معاونت توسعه پژوهش و...

58
ي ل عا ت مه س ب وري ه م ج ا ي م لا س ار ي ا ن هد ب دمات& و خ ي ك* س& ر+ ي وم ل ع گاه* ;pma&ش ب دا ا ور+ پ ا* س دي& ن ج ي& ن درما ي ت* ش ا و ه ا& ر وري< ا ن& ف و* ش ه و* ر+ ي عه وس پ ت& ن عاو م هادي& ن* شH يJ پ ي ن ا ق ي ق ح ت رح ط امه& ن ان ان+ ن ي ن ا ق ي ق ح ت رح ط ;pma&و پ ا& ام خ& ام و ن& ن ا ول :X ئ ش م ري ج م ي گ د ان ون س و م ي ت ت ج م د ی ش ر کت د ;pma&و پ ا& ام خ& ام و ن& ن ا: ان رن ج مر ي ي سا گ د و& ئ ع ا رح : ط ن ي& سار دا خ هاي ه وی س ي ن اسا& ی* ش و ا و& ;pma&مار ن+ پ ا ده کارن& یm کن د ی ل و پ ي& ن وما پ ر کت ا و ن ئm ن ی ش ا هاي& ب* د ر خNDM-1، TEM-1، PER-1 د خ ا ده* س ا مار نr پ& ر ا و ان ی ش ل گ ش& ور م< ي ا ها ان ی ش مار نr پي در ر ست ب ن ا ي& ت من& جام م ا و ه ا ه ی& ر ي و تH کن ر يw سک ب د* روشPCR 1

Upload: lytuyen

Post on 30-Jul-2019

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

بسمه تعالينايراسالمي اجمهوري

زاهواشتي درماني جندي شاپور ادانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهدمعاونت توسعه پژوهش و فن آوري

طرح تحقيقاتي پيشنهادي

طرح تحقيقاتي پايان نامه

دکتر سید مجتبی موسویاندگي مجري مسئول :انام و نام خانو

دگی سایر مجریان :انام و نام خانو

سینتو باکتر بومانیاو شناسایی سویه های جداسازی ن طرح :اعنو زا شده اجدNDM-1، TEM-1، PER-1جد ژنهایاتولید کننده کارباپنماز و

مام خمینیان بستری در بیمارستان های آموزشی گلستان و ابیمارPCRز به روش دیسک ترکیبی و اهوا

93آذر ماه : تاريخ پيشنهاد

محقق گرامي خواهشمند است قبل از تكميل اين پرسشنامه به راهنماي تكميل پرسشنامه و تذكرات توجه فرمایید.

اهواز ، شهر دانشگاهي ،جنب سازمان مركزي دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتينشاني:درماني جندي شاپور اهواز ،

- تلفن:61357 - 15794 - كد پستي 45معاونت توسعه پژوهش و فن آوري ـ صندوق پستي 3361544 ، دور نویس: 3332368

1

Page 2: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

راهنماي تكميل پروپوزال - در بيان مسئله بايد ماهيت و وسعت مسئله، توصيف سابقه مرتبط با موضوع تحقيق، دليل1

انجام اين تحقيق، اهميت موضوع و آنچه محقق تصور می کند با انجام مطالعه در حل مسئله كمكمی کند، مطرح شود.

( ضمن كنكاش در مطالعات قبلي انجام شده مرتبط باLiterature review- در بررسي متون ) 2 موضوع و بحث مختصري درباره آن ها بايد منبع مورد استفاده براي هر موضوع ذكر و به فهرست

منابع و مآخذ ارجاع داده شود. - خالصه روش اجراي طرح بايد حاوي نكات كليدي روش كار باشد به نحوي كه مراحل مختلف را3

از ابتدا تا انتهاي طرح به وضوح ترسيم نمايد . ضمنا بايد توضيح داده شود كه چه داده هایی براييافتن پاسخ به سؤاالت تحقيق الزم است و چگونه

می خواهیم آن ها را جمع آوري و اندازه گيري كنيم . در صورتي كه براي جمع آوري اطالعات ازپرسشنامه اي استفاده می کنید لطفا آن را پيوست نمایید .

كاربردي باشد.–- نوع طرح می تواند، بنيادي ، كاربردي يا بنيادي 4 - نوع مطالعه می تواند پايه، کار آزمایی باليني، اپيدميولوژي توصيفي، مداخله اي، اپيدميولوژي5

تحليلي، كيفي، توليدي تقسيم بندي نمود. : منظور پژوهش هایی است كه در جهت گسترش مرزهاي دانش بدون در نظر- علوم پايه 5-1

گرفتن استفاده علمي خاص براي كاربرد آن انجام می گیرد. : يك پژوهش باليني معموال داراي گروه كنترل است كه هدف آن- کار آزمایی باليني5-2

شناخت و ارزيابي اثر بخشي يك مداخله باليني می باشد. مطالعات باليني قبل و بعد هم شامل اينتعريف می شود.

كه به منظور بررسي شيوه و بروز و ياCross-sectionalمطالعه - اپيدميولوژيك توصيفي: 5-3شناخت عوامل خطر در جامعه انجام می گیرد.

می باشند.Cohort و Cass-control: پژوهش های از نوع - اپيدميولوژيك تحليلي5-4: مطالعه اي است که بر اساس روش های كيفي انجام می شود.- كيفي 5-5 : پژوهشي است كه با بهره گيري از دانش موجود در جهت توليد مواد و وسايل- توليدي 5-6

جديد و يا ارتقاء كيفيت آنچه قبال توليد شده است می باشد. پژوهشي است كه معموال توصيفي- مبتني بر اطالعات بيمارستاني و درمانگاهي:5-7

است و صرفا از اطالعات موجود در پرونده بيماران استفاده می شود. مطالعاتی که صرفا در محیط آزمایشگاه و بر روی حیوانات صورت می گیرد.- تجربی:5-8 مطالعاتی که دارای پیش آزمون و پس آزمون با استفاده از گروه های تجربی و- تجربی:5-9

کنترل بدون انتخاب تصادفی - منظور از نوع فعاليت ، وظيفه اي است كه بر اساس تقسيم كار هر يك4-2- در جدول شماره 6

از اعضاء شركت كننده در تهيه، تدوين و اجراي طرح به عهده دارند ) مديريت طرح، تهيه (…پرسشنامه جمع آوري نمونه انجام آزمايش

-حق الزحمه مربوط به هزينه پرسنلي و حق التحقيق پژوهشگران بر اساس آئين نامه طرح های7پژوهشي منظور گردد.

هزينه هاي پرسنلي منظور گردد.4-2- حق التحقيق محقق و همكاران در جدول 8 - منظور از مالحظات اخالقي مجموعه ي اقداماتي است كه محقق به منظور جلوگيري از امكان9

آسيب و تعرض به حقوق ديگران )جامعه انساني يا غير انساني( انجام می دهد. الزم به ذكر است كه مسائل اخالقي طرح به دليل اهميت، در حوزه معاونت پژوهشي و كميته اخالق در پژوهش مورد

توجه قرار می گیرند.( بنويسيد.Vancouver- منابع و مآخذ مورد استفاده را با استفاده از يك شيوه استاندارد )مثال 10

2

Page 3: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

تذكرات ـ در مواردی که اجراي طرح مستلزم همكاري افراد با سازمان های ديگري باشد، طرح دهنده1

بايستي امضاء افراد يا موافقتنامه كتبي سازمان مربوط را پيوست اين پرسشنامه نمايد. ـ طرح تسليم شده پس از اعالم موافقت نهایی توسط شوراي پژوهشي دانشگاه و عقد قرارداد2

بين معاونت پژوهشي و مجري طرح قابل اجرا خواهد بود. ـ مجري طرح طبق قرارداد ملزم به رعايت كامل مندرجات طرح و ارائه گزارش پيشرفت كار در3

فواصل زماني تعيين شده در قرارداد می باشد. ( داشته باشد،…ـ چنانچه مجري طرح نياز به تغيير مندرجات طرح )بودجه ـ زمان ـ همكاران و 4

تغييرات پس از درخواست كتبي مجري و تصويب در شوراي پژوهشي قابل اجرا خواهد بود. ـ چنانچه انجام طرح پژوهشي در مرحله اي از پيشرفت آن اعم از اينكه به نتيجه نهایی رسيده يا5

نرسيده باشد، منجر به كشف يا اختراع و يا تحصيل حقوق شود مجري طرح طرف قرارداد موظف به معاونت پژوهشي اطالع دهد. حقوق فوق الذکر كه در اثر اجرايبه صورت كتبياست مراتب را

طرح تحقيقاتي ايجاد گرديده است طبق قرارداد متعلق به دانشگاه خواهد بود. ـ در صورت تمايل مجري طرح به انتشار يا ارائه نتايج حاصله در داخل يا خارج از كشور، الزم6

است قبال نظر موافق معاونت پژوهشي جلب گردد. بديهي است كه ذكر حمايت مالي و همكاريمعاونت پژوهشي دانشگاه در انتشارات مذكور الزامي خواهد بود.

ـ چنانچه مجري در هر مرحله از اجراي طرح از ادامه آن منصرف گردد بايد مراتب را به صورت7 كتبي با ذكر داليل مربوط، به معاونت پژوهشي دانشگاه اعالم تا پس از طرح در شوراي پژوهشي

بر اساس قرارداد اقدام گردد.ـ رعايت اصول اخالقي در پژوهش توسط محقق و همكاران الزامي است.8 ـ كليه تجهيزات و لوازم كه از محل اعتبارات پژوهشي تهيه مي شود پس از اتمام طرح بر طبق9

قرارداد به دانشگاه عودت داده خواهدشد.

3

Page 4: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

بخش اول ـ اطالعات مربوط به مجريان و همكاران طرحمجري مسئول :ـ 1ـ1

نام و نام مدركامضا خانوادگی

تحصیلی رشته

تحصیلی مرتبهE-mailهاتلفن همرکد ملیعلمی

دکتر سید

مجتبیموسویا

ن

Ph.Dمیکروب 4590945استادشناسی

2820916313

2848moosavian_ [email protected]

تلفن محلگروه میکروبشناسی–دانشکده پزشکی آدرس محل كاركار

50-33675432522داخلی

نبش خردادمجتمع ایران پارس–خیابان اسفند آدرس منزل3واحد

تلفن محلكار

2522داخلی 50-3367543

شغل و سمتفعلي

دانشیار گروه میکروب شناسی ، عضو مرکز تحقیقات بیماری های عفونی گرمسیری دانشگاه

علوم پزشکی اهواز سازمانمتبوع

دانشگاه علوم پزشکیجندی شاپور اهواز

محل دقيق تلفن محلگروه میکروبشناسی–دانشکده پزشکی اجراي طرح

3330074اجرا

ـ مشخصات سایر مجریان : )راهنمای دوم( )اجباری(2ـ1 نام و نام

مدركامضاتحصیلی

رشتهتحصیلی

مرتبهعلمی

E-mailتلفن همراهکد ملی

4

Page 5: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

خانوادگی

همکار ( )اجباری(– دانشجو – مشاور آمار –ـ مشخصات همكاران اصلي : )مشاور 3ـ1 نام و نام

خانوادگی

مدركامضاتحصیلی

رشتهتحصیلی

مرتبهE-mailتلفن همراهکد ملیعلمی

نوع همكاري

نسیمشمس

دانشجویکارشناسی ارشد

میکروب شناسیپزشکی

40734624دانشجو58

[email protected]

همکاراصلی

5

Page 6: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

ـ فهرست پژوهش های قبلي و مقاالت منتشر شده مجری مسئول :4ـ1

1. Moosavian M., Fathollahzadeh B. , Moazami N. : Bacteriuria due to catheterization in hospitalized patients. Med. J. Islamic Rep. of Iran. 1992, Vol. 6, 2(109-113).

2. Moosavian M., Fathollahzadeh B. , Moazami N. : First Report on Co-infection of Legionellosis and Tuberculosis in Iran. Med. J. Islamic Rep. Of Iran, 1994,Vol. 8(3) : 191-193.

3. Moosavian M. : The survey of pneumonic Legionellosis. Gashtag (In Persian), 1994, Vol. 2, No. 2&3 , 25-26.

4. Moosavian M., Fathollahzadeh B. et al.: Isolation of Legionella pneumophila Serogroups 1, 8 & 10 From Water Sources in Tehran, Iran. Iranian Biomed. J. , 1998,Vol. 2 (2), 83- 87.

5. Moosavian M., Shakoornia Gh. Bacteriological Study of Cerebrospinal Fluid in Hospitalized Suspicious Patients to Meningitis. Pejuhesh in Med. Sci. J. Isfahan Univ. of Med. Sci. (In Persian), 2000, 4(4) : 207-212.

6. Moosavian M., Ghanavati A. : Evaluation of cutaneous infections as a result of Pseudomonas aeruginosa and determination of drug resistance pattern in patients of Ahwaz hospitals. Pejuhesh in Medicine , Shaid Beheshti Univ. of Med. Sci.(In Persian), 2000, 23(4): 293-299.

7. Moosavian M., Khosroshahi N. : Survey of Legionnaires` disease agents in therapeutic equipments and drinking water sources in Ahwaz ,Iran. J. Med. Faculty, Guilan Univ. Med. Sci. ( In Persian), 2004, 13(51): 38-44.

8. Moosavian M., Pordeli H. R. : Survey of Respiratory and Urogenital Infections due to Mycoplasma in the hospitalized patients in Ahwaz Imam Khomeini Hospital ,Iran . J. Kerman Univ. Med. Sci. ( In Persian), 2004, 10(4) :185-192.

9. Moosavian M., Mashali K. : Urinary Tract Infection ( UTI ) due to catheterization and determination of drug resistance patterns of isolated bacteria (in Ahwaz City). J. Med. Sci. Faculty , Hamedan Univ. (In Persian), 2004,11(2):29-34.

10. Tajbakhsh S., Moosavian M., Samarbafzadeh A. et al , Rapid detection of Staphylococcus aureus and Staphylococci genus by fluorescent in situ hybridization (FISH) method. J. of South Med., Bushehr Univ. of Med. Sciences (In Persian) ,2004, 6(2):104-114.

11. Samarbaf-Zadeh A.R., Tajbakhsh S., Moosavian M., et al. Application of fluorescent in situ hybridization (FISH), for detection of Helicobacter pylori. Med. Sci. Monit., 2006; 12(10), CR426-430.

12. Badie F. Moosavian M., Rapid detection of Pseudomonas aeruginosa in clinical samples of burned patients by fluorescent in situ hybridization (FISH). Iranian J. Med. Microbiol. (in Persian), 2008; 1(4): 29-34.

6

Page 7: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

13. Moosavian M.,Tajbakhsh S., Samarbafzadeh A. Rapid detection of clarithromycin-resistant Helicobacter pylori in patients with dyspepsia by

fluorescent in situ hybridization (FISH), compared with E-test. Ann. Saud. Med., 2007;27(2): 84-88.

14. Moosavian M., Hayati K. , A survey of clostridia in the patients with acute diarrhea compared with the control group. Pak. J. Med. Sci. 2008;24(2): 209-212.

15. Tajbakhsh S, Samarbaf-Zadeh AR, Moosavian M., Comparison of fluorescent in situ hybridization and histological method for the diagnosis of Helicobacter pylori in gastric biopsy samples. Med. Sci. Monit., 2008;14 (9):BR183-7.

16. Moosavian M., Darban D. Frequency of isolated Staphylococci species from patients with bacteremia in four hospitals of Ahvaz city. Scientific Med. J. Ahvaz Jundishpur Univ. of Med. Sci. (In Persian),2009;8(1):108-115.

17. Alavi SM., Moshiri N., Moosavian M., Yusefi F., Abbasi E., Seroprevalence of Legionella pneumophila in admitted patients with pneumonia in training hospitals, Ahvaz, Iran. Pak. J. Med. Sci. 2009; 811-816.

18. Moosavian M., Siahpoosh A., Abbasi E., Darabifar H., A Survey of hydro-ethanolic extraction effects of Albizzia lebbeck Bench against the enteric gram-negative and aerobic gram-positive bacilli. Pejuhesh-Sci. J., Arak Univ. of Med. Sci (In Persian), 2010; 13(1):119-126.

19. Gholipour A., Moosavian M., Galehdari H. et al. Cloning and periplasmic expression of peptidoglycan-associated lipoprotein(PAL) protein of Legionella pneumophila in Escherichia coli. Jundishapur J. Microbiol. 2010; 3(1): 1-9.

20. Moosavian M., Darban D. Genomic fingerprints analysis of coagulase-positive and negative Staphylococci isolated from patients with bacteremia by rep-PCR method. Afr. J. Microbiol Res. 2010; 4(5): 354-9.

21. Moosavian M., Wadowsky R. Analysis of genomic fingerprint patterns of Coagulase- Negative Staphylococci strains isolated from pediatric patients blood cultures using rep-PCR. Jundishapur J. Microbiol. 2010; 3(4): 147-153.

22. Moosavian M., Dashti A. Isolation and identification of Legionellosis agents from fishponds, swimming pools and cooling towers in Khuzestan province, Iran. Jundishpur J. Microbiol. 2011; 4(4): 209-215.

23. Moosavian M., Motamedi H., Maleki S., Shahbazian N. Comparison between prevalence of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum in women with

7

Page 8: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

urogenital infections by Multiplex PCR and Culture Methods. J. Med. Tabriz Univ. Med. Sci. (In Persian), 2011; 33(5): 91-97.

24. Moosavian M., Deiham B. Distribution of TEM, SHV and CTX-M genes among ESBL-Producing Enterobacteriaceae isolates in Iran. Afr. J. Microbiol Res. 2012; 6(26): 5433-5439.

25. Gholipour A., Moosavian M., Galehdari H., Makvandi M., Mard SA., Rajabi-Memari H., Imani R., Soleimani N., Alvandi AH. Optimization of gene expression

and purification of Legionella pneumophila peptidoglycan associated lipoprotein recombinant protein. J. Shahrekord Univ. Med. Sci.(In Persian), 2012;14(3):1-11.

26. Talaiezadeh A., Borhani M., Moosavian M., Rafiei A., Neisi Ak., Hajiani E., Alavi SM., Nikkhu A. Prevalence of Helicobacter pylori evaluated by stool antigen test

in Khuzestan province since September to October 2009, south-west of Iran: a population based study. Jundishapur J. Microbiol. 2013; 6(2): 100-104.

27. Rostami1 S., Moosavian M., Shoja1 S., Torabipour1 M., Farshadzadeh Z. Comparison of mecA gene-based PCR with CLSI cefoxitin and oxacillin disc diffusion methods for detecting methicillin resistance in Staphylococcus aureus clinical isolates. AJMR, 2013; 7 (21): 2438-2441.

28. Maleki S., Motamedi H., Moosavian SM., Shahbaziyan N. Frequency of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum in Females With Urogenital Infections and Habitual Abortion History in Ahvaz, Iran; Using Multiplex PCR. Jundishapur J Microbiol, 2013; 6(6): e10088.

29. Rahimzadeh M., Moosavian M., Shoja S. Determination of Pseudomonas aeruginosa Producing Metallo-Beta-Lactamases Isolated from Clinical Specimens by Imipenem-EDTA Combined Disk Method in Ahwaz, Iran. Pejuhesh-Sci. Zanjan Univ. Med. Sci. (In Persian), 2013; 21(87): 73-82.

30. Shoja S., Moosavian M., Peymani A., Tabatabaiefar MA., Rostami1 S., Ebrahimi N. Genotyping of carbapenem resistant Acinetobacter baumannii isolated from tracheal tube discharge of hospitalized patients in intensive care units, Ahvaz, Iran. Iran. J. Microbiol. 2013; 5(4): 315-322.

31. Parhizgari N., Moosavian M., Sharifi A. Antibiotic resistant pattern of methicillinresistant and sensitive Staphylococcus aureus isolated from patients durining 2009-2010, Ahvaz, Iran. Armaghane-danesh, Yasuj Univ. Med. Sci. J.(YUMSJ), (In Persian), 2013; (Dey 1392), 18(13): 758-767.

32. Khaleghi M., Navidpour L., Sepehrizadeh Z., Nazari P., Pourmand MR., Samadi N., Moosavian M., Shahverdi AR. The Sensitization of Legionella pneumophila to some antibiotics by reserpine and anti-Legionella effects of different benzofuranone derivatives. J Med Bacteriol. 2013; 2 (1, 2): pp. 35-40.

8

Page 9: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

33. Pourmand MR., Shahidi K., Nazari P., Moosavian SM., Samadi N., Pourmand Gh., Shahverdi AR. The Different antibacterial impact of silver nanoparticles against Legionella pneumophila compared to other microorganisms. J. Sci. Islamic Rep. Ir. 2013; 24(4): 313 – 319.

34. Gholipour A., Moosavian M., Makvandi M., et al. Development of an indirect sandwich ELISA for detection of urinary antigen, using Legionella pneumophila PAL protein. World J Microbiol Biotechnol. 2014; 30: 1463–1471.

35. Panahibazaz MR., Moosavian M., Khataminia Gh., Feghhi M., Yazdi F., Abbasi-Montazeri E. Sub-conjunctival injection of antibiotics vs. povidone-iodine drop on bacterial colonies count in phacoemolsification cataract surjery. Jundishapur J Microbiol, (in press).

36. Moosavian M. Ahmadkhosravi N., Shoja S. Survey of frequency in extended-spectrum beta-lactamaseproducing Enterobacteriaceae and determination of the antibiotic resistant pattern in clinical isolates in hospitalized patients in teaching hospitalsof Ahvaz University of Medical Sciecences by combination Disk. Jundishapur Sci Med J. (In Persian), (in press).

37. Shoja S., Moosavian M., Nashibi R., Rostami S. Post Neurosurgical Meningitis due to Colistin Heteroresistant Acinetobacter baumannii. Jundishapur J Microbiol, (in press).

بخش دوم ـ اطالعات مربوط به طرح پژوهشيعنوان طرح پژوهشي:ـ1ـ2

9

Page 10: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

الف(فارس

: ي

سینتو باکتر بومانی تولید کنندهاجداسازی و شناسایی سویه های ناز بیمارا شده اجدPER-1 و NDM-1 ، TEM-1جد ژن های اکارباپنماز و

ز به روشاهوامام خمینی ابستری در بیمارستان های آموزشی گلستان و PCRدیسک ترکیبی و .

ب( انگليسي

:

Isolation and identification of carbapenemase producing Acinetobacter baumannii containing NDM-1, TEM-1andPER-1genes in hospitalized patients in the hospitals of Golestan and Emam Khomeini , Ahvaz , Iran by combination Disk and PCR.

ـ نوع طرح: 2ـ2بنيادي ـ كاربردي كاربردي بنيادي

ـ مقدمه و معرفي طرح )بيان مسئله( : 3ـ2

اسینتو باکترها کوکوباسیل های گرم منفی، هوازی وغیرتخمیر کننده ای هستند که به طــور شــایع در عفونت های بیمارستانی نقش دارند ودر طی سه دهه اخیربه عنــوان یکی از مهمــترین پــاتوژن هــای

میلی مــتر ، بــدون2 تــا 1(. انــدازه کلــنی آنهــا بین 2و1فرصت طلب بیمارستانی مطرح شده اند ) پیگمان وصاف تا موکوئیدی است . اسینتو باکترهــا اکســیداز منفی هســتند ، توانــایی احیــا نیــترات را ندارند اندول منفی و کاتاالز مثبت هستند . این باکتریها بر روی محیط آگــار خونــدار معمــوال همولــیز

درجه سانتی گراد رشد می نمایند. اســینتو باکترهــا در طــبیعت انتشــار44ایجاد می کنند و در دمای (. از محیـط هــای مختلـف مثـل:2وسیعی دارند و در منـابع آب و خـاک بـه وفـور یــافت می شـوند )

غذاهای فریز شده، هوای بیمارستان ها و بسیاری از وسایل مــورد اســتفاده در بیمارســتان جــدا می شوند. این باکتریها ارگانیسم هایی هستند که قادرند در محیط هــای بیمارســتانی بخصــوص در بخش

های مراقبت های ویژه عفونت های شدید گوناگونی ایجاد کنند. روز در4درصــد و31روز در رطوبت نســبی 11مقاومت باالی این باکتری نسبت به شرایط محیطی)

درصــد(امکــان حضــور این بــاکتری را در محیــط هــای بیمارسـتانی افــزایش داده10رطوبت نســبی است. در ترشحات انسانی مثل: خلط، ادرار، مدفوع و ترشحات واژن یافت می شوند . این باکتری

% بزرگســاالن و7% افــراد ســالم و ناحیــه فارنژیــال 25به صــورت فلــور نرمــال در ســطح پوســت (. گزارشات نشان می دهند که اسینتو بــاکتر بومــانی عامــل عفــونت3 و 2نوزادان یافت می شود)

های متعدد از جمله: باکتریمی، پنومونی، مننژیت، عفونت های مجــرای ادراری و عفــونت هــای زخم (. و به علت خاصیت کلینیکی قابــل توجــه آن بــویژه طی ســال هــای اخــیر و توانــایی آن در4است )

ــا دارو هــای ضــد کسب مقاومت دارویی به عنوان یک میکروارگانیسم تهدید کننده نسبت به درمان ب(. 5میکروبی در نظر گرفته می شود )

میزان کلونیزاسیون اسینتو باکتر بومانی در افراد بستری شــده در بیمارسـتان بــویژه آنهــا کـه مــدت بستری شدن آنها به درازا کشیده شده و یا درمان آنتی بیوتیکی وسیع یا درمان ضد سرطان داشــته

ــد ذاتی6اند در حال افزایش است ) (. مقاومت اسینتو باکتر بومانی به عوامل ضد میکروبی می توان و یا از طریق کسب عوامل ژنتیکی مقاومت باشد. یکی از آخرین خط های درمــانی در برابــر ســویه های مقاوم به دارو،کارباپنم ها)ایمی پنم، مــروپنم، ارتــاپنم( و متالوبتاالکتــام هــا هســتند کــه امــروزه مقاومت در برابر آنها توسعه یافته است . سویه های مقاوم بــه کاربــاپنم اســینتو بــاکتر اولین بــار در

ــد )1991سال باعث طغیان عفونت بیمارستانی شدندکه از کشور های مختلف هم گزارش شده ان (. کرباپنم ها دسته ای از داروهای گروه بتاالکتام هستند. پاتوژن های فرصت طلب مانند اسینتو8و7

باکتر بومانی به علت دریافت ژن های مقاومت آنتی بیوتیــک هــای بتاالکتــام ، بــرای بیمــاران بســتری )آنــزیم هـای بتاالکتامـاز وسـیعESBLsخطرناک می باشند . این نوع مقاومت بـه علت ژن هـای مولد

10

Page 11: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

ــیرد) و5الطیف ( است که انتقال آنها توسط ترانسپوزون ها و پالسمید و یا موتاسیون صورت می گ9.)

ESBLS شامل تعدادی آنزیم های موتاسیون یافتــه هســتند کــه اجــازه هیــدرولیز آنــتی بیوتیــک هــای بتاالکتام وسیع الطیف را میدهند. بتاالکتاماز ها به روش های مختلفی طبقه بندی شده اند که یکی از

است. اساس طبقه بندی در این روش تشابه ساختمانAmblerاین روش ها ، طبقه بندی مولکولی ( تقسیم می شوند .D تا Aپروتئینی آنزیم است و بتاالکتامازها به چهار کالس اصلی)

ESBL گروه Aپالسمید های مربوط به بتاالکتاماز بوده که فقط در باســیل هــای گــرم منفی شــرح : داده شده اند وسبب هیدرولیز پنی سیلین و سفالوسپورین هایی با طیف کم و وسیع می شوند.

ESBL گروه B.شامل متالوبتاالکتاماز هایی هستند که قادر به هیدرولیز کارباپنم ها می باشند : ESBL گروه Cعموما کروموزومی بوده وبا فرکانس مقــاومت بــاال در میــان انتروباکترهــا گــزارش :

شده است.ESBL گروه D، ــوده : بتاالکتامازهایی با قدرت هیدرولیز زیاد بر علیه اکساسیلین و کلوکساســیلین ب

(.11و10اسید کالوونیک به طور ضعیف از فعالیت آنها جلوگیری می کند ) (وNDM-1 بتاالکتامــاز)ژن نیــودهلی متالوبتاالکتامــازBسطح باالی مقاومت بــه کاربــاپنم هــا در کالس

ــیالNDM-1(.حضور ژن 12( وجود دارد )PER-1 و TEM-1 بتاالکتاماز)Aکالس برای اولین بار از کلبسپنومونیه واشریشیا کلی گزارش شد و در پاتوژن های گوناگون از جمله:

Acinetobacter baumaniiEntrobacter cloacaEscheirchia coliKlebsiella pneumoniaPseudomonas aeruginosa

(.13به آناشاره شده است ) بتاالکتاماز ها بوده و به بسیاری از آنتی بیوتیک های بتاالکتام از جملهB متعلق به گروه NDM-1 ژن

بر پالسمیدها و کروموزوم ها تشخیص داده شده است.NDM-1کارباپنم ها مقاوم است. حضور ژن و گزارش شده که انتقال افقی این ژن باعث تــرویج تبــادل مقـاومت در میــان ارگانیســم هــای گــرم

بتاالکتاماز ها تعلق دارند . A به کالس PER-1 و TEM-1(. ژن های 14منفی می شود) شــرح داده1960 بوده کــه در اواســط TEM-1اولین بتاالکتاماز پالسمیدی در باکتریهای گرم منفی ،

و از بــاکتری اشریشــیاTemoneraشده است . این ژن که اولین بار از کشت خون بیمــاری بــه اســم ،TEM-1کلی جدا شده است به نام وی ثبت گردید . طی مدت کمی پس از جداســازی بتاالکتامــاز

این آنزیم در سراسر جهان به سرعت انتشار یافت ، به طــوری کــه امــروزه مقــاومت ناشــی از این آنزیم به عنوان شایعترین مکانیسم مقاومت به داروهای بتاالکتام در باسیل های گــرم منفی شــناخته

ــود ) ــف تیپ 16و15می ش ــاز وســیع الطی ــال PER-1(. بتاالکتام ــه در س ــار1993 ک ــرای اولین ب بــاالترین شــیوع این ژنESBLSشناسایی شد ، از شایعترین تیپ های در اسینتوباکتر بومانی است . ب

(.18و17از کشورهایی مانند ترکیه ، کره جنوبی و چین گزارش شده است ) می باشدPER-1 و NDM-1 ، TEM-1هدف از این مطالعه بررسی حضور ژن های کارباپنمازی نظیر

ها بوده و اطالعات کمی از میزان شــیوع اســینتو بــاکترESBLکه هر کدام متعلق به گروه خاصی از ( در سطح کشور وجود دارد. عالوه بــر این در اهــواز نــیزNDM-1بومانی حاوی بعضی از آنها )نظیر

مطالعه ای روی نوع اخیر صورت نگرفته است.

Literatureـ بررسي متــون 4ـ Review( در صــورت نيــاز می توانیــد از صــفحات ( : اضافي استفاده نمایید

ــه منظــور بررســی تولیــد2004 و همکــاران در ســال Sechiدر مطالعــه -1 ــه کــه ب از کشــور ترکی ایزوله اسینتو باکتر بومــانی کــه از نمونــه هــای مختلــف20 انجام شد ، از PER-1بتاالکتاماز تیپ

11

Page 12: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

PCR بودنــد کــه بــا روش PER-1 درصد ( دارای ژن 65 ایزوله ) 13بیمارستانی جدا سازی شد ، (. 17شناسایی گردیدند )

ــدBusan از 2005 و همکاران در سال Jeongدر مطالعه -2 جمهوری کره که به منظور بررسی تولی انجام شد ؛ از میان بیماران بســتریPCR در اسینتو باکتر بومانی توسط روش PER-1بتاالکتاماز Kasin بزرگساالن بیمارستان دانشگاه ICUدر بخش مورد عفـونت بــا اسـینتو بــاکتر بومـانی10،

(.18 مشاهده شد )PER-1تولید کننده بتاالکتاماز

از چین که به منظور تعیین ژن های مقاومت بــه دارو2010 و همکاران در سال Daiدر مطالعه-3 ایزوله39در ایزوله های اسینتو باکتر از بیماران با عفونت مجرای تنفسی تحتانی انجام شد ، از

درصد ( از13/5 ایزوله )2 و TEM-1 درصد( از نظر ژن 46/38 ایزوله )15اسینتو باکتر بومانی (.19 مثبت شدند )PCRبا روش PER-1نظر ژن

ایزوله اسینتو باکتر بومـانی جمـع آوری شـده134 در تبریز از 2012پیمانی و همکاران در سال -4 از بیماران بستری در بیمارستان مــیزان مقــاومت آنــتی بیــوتیکی را بــا اســتفاده از روش دیســک

درصــد آنهــا بــه مــروپنم69 درصــد از ایزولــه هــا بــه ایمی پنم و 68دیفیوژن بررسی کردند کــه (.20مقاوم بودند)

از شمال غرب ایران که به منظور بررسی شــیوع2012در مطالعه فرج نیا و همکاران در سال -5 ایزولــه اســینتوباکتر بومــانی از100، در اسینتو باکتر بومانی انجام شــد ، از VEBو PERژن های

ــد 70نمونه های خون ، ادرار ، بزاق ، زخم ،مایع پلور و دیگر نمونه ها ESBLS ایزوله از نظر تولی

(.21 مثبت بودند )PER-1 از نظر ژن PCR درصد ( با روش 51 ایزوله )51مثبت بودند و تعداد

از هندوستان کــه بــه منظــور ارزیــابی اورژانســی ژن2013 و همکاران در سال Mishraمطالعه -6NDM-1از اسینتو باکتر بومــانی در میــان نمونــه هــای بــالینی آسپیراســیون تراشــه ، مــایع مغــزی

ایزولــه اســینتو بــاکتر74نخاعی ، زخم ، سواب گلو ، ادرار و خون انجام شد ، نشــان داد کــه از درصــد ( از نظــر10 ایزوله )3 ایزوله نسبت به ایمی پنم مقاوم بودند و از این تعداد 30بومانی

(.22 شناسایی شدند )ERIC-PCRمثبت بودند که با روش NDM-1ژن

از الجزایر که به منظور بررسی شیوع ژن کارباپنماز2013 وهمکاران در سال Mesliدر مطالعه -7NDM-1 ایزوله از گونــه هــای اســینتوباکتر از محیــط بیمارســتانی و بیمــارانی کــه در113بر روی ایزولـه نســبت بــه80 ، هماتولوژی، جراحی و جراحی مغز و اعصــاب انجــام گــرفت، ICUبخش

NDM-1 از نظــر ژن PCR درصد ( بــا روش 2/6 ایزوله )5ایمی پنم مقاوم بودند که از این تعداد (. 23مثبت شدند )

از هندوسـتان کـه بــه منظـور بررسـی شـیوع ژن2013 و همکاران در سال Routrayدر مطالعه -8 از نمونه های بزاق ، آسپیراسیون تراشهMultiplex PCRهای کارباپنماز در اسینتو باکتر به روش

ســویه نســبت بــه45 ســویه اســینتوباکتر 175، زخم ، خون ، ادرار و غیره انجام شد ، از میــان مثبتNDM-1درصــد( از نظــر ژن 31 ســویه )14ایمی پنم مقاومت نشان دادند که از این تعداد

(.24بودند)ــای 2014در مطالعه فالح و همکاران در سال -9 NDM از تهران که به منظور بررسی شیوع ژن ه

، PER ، VEB ، IMP، VIM ایزولــه اســینتو بــاکتر108، در اسینتو باکتر بومانی انجــام شــد ، از ایزولــه از91بومانی از نمونه های ادرار ، زخم ، مجرای نای ، خون ، مایع پلور و دیگر نمونه ها

-PER درصــد ( از نظــر ژن 03/78 ایزولــه )71 مثبت بودنــد کــه از این تعــداد ESBLSنظر تولیــد (.25 جداسازی نشد)Sequencing methods و PCR با روش NDM-1مثبت بودند ولی ژن 1

12

Page 13: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

از ساری کــه بــه منظــور تعــیین الگــوی مقــاومت1393- در مطالعه آهنجان و همکاران در سال 10 ایزوله اسینتو بــاکتر از نمونــه100 انجام شد ، از TEM-1آنتی بیوتیکی و شیوع ژن های بتاالکتامازی

ESBL درصد ایزوله هــا مولــد 24های زخم سوختگی ، تراشه ، سایر زخم ها ، ادرار ، خون و خلط (.26 درصد گزارش کردند )1/79 راTEM-1 فراوانی ژن PCRبودند و با استفاده از روش

13

Page 14: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

( OBJECTIVES & HYPOTHESISـ اهداف و فرضيات )5ـ2(General Objective)- هدف اصلي طرح 2-5-1

ــای جداسازی ، NDM-1و شناسایی سویه های اسینتو باکتر بومانی تولید کننده کارباپنماز واجد ژن هTEM-1وPER-1جدا شده از بیماران بســتری در بیمارســتان هــای آموزشــی گلســتان و امــام خمیــنی

.PCRاهواز به روش دیسک ترکیبی و

(Specific Objectives)- اهداف ويژه طرح 2-5-2

تعیین هویت اســینتو بــاکتر بومــانی در نمونــه هــای بــالینی بیمــاران بســتری در بیمارســتان هــای-1آموزشی گلستان و امام خمینی اهواز

- تعیین فراوانی نسبی ســویه هــای اســینتو بــاکتر بومــانی مولــد کارباپنمــاز در نمونــه هــای بــالینی2بیماران بستری در بیمارستان های آموزشی گلستان و امام خمینی اهواز

- تعیین الگوی حساسیت سویه های اسینتوباکتر بومانی جدا شده از نمونه های بــالینی بیمــاران بــه3روش دیسک دیفیوژن

در ایزوله هــای اســینتوباکتر بومــانی مولــد کارباپنمــاز بــه روشblaNDM-1- تعیین فراوانی ژنوتیپ 4PCR

در ایزوله های اسینتو بــاکتر بومــانی مولــد کارباپنمــاز بــه روشblaTEM-1- تعیین فراوانی ژنوتیپ 5PCR

در ایزوله های اسـینتو بــاکتر بومــانی مولـد کارباپنمــاز بــه روشblaPER-1- تعیین فراوانی ژنوتیپ 6PCR

- اهداف كاربردي2-5-3

با دستیابی به اطالعات مربوط به فراوانی ژنوتیپ های فوق در سویه های اسینتو باکتر بومانی مقاوم به کارباپنم های جدا شده از نمونه های بالینی و انتقال این اطالعات به جامعه پزشکی ، می

توان به پزشکان دست اندرکار درمان این قبیل بیماران در جهت تجویز صحیح و مناسب آنتی بیوتیک های موثر کمک نموده و در نتیجه ضمن جلوگیری از گسترش سویه های مقاوم به کارباپنم

ها ، به درمان موثرتر و قطعی ، عفونت های ناشی از این باکتریها دست یافت.

- فرضيات يا سؤاالت پژوهش :2-5-4

-آیا در بین ایزوله های باکتریایی از نمونه های بالینی بیماران بستری در بیمارستان هــای آموزشــی1گلستان و امام خمینی اهواز اسینتو باکتر بومانی وجود دارد؟

میزان فراوانی نسبی ســویه هــای اســینتوباکتر بومــانی مولــد کارباپنمــاز در نمونــه هــای بــالینی-2بیماران بستری در بیمارستان های آموزشی گلستان و امام خمینی اهواز چقدر است؟

تعیین الگوی حساسیت سویه های اسینتو باکتر بومانی جدا شده از نمونه های بالینی بیماران به-3روش دیسک دیفیوژن چگونه است؟

ــه روشblaNDM-1میزان فراوانی ژنوتیپ -4 ــاز ب در ایزوله های اسینتوباکتر بومانی مولد کارباپنمPCRچقدر است؟

ــه روشblaTEM-1میزان فراوانی ژنوتیپ -5 در ایزوله های اسینتو باکتر بومانی مولد کارباپنمــاز بPCRچقدر است؟

در ایزوله های اسینتو باکتر بومانی مولــد کارباپنمــاز بــه روشblaPER-1میزان فراوانی ژنوتیپ -6PCRچقدر است؟

14

Page 15: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

ـ روش اجراي طرح و انتخاب نمونه 6ـ

- نوع مطالعه:2-6-1اپيدميولوژيك تحليليپايه

كيفياپيدميولوژيك توصيفيتوليديکار آزمایی باليني

مبتني بر اطالعات بيمارستاني و(تجربی) آزمایشگاهیدرمانگاهي

مداخله ای ) نیمه تجربی (

- خالصه روش اجراي طرح و تکنیک های مورد استفاده :2-6-2

ز نمونه های بالینی :اسازی باکتری اتهیه نمونه وجد با مراجعه به بیمارستان های آموزشی گلستان و امام خمینی اهواز ، نسبت به جمع آوری ایزوله های مشکوک به اسینتو باکتر جدا شده از نمونه های بالینی نظیر خون ، ادرار ، آبسه ، ترشحات

تنفسی ، ترشحات زخم و مایع مغزی نخاعی و ... اقدام و این نمونه ها به آزمایشگاه میکروب سپس با استفاده از تست های استاندارد زیر نسبت بهشناسی دانشکده پزشکی منتقل می گردند. تشخیص قطعی ایزوله ها اقدام خواهد شد.

الف( روش های آزمایشگاهی : به منظور خالص سازی و تعیین قطعی ایزوله ها ، نمونه های جمع آوری شده ابتدا بر روی محیط

درجه سانتی گراد به مدت37مکانکی آگارتلقیح گردیده و پلیت های کشت داده شده در حرارت ساعت انکوبه خواهند شد. در صورت مشاهده رشد پس از رنگ آمیزی گرم و مشاهده48-24

کوکوباسیل های گرم منفی با استفاده از کلنی های تک نسبت به انجام تست های بیوشیمیایی ، تست های اکسیداز ، کاتاالز ، کشت بر روی مکانکیTSI (Triple Sugar Iron Agar )استاندارد نظیر

درجه سانتی گراد ، تست سیترات ، مالونات ،42 درجه و 37آگار و انکوباسیون در حرارت های حاوی قند گلوکز اقدام و به اینOF( Oxidative-Fermentative)تست حرکت و کشت بر روی محیط

(. محیط های2ترتیب به صورت مقدماتی ایزوله های اسینتو باکتر بومانی تعیین هویت خواهند شد) آلمان می باشند.Merckمورد استفاده در این تست ها ساخت شرکت

ب( تست حساسیت به آنتی بیوتیک ها : ( و بر اساس دستورالعملKirby-Bauerتعیین حساسیت به روش آگار دیسک دیفیوژن استاندارد )

CLSI(Clinical and Laboratory Standard Instiuteانجام می گیرد. جهت انجام آزمایش از کلنی های )

مک فارلند تهیه می شود و پس از آغشته کردن5/0باکتری سوسپانسیونی مطابق با کدورت سواب استریل با سوسپانسیون باکتری و گرفتن مایع اضافی آن در جدار لوله ، به صورت سفره ای

( پخش خواهد شد سپس دیسک های آنتی بیوتیک به فاصلهMerckبر روی محیط مولر هینتون آگار ) ساعت انکوباسیون در حرارت24استاندارد از همدیگر و از لبه پلیت قرار داده می شوند ، بعد از

درجه سانتی گراد ، قطر هاله عدم رشد اندازه گیری می گردد و نتایج برای هر آنتی بیوتیک37(.27 تفسیر خواهد شد )CLSIمطابق با دستورالعمل

نوع دیسک مختلف ساخت شرکت )11آنتی بیوتیک های مورد استفاده در این بررسی عبارتند از Rosco( که شامل: ایمی پنم )دانمارک µg10( مروپنم ، )µg10( سفپیم ، )µg30( پی پراسیلین ، )

15

Page 16: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

gµ100( سفتازیدیم، )gµ30( سفوتاکسیم ، )gµ30( کولیستین ، )gµ10( سیپروفلوکساسین، )gµ5( جنتامایسین، )gµ10( آمیکاسین، )gµ30( وتتراسیکلین )gµ30می باشند ).

:ESBLSج( بررسی فنوتیپی تولید ( پس از تهیه سوسپانسیونCLSIبا استفاده از روش فنوتیپی دیسک ترکیبی ) روش استاندارد

مک فارلند و کشت بر روی محیط مولر هینتون ، دیسک های سفوتاکسیم /سفوتاکسیم5/0معادل + اسید کالوالنیک و سفتازیدیم / سفتازیدیم + اسید کالوالنیک با فاصله مناسب از هم بر روی

ساعت ، قطر هاله عدم رشد اندازه گیری می18محیط مولر هینتون آگار قرار داده شده و پس از شود که اگر هاله عدم رشد در دیسک های ترکیبی حاوی اسید کالوالنیک نسبت به حالت بدون اسید

میلی متر یا بیشتر افزایش هاله عدم رشد نشان داد ، به معنای مثبت شدن این تست5کالوالنیک ، (.27 است )ESBLSو تایید تولید فنوتیپیک

(:Modified Hodge Testد( بررسی فنوتیپی تولید کارباپنماز )

.Eابتدا از coli ATCC سوسپانسیون با کدورت معادل نیم مک فارلند تهیه کـرده و آن را بـه25922 رقیق نموده سپس با استفاده از سواب از سوسپانســیون رقیـق شـده بــر روی محیــط1:10میزان

مولر هینتون آگار کشت داده خواهد شد. پس از جذب آب توسط محیط ، یک دیســک کاربــاپنم را در مرکز محیط قرارداده، سپس توسط یک لوپ از هر ایزولــه ی مــورد آزمــایش برداشــته و از لبــه ی

ــه35 ساعت در دمای 20پلیت تا نزدیکی دیسک کارباپنم یک خط رسم نموده و پلیت به مدت درج گرمخانه گذاری می شود. بعــد از گذشـت این مــدت زمــان ، نتــایج خوانــده شــده و اگــر در نــزدیکی دیسک کارباپنم و نزدیک بـه خـط کشـت ایزولـه ی مــورد آزمــایش ، انحنـائی در هالـه ی عـدم رشـد مشاهده شد باکتری تولید کننده ی کارباپنمـاز در نظـر گرفتـه می شـود و اگـر هیچ تغیــیری رخ نـداد

(.27تست منفی در نظر گرفته می شود)

و( بررسی مولکولی ژن های کرباپنماز : جهت بررسی مولکوالر ژن های دخیل در مقاومت به کارباپنم ها ، استخراج و : DNAاستخراج دقیقه و10 ( به مدت Boiling method براساس روش جوشاندن کلنی ها ) DNAخالص سازی

دقیقه و در1 ( به مدت rpm 1500استفاده از مایع روئی به دست آمده از سانتریفیوژ با دور باال ) (.برای انجام صحیح مراحل بعدی نیاز به تعیین28 درجه سانتی گراد صورت خواهد پذیرفت(4دمای

استخراج شده می باشد که به این منظور از بیوفتومتر) اپندورف ( میزان جذبDNAمیزان خلوص نانومتر اندازه گیری می شود .260 و 280نور در استخراج شده را بر روی ژل آگارز با درصد پایین آگار کنترل نموده و تا انجام مرحلهDNAکیفیت

- درجه سانتی گراد ذخیره می شوند.20بعدی در

PCR ( Polymerase Chain Reaction ) : بافر از استفاده با ،PCRابتدا Mgcl2، dNTPs، Taq DNA

polymerase نسبت به تهیه Mastermix اقدام نموده و در نهایت با اضافه کردن DNAــده استخراج ش ( ، نسبت بــه تکثــیر ژن1به عنوان الگو و نیز استفاده از پرایمر های اختصاصی ذکر شده در جدول )

،NDM-1هــای TEM-1، PER-1 و OXA-51 ( در دســتگاه ترموســایکلرEppendorf Germanyاقــدام )

16

Page 17: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

درجــه92 در دســتگاه ترموســایکلر بــه این صــورت اســت ، یــک دقیقــه در PCRخواهد شد. واکنش درجه سانتی گراد برای اتصال بــه55سانتی گراد برای جدا شدن دو رشته از یکدیگر ، یک دقیقه در

ــار40 ، سیکل مذبور DNA درجه سانتی گراد برای همانندسازی 72پرایمرها و یک و نیم دقیقه در ب برای شناسایی اســینتو بــاکتر بومــانیOXA-51(. ) وجود ژن 29و18مورد تکرار قرار خواهد گرفت )

ضروری می باشد ، تتدر نتیجه ابتدا بــا شناسـایی و تکثــیر این ژن سـویه هــای اسـینتو بــاکتر بومـانیمشخص می گردند و سپس نسبت به شناسایی و تکثیر سایر ژن ها اقدام خواهد شد(

PER-1 وNDM-1،TEM-1- مشخصات پرایمرهای مورد استفاده برای شناسایی ژن های 1جدول ReferenceProduct Size (bp)Primer Sequences 5ˊ 3ˊGene

(29)353F: TAATGCTTTGATCGGCCTTGR: TGGATTGCACTTCATCTTGG

bla OXA-51

(24)1000F:GCGCAACACAGCCTGACTTTR: CAGCCACCAAAAGCGATGTC

bla NDM-1

(19)861F: ATGAGTTTTCAACATTTTCGR: TTACCAATGCTTAATCAGTG

bla TEM-1

(18)925F:CAGCGCAATCCCCACTGTR: TTAATTTGGGCTTAGGGCAGA

bla PER-1

% و رنگ آمیزی با5/1 با استفاده از ژل آگارز PCRمحصول : PCRلکتروفورز محصوالت ا Gel Document ( Vilberاتیدیوم بروماید جداسازی شده و سپس با استفاده از یک دستگاه

company , French )(29 نسبت به عکس برداری باند های جدا شده اقدام خواهد شد.) Klebsiella که به ترتیب PER-1 و TEM-1در این بررسی از سویه های استاندارد حاوی ، ژن های

pneumoniae 7881 به طور ذاتی حاوی ژن( TEM و )است Pseudomonas aeruginoa ( KOAS)حامل( ()انستیتو پاستور ایران ( می باشند، به عنوان کنترل مثبت و آب مقطر30می باشد( )PER-1ژن

-Klebsiella pneumoniaeATCC BAA استریل به عنوان کنترل منفی این ژن ها و سویه رفرانسوNDM-1( )به عنوان کنترل مثبت برای ژن 2146

Klebsiella pneumoniaeATCC BAA-1706 به عنوان کنترل منفی برای ژن()NDM-1استفاده خواهد (.31شد)

-OXA به عنوان سویه استاندارد برای ژن ATCC 19606همچنین از سویه اسینتو باکتر بومانی با استفاده خواهد شد.51

- روش محاسبه اندازه نمونه و نحوه نمونه گيري :2-6-3 و با توجه به تنوع نسبت ودرصد های فراوانیژن های درصد95با در نظر گرفتن سطح اطمینان

NDM-1 درصد از هندوستان (10 )صفر درصد از تهران و ،TEM-1 (1/79و ) درصد PER-1(03/78 ،RCC وپس از مشورت با مرکز d= 0.08( و در نظر گرفتن دقت 25 و24، 20درصد ( در منابع )

نمونه 151نهایتا جایگزینی اعداد در فرمول زیر تعداد اسینتو باکتر مورد نیاز می باشد.

P = 0.5

17

Page 18: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

d = 0.08z = 1.96

n=(Z¿¿1−α /2)2∗P∗(1−P)

d2 = 1.962∗0.5∗0.50.082 =151¿

- روش های آماري تجزيه و تحليل نتايج: 2-6-4 جهت ارتباط سنجی و مقایسه20 ویرایش SPSSتجزیه وتحلیل با استفاده از آزمون مربع کای و نرم افزار

متغیر های کیفی انجام خواهد گرفت.

18

Page 19: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

- جدول متغيرها:2-6-5

مشخصاتمتغير

مستقل

وابسته

تعريفكيفيكميعملي

مقياس پيوس

اسمگسستهتهي

رتبهاي

اسینتوباکتربومانی

رشد در**محیط کشت

منفی/مثبت

الگویحساسیت

ایجاد هاله**عدم رشد

بر حسب میلیمتر

تکثیر از**OXA-51ژن PCRطریق

bp

تکثیر از**TEM-1ژن PCRطریق

bp

تکثیر از**PER-1ژن PCRطریق

bp

تکثیر از**NDM-1ژن PCRطریق

bp

ـ مالحظات اخالقي : )فرم رضایت نامه در صورت وجود ضمیمه7ـ2گردد (

ندارد.

19

Page 20: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

ـ زمان الزم براي اجراي كامل طرح :8ـ2ف

دير

مدت)ماه

)ماه1

ماه2

ماه3

ماه4

ماه5

ماه6

ماه7

ماه8

ماه9

ماه10

ماه11

ماه12

ماه13

ماه14

ماه15

ماه16

ماه17

ماه18

ماه19

ماه20

ماه21

ماه22

ماه23

ماه24

1

جمع آوری نمونه، تهیه

محیط کشت و کیت ومواد الزم

6

3کشت2

تعیین32فنوتیپ

4 استخراج

DNA تکثیرژن از

PCRطریق

2

5 استخراج

نتایج و آنالیزاطالعات

2

6 آماده سازی مطالب و

تایپاطالعات

2

17جمع 7

20

Page 21: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

بخش سوم ـ اطالعات مربوط به هزينه هاي انجام طرح

؟ آيا براي اين طرح از سازمان های ديگر درخواست اعتبار شدهاستـ 1ـ3 بلي خير

در صورت مثبت بودن جواب لطفا نام سازمان و نتيجه حاصل را ذكر فرمایید.

ـ هزينه پرسنلي با ذكر مشخصات كامل هر نوع فعاليت و حق الزحمه آن ها :2ـ3رديف

نام و نامخانوادگی

نوعفعاليت

مرتبهعلمي

تعدادافراد

ساعا ت

موردنياز

حق الزحم ه در

ساعت

جمع)ريال (

امورکارگر110010000100000یکزیر دیپلمخدماتی

0

جمع هزينه هاي پرسنلي

ـ هزينه آزمایش ها و خدمات تخصصي:) تمام آزمایشات باید در پردیس دانشگاهی انجام گیرد(3ـ3 موضوع

آزمايش يا خدمات

تخصصي

مركز سرويسدهنده

تعداد كلدفعات

هزينه براي هرجمع )ريال(دفعه

21

Page 22: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

جمع هزينه هاي آزمایش ها و خدمات تخصصي

22

Page 23: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

ـ فهرست وسايل غير مصرفي كه بايد از اعتبار اين طرح از داخل يا خارج كشور خريداري شود: 4ـ3ردي شركت سازنده يانام دستگاهف

فروشنده آيا در ايران موجودكشور

است؟ تعداد قيمت كلقيمت واحدالزم

) ريال (

1-100سمپلر

1000 میکرولیتر

Brand153000005300000خیرآلمان

جمع هزينه هاي وسايل :

ـ فهرست مواد و وسايل مصرفي الزم براي اجراي اين طرح كه بايد خريداري شود:5ـ3رديف

نام ماده يا وسيلهمصرفي

شركت سازنده يافروشنده

آيا دركشور ايران موجود

قيمتتعداد يا مقدار الزمواحد

قيمت كل) ريال (

23

Page 24: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

است؟

1Primer سینا6600002640000 جفت باز 4بلهایرانکلون

سویه های استاندارد2 انستیتو پاستورایران

4120000بلهایران04800000

3Taq DNA polymerase سینا5000002000000 ویال4بلهایرانکلون

4dNTPS سینا7000002800000 ویال 4بلهایرانکلون

5DNA Ladder100bp سینا121600 ویال 2بلهایرانکلون

02432000

6Loading Dye سینا101000101000 ویال1بلهایرانکلون

1110000110000بلهایرانغدیراتانول7

محیط کشت مولر8 500 قوطی )1بلهآلمانMerckهینتون آگار

گرمی (330000

03300000

500 قوطی )1بلهآلمانTSIMerckمحیط کشت 9گرمی (

28000002800000

500 قوطی )1بلهآلمانSIMMerckمحیط کشت 10گرمی (

58000005800000

محیط کشت مک11 500 قوطی )1بلهآلمانMerckکانکی آگار

گرمی (260000

02600000

gr 100 980000980000بلهآلمانOFMerckمحیط 12200000200000 لیتر1بلهایرانایرانیH2O2محلول13

24

Page 25: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

gr 25بلهآلمانMerckمعرف اکسیداز14230000

02300000

دیسک های آنتی15Roscoبیوگرام

دانمار1450005800000 ویال40بلهک

8000080000 عدد1بلهایرانسیناالکل16

17Buric Acid سینا گرمی500 بسته )1بلهایرانکلون

)100000

01000000

18Tris سینا گرمی500 بسته )1بلهایرانکلون

)410000410000

سینااتیدیوم بروماید19159000159000 ویال 1بلهایرانکلون

سینا گرمی100آگارز 201255000بلهایرانکلون

02550000

320000320000 رول1بلهایرانPCRSonicکاغذ 211200360000 لوله300بلهایرانSimaxلوله آزمایش2210000100000 بسته10بلهایران پوشدستکش معمولی23130000520000 بسته4بلهایرانMaxدستکش التکس2418000180000 بسته10بلهایرانسپیدپنبه2525000100000 بسته 4بلهچینچینیالم2630000150000 بسته5بلهایرانایرانسواب2795000190000 سری 2بلهایرانالبترونکیت رنگ آمیزی گرم281990001990000 468 کارتن )1بلهایرانالبترون پتری دیش یک بار29

25

Page 26: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

0عددی(cm 10مصرف 180000540000 بسته3بلهایرانAclabسر سمپلر کریستالی30130000390000بسته3بلهایرانغدیرسر سمپلر زرد31130000390000 بسته3بلهایرانغدیرسر سمپلر آبی322000060000 بسته3بلهایرانچشمک دستمال کاغذی33

سینا5/0میکروتیوپ 34330000660000 بسته2بلهایرانکلون

سینا5/1میکروتیوپ 35140000280000 بسته2بلهایرانکلون

طوبی5/0رک میکروتیوپ 36120000240000عدد2بلهایراننگین

طوبی5/1رک میکروتیوپ 37120000240000عدد2بلهایراننگین

38Mgcl2150000600000 ویال4بلهایرانسیناکلون39EDTA173000692000بسته4بلهایرانسیناکلون

114300لیتر1بلهایرانسیناکلون10xبافر4001143000

Roscoدیسک های ترکیبی41دانمار

4000003200000 ویال8بلهک

محیط کشت سیمون42سیترات

شارلو 500 قوطی )1بلهایراناسپانیا

گرمی (365000

03650000

159000 گرم100بلهایرانQuelabمحیط کشت مالونات4301590000

26

Page 27: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

140000 کیلو گرم1بلهایرانMerckگلوکز 4401400000

187500 کیلویی5/2بسته 1بلهایرانMerckلم پارافی4501875000

60000120000حلقه2بلهایرانایرانیچسب اتوکالو462200088000حلقه4بلهایرانایرانیچسب سفید معمولی473000090000عدد3بلهایرانایرانیماژیک48

64020000جمع هزينه هاي وسايل :

27

Page 28: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

ـ هزينه مسافرت )در صورت لزوم(:6ـ3 تعداد و هدف از مسافرت درمقصد

مدت اجراي طرح نوع وسيله

نقليه تعدادمبلغ ) ريال (افراد

انتقال نمونه ها از بیمارستان ها بهآزمایشگاه

11500000تاکسی

جمع هزينه هاي مسافرت

ـ هزينه تايپ و تكثير:7ـ3 تايپ ، تكثير و صحافي گزارش1

ریال1000000) ريال (نهايي

تايپ و تكثير پرسشنامه ) در صورت2 ریال500000وجود ( ) ريال (

ریال1500000جمع هزينه ها ) ريال (

ـ هزینه هایی كه از ساير سازمان ها تأمین خواهد شد؟8ـ3- نام سازمان تأمین كننده اعتبار، مبلغ و نحوه مصرف آن :3-7-1

ـ جمع هزينه هاي طرح: 9ـ3 ریال1000000- هزينه پرسنلي 1-- هزينه آزمایش ها و خدمات تخصصي 2 ریال5300000 - هزينه وسايل غير مصرفي3ریال64020000- هزينه وسايل مصرفي4 ریال1500000- هزينه مسافرت 5 ریال1500000- هزينه تايپ و تكثير6ریال73320000- جمع كل هزینه ها :7- مبلغ تأمین شده توسط سازمان های ديگر8 - باقيمانده اعتبار مورد نياز كه بايد توسط9

معاونت پژوهشي تأمین گردد:

صحت مطالب، ليست وسايل و مواد و هزينه هاي مطالب مندرج در طرح پيشنهاديمورد تأييد می باشد.

امضای مجری مسول : ....................................................................

میلیون ریال می باشد100در صورتی که هزینه طرح باالتر از ـ 10ـ3قسمت زیر را تکمیل فرمایید:

آیا طرح در راستای اولویت های ملی است ؟) لطفا مشخص فرمایید (

28

Page 29: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

اولویت های پژوهشی علوم پایه مصوب شورای عتف) با.1عنوان :.......................................(

اولویت های فن آوری در عرصه سالمت) با.2عنوان :.......................................(

آیا طرح در راستای اولویت های پژوهشی دانشگاه می باشد؟ )لطفا مشخص

.............................................................. )ضمنا لیستفرمایید(اولویت های ملی پیوست فرم پروپوزال می باشد(

ـ تعهدات پژوهشگر:11ـ3پیش بینی می شود که نتایج حاصل از این طرح حداقل منجر به

موارد زیر گردد: پژوهشي داخل يا خارجی ایندکس نوع–چاپ حداقل يك مقاله در يكي از مجالت معتبر علمي

قبیل: از )Index Copernicus, emro, ISC , Cinhalچهار تا سقف هزینه تحقیقاتی طرحهای ریال )بیست میلیون ریال(000/000/20

پژوهشي داخل يا خارجی ایندکس نوع–چاپ حداقل يك مقاله در يكي از مجالت معتبر علمي )طرح های تحقیقاتی با سقف و ...SCOPUS , , Biological, Abstract ، Embaseسه از قبیل:

ریـال )شصـت میلیـون000/000/60 ریال )بیست میلیـون ریـال( تـا 000/000/20هزینه بین (ریال

پژوهشــي داخــل يــا خــارجی اینــدکس–چاپ حداقل يك مقاله در يكي از مجالت معتبر علمي ــایتهای Pubmed) نــوع یــک و دو( در س ، ISIطرحهــای تحقیقــاتی بــا ســقف هزینــه بین(

ریال )یکصد میلیون ریال(000/000/100 ریال )شصت میلیون ریال( تا 000/000/60 پژوهشــي داخــل يــا خــارجی اینــدکس–چاپ حداقل يك مقاله در يكي از مجالت معتبر علمي

ISIشده در سایت Impact Factor یا مجموع (.باالتر از یک IFطرح هــای )مقاالت باالتر از یک ریال )یکصد میلیون ریال(000/000/100تحقیقاتی باالتر از سقف هزینه

اختراع و نوآوري و يا بومي سازي فن آوريتغيير در سياست گذاري و مديريت خدمات بهداشتي- درمانيتوليد در صنايع علوم پزشكي و فرآورده هاي دارويي و غذايي

كاهش هزينه هاي درمانبهبود كيفيت آموزش، تشخيص و درمان بیماری ها

پیشگیری از بروز بیماری ها محل امضاي معاونمحل امضاي مجري مسئول

یارئیسپژوهشي دانشكدهمرکز تحقیقات

محل امضاي معاونپژوهشي دانشگاه

اطالعات ديگر مربوط به طرح–بخش چهارم ـ مشكالت اجرائي احتمالي در انجام طرح و روش حل مشكالت : 1ـ4 ( :Referencesمنابع و مأخذ ) ـ 1ـ4

29

Page 30: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

1-Asadollahi P, Akbari M, Soroush S, Taherikalani M, Asadollahi K, Sayehmiri K, et al. Antimicrobial resistance patterns and their encoding genes among Acinetobacter baumannii strains isolated from burned patients. Burns. 2012;38(8):1198-20

2-Mahon CR, Lehman DC, Manuselis G. Textbook of D M. 4th ed. Elsevier Mosby, Pennsylvania. 2011pp.489-90.

3-Allen DM, Hartman BJ. Acinetobacter species. In: Mandell GL. Bennett JE, Dolin R (eds).Principles and Practice of Infectious Disease 6th ed. Elsevier, Churchill Livingstone, USA. 2005; chapter 219 , pp. 2632-5.

4-Ali A, Botha J, Tiruvoipati R. Fatal skin and soft tissue infection of multidrug resistant Acinetobacter baumannii: A case report. Int J Surg Case Rep. 2014;5(8):532-6.

5-Kempf M, Rolain J-M. Emergence of resistance to carbapenems in Acinetobacter baumannii in Europe: clinical impact and therapeutic options. Int J Antimicrob. 2012;39(2):105-14.

6-Reddy T, Chopra T, Marchaim D, Pogue JM, Alangaden G, Salimnia H, et al. Trends in antimicrobial resistance of Acinetobacter baumannii isolates from a metropolitan Detroit health system. Antimicrob Agents chemother. 2010;54(5):2235-8.

7- Michalopoulos A F, Alagas ME. Treatment of Acinetobacter infections. Expert Opin Pharmacother.2010;11(5):779-88.

8-Hsueh PR, Teng LJ, Chen CY, Chen WH, Yu CJ, Ho SW, et al. Pandrug-resistant Acinetobacter baumannii causing nosocomial infections in a university hospital, Taiwan. EmergInfec Dis. 2002;8(8):827-32.

9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al. Tow distinct clones of carbapenem resistant Acinetobacter baumannii isolates from Korean hospitals. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009;64(4):389-95.

10-Ambler RP. The structure of β-lactamases. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 1980;289(1036): 321-31.

11-Mesa RJ, Blanc V, Blanch AR, Cortes P, Gonzalez JJ, Lavilla S, et al. Extended-spectrum beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae in different environments (humans, food, animal farms and sewage). J Antimicrob Chemother. 2006;58(1):211-5.

12-Chen Y, Zhou Z, Jiang Y, Yu Y. Emergence of NDM-1-producing Acinetobacter baumannii in China. J Antimicrob Chemother. 2011;66(6):1255-9.

13-Sowmiya M, Umashankar V, Muthukumaran S, Madhavan HN, Malathi J. Studies on New Delhi Metallo-Beta-Lactamse-1 producing Acinetobacterbaumannii isolated from donor swab in a tertiary eye care centre, India and structural analysis of its antibiotic binding interactions. Bioinformation. 2012;8(10):445.

30

Page 31: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

14-Rafei R, Dabboussi F, Hamze M, Eveillard M, Lemarie C, Mallat H, et al. First report of blaNDM-1-producing Acinetobacter baumannii isolated in Lebanon from civilians wounded during the Syrian war. Int J Infect Dis. 2014;21:21-3.

15-Bou G, Oliver A, Martinez-Beltran J. OXA-24, a novel class D beta-lactamase with carbapenemase activity in an Acinetobacter baumannii clinical strain. Antimicrob AgentsChemother. 2000;44(6):1556-61.

16-Nordmann P, Guibert M. Extended spectrum P β-lactamases in Pseudomonas aeruginosa. JAntimicrob Agent Chemother.1998; 42(2):128-131.

17-SechiAbcdefg LA, KaradenizliBC A, DeriuBC A, ZanettiFG S, Kolayli F, Balikci E, et al. PER-1 type beta-lactamase production in Acinetobacter baumannii is related to cell adhesion. Med Sci Monit. 2004;10(6):184.

18-Jeong SH, Bae IK, Kwon SB, Lee K, Yong D, Woo GJ, et al. Investigation of a nosocomial outbreak of Acinetobacter baumannii producing PER-1 extended-spectrum beta-lactamase in an intensive care unit. J Hosp Infect. 2005;59(3):242-8.

19-Dai N, Li DZ, Chen JC, Chen YS, Geng R, Hu YH, et al. Drug-resistant genes carried by Acinetobacter baumanii isolated from patients with lower respiratory tract infection. Chin MedJ(Engl). 2010;123(18):2571-5.

20-Peymani A FS, Nahaei M, Sohrabi N, Abbasi L. Evaluation of Clonal relationship of Multidrug Resistance Acinetobacter baumannii in Imam Reza Hospital, Tabriz, Iran. J Infect Dis. 2012;58:7-12

21-Farajnia S, Azhari F, Alikhani MY, Hosseini MK, Peymani A, Sohrabi N. Prevalence of PER and VEB Type Extended Spectrum Betalactamases among Multidrug Resistant Acinetobacter baumannii Isolates in North-West of Iran. Iran J Basic Med Sci. 2013;16(6):751.

22-Mishra S, Sen MR, Upadhyay S, Bhattacharjee A. Genetic linkage of blaNDM among nosocomial isolates of Acinetobacter baumannii from a tertiary referral hospital in northern India. Int J Antimicrob Agents. 2013;41(5):452-6.

23-Mesli E, Berrazeg M, Drissi M, Bekkhoucha SN, Rolain JM. Prevalence of carbapenemase-encoding genes including New Delhi metallo-beta-lactamase in Acinetobacter species, Algeria. Int JInfect Dis. 2013;17(9):e739-43.

24-Routray A, Lavanya P, Soniya R, Madhavan R. Multiplex PCR for genes encoding prevalent OXA and NDM-1 Carbapenemases in Acinetobacter. J Pharmacol Res. 2013;7:324-26.25-Fallah F, Noori M, Hashemi A, Goudarzi H, Karimi A, Erfanimanesh S, et al. Prevalence of blaNDM, bla PER, bla VEB, bla IMP, and bla VIMgenes among Acinetobacter baumanniiisolated from two hospitals of Tehran, Iran. Scientifica (Cario). 2014;2014:245162

26-Ahanjan M, Kholdi S, Rafiei A. Antibiotic-resistance Patterns and Frequency of TEM and CTX Type Extended-spectrum β-lactamases in Acinetobacter Clinical Isolates. J Mazandaran Univ MedSci. 2014;24(116).

27- CLSI. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; 24th informational supplement. CLSI document M100-S24. Wayne. PA.2014.

31

Page 32: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

28- - Doyle D, Peirano G, Lascols C, Lloyd T, Church DL, Pitout JD. Laboratory detection of Enterobacteriaceae that produce carbapenemases. J Clin Microbiol. 2012;50(12):3877-80.

29- Turton JF, Woodford N, Glover J, Yarde S, Kaufmann ME, Pitt TL. Identification of Acinetobacter baumannii by detection of the blaOXA51-like carbapenemase gene intrinsic to this species. J Clin Microbiol. 2006;44(8):2974-6

30- Vali P, Shahcheraghi F, Seyfipour M, Zamani MA, Allahyar MR, Feizabadi MM. Phenotypic and genetic characterization of carbapenemase and ESBLs producing gram-negative bacteria (GNB) isolated from patients with cystic fibrosis (CF) in Tehran Hospitals. J Clin diagn Res. 2014;8(1):26.

31- Limbago BM, Rasheed JK, Anderson KF, Zhu W, Kitchel B, Watz N, Munro S, Gans H, Banaei N, Kallen AJ. IMP-producing carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae in the United States.J Clin Microbiol. 2011;49(12):4239-45.

خالصه : ) در این قسمت خالصه ای از طرح شامل عنوان، اهداف ویژه وروش کار آورده شود.(

(:General Objective)هدف اصلي طرح ــای جداسازی ، NDM-1و شناسایی سویه های اسینتو باکتر بومانی تولید کننده کارباپنماز واجد ژن ه

TEM-1و PER-1جدا شده از بیماران بستری در بیمارسـتان هـای آموزشـی گلسـتان و امـام خمیـنی PCRاهواز به روش دیسک ترکیبی و

(:Specific Objectives)اهداف ويژه طرح

- تعیین هــویت اســینتو بــاکتر بومــانی در نمونــه هــای بــالینی بیمــاران بســتری در بیمارســتان هــای1آموزشی گلستان و امام خمینی اهواز

- تعیین فراوانی نسبی سویه های اسینتو باکتر بومانی مولد کارباپنماز در نمونه های بالینی بیماران2بستری در بیمارستان های آموزشی گلستان و امام خمینی اهواز

32

Page 33: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

- تعیین الگوی حساسیت سویه های اسینتوباکتر بومانی جدا شده از نمونه هـای بـالینی بیمـاران بــه3روش دیسک دیفیوژن

PCRدر ایزوله های اسینتوباکتر بومانی مولد کارباپنماز به روش blaNDM-1- تعیین فراوانی ژنوتیپ 4 در ایزوله های اســینتو بــاکتر بومــانی مولــد کارباپنمــاز بــه روشblaTEM-1- تعیین فراوانی ژنوتیپ 5

PCR در ایزوله های اســینتو بــاکتر بومــانی مولــد کارباپنمــاز بــه روشblaPER-1- تعیین فراوانی ژنوتیپ 6

PCR

ز نمونه های بالینی :اسازی باکتری االف( تهیه نمونه و جد با مراجعه به بیمارستان های آموزشی گلستان و امام خمیــنی اهــواز ، نســبت بــه جمــع آوری ایزولــه های مشکوک به اسینتو باکتر جدا شده از نمونه هــای بــالینی نظــیر خــون ، ادرار ، آبســه ، ترشــحات تنفسی ، ترشحات زخم و مایع مغــزی نخــاعی و ... اقــدام و این نمونــه هــا بــه آزمایشــگاه میکــروب

سپس با استفاده از تست های استاندارد زیر نسبت بــهشناسی دانشکده پزشکی منتقل می گردند. تشخیص قطعی ایزوله ها اقدام خواهد شد.

به منظور خالص سازی و تعیین قطعی ایزوله ها ، نمونه های جمع آوری شده بر روی محیط مکانکی 24-48 درجــه ســانتی گــراد بــه مــدت 37آگار تلقیح گردیده و پلیت های کشت داده شده در حرارت

ساعت انکوبه خواهند شد. در صورت مشاهده رشد پس از رنگ آمیزی گرم و مشــاهده کوکوباســیل اقـدام و بــه اینهای گرم منفی با استفاده از کلنی های تک نسبت به انجام تسـت هـای بیوشـیمیایی

ترتیب به صورت مقدماتی ایزوله های اسینتو باکتر بومــانی تعــیین هــویت خواهنــد شــد. محیــط هــای آلمان می باشند.Merckمورد استفاده در این تست ها ساخت شرکت

ب( تست حساسیت به آنتی بیوتیک ها : ( و بــر اســاس دســتورالعملKirby-Bauerتعیین حساسیت به روش آگار دیسک دیفیــوژن اســتاندارد )

CLSI .انجام می گیرد

:ESBLSج( بررسی فنوتیپی تولید ــد تولیــد CLSIبا استفاده از روش فنوتیپی دیسک ترکیبی )روش استاندارد بررســی میESBLs ( تایی

گردد.

(:Modified Hodge Testد( بررسی فنوتیپی تولید کارباپنماز ) ( و قرار دادن دیسک کارباپنم در محیط کشت مولر هینتون آگار وMHTبا استفاده روش فنوتیپی )

دستور العمل مربوطه تایید تولید کارباپنماز بررسی می گردد.و( بررسی مولکولی ژن های کرباپنماز :

جهت بررسی مولکوالر ژن های دخیل در مقاومت به کارباپنم ها ، استخراج و :DNAاستخراج دقیقه و10 ( به مدت Boiling method براساس روش جوشاندن کلنی ها ) DNAخالص سازی

دقیقه و در1 ( به مدت rpm 1500استفاده از مایع روئی به دست آمده از سانتریفیوژ با دور باال ) درجه سانتی گراد صورت خواهد پذیرفت . برای انجام صحیح مراحل بعدی نیاز به تعیین4دمای

استخراج شده می باشد که به این منظور از بیوفتومتر) اپندورف ( میزان جذبDNAمیزان خلوص نانومتر اندازه گیری می شود .260 و 280نور در استخراج شده را بر روی ژل آگارز با درصد پایین آگار کنترل نموده و تا انجام مرحلهDNAکیفیت

- درجه سانتی گراد ذخیره می شوند.20بعدی در

PCR ( Polymerase Chain Reaction ) : ابتدا با استفاده از بافرPCR، Mgcl2، dNTPs، Taq DNA polymerase نسبت به تهیه Mastermix اقدام نموده و در نهایت با اضافه کردن DNAاستخراج

( ، نسبت به تکثیر1شده به عنوان الگو و نیز استفاده از پرایمر های اختصاصی ذکر شده در جدول )

33

Page 34: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

( اقدامEppendorf Germanyدر دستگاه ترموسایکلر ) OXA-51 و NDM-1، TEM-1، PER-1ژن های درجه92 در دستگاه ترموسایکلر به این صورت است ، یک دقیقه در PCRخواهد شد. واکنش

درجه سانتی گراد برای اتصال به55سانتی گراد برای جدا شدن دو رشته از یکدیگر ، یک دقیقه در بار40 ، سیکل مذبور DNA درجه سانتی گراد برای همانندسازی 72پرایمرها و یک و نیم دقیقه در

برای شناسایی اسینتو باکتر بومانیOXA-51(. ) وجود ژن 28و18مورد تکرار قرار خواهد گرفت ) ضروری می باشد ، در نتیجه ابتدا با شناسایی و تکثیر این ژن سویه های اسینتو باکتر بومانی

مشخص می گردند و سپس نسبت به شناسایی و تکثیر سایر ژن ها اقدام خواهد شد(

% و رنگ آمیزی با5/1 با استفاده از ژل آگارز PCRمحصول :PCRلکتروفورز محصوالت ا , Gel Document ( Vilber companyاتیدیوم بروماید جداسازی شده و سپس با استفاده از یک دستگاه

French ).نسبت به عکس برداری باند های جدا شده اقدام خواهد شد Klebsiella که به ترتیب PER-1 و TEM-1در این بررسی از سویه های استاندارد حاوی ، ژن های

pneumoniae 7881 به طور ذاتی حاوی ژن( TEM و )است Pseudomonasaeruginoa ( KOAS)حامل( ()انستیتو پاستور ایران ( می باشند، به عنوان کنترل مثبت و آب مقطر30می باشد( )PER-1ژن

-Klebsiella pneumoniaeATCC BAA استریل به عنوان کنترل منفی این ژن ها و سویه رفرانسوNDM-1( )به عنوان کنترل مثبت برای ژن 2146

Klebsiella pneumoniaeATCC BAA-1706 به عنوان کنترل منفی برای ژن()NDM-1استفاده خواهد (.31شد)

-OXA به عنوان سویه استاندارد برای ژن ATCC 19606همچنین از سویه اسینتو باکتر بومانی با استفاده خواهد شد.51

34

Page 35: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

تاييد نهايي طرح در شوراي گروه :تاريخ : ........../............./ .................

حاضرين : دکتر ....................................................................................

امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

دکتر ....................................................................................امضا.....................................................

پروپوزال خانم/ آقای ............................................................... مقطع ................................... رشته ............................... در

و با هزینه ...........................................................13تاریخ .........../............/.............. به تصویب اعضای هیئت علمی گروه ........................................................ رسید. ریال

.........................................................نام و نام خانوادگی و امضای مدیر گروه

تاييد نهايي طرح در شوراي پژوهشي13تاريخ : ................./..................../................دانشكده :

حاضرين :

35

Page 36: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

نام و نام خانوادگی و امضای معاون پژوهشی دانشکده پزشکی ............................................1پیوست

پروژه هاي مصوب دانشگاه در حال حاضر شامل موارد زير می باشد:تأثيرات گرما و ريزگردها بر سالمت.1(TBتوبركلوزيس ).2ديابت.3آترواسكلروزيس.4كانسر.5سالمت مادر و نوزاد.6ناشنوايي.7توليد واكسن و داروهاي جديد.8

2پیوست اولویت های فن آوري در عرصه سالمت:

فن آوري توليد آنتي بادي مونوكلونال.1فن آوري توليد پروتئین های نوتركيب انساني.2فن آوري توليد واکسن های انساني.3فن آوري روش های تشخيص مولكولي.4فن آوري هاي كاتترها، بالن ها و استنت هاي قلبي، ارولوژي و لنزهاي تماسي و داخل چشمي.5 و شتاب دهنده هايCT Scan و MRIطراحي و ساخت دستگاه های پيشرفته تخصصي شامل .6

خطي پزشكيROتوليد فايبر با تكنولوژي نانو جهت استفاده در فيلترهاي همودياليز و .7توليد ماشین های دياليز خانگي و موبايل )در ابعاد مينياتوري(.89.

طرح ها و پروژه هاي ملياولويت پژوهشي علوم پايه مصوب شوراي عالي عتف

مطالعات مولكولي بیماری های واگير با شيوع، مرگ و مير و هزينه باال1

مطالعات مولكولي و ايمونولوژيك در زمينه توليد واكسن و درمان های نوين )منوكلونال آنتي2بادي(

36

Page 37: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

بررسي ژنتيك مولكولي بیماری های شايع غیرواگیر )با تأكيد بر تاالسمي، هموفيلي، اختالالت3شنوايي و بينايي، نورودژنراتيو، قلب و عروق با تأكيد بر تشخيص ، درمان و بازتوانی(

مكانيسم سلولي - مولكولي و ژنتيكي مقاومت های دارويي4

هاي تشخيصي نوين درغربالگری و تشخیص های دقيقها و روشمطالعات مرتبط با تهيه كيت5،.....(PGDزودرس بیماری ها )مانند

بررسي ژنتيك، پاتولوژي و بيولوژي مولكولي تومورها به منظور تشخيص، عملكرد و درمان6تحقيقات در زمينه سلول های بنيادي )به منظور تشخيص، نحوه عملكرد و درمان(7

مطالعه و تحقيق در مورد سنتز آنزیم ها، اگزوپلي ساكاريدها، هورمون ها، فاكتورهاي انعقادي8و ... با كاربرد در پزشكي

ايمني شناسي پيوند عضو و پروتز9درد و مکانیسم های كاهش آن10ژن درماني11

مطالعه و شناخت ايمونولوژيك جمعيت سالم و بيمار با تأكيد بر انواع بدخيمي و اختالالت12اتوايمون

فارماكوژنوميكس13مطالعات سلولي مولكولي و ژنتيك ناباروري14مطالعات ترانستژنيك به منظور شناخت بیماری ها، مقاومت دارويي15ايمونوژنتيك بیماری های آلرژيك16مطالعات مرتبط با بيوسنسورها17ايمونو درماتولوژي18مطالعه سينتيك آنزیم ها19مطالعات در زمينه سیگنال های سلولي20

چک لیست کنترل پروپوزال طرح های تحقیقاتی مرکز ارسال-1

کننده : ....................................................................................نوع طرح :-2

فوقPh.Dدکتری حرفه ای کارشناسی ارشد دستیاری تخصصی طرح تحقیقاتی

جداول مشخصات مجری مسئول و مجریان و همکاران کامل و امضا شده است :-3بله خیر

37

Page 38: معاونت توسعه پژوهش و فنآوريproposal.ajums.ac.ir/Files/Research/4136-2015225141511.docx · Web view9-Park YK, Choi JY, Jung SI, Park KH, Lee H, Jung DS, et al

موارد نقص نوشتهشود:.....................................................................................................

....................جداول هزینه ها کامل شده است : بله خیر-4

موارد نقص نوشتهشود : ...................................................................................................

......................... هزینه طرح : ................................................................................4-1

ریال ضمائم ) پیوست ها ( :-5

صورتجلسه شورای پژوهشی گروه با قید مبلغ مصوب بلی5-1خیر صورتجلسه شورای پژوهشی نهایی دانشکده با قید مبلغ مصوب بلی5-2خیر پرسشنامه طرح ) در صورت وجود( بلی5-3خیر متن رضایت نامه از بیماران بلی5-4خیر اصالح شده پروپوزال بلیCD آخرین 5-5خیر نظریه داوران بلی5-6خیر جوابیه مجری بلی5-7خیر

- پروپوزال طرح تحقیقاتی پس از انجام اصالحات مورد نظر داوران توسط مجری1تذکر و تایید شورای پژوهشی گروه یا دانشکده در صورتجلسه آورده شود .

الصاق نظرات داوران و پروپوزال اصالح شده ضروری می باشد . – 2تذکر نام داوران و محل خدمت : تاریخ دریافت نظرات تاریخ تائید اولیه-6

تاریخ تائید نهاییالف : داوران خارج از دانشگاه :

دکتر...........................................................دکتر..................................................................

دکتر..........................................................دکتر .................................................................

ب : داوران داخل دانشگاه : دکتر...........................................................

دکتر............................................................... دکتر...........................................................

دکتر ..............................................................

38