免 疫 学 检 测（免 疫 学 检 测（ P186P186 ））

抗原或抗体的检测原理抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的可见性

Precipitation

1 、凝集反应2 、沉淀反应血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，称之。3 、补体参与的反应4 、免疫标记技术免疫荧光法：直接荧光法、间接荧光法ELISA ：双抗体夹心法、间接法等

实验内容实验内容

一、特异免疫功能检测：1 、血清中总 IgG 检测：单向琼脂扩散法

（示教） 2 、 ELISA 法检测血清中抗 HBs IgG二、沉淀反应1 、人血清的检测：环状沉淀法2 、 AFP 检测：双向琼脂扩散法（示教）

、免疫电泳法（示教）

沉淀反应沉淀反应 ((precipitation)precipitation)

概念：概念：种类：环状法、絮状法、琼脂扩散法、种类：环状法、絮状法、琼脂扩散法、

对流免疫电泳等。对流免疫电泳等。

琼脂扩散法又包括：单向琼脂扩散试验、双琼脂扩散法又包括：单向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验；与电泳技术结合免疫又有向琼脂扩散试验；与电泳技术结合免疫又有火箭电泳、对流免疫电泳、免疫电泳等。火箭电泳、对流免疫电泳、免疫电泳等。

单向琼脂扩散试验

定量实验：检测可溶性抗原的量定量实验：检测可溶性抗原的量

Mechanism of

single and double

diffusion

Single diffusion

双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验

1孔

3孔2孔

5孔4孔

6孔

双扩实验结果分析

Ag1Ag1

Ab1 Ab1 Ab2

Ab1 Ab2

Ag1 Ag2 Ag1 Ag2

Ag2

对流免疫电泳

原理：带电的抗原、抗体在电场中由于受原理：带电的抗原、抗体在电场中由于受到电场力的作用相对运动，相遇时如果相到电场力的作用相对运动，相遇时如果相对应，则发生结合反应，出现肉眼可见的对应，则发生结合反应，出现肉眼可见的沉淀线。沉淀线。

AFPAFP 向正极移动；向正极移动；抗抗 AFPAFP 向负极移动；向负极移动；

抗体孔 抗原孔抗体孔 抗原孔

对流免疫电泳 原理

抗原与抗体在电场中的移动方向抗原与抗体在电场中的移动方向与其带的电荷是正电荷还是负电荷有关与其带的电荷是正电荷还是负电荷有关

带电荷与其等电点及环境溶液的带电荷与其等电点及环境溶液的 PHPH 大小有大小有关关

AFPAFP 等电点：等电点： PH4-5PH4-5抗抗 AFPAFP 等电点：等电点： PH6-7PH6-7缓冲液：缓冲液： PH8.6PH8.6

与其所受到的电泳力及电渗力的大小有关与其所受到的电泳力及电渗力的大小有关

AFPAFP 及抗及抗 AFPAFP 均带负电荷，但均带负电荷，但 AFPAFP 的的负电荷大于抗负电荷大于抗 AFPAFP ；；所受到的电泳力均所受到的电泳力均向正极方向移动；向正极方向移动；

电渗力：由于固相的琼脂本身带电荷电渗力：由于固相的琼脂本身带电荷（负电荷）在电场中受到电泳力作用有（负电荷）在电场中受到电泳力作用有向正极移动的趋势，由此产生的使液相向正极移动的趋势，由此产生的使液相的物质向反向（负极）移动的作用力。的物质向反向（负极）移动的作用力。

电泳力 电渗力

缓冲液：缓冲液： PH8.6PH8.6

AFP AFP (PH4-5)(PH4-5)抗抗 AFP AFP (PH6-7)(PH6-7)

电泳力 电渗力

环状沉淀试验环状沉淀试验

实验材料：1 、家兔抗人血清2 、人血清稀释液 3 、牛血清稀释液 4 、 N.S ( 生理盐水 )

5 、铁孔座： 1 个 /2 人

公用， 6套 /室

方法：加样

图 1 图 2

注意加样时勿带气泡

先加抗人血清

注意加抗原时要缓慢沿管壁加入

图 3

酶联免疫吸附实验 (ELISA)

定义：运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物质测定的实验方法。

底物显色定性或定量的分析

原理

包被 反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原

或抗体

洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离

12

3 4

基本原理

HBVHBV 血清学标志物检血清学标志物检测测

乙肝病毒的结构及组成成分乙肝病毒的结构及组成成分

DNA

HBcAg (hepatitis B core antigen)

HBsAg(hepatitis B surface antigen)

HBsAg+PreS2

HBsAg+PreS2+PreS1Polymerase

HBeAg (hepatitis B e antigen)

抗抗 -HBs-HBs 检测 检测 - - 双抗原夹心双抗原夹心法法

HBVHBV 血清学标志物检测原理血清学标志物检测原理(ELISA)(ELISA)

抗原包被 阳性血清 ( 含抗体 )

洗涤加酶作用底物加终止液

实验步骤实验步骤

1 、分别试剂盒，取出包被板，做好标记。2 、 在包被孔中分别加入 50ul 待检血清，3 、贴上板贴，置 37℃ 温箱中孵育 30 分钟。4 、洗板 5 次 : 先弃去各孔液体、拍干，用洗涤液注满各孔，防止串流，停留 5~10 秒后弃去，反复 5 次，每次均拍干。5 、加入底物液 1 滴 / 孔，随即加入显色剂 1 滴 / 孔，充分混匀，置 37℃ 避光温育 10 分钟。6 、加终止液 1 滴 / 孔，混匀后肉眼观察结果。 明显显色者为阳性，无色为阴性明显显色者为阳性，无色为阴性3 、随即加入酶结合物 1 滴 / 孔，振荡混匀。

注意事项注意事项

11 、手工洗板时注意防止污染相邻孔。、手工洗板时注意防止污染相邻孔。

22 、血清污染的实验材料均应按传染性样品处理，、血清污染的实验材料均应按传染性样品处理， 放置于指定容器中。操作过程中注意防护放置于指定容器中。操作过程中注意防护。。