1

Etapa analítica

2

Distribución de los tiempos en las fases del proceso analítico

Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B.Samples: from the patient to the Laboratory. 3rd revised edition. 2003. Weinheim

3

• El conjunto de actividades necesarias para realizar una medición es un proceso de medida. Los procesos de

medida que tienen lugar en el laboratorio de bioquímica clínica son de naturaleza

diversa y se fundamentan en la química analítica, la

inmunología y la biología molecular.

Fuentes Arderiu X.,Castiñeiras Lacambra M.J. y Queraltó Compañó J.M. Bioquímica clínica y patología molecular . Vol 1. 2da Edic. Editorial RevertéS.A. Barcelona - 1998

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Técnica (principio) de medida: base científica en la que se fundamenta la medición espectrometría de absorción molecular

Método de medida: descripción genérica del proceso (medición de glucosa en sangrePor espectrometría visible usando hexoquinasa y la reacción de Trinder.

Procedimiento de medida: cuando el proceso se detalla lo suficiente como para poder realizar la medición

Fuentes Arderiu X.,Castiñeiras Lacambra M.J. y Queraltó Compañó J.M. Bioquímica clínica y patología molecular . Vol 1. 2da Edic. Editorial Reverté S.A. Barcelona - 1998

Algunas definiciones

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Análisis de la muestra.Qué medimos en el laboratorio?

• En el laboratorio clínico se miden

magnitudes • Son atributos mensurables de los

componentes de los fluidos biológicos Cuando se indica que se mide glucosa u otro componente, se sobreentiende que lo que se mide es alguno de sus atributos. (concentración de sustancias, de masa, …)

6

Magnitud: Es toda propiedad de los cuerpos que se puede medir. Por ejemplo: temperatura, velocidad, masa, peso, etc.

Medir: Es comparar la magnitud con otra similar, llamada unidad, para averiguar cuántas veces la contiene.

Unidad: Es una cantidad que se adopta como patrón para comparar con ella cantidades de la misma especie. Ejemplo: Cuando decimos que un objeto mide dos metros, estamos indicando que es dos veces mayor que la unidad tomada como patrón, en este caso el metro.

http://www.quimicaweb.net/ciencia/paginas/magnitudes.html

Otras definiciones

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(ver diapos del principio para que completen estas que

siguen)

• Las unidades del sistema métrico decimal, son las más utilizadas en el laboratorio.

• cgs, MKS

• Hacia 1960 se acepta el sistema Internacional de Unidades (SI) como un sistema alternativo. La literatura científica, las publicaciones de investigación y otros estudios expresan sus datos en unidades SI, por lo cual es imprescindible su instrumentación.

Unidades de medida

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Magnitud Nombre Símbolo

Longitud Metro m

Masa Kilogramo kg

Tiempo Segundo s

Temperatura Kelvin K

Cantidad de sustancia

Mol mol

Actividad catalítica

Katal Kat

Volumen Metro cúbico m3

Densidad Kilogramo/metro cúbico kg/m3

Velocidad Metro por segundo m/s

Concentraciónde sustancia

Mol por metro cúbico mol/m3

The International System of Units (SI) (8 edición). International Bureau of Weights and Measures (BIPM). 2006.

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Cantidad de sustancia: Unidad: mol (mol)Los moles miden el número de átomos o moléculas que existen en realidad en un objetoEl número real de entidades elementales presentes en un mol es el número de Avogadro En una definición menos formal, al igual que una docena de partículas son doce de estas partículas, un mol de partículas son 6,022 x 1023 (el número de Avogadro) de estas partículas. El mol se usa como contador de unidades, como la docena (12) o el millar (1000).

En un mol de una sustancia hay 6,022 x 1023 partículas de la misma.

http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/contratapa/aprendiendo/capitulo5.htm

Actividad catalítica: Unidad: katal

Un katal se define como la actividad catalítica responsable de la transformación de un mol de compuesto por segundo. Kat= mol/s

Nombre Símbolo Potencia

microkatal μkat 10-6 kat

nanokatal nkat 10-9 kat

http://www.ecured.cu/index.php/Katal

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Analito U.Convencional U.SI

Bilirrubina Colesterol

Glucosamg% mmol/m3

Enzimas U/L kat/m3

Glucosa 70 – 110 mg/dl 3,9 – 6,1 mmol/dm3

ALAT (GPT) M: 7-30 U/L 0,12-0,5 μKat/dm3

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Calibradores y sueros controlCalibrador•Posee un valor asignado establecido por el fabricante, se utiliza para estandarizar el método o el instrumento. Nos permite calcular los valores de las muestras de los pacientes

Suero control•Material estable, con concentraciones y actividades de los distintos componentes del suero, preparado a base de suero humano, o animal y componentes artificiales. Se le ha asignado estadísticamente un valor x y un intervalo de + 2DS. Se usa para monitorear las condiciones de trabajo diario para valorar precisión y exactitud.

12

Cualitativo: expresado en valores de escala nominal, cuando son palabras o números considerados solo como signos ej: amarillo ámbar; Rh+, no reactivo.

Semicuantitativo: expresado con valores de escala ordinal ej: abundante; +++

Cuantitativo: se expresa a través de una escala de números racionales ej: 50 mol/L

Fuentes Arderiu X.,Castiñeiras Lacambra M.J. y Queraltó Compañó J.M. Bioquímica clínica y patología molecular . Vol 1. 2da Edic. Editorial Reverté S.A. Barcelona – 1998 p7

Expresión de resultados

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Para poder interpretar con fines diagnósticos un valor medido de una magnitud biológica de un paciente es imprescindible conocer uno o más valores de esa magnitud medidos en individuos similares y compararlos. Debido a esta necesidad surge el concepto de valor de referencia biológico.

Un valor de referencia biológico es un valor medido de una magnitud particular obtenido con fines comparativos en un individuo —llamado individuo de referencia— que cumple unos requisitos pre - establecidos.

Si no se indica lo contrario, al hablar de valores de referencia biológicos se supone que se trata de una población de individuos sanos, que si realmente es así se denominan valores de referencia fisiológicos.

Valores de referencia

14Roca P., Oliver J.,Rodriguez A.M. Bioquímica. Técnicas y métodos. Editorial Hélice. 2003. Madrid

La selección de la metodología depende de varios factores

• Finalidad (detectar o cuantificar)

• Disponibilidad de la muestra

• Tipo de muestra

• Disponibilidad de instrumental

• Tiempo de procesamiento

• Costos

La metodología analítica

15

La metodología analítica

1. Métodos químicos2. Métodos físicos3. Métodos enzimáticos4. Métodos inmunológicos5. Métodos de BM.

16

Los métodos de análisis bioquímicos deben

permitir determinar la existencia de una

molécula en presencia de otras que se

encuentran en la misma muestra.

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Métodos químicos

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19

Métodos físicos

20

Métodos enzimáticos

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Métodos inmunológicos

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23

Como seleccionamos el procedimientos de medida?

El estudio de laboratorio adecuado debe cumplir con criterios de:

• aplicabilidad dan como resultado la rapidez con la que el médico puede obtener el resultado por lo que en gran medida depende de ellos que una prueba pueda realizarse en forma urgente, mientras que un elevado grado de complejidad o un costo elevado por la rareza de la prueba puede obligar a que la prueba se deba referir a un laboratorio especializado.

• Los criterios de confiabilidad, por su parte, son aquellos que permiten tomar decisiones médicas con un alto grado de certidumbre.

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Aplicabilidad

• Oportunidad • Costo • Seguridad • Complejidad

Confiabilidad• Precisión• Exactitud• Sensibilidad• Especificidad

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Es sinónimo de reproducibilidad, representa la capacidad del método de obtener el mismo resultado, en la misma muestra; en una serie de determinaciones se mide a través del coeficiente de variación porcentual (CV%).Se la evalúa en el Control Calidad Interno(CCI).

Precisión

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• Es la relación que existe entre el resultado encontrado y el valor verdadero.

• La veracidad de los resultados que emite el laboratorio sólo puede ser garantizada cuando se participa en programas Inter-laboratorios (PEEC)

Exactitud

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http://www.medigraphic.com/anuncios/pdfs/terres/Cap3.pdf

Individuo 1

1461411491431461451452,71,9

Individuo 2

1391411421391371401391,91,3

Individuo 3

1401351381341321381363,02,2

MediaDSCV

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La habilidad de un test para identificar correctamente a los que SI tienen la enfermedad

Una prueba con alta sensibilidad tendrá pocos falsos negativos

Desde el punto de vista analítico, la sensibilidad depende del método para detectar concentraciones mínimas de un analito, de esta manera podemos decir que los métodos inmunoenzimáticos (ELISA) son más sensibles que los de aglutinación para la detección de antígenos.

Sensibilidad

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La habilidad de una prueba para identifica correctamente aquellos quienes no tienen la enfermedad.

Una prueba con alta especificidad tendrá pocos falsos positivos.

En el enfoque analítico, se trata de la capacidad del método de detectar y cuantificar el analito en estudio sin dar falsos positivos a través de lo que conocemos como interferencias o “reacciones cruzadas”.

Especificidad

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• Valor predictivo positivo:Es la probabilidad de padecer la enfermedad

si se obtiene un resultado positivo en el test.

• Valor predictivo negativo:Es la probabilidad de que un sujeto con un

resultado negativo en la prueba esté realmente sano.

Junto con la sensibilidad y especificidad son indicadores de calidad de un test. Valoran la capacidad predictiva de un test.

Valores predictivos

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• Relaciona la sensibilidad y la especificidad de una prueba en un solo índice, no varía con la prevalencia.

• Esto permite utilizarlo como índice de comparación entre diferentes pruebas para un mismo diagnóstico

La razón de probabilidad positiva (RPP): probabilidad de tener la enfermedad en oposición a no tenerla,teniendo un resultado positivo del test.

La razón de probabilidad negativa (RPN): probabilidad de no tener la enfermedad en oposición a tenerla, teniendo un resultado negativo del test.

Razón de probabilidades

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IV Congreso Argentino de la Calidad en el Laboratorio Clínico – BsAs – 2006

34González de BuitragoJ.M.Técnicas ymétodos de laboratorio clínico. 3era edicion.2010. Barcelona p 21-25

Un kit o equipo de reactivos es un conjunto de dos o mas reactivos que se emplean para determinar una sustancia y se suministran juntos en un envase con las instrucciones del procedimiento.

Los métodos más usados para obtener agua de buena calidad son: Destilación y Desionización

Kits reactivos y agua

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No existen métodos 100% sensibles, específicos, precisos y exactos, ya que por lo general observamos que conforme aumenta la sensibilidad se reduce la exactitud, la precisión, la especificidad y viceversa.

Estas fronteras se han ido rompiendo gradualmente con el surgimiento de los más avanzados inmunoensayos y más recientemente con el advenimiento de la biología molecular.

Conocer los criterios de confiabilidad y aplicabilidad, así como las fortalezas y las debilidades de las pruebas diagnósticas permite hacer una mejor indicación e interpretación de los resultados de los estudios.

Algunas reflexiones

Materiales comunes a todos los laboratorios

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Materiales comunes a todos los laboratorios

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• Heladera• Freezer• Baño maría• Escritorio• Pc• Material de vidrio• Material descartable• Pipetas automáticas• Estufas de secado• Balanzas• Centrífugas • Consumibles• M.O.• Cronómetros• Drogas y reactivos

Instrumentación y equipamiento

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Errores etapa analítica

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•REACTIVOS(incluyendo agua)• pureza • preparación • estabilidad • almacenamiento

.•TIPO DE MATERIAL Y SU LIMPIEZA.

•MEDICION DE VOLUMENES.

•MEZCLADO.

•TIEMPO Y TEMPERATURA DE REACCION.•INTERFERENCIA/ESPECIFICIDAD.

Errores etapa analíticaInstrumental a)manejo adecuado

b)mantenimiento c)calidad

d)estabilidad electrónica

e)resolución óptica

f) linelidad

1. Identifique la técnica, la metodología y el procedimiento utilizado en el / los

reportes científicos analizados.

2. Identifique los errores analíticos probables de su laboratorio. Qué medidas

adoptaría para que no ocurran?

3. Escriba la cita bibliográfica del reporte científico analizado (según normas

de publicación de Revista Veterinaria)

4. Resuelva el punto 2 del instructivo del T.F.I Prácticas a realizar. (Un mínimo de 3

pruebas que realizará y la técnica, la metodología y el procedimiento que empleará para

realizar cada una de ellas.)

5. Resuelva el punto 7 del instructivo del T.F.I. Equipamiento básico necesario.

(Características técnicas, criterios de selección, costos, etc)

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Actividad de articulación teoría - práctica