2752 eq 8 caracteristicas tintoriales de los hongos
TRANSCRIPT
Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
MICROBIOLOGÍA GENERAL II
Equipo 8:
MARTÍNEZ PÉREZ LIDIA
JUÁREZ PASTÉN GERARDO
GUZMÁN CÓRDOBA GERARDO
CARACTERÍSTICAS
TINTORIALES DE
LOS HONGOS
OBJETIVO
- El alumno al termino de la practica será capaz deobservar y diferenciar hongos de diferentes fuentes,mediante diferentes técnicas tintoriales.
- El alumno conocerá las principales técnicas detinción de hongos.
- El alumno procurara identificar y clasificar los hongosaislados en la practica 2.
PARED CELULAR
Esta formada por capas de polisacáridos
- Glucanos (polímeros β-1,6, ramificados de glucosa)
- Mananos(polímeros α –1,6, ramificados de manosa)
- Polímeros de glucosamina
- Proteínas
- Lípidos (ergosterol)
- Quitina (polímero β-1,4 de N-acetilglucosamina)
MECANISMOS DE COLORACION
¿COMO ENTRAN?
La coloración celular y tejidos son una combinación defenómenos físicos y químicos de absorción: los fenómenosfísicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en ciertogrado.La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos yviceversa indican que hay reacción química.
¿CÓMO SE TIÑEN?La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos quetienen alguna afinidad específica por los materiales celulares.
Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculascargadas positivamente (cationes) y se combinan conintensidad con los constituyentes celulares cargadosnegativamente, tales como los ácidos nucleicos y lospolisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son elazul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente(aniones) y se combinan con los constituyentes celularescargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esoscolorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.
Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; loscolorantes de este grupo se combinan con los materialeslipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar lalocalización de las gotículas o depósitos de grasa. Un ejemplode colorante liposoluble es el negro Sudán.
TINCIONES SIMPLES DIFERENCIALES ESPECIALES
FUNDAMENTO Se utiliza un solo colorante, es simple y fácil de realizar.
Se utilizan dos o mas colorantes.
Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distintacomposición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes.
EJEMPLOS • Azul de
metileno
• Safranina
.
• Eritrocina.
• Anaranja
do de
acridina
• Azul de
algodónDe lactofenol
• Gram.
• Ziehl-
Neelsen
• Acido
peryodico
de Schiff
• Giemsa y
Wright.
•Tinta china.
•Grocott – Gomori.
•Blanco de
carcoflour
TINCIONES SIMPLES
AZUL DE METILENO
UTILIDAD: Para exámenes en fresco o coloraciones compuestas.
FUNDAMENTO: Los hongos adquieren un color azul semejante al azul de algodón, aunque el hongo se observa mas intenso que el fondo del campo.
COMPONENTES
Azul de metileno 0.3g. Colorante
Agua destilada 100ml
Mucor sp
Safranina
UTILIDAD: Para el estudio de cultivos y productos
biológicos líquidos.
FUNDAMENTO: Los elementos fúngicos se tiñen de
color rojo intenso, y el resto del campo toma un
tono incoloro o rosa pálido.
Rihizopus sp
Penicillium sp.
Aspergillus sp.
Tinción con Eritrocina.
Útil para la observación de gránulos
causados por:
• Nocardia
• Madurella grisea
• Madurella mycetomatis
Granos de micetoma por Nocardia sp.
Anaranjado de Acridina
• Colorante vital, que da una fluorescencia
verde si el microorganismo está vivo y roja si
está muerto.
Tinción de ascosporas de
Sowerbyella rhenana en naranja
de acridina
Mucor mucedo.
Candida albicans
COMPONENTES FUNCIÓN
Fenol Destruye la flora acompañante.
Ácido láctico Conserva las estructuras fúngicas al
provocar un cambio de gradiente
osmótico con relación al interior del
fúngico generando una película por así llamarlo protectora.
Azul de lactofenol
El colorante es fuertemente ácido y se usa
para la tinción directa de micelio
micólico, el cual toma un delicado color azul claro.
Glicerol Agente humectante.
Azul de algodón
Microsporium canis Rihizopus sp.
Aspergillus sp.Absidia corymbifera
TINCIONES DIFERENCIALES
Tinción de Gram
UTILIDAD: Se emplea para teñir:
- Productos biológicos líquidos
- Exudados de lesiones
- Macerados de biopsias
- Todos los hongos son positivos a la
coloración de Gram, excepto
Cryptococcus neoformans.
FUNDAMENTO
- El decolorante alcohol acetona disuelve
a los lípidos de la pared impidiendo la
retención del cristal violeta en los
organismos Gram negativos
- Se forma un complejo: lugol-cristal-
violeta-ribonucleato de magnesio
- Esta técnica se basa en las diferencias
en el punto isoeléctrico.
Blastomyces dermatitis Candida albicans
Granos de Nocardia sp.
Tinción Ziehl-Neelsen (Ácido-Alcohol-
Resistentes)UTILIDAD
Útil en algunos microorganismos ácido
resistentes como N. asteroides, N. brasiliensis
y otros actinomicetes.
FUNDAMENTO
El contenido lipídico de estos organismos
esta compuesto principalmente por ceras y
fosfolípidos que alcanzan hasta un 40 % desu peso seco total .
Grano de Nocardia sp.Grano de Actinomadura madurae .
Actinomyces Israelii
Técnica de SchiffFUNDAMENTO
- En la tinción PAS se trata el material con
ácido peryódico, que oxida los 1,2-glicoles
formándose grupos aldehído en los
glucanos y mananos de las paredes
celulares de los hongos
- Con el reactivo de Schiff, los aldehídos
reaccionan dando un color rojo luminoso.
Mucor sp.
Coccidioides immitis
Hystoplasma Capsulatum
Tinción de Giemsa y Wright
- Utilizada para levaduras intracelulares,
que generalmente se encuentran dentro
de los macrófagos o monocitos
- Forma un halo alrededor de la pared
celular
- Citoplasma se tiñe de azul celeste
- Un polo se tiñe de azul oscuro (media
luna)
Blastomyces dermatitidis. Aspirado de tejido de perro, tinción Wrigth
Hystoplasma capsulatum
TINCIONES ESPECIALES
Tinción negativa con tinta china
FundamentoEste método es ideal para observar
inclusiones refráctiles que no se tiñen
fácilmente, tales como gránulos de azufre,
ácido poli-B-hidroxibutirico, esporas o capsulas,
debido a que las partículas de carbón
empleadas están cargadas negativamente y
son repelidas por la carga negativa de la
pared y delimitan una silueta mayor que el
tamaño real de la bacteria.
UTILIDAD
- Esta tinción especial
para visualizar a
Cryptococcus
neoformans.
- La tinta china se emplea
en una dilución de 1:2
con agua destilada
(suspensión de coloidal
de carbón o nigrosina)
- La técnica consiste en
colocar una gota del
producto biológico por
examinar y una gota
de tinta china
separados por 3 mm
COMPONENTES:
Tinta china de buena
calidad (nigrosina, tinta
Pelikan India Ink o Parker
Black Ink, entre otras).
La cápsula aparece como un halo claro y nítido en torno a una
levadura redonda, delimitado por las partículas de carbón en
suspensión coloidal de la tinta china, exhibiendo un nítido
contraste.
Tinción con tinta china para observar la
cápsula de C. neoformans.
Tinción de Gomori-Grocott(Metenamina de plata)
FundamentoEsta basada en que presencia de acido
crómico, los grupos hidroxilo de lo
polisacáridos de la pared celular de los
hongos son oxidados a aldehídos; estos a su
vez, reducen el complejo nitrato- plata
metenamina produciendo la coloración
café a negra, debido de la plata reducida
en los lugares de localización de los
aldehídos
Imagen histológica, tinción con Gomori-Grocott (tinción con
plata) mostrando esférulas en diferentes estados de
maduración.
TINCIÓN DE GROCOTT-GOMORI
Con esta técnica los hongos se tiñen de color negro al igual que unas
bacterias(Nocardia y Actinomices) la mucosa adquiere un color gris
oscuro; las partes internas del micelio rosa oro; el fondo aparece de
color verde claro.
C. neoformans
Blanco de carcoflourFundamento
El calcofloúr es un flourocromo que se une apolisacáridos con los enlaces beta 1-3 y beta 1-4
presentes en polímeros tales como celulosa y la
quitina. El colorante fluorece cuando se expone a
una fuente de luz ultravioleta de onda corta o
capaz de producir la luz azul (longitud de onda
410-450 nm). Es un método de alta sensibilidad
para definir claramente los elementos micoticos
con microscopio de fluorescencia
Reactivos
- Calcoflour blanco M2R (polysciences)
- Azul de Evans
HIDRÓXIDO DE POTASIO.
Puede utilizarse para examinar muestras
clínicas con abundantes células y restos
celulares.
El Hidróxido de potasio al 10% (solución de
KOH) permite ver elementos de hongos ya
que el KOH digiere parcialmente los
componentes proteicos, por ejemplo de la
célula huésped, pero no actúa sobre los
polisacáridos de las paredes celulares de
los hongos.
Solución de KOH al 10%
Cabello
infectado de
tiña de la
cabeza (Tinea
capitis)
Procedimiento
• Tomar un espécimen con abundante crecimiento.
• Aplicar la técnica de tinción
• Observar a 10X y 40X
• Aplicar otra técnica y el KOH al 10 %.
• Observar a 10 y 40X y esquematizar
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS- Guzman Arenas Roberto, “Micología médica”., Editorial
McGraw-Hill, 2ª. Edición; México, 2004. Capitulo 34 pag 299-
305
- RubenLopezMartinez, Micología Médica Procedimiento para
el diagnostico de laboratorio, Ed. Trillas, México 2006 Capitulo
10 Pag.149-158
- F.J. Baker, Manual de Técnicas de Micología Médica Editorial
Acribia, S.A Zaragoza España 1998 pag. 18-20; 40-41
- Dr. Norman F. Connan; Micología; Editorial Interamericana
S.A de C.V 3ra Edición México 1972 pag. 557-569
- Lynch, M; Raphael, S. Métodos de Laboratorio. Editorial
Interamericana. 2º edición. México. 1987. Tomo II pag. 523-530
- MURRAY, G. Microbiología Médica. Edit. El Manual Moderno.
3º edición México D.F. 1997 pag 175-182