146721833 jurnal dna bakteri doc

7/22/2019 146721833 JURNAL DNA Bakteri Doc

1/6

Supiana, Transformasi DNA

TRANSFORMASI DNA PLASMIDSalmonella typhiRESISTEN KLORAMFENIKOL KE KULTURSalmonella typhi

SENSITIF KLORAMFENIKOL Supiana Dian Nurtjahyani )

Abstrak : Resistensi mikroorganisme terhadap antibiotika merupakan masalahbesar dalam penanganan penyakit infeksi. Plasmid berperan sebagai perantaradalam produksi enzim CAT. Penelitian tentang DNA plasmid Salmonella typhiyang bertanggunga!ab terhadap produksi enzim CAT dan bagaimana pengaruhenzim CAT ini terhadap resistensi Salmonella typhi bila dipapar dengankloramfenikol perlu dilakukan. Penelitian ini bertuuan untuk mengetahui apakahplasmid pengkode resistensi kloramfenikol dari Salmonella typhi resisten

kloramfenikol bila ditransformasikan ke dalam kultur Salmonella typhi sensitifkloramfenikol dapat mengubah Salmonella typhimenadi resisten kloramfenikol.Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratoris dengan pendekatan

penelitian yang digunakan adalah Post test only design. Penelitian inidilaksanakan di laboratorium "iokimia #$%PA &nair dan TDC mulai bulanSeptember sampai No'ember ())*.+asil analisis data penelitian ini menunukkan proses transfer DNA plasmidtersebut melalui transformasi, ternyata DNA plasmid dapat ditranfer dan mampumerubah sifat bakteri tersebut, artinya perpindahan materi genetik ini dapat teradikarena adanya rekombinasi gen, bila gengen yang homolog pada Salmonella

typhi ini teradi pindah silang -crossing over dan yang diekspresikanmengandung gen CAT maka Salmonella typhi akan menadi resistenkloramfenikol. /esimpulan dalam penelitian ini adalah DNA plasmid Salmonellatyphi yang resisten dapat ditransformasikan ke dalam sel Salmonella typhisensitifkloramfenikol bila selnya dibuat kompeten terlebih dahulu dan teradi prosesrekombinasi gen.

Kata Kuni : /loramfenikol, trasnformasi DNA plasmid, Salmonellatyphi resisten,Salmonella typhi sensitif

I! P"n#ahu$uan

Di %ndonesia penderita demam tifoid0ukup banyak, diperkirakan 1))23)).)))penduduk per tahun dan tersebar di mana

mana -/adang, ())4. Angka kesakitan berkisar567 dari tahun 3*13 sampai 3*18, dan angkakematian ratarata se0ara nasional berkisarantara (5,47 -+andoo, 3**8. Penyakitdemam tifoid ini ditemukan hampir sepanangtahun terutama pada musim panas. Demam

tifoid dapat ditemukan pada semua umur,

tetapi yang paling sering pada anak besar,umur 4* tahun, dan lakilaki lebih banyakdari perempuan dengan perbandingan (5 9 3-/adang, ())4.

Salmonella typhi sebagai penyebabkasus demam tifoid pada manusia dapatmenyebabkan kematian lebih dari 8)),)))orang pertahun. Dari data tersebut di atasterlihat bah!a demam tifoid adalah penyakityang tersebar luas diseluruh dunia terutama

:Supiana Dian Nurtjahyani adalah dosen Program Studi Pendidikan Biologi UNIROW u!an

*6


2/6


di daerah beriklim tropik yang sampaisekarang masih merupakan problema kesehatandi seluruh dunia -$irza et al", ())), ;ain# etal", ())5, $andal et al", ())6. +asil

penelitian Purnomo -3**6 di Surabayamenunukkan bah!a penyakit demam tifoiddiperkirakan dari tahun ke tahun 0enderungmeningkat baik penderita maupun karier.

/loramfenikol sebagai obat pilihanpada pengobatan demam tifoid di %ndonesiatelah lama digunakan sehingga memungkinkanteradinya perubahan kepekaan Salmonellatyphi terhadap antibiotika tersebut. Resistensimikroorganisme terhadap antibiotika

merupakan masalah besar dalam penangananpenyakit infeksi. Plasmid berperan sebagaiperantara dalam produksi enzim CAT.Penelitian tentang DNA plasmid Salmonellatyphiyang bertanggunga!ab terhadap produksienzim CAT dan bagaimana pengaruh enzimCAT ini terhadap resistensi Salmonella typhibila dipapar dengan kloramfenikol perludilakukan.

"erdasarkan uraian diatas disusun

rumusan masalah penelitian sebagai berikut9


3/6

Prospektus# ahun & Nomor '# Okto!er '()'

ambar 3. *el agarose elektro%oresis-37 untuk hasil ekstraksi DNA plasmid Salmonellatyphi resisten kloramfenikol. Plasmid ini setelah di PCR mengandung gen CAT

ambar (. +asil ui transformasi DNA plasmid Salmonella typhiresisten kloramfenikol ke dalam kulturSalmonella typhi sensitif kloramfenikol dengan metode disk kloramfenikol -C5) setelahmasa inkubasi 31 am pada suhu 5)C, tanda panah menunukkan koloni tumbuh.

Tabel 3. +asil transformasi DNA plasmid Salmonella typhi resisten kloramfenikol pada kulturSalmonella typhi sensitif kloramfenikol se0ara difusi dengan metode disk kloramfenikol-C5)

DNA Plasmid resisten ke kulturSalmonella typhi sensitif

K%$%ni K"t"ran'an

*8

$ 3 ( 5 6 4 8

*638(535)

844

bp

6583

(5((5

/eterangan 9PR52S35 9 PR5 DNA plasmid Salmonella typhi resisten kloramfenikol

S35 kultur Salmonella typhisensitif kloramfenikolPR*2S36 9 PR* DNA plasmid Salmonella typhi resisten kloramfenikol

S36 kultur Salmonella typhi sensitif kloramfenikolPR3(2S34 9 PR3( DNA plasmid Salmonella typhi resisten kloramfenikol

S34 kultur Salmonella typhisensitif kloramfenikol

()((

(*+

PR52S35

PR*2S36

PR3(2S34


4/6


kloramfenikol

PR52S35 Tumbuh Resisten

PR*2S36 Tumbuh Resisten

PR3(2S34 Tumbuh Resisten/eterangan.9PR52S35 9 PR5 DNA plasmid Salmonella typhi resisten

S35 kultur Salmonella typhi sensitif kloramfenikolPR*2S36 9 PR* DNA plasmid Salmonella typhi resisten

S36 kultur Salmonella typhi sensitif kloramfenikolPR3(2S34 9 PR3( DNA plasmid Salmonella typhi resisten

S34 kultur Salmonella typhi sensitif kloramfenikol

+asil transformasi plasmidSalmonella typhi resisten kloramfenikol kekultur Salmonella typhisensitif kloramfenikoldapat dilihat dalam gambar (. dan tabel 3.

Pada tabel 3 tersebut diatas semuakoloni yang tumbuh resisten, kemudiandilakukan ui CAT B?%SA yang hasilnyaditampilkan pada tabel (. "erikut ini 9

Tabel (. +asil &i CAT B?%SA Transformasi DNA plasmid Salmonella typhi resistenkloramfenikol ke dalam kultur Salmonella typhisensitif kloramfenikol

"aris microtiterpadaplate

* , -

A ).)5 ).3)* .!/-(

" ).)81 ).)68 .!**0

C ).(1) ).581 .!1*,

D ).388 ).34 ).)1

B ).36( ).34) ).33

# ).336 ).3() ).11

K"t"ran'an9&asi$ uji 2AT ELISA #ibaa #"n'an panjan' '"$%3ban' (. n3 s"suai #"n'an anjuran Kit ELISApr%#ukRoche4 #ia3bi$ saat #i $uarELISA reader!/olom 3 dan (9 !lankdan CAT standar dilution -blok biru /olom yang diberi nomor 4 dan 89 konsentrasienzim CAT sampel "aris 3,(,5 dan kolom yang diberi nomor 4 dan 89 konsentrasi enzim CAT hasiltransformasi plasmid resisten ke kultur Salmonella typhigalur sensitif kloramfenikol -blok ungu dengan nomorsampel PR52S35, PR*2S36, PR3(2S34. /olom 4 dan 8 nomor sampel sama karena dibuat duplo.

III! P"3bahasanPlasmid yang resisten setelah

berhasil diisolasi seperti pada gambar 3.dengan leader marker +ind III ukurannyaberkisar *638 bp hal ini sesuai denganukuran plasmid se0ara utuh, kemudianplasmid ini ditransfer ke dalam kultur selSalmonella typhisensitif kloramfenikol yangsebelumnya dibuat kompeten ternyata DNAplasmidnya dapat ditransfer, setelah diuipada media yang mengandung antibiotik-kloramfenikol koloni tersebut tumbuhberarti resisten.

Pada penelitian ini melalui proses

transfer DNA plasmid tersebut melalui

transformasi ternyata DNA plasmid dapatditranfer dan mampu merubah sifat bakteritersebut, artinya perpindahan materi genetikini dapat teradi karena adanya rekombinasigen, bila gengen yang homolog padaSalmonella typhi ini teradi pindah silang-crossing over dan yang diekspresikanmengandung gen CAT maka Salmonellatyphi akan menadi resisten kloramfenikol.-$adigan, ())8.

Sel "akteri yang dipakai padaproses transformasi tersebut di atas adalahsel bakteri dari kultur yang semula diisolasiplasmidnya baik yang resisten maupun

yang sensitif karena penelitian ini hanya

*


5/6

Prospektus# ahun & Nomor '# Okto!er '()'

bertuuan mengui apakah plasmid sebagaipenanggunga!ab terhadap sifat resistensi itudapat ditransfer. +al ini uga dibuktikan olehhasil penelitian $andal , et al"#())6 bah!a

dengan adanya antibiotika maka bakteri yangmengandung gen resisten pada plasmid akanberkembang dan plasmid resisten ini akanstabil di dalam sel yang dapat diturunkandan plasmid merupakan faktor resiko yangserius karena dapat dipindahkan ke sel lain.Penelitian ini uga dibuktikan oleh hasilpenelitian Diab et al#())( bah!a antibiotikayang resisten pada mikroba dapat merubahgen dan su!se,uen yang merupakan proesseleksi oleh antibiotika, faktor resisten ugadi ba!a oleh kromosomal yang dapat

berkembang dan menghasilkan mutasi se0araspontan dan ekstrakromosomal resisten-plasmid resisten.

Antibiotika resisten ini ugamempunyai karakteristik yang dapatditransfer pada organisme resipien yangterdapat dalam lingkungan dan DNA yangmengkode antibiotika mungkin uga dapatditransfer se0ara konugasi diantarabeberapa mikroorganisme -Sha! et al, 3*15,Ramteke et al# 3**) Sha! et al, 3**3, dan

+arnett et al , 3**1. en yangbertanggunga!ab terhadap resistensikloramfenikol terletak pada Tn * denganpanang 33)( bp dan yang mengkode enzimCAT panangnya (*5 bp -Sambrook, ())3,;ain et al, ())5. +asil ui CAT B?%SAmemperlihatkan perbedaan konnsentrasienzim CAT pada kedua kultur S"typhi hasiltransfeksi.

I5! K"si3pu$an

Dari hasil penelitian dan analisa datadapat ditarik kesimpulan sebagai berikut 9DNA plasmid Salmonella typhi yangresisten dapat ditransformasikan ke dalamsel Salmonella typhi sensitif kloramfenikolbila selnya dibuat kompeten terlebih dahuludan teradi proses rekombinasi gen.

Da6tar Pustaka

Diab A.$, Abdel Aziz dan S.a. Selim, ())(.Plasmid encoded trans%era!leanti!iotic resistance in gram negative!acteria# isolated %rom drinking

-ater in Ismalia .ity" PakistanEournal of "iologi0al S0ien0es 4Fol..

+andoo, %, 3**8. Diagnosis la!oratoriumdemam ti%oid" /a!oratorium0 InstalasiPatologi 1linik 2akultas 1edokteran&NA%R2RS&D Dr. SutomoSurabaya.

/adang, /.E., ())4.Pengenalan dini demamti%oid. "erita /esehatan.

$adigan $ T,.$artinko Eohn $, ())8.Brock !iology o% microorganisms.*nded. Prenti0e +all.%n0.

$andal S, $andal $D, Pal N/, ())6.Plasmid3encoded multidrug resistanceo% Salmonella typhi and some enteric!acteria in and around 1olkata#India9 A Preliminary Study. Gnline E+ealth Allied S0s69 (.

$irza S, /ariuki S, $amun /.H, "ee0hingN.E, and +art C.A, ())). 4nalysiso% plasmid and chromosomal DN4o% multidrug resistant Salmonellaenterica Serovar typhi %rom 4sia.EC$, p9 366*364(.

Purnomo +ari S, 3**6" Prediksi penye!arandemam ti%oid di dua kecamatan dikotamadya Sura!aya.Disertasi &NA%RSurabaya.

Ramteke, P.;., S.P.P. Abha aur and E.;."hatta0haree, 3**). 4nti!ioticresistance o% coli%orm in drinkingWater in rural areas. %ndian E.$ed.Res *39 314 311.

*1


6/6


Sambrook E., #rits0h B.#., and $aniatis T.,())3. In 5itro ampli%ication o%DN4 !y the polymerase chainreaction. %n $ole0ular Cloning. 1.31

I 1.3(8. Third edition. Cold Spring+arbor ?aboratory Press.

Sha!, ;F, and ?es lie, A., 3**3.Chloramphenicol acetyltrans%erase4nnu. Re'."iophys Chem ()9 58558*.

Sh a!, ;F, 3 *1 5. .hloramphenicolacetyltrans%erase en6ymology andmolecular !iology CRC Crit Re'."io0hem 369 368.

Stephen ".+ulley, Ste'en R Cummings,3*11. Designing clinical research.;illiams J ;ilkins, 6(1 Bast PrestonStreet "altimore, $D (3()(, &.S.A.

;ain, E, Nga Diem ?.T, /idgell Claire,Eames /eitg, #ortune Sarah, DiepS.T, Ali Tahir, aora, G, Parry C,Parkhill E, #errar E, ;hite E.N,Dougan , ())5.7olecularanalysis o% inc+))antimicro!ial resistance plasmids%rom Salmonella Serovar yphistrains

**

146721833 jurnal dna bakteri doc

Documents