1.2 基因工程的基本操作程序

四个基本步骤：四个基本步骤：

11 ）目的基因的获取）目的基因的获取

22 ）基因表达载体的构建）基因表达载体的构建

33 ）将目的基因导入受体细胞）将目的基因导入受体细胞

44 ）目的基因的检测与鉴定）目的基因的检测与鉴定

一、目的基因的获取

• 目的基因主要是指 ______________________

• 获取目的基因的常用方法① 从基因文库中获取

② 利用 PCR 技术扩增目的基因

③ 通过 DNA 合成仪用化学方法直接人工合成

编码蛋白质的基因

基因文库基因组文库

部分基因文库（如 :cDNA 文库）

1. 基因文库的概念及分类

将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。

（一）从基因文库中获得目的基因

2. 基因文库的构建方法

供体细胞中的 DNA

许多 DNA 片段

运载体

限制酶

与载体连接

受体细胞

产生特定性状

导入

目的基因分离

(1)基因组文库 ----含该生物的所有基因

IMNIMN 基因组文库的构建基因组文库的构建 基因组文库的构建基因组文库的构建

DNA 聚合酶

目的基因的mRNA

杂交双链( 单链 RNA/ 单链

DNA)

单链 DNA

反转录酶

核酸酶 H

双链 DNA( 目的基因 )

(2)cDNA 文库的构建（反转录 DNA ）

（二）利用 PCR 技术扩增目的基因

（二）利用 PCR 技术扩增目的基因

① 概念： PCR 全称为 _______________ ，是一项 在生物 ____ 复制 _____________ 的核酸合成技术 ③ 条件： ___________ 、 _______________ 、 ___________ 、 ___________

② 原理： __________

④ 方式：以 _____ 方式扩增，即 ____ （ n 为扩增循 环的次数）⑤ 结果：

多聚酶链式反应体外 特定 DNA 片

段DNA 复制模板 DNA 四种脱氧核苷酸

一对引物DNA 聚合酶 指数 2n

使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增

（二）利用 PCR 技术扩增目的基因

IMNIMN

过程：过程： 过程：过程： 变性、退火、延伸三步曲变性、退火、延伸三步曲变性、退火、延伸三步曲变性、退火、延伸三步曲

高温变性高温变性高温变性高温变性

低温退火低温退火低温退火低温退火中温延伸中温延伸中温延伸中温延伸

IMNIMN

(( 三三 ). ). 通过通过 DNADNA 合成仪用化学的方法直接人工合成仪用化学的方法直接人工合成合成

基因 _____ ，核苷酸序列 ______ 。

较小已知