蛍光イメージング試薬 - sigma-aldrich: analytical, …¨™識原理： pkh 、cellvue...

biomolecules

sigma.com/fluorescence

ライブセルイメージング・PKH & CellVue®

細胞表面の修飾・ NEW KODE™ テクノロジー

GPCRリガンド - レセプターのリアルタイム解析・ NEW 蛍光 GPCRリガンド

アンチストークス光を発するナノ粒子・ NEW Sunstone® Upconverting nanocrystal

内在性遺伝子が蛍光タグ標識された細胞株・CompoZr® Cytoskeletal and Pathway Marker Cell Lines

タンパク質相互作用や修飾の高感度検出・ NEW Duolink®

蛍光イメージング試薬

2

特徴

● 簡便な操作● 高い安定性と再現性● 最長 100 日以上のトラッキング● 生理活性、増殖能への影響少● 色素漏出、他細胞への色素移行なし● 幅広い細胞に対応● 多くの文献で証明された信頼性

標識原理：　PKH、CellVueは、蛍光発色部位と結合した脂質親和性の長い尾部を持っています。短時間（1-5分）のインキュベート処理で、この尾部が細胞膜に挿入され、蛍光発色部位を細胞の外表面に露出させた状態で留まります。その為、幅広い細胞を標識することが可能です。

標識された細胞膜のモデル

PKH、CellVue は生細胞の長期標識が可能な蛍光ラベルキットです。細胞とのリンカー部位は生理的に安定しており、また細胞への毒性は見られません。標識された細胞は、通常通りの生体反応、増殖を示し、長期トラッキングや細胞間相互作用等の観察にご使用いただけます。

PKH and CellVue®

PKHキットによる標識プロトコール

均一な細胞懸濁液 PKH Labeling Kit

希釈剤 + PKH色素

2×　PKH色素溶液

PKH標識細胞

多色分析

ファゴサイトーシスin vivoで移植細胞のトラッキング

細胞間相互作用測定

遠心, 無血清培地で洗浄 ×2

細胞ペレット

希釈液で再懸濁

2×　細胞懸濁液

細胞増殖能測定● タンパク質含有培地添加により反応停止● 洗浄 ×3● 標識細胞を再懸濁、各アプリケーションに利用

1×　細胞懸濁液/色素溶液インキュベート　＜5min. RT

(exteternal leaflet)

Lipid bilayer

(Internal leaflet)

3

造血系細胞 CD34+ stem cells, CFU-s, normal and neoplastic progenitor cells, culture initiating cellsその他　血液系細胞 erythrocytes, neutrophils, platelets

免疫細胞lymphocytes, monocytes, macrophages, thymocytes, splenocytes, cytotoxic or autoimmune effector cells, dendritic cells

その他　血液細胞、骨髄細胞 erythrocytes, neutrophils, platelets, stromal cells, lung fibrocytes

培養細胞tumor cells and cell lines, fibroblasts, smooth muscle cells, hybridomas, T-cell lines and clones

初代培養細胞 embryonic cells, endothelial cells, epithelial cells, neurons, myocytes, cartilage cells

その他　生体粒子viruses, protoplasts, phytoplankton, erythrocyte ghosts, fluorocarbon emulsions, phagosomes

sigma.com/pkhreferences

細胞の使用例

色素 CAT.NO. 用途キット内容価格

PKH2 PKH2GL-1KT 一般細胞用色素溶液：0.5 ml Diluent A溶液： 6x10 ml ¥117,500

PKH67

MINI67-1KT

一般細胞用

色素溶液：0.1 ml Diluent C溶液： 1x10 ml ¥35,500

MIDI67-1KT 色素溶液：0.1 ml Diluent C溶液： 6x10 ml ¥57,500

PKH67GL-1KT 色素溶液：0.5 ml Diluent C溶液： 6x10 ml ¥129,100

PKH26

MINI26-1KT一般細胞用

色素溶液：0.1 ml Diluent C溶液： 1x10 ml ¥35,500

PKH26GL-1KT 色素溶液：0.5 ml Diluent C溶液： 6x10 ml ¥129,100

PKH26PCL-1KT 貪食細胞用色素溶液：0.5 ml Diluent B溶液： 6x10 ml ¥129,100

CellVue® ClaretMINCLARET-1KT

一般細胞用

色素溶液：1x0.1 ml Diluent溶液： 1x10 ml ¥35,400

MIDCLARET-1KT 色素溶液：2x0.1 ml Diluent溶液： 6x10 ml ¥59,400

sigma.com/pkh-jp

Dye PKH2 PKH67 PKH26 CellVue® ClaretExitation/Emission 490nm/504nm 551nm/567nm 655nm/675nmTime to 50% intensity in non-dividing cells in vivo 5-8 days 10-12 days 100-200 days Not yet known

(in vitro studies suggest it will be similar to PKH26)General cell tracking applications (typical timeframe)

In vitro and in vivo (days to weeks)

In vitro and in vivo (days to months)

In vitro and in vivo (maximum not yet known)

Cell proliferation monitoring Yes (8-10 generations)

Yes (8-10 generations)

Comparable to standard tracking dyes (e.g. PKH26 and CFSE)

4NEW KODE™ テクノロジー

KODEテクノロジーは、細胞やウイルスなどの生存・増殖に影響を与えずに、細胞膜上を修飾することが可能な技術です。膜表面に機能分子を結合させるための特殊な構造（FSL）を用いることで、細胞膜を含む疎水性表面を糖質、ビオチン、蛍光物質などで修飾すことができます。

　FSL分子は機能部位（F）、スペーサー部位（S)、脂質部位（L）の３つの部位によって構成されています。この分子は水溶液中での可溶性に優れ、細胞表面上で安定的に保持されます。また、固定化された細胞や固相表面など、疎水表面も修飾することが可能です。FSL修飾された細胞は“kodecyte”や“kodevirion”として知られ、これらは本来の細胞活性を失うことなく、且つ機能部位（F）に新たな活性を付与されます。

　FSL-biotinによって修飾された膜表面は、avidin/straptavidinを介した蛍光標識や酵素による呈色反応を行うことが可能です。FSL-fluoresceinを用いることで、細胞表面を直接標識することができます。

　FSLは初期胚、精子、ゼブラフィッシュ、上皮細胞、内皮細胞などの修飾に用いられています。Kodecyteは本来の細胞活性を失うことなく、且つ機能部位（F）に新たな活性を付与することが可能です。

　FSLの高い生体適合性および高効率な細胞膜への取り込みは、この技術が細胞生物学の新たなアプリケーション開発のための貴重な研究ツールであることを示しています。

FSL-A（tri）（CAT.NO. F9307）の構造糖質部位（F,赤）、スペーサー部位（S、青）、脂質部位（L,黒）

FSL-biotin（CAT.NO. F9182）修飾されたマウス胚。Alexa Fluor® 488-avidinを反応させた後、共焦点顕微鏡（λem = 550nm）を用いて観察した。

循環系を標識するため、FSL-fluorescein（CAT.NO. F1058）を静脈内に注入し、８日後に観察した。

FSLの構造

O

HO

HONHAc

HO

O

HO

O O

HO

OH3C

OHHO

OH

O

NHO

ONH

OO

OO

O

OPHO O

5

製品情報

Biotin / Fluorescent FSL

製品名 CAT. NO. 機能部位（F）価格

FSL-biotin F9182-1MG biotin ¥53,200

FSL-fluorescein F1058-1MG fluorescein ¥53,200

Carbohydrate FSL

製品名 CAT. NO. 機能部位（F）価格

FSL-A(tri) F9307-1MG血液型抗原　A型トリサッカライド GalNAcα3(Fucα2)Galβ ¥53,200

FSL-B(tri) F9557-1MG血液型抗原　B型トリサッカライド Galα3(Fucα2)Galβ ¥53,200

FSL-Galili(tri) F9432-1MG血液型抗原　Galili抗原　トリサッカライド Galα3Galβ4GlcNAcβ ¥53,200

FSL-GB3 F9807-1MG血液型抗原　GB3(pk)抗原　トリサッカライド Galα4Galβ4Glcβ ¥53,200

FSL-LE(tri) F9682-1MG血液型抗原　Lewis抗原　トリサッカライド Galβ(Fucα4)GlcNAcβ ¥53,200

FSL-Tyr1 F7558-1MG N-Formyl tyrosine125I標識用 ¥53,200

References

1. Modification of red blood cells for laboratory quality control use. Curr. Opin. Hematol. 16, 467-72 (2009).2. Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions.

J. Viriological Methods, 176, 78-84 (2011).3. Inkjet printing of Function-Spacer-Lipid (FSL) biomolecules, Barr, K., Diegel, O., et al., NZ Rapid Product Development Conference 2011,

Auckland University of Technology, Auckland, New Zealand.4. A synthetic globotriaosylceramide analogue inhibits HIV-1 infection in vitro by two mechanisms. Glycoconjugate J., 27, 515-524 (2010).5. Fluorescent Function-Spacer-Lipid construct labeling allows for real-time in vivo imaging of cell migration and behavior in zebrafish.

J. Fluorescence, 22, 1055-63 (2012).6. Toward creating cell membrane glyco landscapes with glycan lipid constructs. Carbohydrate Res., 356, 238-46 (2012)7. An improved Fc function assay utilizing CMV antigen-coated red blood cells generated with synthetic function-spacer-lipid constructs.

Vox Sanguinis, 102, 72-8 (2012).8. A prominent role for DC-SIGN+ dendritic cells in initiation and dissemination of measles virus infection in non-human primates.

PLoS One, 7, e49573 (2012).9. Flow cytometry evaluation of red blood cells mimicking naturally-occurring ABO subgroups following modification with variable

amounts of FSL-A and B constructs. Transfusion, 52, 247-51 (2011).10. Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes. Transfusion, 51, 1723-30 (2011).11. In vivo neutralization of anti-A and successful transfusion of A antigen-incompatible red blood cells in an animal model. Transfusion,

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J. Visualized Experiment (JoVE), 54, e3289 (2011) (Video article).

sigma.com/KODE

6 NEW Fluoresent GPCR ligandsGタンパク質共役受容体に対する蛍光標識リガンドです。リガンドーレセプターの結合をリアルタイムに解析できるほか、レセプターの局在も観察することが可能です。

標的 GPCRファミリー製品名 CAT. NO. 価格synonyms 標的 GPCR Ex/Em

adenosine family

Fluorescent Adenosine receptor Agonist (A-633-AG)SML0155-50UG ¥55,800SML0155-200UG ¥159,800SML0155-1MG ¥400,000

Adenosine-5’-N-ethyluronamide (NECA)-derivative A1/A2A/A2B/A3 638nm/657nm

Fluorescent Adenosine receptor Antagonist (A-633-AN)SML0156-50UG ¥55,800SML0156-200UG ¥159,800SML0156-1MG ¥400,000

Xanthine Amine Congener (XAC)-derivative A1/A2A/A3 636nm/651nm

Fluorescent Adenosine A3 receptor Antagonist (A3-633-AN)SML0157-50UG ¥55,800SML0157-200UG ¥159,800SML0157-1MG ¥400,000

Xanthine Amine Congener (XAC)-derivative A1/A2A/A3 633nm/650nm

adrenoceptor family

Fluorescent beta2 adrenoceptor Agonist (beta2-633-AG)SML0158-50UG ¥55,800SML0158-200UG ¥159,800SML0158-1MG ¥400,000

Salbutamol-derivative β1/β2 633nm/650nm

Fluorescent Beta-2 Adrenoceptor Antagonist (beta3-633-AN3)SML0159-50UG ¥55,800SML0159-200UG ¥159,800SML0159-1MG ¥400,000

( ± )-Alprenolol-derivative β1/β2/β3 633nm/650nm

Fluorescent Beta-2 Adrenoceptor Antagonist (beta2-633-AN)SML0160-50UG ¥55,800SML0160-200UG ¥159,800SML0160-1MG ¥400,000

( ± )-Propanolol-derivative β1/β2/β3 633nm/650nm


(S)-Propranolol-derivative β1/β2/β3 633nm/650nm


( ± )-Pindolol-derivative β1/β2/β3 633nm/650nm

Fluorescent Beta-3 Adrenoceptor partial Agonist (beta3-633-AG)SML0163-1MG ¥55,800SML0163-200UG ¥159,800SML0163-50UG ¥400,000

(S)-Carazolol-derivative β1/β2/β3 633nm/650nm

Dopamine family Fluorescent Dopamine D1 receptor Antagonist (D1-633-AN2)SML0164-50UG ¥55,800SML0164-200UG ¥159,800SML0164-1MG ¥400,000

SKF83566-derivative D1/D2/D5 633nm/650nm

GABA receptor family Fluorescent GABA-B receptor Antagonist (GB-633-AN)SML0165-50UG ¥55,800SML0165-200UG ¥159,800SML0165-1MG ¥400,000

CGP-54626A-derivative GABA β1/β2 633nm/650nm

Histamine family

Histamine H1 receptor Antagonist (H1-BY633-AN)SML0166-50UG ¥55,800SML0166-200UG ¥159,800SML0166-1MG ¥400,000

Mepyramine-derivative H1/H2/H3 633nm/650nm

Fluorescent Histamine H2 receptor Antagonist (H2-633-AN)SML0167-50UG ¥55,800SML0167-200UG ¥159,800SML0167-1MG ¥400,000

Aminopotentidine-derivative H1/H2/H3 633nm/650nm

Fluorescent Histamine H3/H4 receptor Antagonist (H3-633-AN)SML0168-50UG ¥55,800SML0168-200UG ¥159,800SML0168-1MG ¥400,000

Clobenpropit-derivative H1/H2/H3 633nm/650nm

Muscarinic ACh family Fluorescent Muscarinic M3 receptor Antagonist(M3-633-AN)SML0169-50UG ¥55,800SML0169-200UG ¥159,800SML0169-1MG ¥400,000

Pirenzepine-derivative M1/M3/M5 633nm/650nm

Serotonin receptor family Fluorescent 5HT-1A receptor Antagonist (5HT1A-633-AN2)SML0170-50UG ¥55,800SML0170-200UG ¥159,800SML0170-1MG ¥400,000

NAN-190-derivative 5-HT1A/5-HT1B/5-HT2A 633nm/650nm

ReferencesStoddart, LA et al., Fragment Screening at Adenosine-A3 Receptors in Living Cells Using a Fluorescent-Based Binding Assay. Chemistry & Biology, 19:1105-1115 (2012). sigma.com/sfnprobes

7NEW Sunstone® Upconverting nanocrystals

Sunstoneはライフサイエンス研究において、各種アプリケーションに適した新しい蛍光ナノ・クリスタルです。これまでの蛍光物質とは異なり、長波長で励起し、可視光を放出するという特徴を持っています。アビジン、ビオチン、アミノ基やカルボキシル基を有しており、任意の目的分子に結合させることが可能です。

特徴

● 長波長で励起し、可視光を放出● ストークスシフトが大きいため、励起光の影響を受け難い● 蛍光の退色や減衰が起こらない● サンプルの自家蛍光の影響を受け難い

励起光と放射光

● Excitation: 976 nm● Emission: 475 – 804 nm

Sunstoneの原理：長波長（近赤外）の光子を吸収し、短波長（可視光）を放射するナノ粒子。

製品名官能基 λEx（nm） λEm max. （nm）* 粒径（nm） CAT. NO. 価格

UCP 804 -

976 804 10 - 60

53367-1MG ¥61,500UCP 804, carboxylated Carboxyl 89157-1MG ¥63,800UCP 804, biotin conjugated biotin 43177-1MG ¥66,500UCP 804, avidin conjugated Avidin 76736-1MG ¥75,500UCP 804, amine conjugated amine 73702-1MG ¥63,000UCP 545 -

976 545 10 - 60


976 538 10 - 60


976 475 10 - 60

67345-1MG ¥61,500UCP 475, carboxylated Carboxyl 90838-1MG ¥63,800UCP 475, biotin conjugated biotin 59956-1MG ¥66,500UCP 475, avidin conjugated Avidin 89043-1MG ¥75,500UCP 475, amin conjugated amine 57688-1MG ¥63,000

References1. Kobayashi, H., Kosaka, N., Ogawa, M., Morgan, N., Smith, P.D., Murray, C.B., Ye, X., Collins, J., Kumar, G.A., Bell, H., and Choyke, P.L. In vivo multiple color

lymphatic imaging using upconverting nanocrystals. J. Mater. Chem., 19, 6481?84 (2009).2. Corstjens, P.L.A.M., Li, S., Zuiderwijk, M., Kardos, K., Abrams, W.R., Niedbala, R.S. and Tanke, H.J. Infrared up-converting phosphors for bioassays. IEE Proc.

Nanobiotechnol., 152, 64?72 (2005).3 .Soukka, T., Kuningas, K., Rantanen, T., Haaslahti, V., and Lovgren, T. Photochemical characterization of up-converting inorganic lanthanide phosphors as potential

labels. J. Fluoresc., 15, 513-28 (2005).

sigma.com/upconversion

8

DIC

TUBA1BACTB

overlay

LMNB1

CompoZr® Cytoskeletal and 　　Pathway Marker Cell LinesCompoZr Cytoskeletal and Pathway Marker Cell Linesは CompoZr ZFNを用いた標的特異的ノックインにより、内在性遺伝子末端に蛍光タグを融合した細胞です。オルガネラ構成タンパクやシグナル伝達タンパクの細胞内局在の解析には、従来免疫染色やタグ付きタンパクの一過性発現などの手法が用いられてきました。免疫染色は手法が煩雑で、細胞を固定する必要があるため継時的解析は困難です。また一過性発現では、ホスト細胞の内在性遺伝子の発現動態を反映しません。CompoZr Marker Cell Lineは標的遺伝子のゲノム構造にほとんど影響を与えずに蛍光タグを融合しているため、生細胞内での標的タンパクの局在・発現動態の簡便な検出を可能にします。

特徴● 生細胞を用いた簡便な標的タンパクの可視化　　-　抗体不要で、生きたままの細胞を観察可能　　-　免疫染色が不要のため、時間とコストを大幅に

削減可能

● ホスト細胞のタンパク発現パターンを維持　　-　ゲノム構造が維持されているため、ホスト細胞

の発現動態を忠実に再現

● 再現性の高い実験データでスクリーニングに最適　　-　一過性発現ではなく安定したゲノム改変のため、

安定した実験データを実現　　-　384well 等での HTS にも対応可能

CompoZr ZFN による蛍光タグ挿入の模式図

U2OS LMNB1-TUBA1B-ACTB

（Cat.#: CLL1218）

Cytochalasin B の β-actin に及ぼす影響　RFP-ACTB　U2OS 細胞（Cat.#: CLL1035）を 21 µM Cytochalasin B 存在下で培養し、継時的に観察した。時間の経過とともにアクチンフィラメントの断片化が認められた。

StatticによるSTAT3核内移行の阻害　GFP-STAT3　SKOV3細胞（Cat.#: CLL1139）を 100 ng/ml IL-6存在下で培養するとGFP-STAT3の細胞質から核への顕著な移行が認められた（A, C）。20 µM Stattic１時間の前培養により、 GFP-STAT3の IL-6による核移行が阻害された（B, D）。

- CytB (0 min)

+CytB (7 min) +CytB (32 min)

20 µm

+K630:.37 CKÿMVÿWTÿ!:-::/4

6KÿXÿB8)YZÿMVÿ5/0K FKÿMVÿWTÿ!:-::/4 XÿB8)YZÿMVÿ5/0K

A. Control B. 20 µM Stattic

D. 20 µM Stattic + IL-6, 20 min.C. + IL-6, 20 min.

target integration site

1

242

1

coding regionuntranslated region

ATG848 bp 593 bp

ATG

FP

ZFN-1

ZFN-1

ZFN-2

7

target integration site

ZFN-2

ZFN-ZFN-2

splice signal

ATG

ATG ATG

intact splice signalcoding regionuntranslated region

1 Kb 700 bp FP

TUBA1B

ACTB

C T T C G C C T C C T A A T C C C T A G C C A C T A T G G T G A G T A A

G A A G C G G A G G A T T A G G G A T C G G T G A T A C C A C T C A T T

M D D D I A A L V V D N G S G M C K A G F A

A T G G A T G A T G A T A T C G C C G C G C T C G T C G T C G A C A A C G G C T C C G G C A T G T G C A A G G C C G G C T T C G C G G G

T A C C T A C T A C T A T A G C G G C G C G A G C A G C A G C T G T T G C C G A G G C C G T A C A C G T T C C G G C C G A A G C G C C C

9EGFR Biosensor Cell LineGFP標識 SH2ドメインにより、内在性 EGF受容体の高感度アッセイが可能に！

EGFRと特異的に反応するGrb2由来 SH2ドメインの GFP標識物を発現させることにより、内在性 EGF受容体の活性を高感度かつ簡便に解析することができます。内在性 EGF受容体の発現動態・活性・細胞内移行の研究に最適です。

特徴● 生細胞における EGFR 動態解析が可能● 高感度かつ高い特異性● 内在性の EGFR 発現・活性プロファイル● 384well 等でのスクリーニングにも対応可能

A549 EGFR Biosensor Live Cell AssayEGFR Biosensor の構造（上図）。100 ng/mL EGFの刺激により、時間経過とともに活性化EGFRの細胞内移行が観察された（下図）。

製品名 CAT. NO. ホスト細胞遺伝子 Gene ID 標識価格

CompoZr Cytoskeletal and Pathway Marker Cell LinesA549 GFP-EGFR CLL1141-1VL A549 EGFR 1956 C末端　GFP ¥480,000A549 GFP-SMAD4 CLL1167-1VL A549 SMAD4 4089 C末端　GFP ¥480,000A549 GFP-STAT1 CLL1158-1VL A549 STAT1 6772 C末端　GFP ¥480,000A549 RFP-STAT3 CLL1140-1VL A549 STAT3 6774 N末端　RFP ¥480,000

A549 GFP-CTNNB1 RFP-LMNB1 CLL1149-1VL A549CTNNB1 1499 N末端　GFP

¥480,000LMNB1 4001 N末端　RFP

MCF10A RFP-TUBA1B CLL1039-1VL MCF10A TUBA1B 10376 N末端　RFP ¥480,000SKOV3 GFP-HER2 CLL1135-1VL SKOV3 HER2 2064 C末端　GFP ¥480,000SKOV3 GFP-STAT3 CLL1139-1VL SKOV3 STAT3 6774 N末端　GFP ¥480,000

SKOV3 GFP-HER2 RFP-EGFR CLL1143-1VL SKOV3HER2 2064 C末端　GFP

¥480,000EGFR 1956 C末端　RFP

U2OS GFP-ACTB CLL1032-1VL U2OS ACTB 60 N末端　GFP ¥480,000U2OS RFP-ACTB CLL1035-1VL U2OS ACTB 60 N末端　RFP ¥480,000U2OS GFP-HMGA1 CLL1036-1VL U2OS HMGA1 3159 C末端　GFP ¥480,000U2OS GFP-LMNB1 CLL1033-1VL U2OS LMNB1 4001 N末端　GFP ¥480,000U2OS GFP-NUP98 CLL1136-1VL U2OS NUP98 4928 N末端　GFP ¥480,000U2OS GFP-TUBA1B CLL1031-1VL U2OS TUBA1B 10376 N末端　GFP ¥480,000U2OS RFP-TUBA1B CLL1034-1VL U2OS TUBA1B 10376 N末端　RFP ¥480,000

U2OS BFP-LMNB1 RFP-ACTB CLL1038-1VL U2OSLMNB1 4001 N末端　BFP

¥480,000ACTB 60 N末端　RFP

U2OS GFP-ACTB RFP-TUBA1B CLL1037-1VL U2OSACTB 60 N末端　GFP

¥480,000TUBA1B 10376 N末端　RFP

U2OS LMNB1-TUBA1B-ACTB CLL1218-1VL U2OSLMNB1 4001 N末端　BFP

¥480,000TUBA1B 10376 N末端　GFPACTB 60 N末端　RFP

EGFR Biosensor Cell LineA549 CELLS EGFR SH2 BIOSENSOR CLL1097-1VL A549 EGFR Biosensor ¥440,000

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N CTagGFP SH2 SH2

-EGF(0min) +EGF(6min) +EGF(69min)

10NEW Duolink®

Duolinkは in situ PLA（Proximity Ligation Assay）テクノロジーを用いることにより、細胞や組織内におけるタンパク質間の相互作用を高感度に検出することができるシステムです。従来の蛍光を用いた FRET/BRETや共免疫沈降とは異なり、内在性タンパク質の相互作用や局在を検出することが可能です。

● ネイティブな状態のタンパク間相互作用を解析可能● 事前に標識 / 過剰発現等の必要なし● シグナルを増幅することで高感度な検出が可能● 通常の顕微鏡で解析可能。特殊な機器は必要なし

Step 1.　一次抗体の結合サンプルをブロッキングした後、標的特異的一次抗体を反応させる。2種類の一次抗体を使用する場合は、免疫動物種の異なる組み合わせとする。一次抗体の生物種がマウス・ウサギ・ヤギ以外の場合は、Duolink In Situ Probemakerを用いて直接 PLA標識が可能

Step 2.　Duolink PLA probe （二次抗体）の反応2種類の異なったオリゴヌクレオチドで標識された二次抗体（Duolink In Situ PLA probe PLUS および Duolink In Situ PLA probe MINUS）を反応させる

Step 3.　PLAプローブのハイブリダイゼーションおよびライゲーションLigation solutionを添加し、インキュベートする。溶液中に含まれる 2種類のオリゴヌクレオチドがふたつの PLA probeとハイブリダイズして環状構造を取る。引き続いて Ligaseが働くことにより、closed circleを形成する。

Step 4.　伸長反応と標識プローブのハイブリダイズライゲーション反応により形成された closed circleを鋳型とする伸長反応により、rolling-circle amplification （RCA）が起こり、繰り返し配列を有する長い一本鎖となる。溶液中に含まれる標識プローブ（図中赤丸）が RCA産物とハイブリダイゼーションし、増強したシグナルが得られる。

sigma.com/duolinkjapan　で PLA法の Videoを公開しております。

2013.09より販売開始

特徴

PLAアッセイの原理

Step 5.　検出と解析標準的な顕微鏡による可視化。Duolink ImageToolを使用することにより、定量的解析も可能

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ニ分子間相互作用の検出および定量―方法―それぞれの標的分子に結合する 2種類の一次抗体を使用して　PLA法により検出する。―アプリケーション―　　　　タンパク質相互作用の検出・定量　　　　タンパク複合体の局在検出

修飾タンパクの検出および定量―方法―標的タンパクと結合する抗体と修飾部位を認識する抗体の 2種類を一次抗体として使用し、PLA法により検出する。―アプリケーション―　　　　タンパク質翻訳後修飾の検出・定量　　　　糖鎖修飾、リン酸化、アセチル化　等

タンパク発現の検出および定量Single recognition method―方法―標的タンパクと結合する 1種類の一次抗体と、PLA probe PLUS、PLA probe MINUSで検出する。―アプリケーション―　　　　微量発現タンパクの高感度検出

Double recognition method―方法―標的タンパクと結合するエピトープの異なる 2種類の一次抗体を使用して PLA法で検出する。―アプリケーション―　　　　発現タンパクの高精度検出

A549細胞サイトスピンサンプル中の EGFRのSingle recognition method による検出

ヒト乳がん FFPE切片中におけるHER2/HER3　ヘテロダイマーの検出一次抗体として抗 HER2および抗 HER3の 2種を使用

Duolink® アプリケーション

・�本カタログに掲載の製品及び情報は2013年8月1日現在の内容であり、収載の品目、製品情報、価格等は予告なく変更される場合がございます。�最新の情報は、弊社Webサイト（sigma-aldrich.com/japan）をご覧ください。・掲載価格は希望納入価格（税別）です。詳細は販売代理店様へご確認ください。・弊社の試薬は試験研究用のみを目的として販売しております。医薬品原料並びに工業用原料等としてご購入の際は、弊社ファインケミカル事業部までお問い合わせ願います。

SAJ1600�2013.8

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シグマアルドリッチジャパン

NEW Duolink® product List製品名 CAT. NO. 容量価格

PLA Probes PLUS ※ 1反応は 1cm2をカバー

Duolink In Situ PLA probe anti-Mouse PLUSDUO92001-30RXN 30反応 ¥49,000DUO92001-100RXN 100反応 ¥86,000

Duolink In Situ PLA probe anti-Rabbit PLUSDUO92002-30RXN 30反応 ¥49,000DUO92002-100RXN 100反応 ¥86,000

Duolink In Situ PLA probe anti-Goat PLUSDUO92003-30RXN 30反応 ¥49,000DUO92003-100RXN 100反応 ¥86,000

PLA Probes MINUS ※ 1反応は 1cm2をカバー

Duolink In Situ PLA probe anti-Mouse MINUSDUO92004-30RXN 30反応 ¥49,000DUO92004-100RXN 100反応 ¥86,000

Duolink In Situ PLA probe anti-Rabbit MINUSDUO92005-30RXN 30反応 ¥49,000DUO92005-100RXN 100反応 ¥86,000

Duolink In Situ PLA probe anti-Goat MINUSDUO92006-30RXN 30反応 ¥49,000DUO92006-100RXN 100反応 ¥86,000

Detection Reagent ※ 1反応は 1cm2をカバーDuolink In Situ Detection Reagents Brightfield DUO92012-30RXN 30反応 ¥105,000　　　　　　　　　　　　　　　　（褐色 :　HRP基質による発色） DUO92012-100RXN 100反応 ¥155,000Duolink In Situ Detection Reagents Green DUO92014-30RXN 30反応 ¥72,000　　　　　　　　　　　　　　　　（Ex/Em: 495/527 same filter as e.g. Cy2 or FITC） DUO92014-100RXN 100反応 ¥128,000Duolink In Situ Detection Reagents Orange DUO92007-30RXN 30反応 ¥65,000　　　　　　　　　　　　　　　　（Ex/Em: 554/576 same filter as e.g. Cy3） DUO92007-100RXN 100反応 ¥115,000Duolink In Situ Detection Reagents Red DUO92008-30RXN 30反応 ¥65,000　　　　　　　　　　　　　　　　（Ex/Em: 598/634 same filter as e.g. Texas Red） DUO92008-100RXN 100反応 ¥115,000Duolink In Situ Detection Reagents Far Red DUO92013-30RXN 30反応 ¥72,000　　　　　　　　　　　　　　　　（Ex/Em: 644/669 same filter as e.g. Cy5） DUO92013-100RXN 100反応 ¥128,000Probemaker（任意の抗体を PLA Probe標識）Duolink In Situ Probemaker PLUS DUO92009-1KT 20 µg ¥86,000Duolink In Situ Probemaker MINUS DUO92010-1KT 20 µg ¥86,000アクセサリDuolink In Situ Brightfield Mounting Medium DUO80102-40ML 40 mL ¥9,000Duolink In Situ Mounting Medium with DAPI DUO82040-5ML 5 mL ¥40,000

Duolink In Situ Wash Buffer, BrightfieldDUO82047-4L 4 L ¥11,000DUO82047-20L 20 L ¥44,000

Duolink In Situ Wash Buffer, FluorescenceDUO82049-4L 4 L ¥11,000DUO82049-20L 20 L ¥44,000

Duolink In Situ Microplate Nuclear Stain and Anti-Fade DUO82064-1KT 2x 96well分 ¥15,000Duolink In Situ Microplate Heat Transfer Block DUO82065-1EA アルミブロック ¥53,000Duolink ImageTool　Windows XP, Vista, 7　対応 DUO90806-1EA 1 each ¥180,000

すぐに実験を開始できる　Duolink Starter Set　もご用意しております。（¥186,000～）PLA probe PLUS & MINUS, Wash Buffer, Detection Reagent, Mounting Medium　が全て揃ったお得なセットです。

sigma.com/duolinkjapanの専用フォームにてご用命ください。

2013.09より販売開始

蛍光イメージング試薬 - sigma-aldrich: analytical, …¨™識原理： pkh 、cellvue...

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