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SureSelect ライブラリ調製 / ターゲットエンリッチメントシステム HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステム 次世代シーケンサ用ソリューション See Deeper. Reach Further.

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Page 1: 次世代シーケンサ用ソリューション SureSelect Select... · 次世代シーケンシング効率化の世界標準 DNA オリゴを切り離す 数万から数十万種類の120

SureSelectライブラリ調製 /ターゲットエンリッチメントシステム

HaloPlexターゲットエンリッチメントシステム

次世代シーケンサ用ソリューション

See Deeper. Reach Further.

Page 2: 次世代シーケンサ用ソリューション SureSelect Select... · 次世代シーケンシング効率化の世界標準 DNA オリゴを切り離す 数万から数十万種類の120

次世代シーケンシング効率化の世界標準

DNA オリゴを切り離す数万から数十万種類の 120 merビオチン化 RNA プローブが

1本のチューブに入ったキットとして出荷

ビオチン化 RNA に転写(プローブの作製)

120 mer の DNA オリゴをアレイ上に製造

SureSelect の特長

カスタムデザイン作成

DNA オリゴをアレイ上に製造

ビオチン化DNA プローブを作製

最大 200,000プローブが1本のチューブに入ったキットとして出荷

NGS ターゲットエンリッチメントシステム

2009年に発売された SureSelect Target Enrichment システムは、次世代シーケンシングを画期的に効率化し、世界各国の次世代シーケンサユーザーから絶大な支持を集めています。すでに Nature、Science をはじめとする主要な雑誌に 400報近い応用例が報告されており、原因不明のメンデル遺伝病の原因遺伝子の同定において数多くの成果が報告されているばかりではなく、がんや糖尿病、神経疾患や

精神疾患など、より複雑で一般的な疾患に対しても幅広く応用されています。

さらに 2012年、ヒトゲノムを対象にした HaloPlex Target Enrichment システムが登場し、より少ない DNA を用いて、より簡単に実験を行うことが可能になりました。SureSelect を用いた Exome 解析のフォローアップや、疾患感受性遺伝子パネルによる多検体の解析に活用されており、デスクトップ型次世代シーケンサとの組み合わせで迅速に結果が得られるという利点があります。

アジレント・テクノロジーでは、進化し続けるシーケンサ技術と、それに伴い次々と生み出される新たなご要望にこたえるべく、製品の

種類、対応シーケンサ、カスタムキット、自動化システム、解析ツールなど次世代シーケンサ用ソリューションを常に拡充、充実させ

ています。

● 高品質 120 merのロングオリゴ(プローブ)20 bp程度の Deletion があっても理想的なアレルバランスでキャプチャ、SNP や InDel の影響を受けにくく、高効率で変異を検出

● ビオチン化 RNA をプローブとして利用DNA-DNA より高い DNA-RNA のハイブリ効率プローブのコンタミネーションがない

● 容易なハイスループット化

● バイオアナライザ /TapeStation と定量 PCR による QC ステップを取り入れた堅牢なプロトコル

HaloPlex の特長● わずか 225 ngの gDNA からスタート可能

FFPEサンプルにも対応

● シンプルなプロトコル、短い hands-on timeゲノム DNA の物理的断片化は不要、特別な機器を必要としないシンプルなプロトコル 2-3 時間の hands-on time で 1日から 1.5日で完了

● Web 上の SureDesign で簡単にカスタムライブラリを設計

● 専用解析ソフトウェア SureCall でデータ解析可能 FASTQ ファイルを入力すればアライメントから変異解析までを自動で実施コマンドライン不要のシンプルなソフトウェア

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キャプチャライブラリ(プローブ)と試薬キットを それぞれ別にご購入いただく製品構成です。

キャプチャライブラリ:実験の目的に応じて、異なるターゲット領域をカバーしているライブラリの中から選択

試薬キット:使用予定のプロトコルと次世代シーケンサの機種によって選択それぞれにアジレント NGS 自動化システム用の試薬があります。

1. キャプチャライブラリ(プローブ)を選択します● SureSelect XT DNA キャプチャ● SureSelect XT DNA Methyl-Seq

2. 適切な試薬キットを選択しますSureSelect XT 試薬キット:ライブラリ調製試薬・アダプタ・ハイブリダイゼーション試薬を含む

● イルミナ社 HiSeq 対応(HSQ)・MiSeq 対応(MSQ)● ライフテクノロジーズ社 5500 SOLiD 対応

SureSelect QXT 試薬キット:ライブラリ調製試薬・アダプタ・ハイブリダイゼーション試薬を含む● イルミナ社 HiSeq 対応(HSQ)・MiSeq 対応(MSQ)

SureSelect Methyl-Seq 試薬キット:ハイブリダイゼーション試薬・アダプタを含む● イルミナ社 HiSeq 対応(HSQ)

SureSelect 試薬キット:ハイブリダイゼーション試薬を含む● ライフテクノロジーズ社 IonProton 用※ライブラリ調製試薬はライフテクノロジーズ社からご購入ください。

3. 反応数を 16検体・96検体の 2種類から選択します(自動化用は 96検体のみ)

ゲノム DNA の目的領域をシーケンスする

カスタム P.10

カタログ P.8

カタログ P.4

SureSelect 製品選択ガイド

◆ PolyA 付き RNA をストランド特異的にシーケンスするための製品(キャプチャは含みません)SureSelect ライブラリ調製試薬:ライブラリ調製試薬を含む

● SureSelect Strand Specific RNA Library 調製試薬(イルミナ社 対応)

◆目的の Transcript をキャプチャしてシーケンスするための製品

1. キャプチャライブラリ(プローブ)を選択します● SureSelect XT RNA キャプチャ

2. 適切な試薬キットを選択しますSureSelect XT 試薬キット:ライブラリ調製試薬・アダプタ・ハイブリダイゼーション試薬を含む

● イルミナ用 SureSelect Strand Specific RNA Library 調製試薬とハイブリ試薬・アダプタのキット

3. 反応数を 16検体・96検体の 2種類から選択します

カスタム P.10カタログ P.9

P.9

RNA をシーケンスする

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■ 製品概要製品 特徴

Human All Exon V5 改善を重ねた5代目のデザインにより、キャプチャの均一性をより向上させ、より少ないシーケンス量で高いカバレッジを得ることができます。合計 50 Mbの Coding 領域をキャプチャ対象としています。

Human All Exon V5+UTRs 上記 V5ライブラリのターゲット領域に、UTR を追加したデザインです。

Human All Exon V5 +lncRNA 上記 V5ライブラリのターゲット領域に、8,263 lincRNA と HGNC 979 non-coding RNA エクソン合計9.3 Mbを追加したデザインです。

Human All Exon V5 +Regulatory 上記 V5ライブラリのターゲット領域にプロモータや一部のエンハンサなどの制御領域を追加したデザインです。

Human All Exon V5 + ミトコンドリア DNA(アーリーアクセス)

上記 V5ライブラリのターゲット領域に、16のミトコンドリア関連の核遺伝子のエクソンおよび、16 kbのミトコンドリアゲノム DNAをキャプチャするプローブを追加したデザインです。ミトコンドリア DNAの過剰なキャプチャを避けるため、核遺伝子をキャプチャするプローブとミトコンドリアゲノムをキャプチャするプローブの比が 100:1に調整されています。

Mouse All Exon UCSCS の mm9 の Reference 配列をもとに Ensemble と RefSeq で定義されたエクソンにプローブがデザインされています。

Bovine All Exon University of Maryland build 3.1のデータベースをもとに USDA と設計したデザインです。Coding Exon, Predicted Exon および miRNA を含みます。

Canine All Exon(アーリーアクセス) CanFam2 の UCSC Tracks をもととしてデザインされ、RefSeq, Human Protein Alignment および Spliced ESTs を含みます。

Zebrafish All Exon Ensemble の Zv9 library をもとに、Sanger 研究所と設計したデザインです。

Human Kinome DNA 612のキナーゼ遺伝子とがん関連遺伝子のエクソンと UTR 領域にプローブがデザインされています。キナーゼ変異と疾患との関連の探索に威力を発揮します。

Human Chr-X exon ヒト X 染色体のエクソンをキャプチャします。X 連鎖型疾患の原因遺伝子探索に威力を発揮します。

■ 製品型番 XT:ポストプール式

ライブラリ 製品名 ターゲットサイズ型番

16反応 96反応

Exome

Human All Exon V5 キャプチャライブラリ 50 Mb 5190-6208 5190-6209Human All Exon V5 + UTRs キャプチャライブラリ 75 Mb 5190-6213 5190-6214Human All Exon V5 + lncRNA キャプチャライブラリ 59.3 Mb 5190-6446 5190-6447Human All Exon V5 + Regulatory キャプチャライブラリ   113.7 Mb お問い合わせください お問い合わせください

Human All Exon V5 +ミトコンドリア DNA キャプチャライブラリ 50 Mb EA(アーリーアクセス) EAMouse All Exon キャプチャライブラリ 49.6 Mb 5190-4641 5190-4642Bovine All Exon キャプチャライブラリ 54 Mb 5190-5448 5190-5449Canine All Exon キャプチャライブラリ 54 Mb EA EAZebrafish All Exon キャプチャライブラリ 75 Mb 5190-5450 5190-5451

PanelHuman DNA Kinome キャプチャライブラリ 3.2 Mb 5190-4646 5190-4647Human Chromosome-X キャプチャライブラリ 3.1 Mb 5190-4651 5190-4652

試薬 対応 NGS /機種型番

16反応 96反応

DNA 用:ライブラリ調製試薬を含む

イルミナ社 HiSeq G9611A G9611Bイルミナ社 MiSeq G9612A G9612Bライフテクノロジーズ社 5500 SOLiD G9615A G9615B

DNA 用:ライブラリ調製試薬を含まない

ライフテクノロジーズ社 IonProton G9605A G9605B

SureSelect XT DNA キャプチャ用カタログライブラリ

XT:ポストプール式…ライブラリの高い複雑性の保持が必要とされる用途に適しています。XT2 プレプール式の製品についてはお問い合わせください。

XT:ポストプール式

SureSelect

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右図は SureSelect Human All Exon シリーズの性能を示すデータです。本製品はバージョンアップの度にキャ

プチャ性能が改善されており、V5および 5+UTRs のキットでは、V4で見られた過剰な読み取りを回避して均一性を向上させました。他社製品と比べてより

少ないシーケンス量で、より高いカバレッジを得る

ことが可能です。

SureSelect のキャプチャプローブは、120 merの長さの高品質ビオチン化 RNA を使用しています。

DNA ではなく、長い RNA オリゴを使用しているため、ターゲットの gDNA に 20 bp近くの Deletion が存在しても、良好なアレルバランスでキャプチャすること

ができます。米国科学アカデミー紀要(PNAS)には、乳がんサンプル中の BRCA 遺伝子のさまざまな変異の検出例とアリルバランスが報告されています。 SNP や InDel があっても、高い性能を示す SureSelectは、次世代シーケンサによる多検体の変異解析に

威力を発揮します。

Allele 1 Allele 2 – 20bp deletion

Allelic Balance post-capture

0.5 0.5

Deletion

Reference:Detection of inherited mutations for breast and ovarian cancer using genomic capture and massively parallel sequencing. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Jul 13;107(28):12629-33.

最新のデータ、英文プロトコル、論文や Webcast は、下記のアジレント社英語 WEB サイトにてご覧頂くことができます。 http://www.halogenomics.com/

■ 主な仕様キャプチャライブラリは XT, QXT で共通して使用できます。

Human All Exon V5 Human All Exon V5+UTRsカバーする遺伝子数 21,522 21,522カバーするエクソン数 357,999 359,555CCDS 37.3(rel 9) 37.3(rel 9)RefSeq Rel51(01/12) Rel51(01/12)GENCODE V10(Ensemble 65) V10(Ensemble 65)miRBase V18 V18TCGA V6 V6UCSC hg19 hg19VEGA V46 V46Total 50 Mb 75 Mb

Read の均一性を向上させより少ないシーケンス量でこれまで同様のカバレッジを実現

Human All Exon50 Mb

(5 Gb seq)

Human All Exon V451 Mb

(4 Gb seq)

Human All Exon V550 Mb

(4 Gb seq)

過剰に深読みされる領域のプローブを減らし、より均一なカバレッジを実現

SureSelect V5(4 Gb)

SureSelect V5+UTRs(6 Gb)

他社製品(5 Gb)

100%

90%

80%

70%

60%

50%

40%

30%

ターゲットエンリッチメントの世界標準 XT:ポストプール式

120 mer の RNA プローブで SNP, Indel を高精度・高感度に検出

% Reads On-target +/–100 bp % bases > 1x cov. % bases > 20x cov.

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■ 製品型番 QXT試薬 対応 NGS /機種 反応数 型番

SureSelect QXT ライブラリ調製キット イルミナ16 G9682A96 G9682B

SureSelect QXT Reagent キット(ハイブリ用試薬含む) イルミナ16 G9681A96 G9681B

※自動化対応試薬は開発中です。お問い合わせください。

SureSelect QXT DNA ライブラリ調製キットSureSelect QXT Reagent キット QXT:ポストプール式

SureSelect QXT:ポストプール式…効率化が必要とされる用途に適しています

SureSelect QXT Reagent キット :ハイブリ時間をわずか 1.5時間に短縮上記の SureSelect QXT ライブラリ調製法を、SureSelect XT のキャプチャライブラリと組み合わせて使うための試薬キットです。新しいハイブリダイゼーション試薬の開発により、わずか 1.5時間へとハイブリ時間の短縮が実現しました。これにより、エクソームシーケンスやターゲットシーケンスのライブラリ調製を 1日で行うことが可能となりました。最大の効率が求められる用途に最適です。

SureSelect QXT を用いると、50 ngの微量 DNA からスタートして、トータル 7時間、ハンズオン 3.5時間のハイスピードで、エクソームなどターゲットキャプチャ済みでシーケンスにかけられるライブラリが

完成します。速さと簡便さが求められる NGS のアプリケーションに最適なソリューションです。

キャプチャライブラリは定評ある SureSelect XT シリーズと共通です。

注)高いライブラリ複雑性の保持が求められる癌や FFPE サンプルの解析には、従来の XT キットのご利用をお勧めします。

■ SureSelect QXT ターゲットキャプチャのワークフロー

SureSelect QXT ライブラリ調製キット:DNA 必要量はわずか 50 ng高い性能と品質で定評あるアジレント SureSelect シリーズに、DNA ライブラリ調製キット(イルミナ用)が新たに登場しました。独自のトランスポゼースにより高い効率でアダプタ付加のタグメンテーションを行い、約 90 分の短時間で、DNA シーケンス用ライブラリの調製が可能です。ヒトや各種モデル生物、植物、昆虫など幅広いアプリケーションに対応します。

■ SureSelect QXT のワークフロー

ライブラリQC

反応 準備

PCR 準備

PCR 増幅

バイオアナライザ TapeStation

断片化とアダプタ付加 (45℃)

AMPureXP 精製

AMPureXP 精製

11 min 16 min~ 25 min~ 10 min ~ 10 min

~ 90 min~ 20 min

1 2 3 4 5 Work Days

Library Prep Enrichment Sequence

圧倒的な時間短縮!QXT

Competitor B

Competitor A

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サンプルから抽出された gDNA や total RNA の QC

各ステップでライブラリの QC をしながら進めるワークフロー

サンプルから抽出されたゲノム DNA や Total RNA の品質確認、NGS 用ライブラリ調製過程での品質確認など、NGS のワークフローにおいて電気泳動装置は必須のものです。アジレントのバイオアナライザまたは TapeStation を用いると、非常に簡単な手順で迅速にサンプルの QC を行うことができます。

SureSelect 実験プロトコル QC ステップ

バイオアナライザDNA1000 キット断片化DNAのサイズ確認

バイオアナライザDNA1000 キットアダプタ付きDNAライブラリのサイズ確認と定量

アダプタ付きDNA断片

溶液中で24時間ハイブリダイゼーション

ビオチン化 RNAベイトライブラリ

ストレプトアビジン磁性ビーズ

キャプチャされたDNAだけを回収、濃縮

サイズ確認と定量後シーケンシングへ

gDNAもしくはmRNAを目的サイズに断片化

SureSelect XT キットまたはNGSキット

バイオアナライザ リアルタイム定量PCR

バイオアナライザ高感度DNAキットキャプチャされたDNAのサイズ確認と定量

QPCR NGSライブラリ定量キットDNAライブラリのハイスループット定量

SureSelect 実験プロトコル QC ステップ

バイオアナライザDNA1000 キット断片化DNAのサイズ確認

バイオアナライザDNA1000 キットアダプタ付きDNAライブラリのサイズ確認と定量

アダプタ付きDNA断片

溶液中で24時間ハイブリダイゼーション

ビオチン化 RNAベイトライブラリ

ストレプトアビジン磁性ビーズ

キャプチャされたDNAだけを回収、濃縮

サイズ確認と定量後シーケンシングへ

gDNAもしくはmRNAを目的サイズに断片化

SureSelect XT キットまたはNGSキット

バイオアナライザ リアルタイム定量PCR

バイオアナライザ高感度DNAキットキャプチャされたDNAのサイズ確認と定量

QPCR NGSライブラリ定量キットDNAライブラリのハイスループット定量

SureSelect 実験プロトコル QC ステップ

バイオアナライザDNA1000 キット断片化DNAのサイズ確認

バイオアナライザDNA1000 キットアダプタ付きDNAライブラリのサイズ確認と定量

アダプタ付きDNA断片

溶液中で24時間ハイブリダイゼーション

ビオチン化 RNAベイトライブラリ

ストレプトアビジン磁性ビーズ

キャプチャされたDNAだけを回収、濃縮

サイズ確認と定量後シーケンシングへ

gDNAもしくはmRNAを目的サイズに断片化

SureSelect XT キットまたはNGSキット

バイオアナライザ リアルタイム定量PCR

バイオアナライザ高感度DNAキットキャプチャされたDNAのサイズ確認と定量

QPCR NGSライブラリ定量キットDNAライブラリのハイスループット定量

SureSelect 実験プロトコル QC ステップ

バイオアナライザDNA1000 キット断片化DNAのサイズ確認

バイオアナライザDNA1000 キットアダプタ付きDNAライブラリのサイズ確認と定量

アダプタ付きDNA断片

溶液中で24時間ハイブリダイゼーション

ビオチン化 RNAベイトライブラリ

ストレプトアビジン磁性ビーズ

キャプチャされたDNAだけを回収、濃縮

サイズ確認と定量後シーケンシングへ

gDNAもしくはmRNAを目的サイズに断片化

SureSelect XT キットまたはNGSキット

バイオアナライザ リアルタイム定量PCR

バイオアナライザ高感度DNAキットキャプチャされたDNAのサイズ確認と定量

QPCR NGSライブラリ定量キットDNAライブラリのハイスループット定量

TapeStationD1000 assay

TapeStationD1000 assay

TapeStationHS D1000 assay

QPCR NGSライブラリ定量キット

DNA ライブラリのハイスループット定量

バイオアナライザDNA1000 assay

バイオアナライザDNA1000 assay

バイオアナライザ高感度 DNA assay

断片化 DNA のサイズ確認

アダプタ付き DNA ライブラリのサイズ確認と定量

キャプチャされた DNA のサイズ確認と定量

TapeStationバイオアナライザ Mx3000P/3005Pリアルタイム定量 PCR

SureSelect 実験プロトコル QC ステップ

バイオアナライザDNA1000 キット断片化DNAのサイズ確認

バイオアナライザDNA1000 キットアダプタ付きDNAライブラリのサイズ確認と定量

アダプタ付きDNA断片

溶液中で24時間ハイブリダイゼーション

ビオチン化 RNAベイトライブラリ

ストレプトアビジン磁性ビーズ

キャプチャされたDNAだけを回収、濃縮

サイズ確認と定量後シーケンシングへ

gDNAもしくはmRNAを目的サイズに断片化

SureSelect XT キットまたはNGSキット

バイオアナライザ リアルタイム定量PCR

バイオアナライザ高感度DNAキットキャプチャされたDNAのサイズ確認と定量

QPCR NGSライブラリ定量キットDNAライブラリのハイスループット定量

わかりやすい実験プロトコルと QC ステップ

SureSelect

gDNA の QC は genomic DNA キット Total RNA の QC は RIN/RINeTapeStation の genomic DNA キットを使うと、アガロースゲルの調製なしに手軽に gDNA の分解度合いを評価することができます。

TapeStation・バイオアナライザの RNA キットを使うと、Total RNA の分解度合いを評価し、RIN/RINe として結果を数値化します。RNA サンプルの客観的な QC が可能です。

DNA 断片化からアダプタ付きライブラリ調製、SureSelect によるハイブリダイゼーション、キャプチャされた DNA の回収、増幅、精製までの全ステップが、わかりやすい日本語プロトコルで提供されています。SureSelect のワークフローの中では、断片化・ライブラリ調製・キャプチャ後のステップに、バイオアナライザまたは TapeStation と定量 PCR による QC ステップが入り、安心して実験を進めることができます。

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メチル化部位の網羅的な解析に威力を発揮エピジェネティクスの重要な機構のひとつである DNA メチル化については、癌におけるゲノムワイドな低メチル化や、癌抑制遺伝子の高メチル化などの現象が知られており、自然発生の癌化の初期にかかわっていると推測されています。また近年は、生活習慣病や精

神神経疾患などとのかかわりも精力的に研究されており、メチル化部位を網羅的に低コストで解析できる手法の開発が強く求められて

いました。

SureSelect XT Methyl-Seq は、ヒトで 84 Mb、マウスで 109 Mbのメチル化に関連するターゲットを、PCR 増幅なしにキャプチャし、バイサルファイト変換を行った後、増幅してシーケンスを行います。CpG アイランドや近年注目を集める CpG アイランドの Shore および Shelves と定義される領域、がん、組織特異的な DMRs(Differential Methylated Regions)などのメチル化状態を 1 bpの解像度で一気に解析できます。NGS を活用し、メチル化研究を加速する画期的なツールです。

■ Methyl-Seq 製品一覧:XTポストプール式

ライブラリ 製品名 ターゲットサイズ型番

16反応 96反応

MethylHuman Methyl-Seq 84 Mb 5190-4661 5190-4662Mouse Methyl-Seq 109 Mb EA EA

試薬 対応 NGS /機種型番

16反応 96反応

XT Methyl Reagents イルミナ社 HiSeq G9651A G9651B

※イルミナ HiSeq のみの対応です。※ポストプール式のみの対応です。※実験に別途バイサルファイト変換試薬などが必要です。その他の必要な試薬は、http://Agilentgenomics.jp のサイトを参照ください。

SureSelect XT Human / Mouse Methyl-Seq XT:ポストプール式

SureSelect

84 Mbのターゲットサイズコンテンツ

● CpG アイランド● 癌、組織特異的 DMRs● GENCODe プロモーター● CpG アイランド、

shores and shelves ± 4 kb● DNasel 高感受性領域● RefGenes● Ensemble Regulatory Features

109 Mbのターゲットサイズコンテンツ

● CpG アイランド● 組織特異的 DMR● Ensenmbl Regulatory Features – CpG shores and shelves(± 4 kb) – DNase I Hypersensitive sites – Histone Modifications – TFBS – Polymerase

Human Methyl-Seq Mouse Methyl-Seq(EA)

※微量 DNA からのターゲットメチルシーケンスを可能とする PBAT(Post Bisulfite Adapter Tagging)法との組み合わせについてはお問い合わせください。

● Open Regulatory Annotatione – Promoters(ORegAnno) – Enhancers – TFBS – Regulatory Polymorphisms

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ストランド特異的 RNA ライブラリ調製試薬SureSelect Strand Specific RNA ライブラリ調製キットは、わずか 50 ngの total RNA から、99%以上の高い特異性でストランド特異的なライブラリを調製する試薬キットです。Duplication の Read が低く抑えられているため、シーケンス量に比してより高いカバレッジを達成できます。また 5'/3'バイアスも少なくなっており、遺伝子全長に渡ってより均一なカバレッジを得ることができます。

本キットで調製したライブラリの RNA-Seq による発現差解析の結果とアジレント遺伝子発現マイクロアレイによる発現差解析の結果は高い相関があり、RNA-Seq のフォローアップ実験としてより安価で簡便なマイクロアレイを用いることも可能

です。

特定の遺伝子をキャプチャをしたい場合は、SureSelect RNA キャプチャライブラリおよび SureSelect 試薬キットと組み合わせて興味のある遺伝子のみの Deep Sequencing を行うこともできます。

■ 製品型番

製品名型番

16反応 96反応

SureSelect Strand Specific RNA Library 調製試薬、イルミナ対応 G9691A G9691B

※ 本製品はイルミナ社の Sequencer にのみ対応しています。※ キャプチャを行う場合は、本ライブラリ調製試薬とキャプチャライブラリ・SureSelect 試薬キットを組み合わせてお使いください。

100

99

98

97

96

95Agilent -Replicate 1

Agilent -Replicate 2

Agilent -Replicate 3

99%を超えるストランド特異性

Agilent -Replicate 1

Agilent -Replicate 2

Agilent -Replicate 3

450

400

350

300

平均カバレッジ(Base)

遺伝子発現マイクロアレイと RNA-seq の比較

次世代シーケンサで RNA-Seq を行った場合、それぞれの転写産物の Read Depth は発現量に相関するため、目的遺伝子の発現量が低いと十分なカバレッジが得られない問題がありました。SureSelect RNA キャプチャキットはこの問題を解決します。

● RNA キャプチャにより、Read Depth が 10~ 100倍増加● 低発現遺伝子のカバレッジが向上● gDNA の SNP や InDel が遺伝子発現に与える影響を精度よく解析● アレル特異的な発現レベルを高精度に定量● スプライスバリアントの同定にも威力を発揮● 融合遺伝子(Fusion Gene)の発見効率を向上

■ 製品一覧

ライブラリ 製品名 ターゲットサイズ型番

16反応 96反応

Panel Human Kinome 3.2 Mb 5190-4801 5190-4802

試薬 対応 NGS /機種型番

16反応 96反応

RNA 用:ライブラリ調製試薬を含む イルミナ社 HiSeq G9692A G9692BRNA 用:ライブラリ調製試薬を含まない ライフテクノロジーズ社 SOLiD4 G9604A G9604B

SureSelect RNA Human Kinome キットDNA Capture Human Kinome キットとまったく同じ 612の Kinase 遺伝子とがん関連遺伝子がターゲットです。プローブは転写産物の配列に対してデザインされています。DNA と RNA の両方のキットを使用することで、gDNA に起きた変異が転写産物に与える影響を、詳細に解析できます。また新規融合遺伝子の発見にも力を発揮します。

ターゲットキャプチャ用カタログライブラリ

* Top 1000 Expressed Transcripts. 50 ng of Human UHRR samples Data normalized to 20 million reads. 2x100 bp sequencing

SureSelect RNA Sequencing 用製品 ポストプール式

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SureSelect XT カスタムキット

SureSelect XT DNA キャプチャ用カスタムキット ターゲット領域を 24 Mbまで拡張可能【 対応生物種(全 16 種類)】ヒト、マウス、ラット、イヌ、ウシ、ニワトリ、線虫、ショウジョウバエ、アラビドプシス イネ、アカゲザル、マーモセット、メダカ、ゼブラフィッシュ、出芽酵母、分裂酵母 全 16種類

■ 製品一覧:XT ポストプール式 *その他の生物種でも独自デザインのベイトでライブラリ作製可能

ライブラリ ターゲットサイズ型番

16反応 16反応 Re-Order 96反応 96反応 Re-Order

Custom

1-499 Kb 5190-4806 5190-4811 5190-4807 5190-48120.5-2.9 Mb 5190-4816 5190-4821 5190-4817 5190-48223.0-5.9 Mb 5190-4826 5190-4831 5190-4827 5190-4832

2ELIDs(サイズ目安 6.0-11.9 Mb)

5190-4836 5190-4841 5190-4837 5190-4842

3ELIDs(サイズ目安 12.0-24.0 Mb)

5190-4896 5190-4901 5190-4897 5190-4902

試薬 対応 NGS /機種型番

16反応 96反応

DNA 用:ライブラリ調製試薬を含む

イルミナ社 HiSeq G9611A G9611Bイルミナ社 MiSeq G9612A G9612Bライフテクノロジーズ社 5500 SOLiD G9615A G9615B

※ポストプール式対応製品です。プレプール式対応製品についてはお問い合わせください。※ 16 種類のバーコードアダプタが含まれています。96 種類のバーコードアダプタが必要な場合はお問い合わせください。※ Re-Order 2回目以降の同一デザインの場合はこちらの型番で御注文ください。

SureSelect RNA キャプチャ用カスタムキット【 対応生物種(全 79種類)】ヒト、マウス、ラット、イヌ、ウシ、ニワトリ、線虫、ショウジョウバエ、アラビドプシス イネ、アカゲザル、メダカ、その他 67生物種

■ 製品一覧:ポストプール式 *全 79種に含まれていない生物種でも独自デザインのベイトでライブラリ作製可能

ライブラリ ターゲットサイズ型番

16反応 16反応 Re-Order 96反応 96反応 Re-Order

Custom1-499 Kb 5190-4934 5190-4939 5190-4935 5190-4940

0.5-2.9 Mb 5190-4944 5190-4949 5190-4945 5190-49503.0-5.9 Mb 5190-4954 5190-4959 5190-4955 5190-4960

試薬 対応 NGS/機種型番

16反応 96反応

RNA 用:ライブラリ調製試薬を含まない

イルミナ社 HiSeq G9601A G9601B

※ポストプール方式対応製品です。※ 16 種類のバーコードアダプタが含まれています。96 種類のバーコードアダプタが必要な場合はお問い合わせください。※ Re-Order 2回目以降の同一デザインの場合はこちらの型番で御注文ください。

XT: ポストプール式SureSelect XT カスタムキット

SureSelect

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SureSelect カスタムキット

アジレント・テクノロジーは、1枚から自由にカスタムマイクロアレイをデザインすることができるWeb上のフリーツール eArray を、長い時間をかけて開発、発展させてきました。このツールの機能を利用・拡張し、ゲノムキャプチャのためのターゲット領域を自由に選択することができる新しいツールとしてリリースされたのが、SureDesign です。

SureSelect DNA キャプチャには SureDesign を、SureSelect RNA キャプチャには eArray を用い、ヒトだけではなくマウス、ラット、ショウジョウバエ、アカゲザル、イネ、マーモセット、メダカなど様々な生物種に対して、キャプチャしたい領域や遺伝子名を入力して、 SureSelect のカスタムライブラリをデザインすることができます。SureDesign は、HaloPlex のカスタムデザインにもご利用頂くことができます。

eArray には 79種類の生物種の Transcriptome 配列情報が登録されており、GenBank のアクセッション ID や転写物の配列情報を指定することで任意の Transcript をキャプチャするためのプローブ設計を行います。UniGene に登録されていない転写物をキャプチャしたい場合、ゲノム上の任意の領域を指定することでプローブ設計をすることも可能です。

設計されたプローブは、eArray 内の Transcriptome 情報を用いて他の転写物との相同性検索をすることも可能で、その結果からプローブを取捨選択することもできます。

■ 製品概要本製品は、1つのデザインに含まれるプローブの数と、キャプチャされる領域の合計サイズで価格帯が変わります。各デザインに含めることのできる遺伝指数はデザインによって大きく異なります。

RNA

Bait

SureDesign には 16種類の生物種のゲノム DNA の配列情報が登録されており、ゲノム上の位置情報や遺伝子名、データベースのアクセッション ID や SNP ID を入力することで任意の領域をキャプチャするためのプローブを設計を行います。指定領域のコーディングエクソンのみ・UTR を加えたエクソンのみ・領域全体などの指定も可能で、合計キャプチャサイズ 24 Mbまでのデザインが作成可能です。

SureDesign でカスタム設計したデザインを Human All Exon V5にプラスし、1つの「Exome Plus デザイン」として実験することもできます。

SureDesign にゲノム DNA の情報が登録されていない生物種については、独自に設計したプローブの塩基配列情報をアップロードして頂くことで、カスタムデザインの作成が可能です。

SureSelect DNA キャプチャのカスタム作成:SureDesign

Library

Bait

ゲノムDNAEnrichしたい領域

Bait Group1

Target interval

Bait Group2

● 最高の使いやすさを追及したユーザーインターフェース– 多言語に対応したユーザーインターフェース、日本語・英語などの言語で操作可能– 目的に応じて標準操作とアドバンスオプションが選択可能、シンプルな操作と高度な設定を共存

– SureDesign ユーザーインターフェースから UCSC ゲノムブラウザにダイレクトリンク、検索されたターゲット領域や設計されたプローブをすぐに視覚的に確認可能

– スピーディーなプローブ設計により、最短の待ち時間でカスタム設計が可能

● 最高のパフォーマンスを実現するプローブ設計アルゴリズム– Masking オプションにより、ゲノム上のリピート領域など「避けたい領域」を設定

– ブースティングオプションにより、キャプチャが難しい領域のカバレッジを改善

– 目的に応じて最適なプローブ密度を x2から x5まで自由に設定可能

SureSelect RNA キャプチャのカスタム作成:eArray

カスタムキット ターゲットサイズ範囲

プローブ数上限 サイズ 遺伝子数目安

SureSelect XT Custom 1 Kb - 499 Kb 57,680 1 Kb - 499 Kb 約 150SureSelect XT Custom 0.5 - 2.9 Mb 57,680 0.5 - 2.9 Mb 約 900SureSelect XT Custom 3 - 5.9 Mb 57,680 3.0 - 5.9 Mb 約 1,300SureSelect XT Custom 6 - 11.9 Mb 115,360 6.0 - 11.0 Mb 約 2,500SureSelect XT Custom 12 - 24 Mb 173,040 12.0 - 24.0 Mb 約 5,000

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HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステムは PCR のスピードとハイブリダイゼーションによる選択的濃縮の利点を組み合わせることにより、1チューブで 200,000ものアンプリコンを増幅可能な技術です。 ● 疾患関連遺伝子 2000個の coding exon を濃縮するパネル ● 全ゲノムシーケンス、Exome シーケンスで同定・絞り込んだ変異を多数のサンプルで解析 ● 染色体の特定領域だけに注目した解析など、ヒトゲノムの最大 5 Mbの領域を 225 ngのゲノム DNA サンプルから簡単に濃縮し、変異解析を短時間に高い精度で実施することができます。デスクトップシーケンスと組み合わせて使用することで、威力を発揮します。

■ 少ないサンプル量・簡単なプロトコル・フレキシブルなプラットフォーム対応 ● わずか 225 ngの gDNA からスタート可能 ● FFPE サンプルに対応したデザインも可能 ● 物理的断片化はおこなわず、特別な機器は不要 ● 2-3時間の hands-on time、1日から 1.5日でターゲットエンリッチメントが完了 ● アジレント自動化システムに対応したプロトコルを順次開発中 ● ウェブサイト上のデザインウィザード SureDesign で簡単にカスタムライブラリを設計 ● イルミナ HiSeq、MiSeq、ライフテクノロジーズ Ion Torrent 対応

■ 高い性能 ● 1チューブでなんと 200,000アンプリコンを増幅 ● ターゲットサイズは 5 Mb(イルミナ)、2.5 Mb(Ion PGM) ● ターゲット領域を複数のアンプリコンでカバーし、極めて高いターゲットカバレッジと感度で変異を検出

従来のアンプリコンシーケンスを凌駕する新技術

HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステムの特長

従来のアンプリコンシーケンス

ターゲット領域を複数のアンプリコンでカバー・変異検出の信頼性が向上

ターゲット領域を 1つのアンプリコンでカバー・PCRで入るエラーと変異の区別が困難

* 4-400 kbの範囲で、異なる 12デザインについてエンリッチメントを行い、

HiSeq、MiSeq、Ion PGM いずれかのシステムで解析を行った結果に基づきます。

サイズの異なるライブラリ間でも安定して高いパフォーマンスが得られます。

HaloPlex

gDNA 225 ng

Hands-on time はわずか 2-3 時間

HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステム

t

HaloPlex のパフォーマンスデザイン可能なサイズ 5 Mbまで(Ion PGM 対応キットは 2.5 Mbまで)Specificity(% basses on-target) > 99% *Uniformity(coverage at 10% of mean) > 90% *

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ターゲット領域

ターゲットとするフラグ メントと相補的な部分

I n d e x i n g P r i m e r Cassette:シーケンシングに必要な配列を含む共通部分

HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステムのしくみ■ Step 1. gDNA を 8組の制限酵素で消化

■ Step 2. HaloPlex プローブとのハイブリダイゼーション

■ Step 3. ビーズ精製とライゲーション

シンプルな 4ステップの実験で、ターゲット領域のエンリッチメントが完了し、すぐにシーケンシング可能なライブラリが完成します。

サンプル DNA を 8組の制限酵素で double-digestionヒトゲノムの制限酵素切断パターンはデータベースから予測可能なので、ライブラリをデザインする時に、ターゲット領域を含んでいて長さが 100-400 bp程度になるフラグメントが in silico で選択され、HaloPlex プローブがデザインされます(右図)。

制限酵素処理した gDNAフラグメントの両端と HaloPlex プローブがハイブリダイズし、環状構造を形成します。

HaloPlex プローブは、濃縮されるフラグメントに対応した数がキットに含まれ、最大で 200,000種類になります。

濃縮するフラグメントの数の分、HaloPlex プローブと gDNA フラグメントの環状構造が形成されます。

マグネットビーズに結合させたままの状態で、ライゲーション反応により、ターゲット DNA と Indexing Primer Cassette は環状 1本鎖 DNA になります。

ストレプトアビジン・マグネットビーズで、ターゲット DNA/HaloPlex Probe のハイブリッドを捕集し、ハイブリダイズしなかった DNA を洗いで除去します。

リードの累積

エンリッチされたフラグメントの両端から得られるリード

ターゲット領域

制限酵素で消化したフラグメント

全てのプローブに共通、シーケンシングに必要な配列部分

20数bp相補的

20数bp相補的

■ Step 4. ターゲット断片の PCR 増幅アルカリ性の溶出バッファで HaloPlex プローブと、環状 1本鎖 DNA を解離させ、回収します。

共通配列部分に対するプライマーで PCR 増幅を行います。最大 200,000アンプリコンを 1組のプライマーで増幅します。PCR 産物を AMPure ビーズ精製し、最終産物はそのままシーケンシングに進めることができます。

HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステム

■ Step 5. シーケンシング・データ解析それぞれのプラットフォームにあわせたメソッドでシーケンシングし、データ解析を行います。

HaloPlex で得られるデータは、ターゲット領域に対して複数のアンプリコン由来のリードが積み重なった様式になります。

無料のソフトウェア SureCall も利用可能!

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カスタムデザインキット:デザインの過程でターゲット領域のカバー率が判明両鎖キャプチャや FFPE オプションなど多彩な機能

■ 製品一覧:HaloPlex Target Enrichment Panel製品名 反応数 イルミナ対応 IonPGM 対応

HaloPlex Cancer リサーチパネル 16 G9903A G9904A96 G9903B G9904B

HaloPlex 心筋症リサーチパネル 16 G9908A G9909A96 G9908B G9909B

・96反応キットは NGS自動化システムに対応

■ 製品一覧:HaloPlex Target Enrichment カスタムキット製品名 ターゲットサイズ 反応数 型番

HaloPlex Target Enrichmentイルミナ対応

1-500 kb(プローブ数 <20 K) 48 G9901C96 G9901B

501 kb - 2.5 Mb(20 K=<プローブ数 <200 K) 48 G9911C96 G9911B

2.6 - 5 Mb(20 K=<プローブ数 <200 K) 48 G9921C96 G9921B

HaloPlex Target EnrichmentIon PGM 対応

1 - 250 kb(プローブ数 <20 K) 48 G9902C96 G9902B

251 kb - 2.5 Mb(20 K=<プローブ数 <200 K) 48 G9912C96 G9912B

・カスタムキット:全キット NGS自動化システムに対応

HaloPlex Cancer リサーチパネル遺伝子リストABL1 CDKN2A FANCA FGFR3 JAK3 NOTCH1 PTEN STK11AKT1 CSF1R FANCC FLT3 KIT NPM1 RET TP53ALK CTNNB1 FANCF HRAS KRAS NRAS RUNX1 VHLAR EGFR FANCG IDH1 MAP2K1 PDGFRA SMAD4 WT1

ATM ERBB2 FGFR1 IDH2 MAP2K4 PIK3CA SMOBRAF ERBB4 FGFR2 JAK2 MET PIK3R1 SRC

HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステム

t

シンプルで直観的に操作できる SureDesign により、簡単にカスタムデザインの作成が可能です。選択されたアンプリコンの位置から、ターゲット配列のカバー率が自動的に計算されます。

● 両鎖キャプチャのオプション…FFPE 処理による片側 Strand の Artifact を除去● FFPE対応オプション…断片化の進んだ FFPE サンプルのカバー率を向上させるため、より短いサイズのアンプリコンが自動的に選択されます。

イルミナシーケンサで 1 kb-5 Mb、IonPGM で 1 kb-2.5 Mbの領域で自由な設計が可能です。

HaloPlex Cancer リサーチパネル● がん関連 46遺伝子の合計 526ホットスポットを網羅的に解析

● FFPEサンプルに対応したデザイン● Research Use Only

カタログキット:設計済みの Panel で手軽に変異解析

HaloPlex 心筋症リサーチパネル● 肥大型心筋症、拡張型心筋症、不整脈原性右室心筋症関連の 34遺伝子を含むデザイン

● Uppsala 大学 Dr. Berivan Baskin との共同開発● Research Use Only

その他の設計済み疾患リサーチパネルについては、お問い合わせください。

HaloPlex 心筋症リサーチパネル遺伝子リストTTR MYH6 TNNI3 CSRP3 DES LDB3 RBM20 DSG2

MYL2 MYH7 TPM1 PLN LMNA ABCC9 TGFB3 DSC2MYL3 MYBPC3 TTN TNNC1 SGCD SCN5A DSP TMEM43

MYOZ2 TNNT2 ACTN2 TCAP VCL TAZ PKP2 JUPNEXN ACTC1

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SureCall:SureSelect/HaloPlex 専用データ解析ソフトウェア(Human のみ)FASTQ ファイルの入力で変異を同定、手間いらずの解析フロー

■ 取り扱えるデータ・解析 PC の必要条件● SureSelect(Human のみ), HaloPlex でターゲットエンリッチメントを行って取得したシーケンシングデータ● FASTQ 形式または BAM 形式● イルミナプラットフォーム、Ion PGM ともに対応● OS:Windows 7、RAM推奨 12 GB(アライメントを行う場合)、8 GB(アライメント済みデータの解析の場合)ハードディスクの空き容量:500 GB以上

■ SureCall のワークフローデザインファイルおよびデータファイルを指定して解析を開始

  ▼

レポート

Mutation Table と Genome Viewer

SureCall は、SureSelect, HaloPlex データ解析をウィンドウズ PC上で手軽に行うことができるソフトウェアです。

シーケンシング結果の FASTQ ファイルと、SureSelect, HaloPlex のデザインファイルを入力すれば、アライメント・変異検出・変異のカテゴリー分類までの一連の解析を自動で実施します。

  ▼Mutation Table と Genome Viewer で結果が表示されます。 必要に応じて、カテゴリー分類の変更や、コメントの追加ができます。

  ▼結果をコンパクトにまとめた レポートファイルを SureCall が作成します。

アダプター配列除去、BWA もしくは TMAP によるアライメント      ▼Mutation 検出、Mutation のインパクトの解析、QC レポートの作成       ▼Mutation のカテゴリ分類、Mutation Table の出力、ブラウザ形式での表示

SureCall による自動プロセス

SureSelect / HaloPlex ターゲットエンリッチメントシステム

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Bravo NGS 自動化システム

8~ 96 検体の各種 NGS ライブラリ調製をフレキシブルに自動化

次世代シーケンサの応用が生活習慣病や癌などのより一般的な疾患に広がるにつれ、効率的な多検体処理の要望が高まっています。

アジレント・テクノロジーではリキッドハンドリングプラットフォーム Bravo をベースにしたシステムで、NGS ライブラリ調製の自動化 ソリューションを提供しています。

Bravo NGS オプション A は、より安価で場所をとらないシステムで、HaloPlex の自動化の他に、カスタム AMPure 精製-可変ボリューム、カスタム AMPure サイズセレクション、ランダムピッキング、SureSelect のステップ毎の自動化が可能です。特に AMPureXP 精製については、DNA 量、ビーズ量、溶出量、インキュベーション時間を可変で設定できるため、各種の NGS ライブラリ調製プロトコルにおいて、ビーズ精製ステップを 8-96検体の単位で効率よく自動化できます。

Bravo NGS Workstation オプション B では、 Bravo に、スタッカーとロボットハンドラーを備えたベンチセルと、各種プレートを 20までセット可能なミニハブステーションを追加したシステムを用い、断片化された DNA の精製からライブラリ調製、SureSelect のハイブリダイゼーション、精製の個々のステップを最大 96 検体まで自動で行います。8検体単位で自動化処理を行うことができますが、SureSelect 自動化用の試薬は、 24, 48, 96 検体単位で使用したときに、過不足なく使用できるように量が調整されています。アジレント Strand Specific RNA ライブラリ調製試薬にも対応します。3日間で最大 96検体まで処理できるので、真のハイスループット NGS 解析を実現することができます。世界および日本で数多くの導入、稼働実績があり、安心してお使いいただけます。またオプションとして、イルミ

ナ社 TruSeq の PCR-Free DNA-Seq、RNA-Seq ライブラリ調製や種々の条件の AMPureXP ビーズ精製、各社 NGS プロトコルにも対応しています。

アジレント NGS 自動化システムの特徴● 手間と時間のかかる NGS ライブラリ調製を自動化● 自動化システムのハードウェアと NGS ライブラリ調製用の試薬を 1社から提供。便利で安心な一本化されたサポート窓口。

● バリデーション済みの自動化プロトコルを提供。● わかりやすい和文マニュアル● 自動化システムの使用量に合わせた専用の試薬を発売。● 世界および日本での豊富な稼働実績に基づく高い信頼性。● SureSelect XT, HaloPlex, Strand Specific RNA に対応● SureSelect QXT の自動化についてはお問い合わせください。

Agilent Bravo NGS オプション A(AMPure ビーズ精製の自動化のカスタマイズ、

SureSelect のプロトコルのステップ別自動化、HaloPlex の自動化アプリケーションに対応)

Agilent Bravo NGS Workstation オプション B(SureSelect/HaloPlex およびその他の NGS ライブラリ調整)

有償追加プロトコル

● イルミナ TruSeq PCR-Free DNA-Seq● イルミナ TruSeq Nano DNA-Seq● イルミナ TruSeq RNA-Seq● イルミナ TruSeq ChIP● NEBNext ChIP-Seq● Epicentre Ribo-Zero● KAPA HTP Library Prep ● PacBio 10 kb Template Prep● 各種 AMPureXP ビーズ精製● AMPureXP ビーズによるサイズ選択その他の試薬のプロトコルについては個別に ご相談ください。

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Bravo NGS 自動化システム

マニュアル操作と自動化システムによる SureSelect ライブラリ調製の比較NGS 自動化システムを用いると、コバリス断片化処理、サーマルサイクラーによる PCR 反応とハイブリダイゼーション、およびバイオアナライザ /TapeStation を用いたサンプル QC 以外のステップのほとんどを、自動化することができます。下記に SureSelect のライブラリ調製にかかる時間を、マニュアル操作と自動化システムで比較した例を示します。マニュアルでは一度に一人で 96 検体のサンプルを処理することは不可能ですが、自動化システムを用いることにより、1回のランで最大 96 検体を処理できるようになるので、サンプルのスループットは飛躍的に向上します。

マニュアル操作によるサンプル前処理 自動化されたサンプル前処理

操作時間処理済みサンプル / 日の最大値

操作時間処理済みサンプル / 日の最大値

ライブラリ調製 375 20 25 96プリキャプチャ PCR 90 20 13 96ハイブリダイゼーションの準備 60 20 7 96キャプチャ 210 20 20 96ポストキャプチャ PCR 90 20 40 96合計時間(分) 825

20~ 40 / 週105

192 / 週合計時間(時間) 13.75 1.75

ターゲットエンリッチメントのためのマニュアル操作によるサンプル前処理と自動的なサンプル前処理の比較:操作時間と 1週間あたりのスループットの概算

■ 製品型番:SureSelect XT自動化システム対応キット

ライブラリ 製品名 ターゲットサイズ型番

96反応 96反応 Re-Order

Exome

Human V5 50 Mb 5190-6210 5190-6210 Human V5+UTRs 75 Mb 5190-6215 5190-6215Human V5+lncRNA 59.3 Mb 5190-6448 5190-6448Human V5+Regulatory 113.7 Mb お問い合わせください お問い合わせください

Human V5+mtDNA 50 Mb お問い合わせください お問い合わせください

Panel Human Kinome 3.2 Mb 5190-4648

Custom

1 - 499 Kb 5190-4808 5190-48130.5 - 2.9 Mb 5190-4818 5190-48233.0 - 5.9 Mb 5190-4828 5190-4833

2ELIDs(サイズ目安 6.0 - 11.9 Mb) 5190-4838 5190-4843

3ELIDs(サイズ目安 12.0 - 24.0 Mb) 5190-4898 5190-4903

試薬 対応 NGS /機種型番

96反応 480反応

DNA 用:ライブラリ調製試薬を含む

イルミナ社 HiSeq G9641B G9641Cイルミナ社 MiSeq G9642B G9642C

※イルミナ社以外の NGSプラットフォームへの対応また記載以外の製品の自動化対応についてはお問い合わせください。※ 16 種類のバーコードアダプタが含まれています。96 種類のバーコードアダプタが必要な場合はお問い合わせください。

HaloPlex の 48および 96反応用のキットは、マニュアル操作および本自動化システムの両方に対応しています。型番は P.13を参照ください。

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TapeStation より簡便で高速な多検体のライブラリ QC を実現

TapeStation はゲル充填済みの ScreenTape を使用し、DNA や RNA サンプル 16検体をわずか 20分(genomic DNA キットは 25分)で高速分析することが可能です。サンプルは 96Well Plate にセットして、 ScreenTape とチップを入れ替えるだけの操作で、96検体でも 2時間以内で分析が終了します。多検体ライブラリのサイズ確認と定量に

威力を発揮します。

▶ ゲル充填作業不要

▶ DNA サンプルを loading buffer と混ぜるだけ

▶ 各サンプル独立レーンなのでレーン間のクロスコンタミネーションはありません。

▶ DNA サンプル 16 検体をわずか 20 分で高速分析(96 検体でも 2時間以内)

▶ 未使用レーンを後から*利用可能 *2 週間以内

▶ バイオアナライザと同等の感度、分離能

● DNA 用 D1000キット(dsDNA 35 - 1000 bp, 0.1 - 50 ng/µL)

● DNA 用 High Sensitivity D1000 キット(dsDNA 35 - 1000 bp, 75 - 1000 pg/µL)

● Genomic DNA キット(200 - 60,000 bp, 0.5-100 ng/µL)● RNA 用 RNA キット(2 - 500 ng/µL)● RNA 用 High Sensitivity RNA キット(100 - 10,000 pg/µL) 感度はいずれもラダー測定時のものです。

ゲノム DNA の品質確認をより簡便に行いたいというお客様のご要望にお答えするため、より簡便に QC を行えるシステムとして Genomic DNA Kit を開発しました。必要サンプル量は僅か1 µL、バッファと混ぜるだけの簡単なサンプル調製でゲノム DNA の品質確認が行えます。

バイオアナライザ 次世代シーケンサ ライブラリ QC の世界標準DNA や RNA を高い感度で検出、定量できるマイクロチップ型電気泳動バイオアナライザは、次世代シーケンサの DNA-Seq、RNA-Seq、ChIP-Seq など各種アプリケーションのライブラリ QC に広く採用されています。

SureSelect では、コバリス社製 DNA 断片化装置による断片化のサイズ確認、アダプタ付き DNA ライブラリのサイズ確認と定量、最終的にキャプチャされたライブラリのサイズ確認と

定量にバイオアナライザを使用します。 ● DNA1000キット(dsDNA 25 - 1000 bp, 0.1 - 50 ng/µL)● High Sensitivity DNA キット(dsDNA 50 - 7000 bp, 5 - 500 pg/µL)● RNA6000ナノキット(5 - 500 ng/µL)● RNA6000ピコキット(50 - 5000 pg/µL)感度はいずれもラダー測定時のものです。

ライブラリ QC ツール

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Avadis-NGS 次世代シーケンサーの膨大なデータを 解析するためのソフトウェアパッケージ

QPCR NGS ライブラリ定量キット

優れた GUI と直感的でわかりやすい操作で、世界で最も多く使われている遺伝子発現解析用ソフトウェア GeneSpring。Avadis-NGS は、この GeneSpring をベースに開発され、初心者でも使いやすいインターフェースと解析ツール群を備えています。次世代シーケンサーで行うリシーケンスアプリケーションについて研究者を強力にサポートします。

高速サイクル条件下でも、高い感度と再現性を示す新規 Mutant Taq の Brilliant III Ultra-Fast を用い、NGS ライブラリの定量に必要な DNA の Standard や Primer などの試薬を 1つにまとめた便利なキットです。

特にマルチプレックスシーケンスを行う際には、各サンプルのライブ

ラリを正確に定量し、等量に混ぜることが重要なポイントとなります。

SureSelect でキャプチャしたライブラリのみならず、全ゲノムシーケンス用のライブラリの定量にも使うことができます。キットには、84サンプル分の定量 PCR に必要な試薬がまとまっています。

● G4880A QPCR NGS ライブラリ定量キット イルミナ用● G4881A QPCR NGS ライブラリ定量キット AB SOLiD 用

取り扱えるデータ● SAM/BAM 形式のデータ● ELAND の Export 形式のデータ● FASTA/FASTQ 形式のデータ

基本機能● 独自の Aligner によりリファレンスゲノムへのアライメントが可能● ゲノムマネージャーによりゲノム配列や遺伝子のアノテーション管理が可能

● ゲノムブラウザによる結果の閲覧が可能● リードクオリティの評価とフィルタリング機能が可能

対応アプリケーション● DNA Variationゲノム DNA の SNPs・INDEL 検出や、染色体の リアレンジメント等の検出。SNP Effect の評価、 複数サンプルの比較が可能。

● RNA-SeqcDNA からの発現差解析、融合遺伝子、 Splice Variant 等の解析、SNPs 検出

● ChIP-Seq転写因子等の結合領域の予測や 近傍遺伝子のリストアップ

● Small RNA-SeqmiRNA・snRNA・snoRNA 等の Non-codingRNA の解析

Avadis-NGS はデータを生物学的に解釈するためのツールが搭載されています。

● GO 解析: Gene Ontology を使った 遺伝子リストの意味づけ

● GSEA/GSA: BROAD Institute が定義した GeneSet を使った遺伝子リストの意味づけ

ライブラリ QC &データ解析ツール

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販売店アジレント・テクノロジー株式会社[ お問い合わせ窓口 ]

本社 /〒 192-8510 東京都八王子市高倉町 9-1●カストマコンタクトセンタ  0120-477-111mail:email_ [email protected]※仕様は予告なく変更する場合があります。 ※本資料掲載の製品は全て研究用です。 その他の用途にご利用いただくことはできません。

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