8/17/2019 3_ CROMATOGRAFIA

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CROMATOGRAFIAScopo dell’esperienza è la separazione mediante cromatografia su colonna dei 3 componenti  A , B e C  

di una miscela (M) di sostanze organiche colorate. La procedura prevede tre fasi:

1° fase.  Determinazione via TLC della migliore miscela eluente.

2° fase.  Separazione della miscela mediante cromatografia su colonna.

3° fase.  Controllo della separazione mediante analisi TLC delle frazioni eluite.

 Procedura Sperimentale.

1° fase. Effettuare 5 prove di eluizione TLC della miscela M 

testando come eluenti l’etere di petrolio  e l’acetato di etile 

nelle seguenti proporzioni:

Eluente 1: etere di petrolio (5 ml)

Eluente 2: etere di petrolio: acetato di etile 7:3 (3.5 : 1.5 ml)

Eluente 3: etere di petrolio: acetato di etile 5:5 (2.5 : 2.5 ml)

Eluente 4: etere di petrolio: acetato di etile 3:7 (1.5 : 3.5 ml)

Eluente 5: acetato di etile (5 ml)

Valutare la migliore miscela eluente sulla base delle

separazioni ottenute (riportare nella relazione i fattori di

ritenzione di ciascun componente della miscela per ogni eluente).

2° fase. Effettuare la separazione su colonna come segue:

•  Pesare 10 g di gel di silice e miscelarlo in un beaker all’eluente scelto

nella 1° fase. Agitare la sospensione per eliminare l’aria intrappolata.

•  Impaccare la colonna versando la sospensione con un imbuto di vetro e

lasciare sedimentare la fase fissa alimentando dall’alto con l’eluente

per evitare che vada a secco.

• 

Prelevare 3 ml di miscela M e supportarla su 1 g di fase stazionariaevaporando il solvente in cui è disciolta al rotavapor. Depositare la

miscela solida supportata sulla sommità della colonna, montare il

serbatoio per l’alimentazione della fase mobile, ed eluire recuperando

finchè possibile l’eluente.

•  Raccogliere le frazioni di eluato (basandosi sulla colorazione dell

  e bande), poi aumentare la polarità della fase mobile con acetato

di etile per eluire il composto molto polare C (rosso).

3° fase. Effettuare il controllo via TLC di ciascuna frazione come segue:

•  Depositare, mediante il

capillare, delle aliquote diciascuna frazione su

lastrine TLC tagliate

opportunamente per

ospitare il maggior numero

di macchie (senza eccedere

la larghezza della

cameretta).

•  Ricordarsi di deporresempre accanto la macchia

relativa alla miscela M.•  Effettuare lo sviluppo con

la stessa fase mobile della colonna.

•  Indicare il numero ed il tipo di componenti presenti in ciascuna frazione riportando schematicamente i

risultati nella relazione finale.

(arancio) A

(giallo) B

(rosso) C

Miscela M

A

B

C

Fraz.1 Fraz.2 Fraz.3

Miscela M

A (arancio)

B (giallo)

C (rosso)

fronte dell'eluente

dB

LRf   =

L

dBB