol. 2008. Vol. 35. P. 679–687.

[41] Béhe M., Powell P., Mäcke H. R. // 99mTc Labelled Peptides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coor-dinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 115–128.

[42] Bangard M., Béhé M., Guhlke S. et al. // Eur. J. Nucl. Med. 2000. Vol. 27. P. 628–637.

[43] Waehrens L. N., Rasmussen J. T., Heegaagd C. W., Fal- borg L. // J. Label. Compd. Radiopharm. 2007. Vol. 50. P. 211–217.

[44] Hubalewska-Dydejczyk A., Fröss-Baron K., Mikołajczak R. et al. // Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imag. 2006. Vol. 33. P. 1123–1133.

[45] Chrapko B. E., Nocuń A., Gołębiewska B., Stefaniak B. // Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imag. 2009. Vol. 36, Suppl. 2. P. S260–S280, OP545, S264.

[46] Liu S., Kim Y.-S., Hsieh W.-Y., Sreerama S. G. // Nucl. Med. Biol. 2008. Vol. 35, N 1. P. 111–121.

[47] Rusckowski M., Qu T., Gupta S. // J. Nucl. Med. 2001. Vol. 42. P. 1870–1877.

[48] Zhang Y.-M., Liu N., Zhu Z.-H. et al. // Eur. J. Nucl. Med. 2000. Vol. 27. P. 1700–1707.

[29] Poramatikul N., Sangsuriyan J., Kongpeth P. // 99mTc La-belled Peptides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 129–145.

[30] Decristoforo C., Melendez-Alafort L., Sosabowski J. K., Mather S. J. // 99mTc Labelled Peptides for Imaging of Periph-eral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Pro-ject 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 147–153.

[31] Gil M. C., Chandía V. M., Errazu X. // 99mTc Labelled Pep-tides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 39–49.

[32] Mishra A. K., Mishra P., Chuttani K. et al. // 99mTc Labelled Peptides for Imaging of Peripheral Receptors: Final Report of a Coordinated Research Project 1995–1999. Vienna (Austria): IAEA, 2001. P. 49–55.

[33] Salouti M., Rajabi H., Babaei M. H., Rasaee M. J. // Nucl. Med. Biol. 2008. Vol. 35. P. 763–768.

[34] Gandomkar M., Najafi R., Shafiei M. et al. // Nucl. Med. Biol. 2007. Vol. 34. P. 651–657.

[35] Decristoforo C., Santos I., Pietzsch H. J. et al. // J. Nucl. Med. Appl. Mol. Imag. 2007. Vol. 51. P. 33–41.

[36] Qu T., Wang Y., Zhu Z. et al. // Nucl. Med. Commun. 2001. Vol. 22. P. 203–215.

[37] Ohtsuki K., Akashi K., Aoka Y. et al. // Eur. J. Nucl. Med. 1999. Vol. 26, N 10. P. 1251–1258.

алеся обзор pадифарм рус

Education