4-(n-methylhydrazino)-7-nitro-2,1,3-benzooxadiazole (mnbdh): a novel fluorogenic peroxidase...
TRANSCRIPT
�������������
������ ���� ��� � � ����� ��� ��� � � ���� �� ����� ����� ������� ���� ���� !""" "�#"�"�$$%""%$�"�����$ & �#��"'��"%" ���$
���������� ������������ ����������������������� �������� � �� ��!�"� �#���$ %� �����&� '"�&� ���((()�� *�+��� ,�-��� ./�-0� *��0�� ����� ��-12� 3��405
�6+��4 ��� 7 ���70���6�- �+ � ����� �8 �00��70�9� 8��0:��48�� �;;��7�0���4 �� ����+0�7�� 7 ���40�+� �2 ����+0� -�0�70�������04� �9�� �� 7��;��< ��0��7�4� ��� �����6�- �+ 0 ��� �� 7�0��+0�7 �70�9�0+ ��- 4:�40��0� 4���70�9�0+� �� 0 �4 7��0�<0�;���<�-�4�4 ��� �8 4;�7��� ��0���40 ��7�:4� �8 0 � ;�44�����0+ �87�:;���� �!=! -�0�70��� 2�0 ���70���4 +���-��� �!=!� ���--�0��� 0� 0 � 0+;� ��- �70�9�0+ �8 0 � ;���<�-�4�� 0 � ��2��-�0�70��� ����0 �8 0 � ��6+��0�7 ���70��� �4 ��8�:��7�- �+ 0 �7 ��������7 �� 8�:�������7 4:�40��0� :4�-� �4 0 � ;��;��0��4�8 0 � -�0�70�- ���70��� ;��-:70 ;��+ � 7�:7��� ����� , 9����0+�8 ������7 7��;�:�-4 ��� :4�- �4 7 ��������7 4:�40��0�4� 8���<��;��� �����0�7 �����4 ��>� ��; ��+����-������ ?=@�A�B�C
$�$�������0�0����0 +����6�-��� ?D*.A�B!C ��- ��4� !�!���6������4?$��0 +����6�0 ��6����A���4:�8���0� �4 0 � -�������:�4��0 ?,.DEAB$C � �� 7�4� �8 0 � ���� 4��4�0�9� 8�:�������7��0 �-4 0 � �� +-��<+; ��+�7����<+��7 �7�-4� �4;�7����+ �� +-��<+; ��+��7�0�7 �7�- ?;�@,A� �9� 8�:�- 2�-�4;���-�;;��7�0����B�C
D � ���� -�4�-9��0��� �8 0 � �� +-��<+; ��+�7����<+��7�7�-4 ��- �0 �� 8�:�������7 4:�40��0�4 �4 0 � -�88����7���02��� 0 � �;0��:� ;� 8�� 0 � ��6+��0�7 ���70���� 2 �7 ���4 �� � ��-���0��+ �7�-�7 ������B�C ��- 8�� 8�:���47��7�-�0�70��� �8 0 � ;��-:704� 2 ��� ��>����� ��-�� ��� ���F:���-�B�C , 4�7��- -��2��7> �4 0 � 4 ��0 2�9�����0 4 8�� 0 ��<7�0�0��� ��<��� �8 0 � 8�:���; ���4� G:�0 ������� �<�-��0��� �8 0 � >��2� 8�:�������7 4:�40��0�4 +���-4� �� ��40 7�4�4�� ��<0:�� �8 ���70��� ;��-:704 ��0 �� 0 �� ��� 2��� -�8���-8�:���; ���B�C ��-� �� 4��� 7�4�4� ��0 �9�� 0 � �<�70 40�:70:���8 0 � 8�:���47��0 7��;�:�-4 ��0����- 7�:�- �� ��:7�-�0�-��+-��6��� ������04 ��� 0 � ��40 ;�;:��� ���:; �8 -���9��
0�4��� ������04 8�� 7�����+� 7��;�:�-4�B#C �� 0 �4 2��>� 2�-�47���� 0 � :4� �8 � +-��6��� ������0 �4 � 8�:�������7;���<�-�4� 4:�40��0�� E:�;��4����+� 0 � ���8�:���47��0 ��?����0 +� +-��6���A�#���0���!���$����6��<�-��6��� ?*�.��A�2 �7 2�4 ��7��0�+ ��0��-:7�- �4 ������0 8�� 0 � -�0�������0��� �8 7�����+� ���:;4B�C ��- ��0��0� ���4�B�C �4 �<�-�6�- �+�!=! �� ;��4��7� �8 ;���<�-�4� ?@=�A 0� 0 � ��0��4�9��+8�:���47��� ��?����0 +������A�#���0���!���$����6��<��-��6��� ?*�.�,A BF� ?�AC� D � �-��0�0+ �8 0 � ���70���;��-:70 2�4 9���8��- �+ �*H� 1 % �4� ��- 8�:���47��7�4;�70��47�;+� ��44 4;�70����0�+� ��- �@�� D � ��6+��0�7���70��� ��- 8�:���47��7� -�0�70��� ��� 7�����- �:0 �� � ���-�+
B�C �A H� *� (� @������ �� E� ,4 0��� E� *��7�-�� ������ �)**� ���� ��� I���J �A @� �� E �:�� � (� E���0� � (� H����4��� K� ������� �� E��: ����� �� ����� H� �� �� ,�-��4��� D� *�7 ��� �� ����� ���� �))+����� ���� I ��!!�
B!C �A � �� E �4��+� �� *��-�� �� E� 3��� 3� *� ��4��� (� �� 3����� � ��:��7 � @� ,� E ������ �� �� E�44�� =� E��0 ��4� ����� ����� ��� ����� �� �))+� ��� �$�#� I �$���J �A @� � �:���� K� �� �:���� ��*�4 ���� 3� �� .��7 � *� ,� *�4>�2�06� (� ,� .�9��� *� �� G�4 ���������� �)),� ���� !$� I !�!�
B$C �A H� �� H:-�7� � �� E �4��+� �� *��-�� =� E��0 ��4� E� E� E����� �� ��E�44�� �� ����� �!�"�� �))*� �#�� #$� I #$�J �A D� *:�� ���� D� ,4� ����*� E��9��� �� .�:0��4� �� *�4:-�� �� 3��>�� *� 3�����+� �� � ��� ��� ��� (� G� E+��4� *� �� G�4 ���� @� � �:���� (� *� �4���� �� ������!�"�� �))*� �#�� !��# I !�#��
B�C �A �� E� .��-0� E� �� E�+-��� ����� $�!� ������� �))�� %�� �#� I ���J�A �� ��0 ��� L� M��� �� ����� ���� �))�� �%�� �$#!� I �$#!�J 7A E�*��7�-�� ,� ����4� ��� ����� �� &� � �))�� ���� !""! I !"�!J -A @� ��E �:� ��� !����" �� �� ������" ?��4��N � .����4A� *�4�+ ���� .��>�� �7���� �� �)),� E� $�# I ����
B�C �A (� D� �:�; +� *� � ��-��� ������� �����'"� ���� �))*� !�� I !��J�A *� �� H�4 � ������� �����'"� ���� �)))� � I ���
B�C �A �� ���7O�����-��P �� @� = � (� �:� (� � E7 ��06���� �� �� E�44�� ���������� ��� � ���� �� �))+� ��� ���� I ���$J �A @� �� E �:�� � (� E���0�� (� H����4��� K� ������� �� E� �: ����� �� ����� H� �� �� ,�-���4��� D� *�7 ��� �� ����� ���� �))+� ���� ���� I ��!!J 7A H� �� ��,�-��4��� ����� ����� ��� � ���� �� �))�� �#� �"�"� I �"��$J-A *� @� �4��0�� @� � E7 ����� K� D���� *� E�����7���� (��� " ��������� �))�� )� !$� I !$�J �A � (� E���0� �� E� ����� H� �� �� ,�-��4����� ���� ����� �)),� ���� �!� I �$��
B#C �A (� �:� �� �� E�44�� �� ����� ���� �))�� �%�� ����� I �����J �A (��:� �� ���7O�����-��P �� �� �� E�44�� �������"��' �)),� �)� �!$$$ I�!$�"�
B�C � (� H����4��� D� *�7 ��� ����� ����� ��� � ���� �� �)),� �����##� I ��#�"�
B�C G�� � ��9��2� 4��N �� 3�-����0� (� 3: ������ �� ���-����� ���������� � 4:���00�-J ������ ���� ��� � � � 4:���00�-�
B�"C G�� �� �4���0�- �00��;0� 4��N *� (�4�; � H� ������Q� ������� &� ����� *���� �))�� �� �"!� I �"!��
B��C �� ���-����� D� @� �� ������ ���� �))+� �#+� ��!� I ��$!J ���������� ��� � � ����� �))+� �,� �#!" I �#!$�
B�!C �A �� 3:�6� �� ���-����� ������ ���� �)*�� �%� �� I �"J ���������� ��� � � ����� �)*�� ��� #� I #!J �A ,� ��00�R� .� .�-��� (�3: ������ �� ���-����� ���� ���� �� �)))� ,� �!! I ��$�
B�$C �� 3:�6� (� *S�6������� ���� �)**� �##� ��!� I ��!�J������ ������� � � ����� �)**� ��� �$#� I �$##�
B��C �A (� ����-���-�&(��- �))�� ��� $� I ��J �A �� ������� @� E7 ����������� .���� ���� ����� �)))� �� $� I $�J 7A D� K����4>�� �� ���-����������� ���� �))�� �#�� #�� I #��J ������ ���� ��� � � ����� �))���%� #!! I #!��
B��C 3� .����4� �� ��0�4� (� 3����04�4� �� @�;�; �0�:� @� E�0���:� �����F:���� �� E7 S8��� (������ ��� *���� �)*)� �#� $��$ I $��"�
B��C .� .�-��� 3� 3: �� �� =2��� �� ���-����� ,� ��00��� �8��� (�3: ������ ������ ����� )#�� !!$ I !!��
B5C @��9����6� ��� 1� 3��40� ��;���� ��� (� *�+��� ��;���� ��� *� ����,�������47 �7 ���47 �4 ��40�0:0��408S��47 � ��� ���4�1��9��4�0S0 */�40����� ����3�����E0��44� �� ����� */�40�� ?������+AG�<N ?���A!����$�$$�������� N :2��>��40T:����:��40���-�
��� ,� ./�-0.,EG,�� :-2��4 �8�� ?������+A
B55C D � �:0 ��4 2�:�- ��>� 0� 0 ��> 0 � G��-4 -�� � ���47 �� ��-:40���?G���>8:�0%*���A 8�� 8����7��� 4:;;��0�
�������������
���� � ���� �� ����� ����� ������� ���� ���� !""" "�#"�"�$$%""%$�"������ & �#��"'��"%" ������ ���� ��� � � ����� ��� ��� �
�7�-�7 ��-�:� ?;� ���A� �� 7�4� �8 *�.��� 4������ ;��;0��� 8�� 7��9��4��� �8 0 � 4:�40��0� ��- -�0�70��� �8 0 �;��-:70 ��� ��4��9�-� D � �@� �<;������04� 2�0 1 % �4-�0�70��� �8 0 � ���70��� ��<0:��� 4 �2 ���+ ��� �--�0�����;��> �� 0 � 7 ����0�����J �04 ��0��0��� 0��� ��- 1 % �44;�70�:� ��07 0 �0 �8 ;:�� *�.�,� ��0 8�:���47��7�-�0�70��� ?�<7�0�0��� 2�9�����0 N �#" ��� ���44��� 2�9������0 N ��# ��A ���+ 0 � *�.�, ;��> �;;���4 �� 0 �7 ����0������ �� �0 �� ���70��� ;��-:704 7�:�- �� ��4��9�-�+ ��F:�- 7 ����0����; +�G�� 0 � -�0������0��� �8 �!=!� ��4�- �� 0 � ;��7�-:��
-�47����- ����2� 0 � ����0 �8 -�0�70��� ?=�A �4 !�!� �"�����- 0 � ����0 �8 F:��0�8�7�0��� ?=LA �4 #��� �"���� D �4�9��:�4 ��� 4:;����� �+ � 8�70�� �8 0 ��� 7��;���- 0� 0 �4���0����- 8�� ;�@,� �� �--�0���� 0 � 4���70�9�0+ �4 ��;��9�-:4��� *�.�� ��7�:4� �8 0 � ��-�4 �80�- �<7�0�0��� ��-���44��� ��<����D � *�.�� ��0 �- 2�4 9���-�0�- �+ 7��;���4�� 2�0
02� �40����4 �- ;���<�-�4� 4:�40��0�4� ,.DEB�"C ��- ;�@,�B��C
0 ��:� 0 � -�0������0��� �8 ��:7�4� �� 8�:� -�88����0��9�����4� ��:7�4� �4 �<�-�6�- �+ ������ �<+��� �� 0 �;��4��7� �8 ��:7�4� �<�-�4�� ��- 8���4 +-����� ;���<�-��D � ��00�� �4 -�0�70�- �� � ;���<�-�4��7�0��+6�- ���70��� ��4�-�� ��� �8 0 � 4:�40��0�4 ���0����- ���9��D � ����+0�7�� 8��:��4 �8 ����0 �8 0 � 0 ��� ��0 �-4 ���
��40�- �� D���� �� D � ; �0���0��7 ��0 �- �- 0 � 4�����40����0�9� 40��-��- -�9��0��� �:0 �0 �4 �� ��-�� �8 �����0:-� ��444��4�0�9� 0 �� 0 � 8�:�����0��7 0�7 ��F:�4� D � =� ��-=L 2�0 *�.�� ��� ��2�� �+ � 8�70�� �8 0 ��� 7��;���-0� ;�@,� G:�0 �� �-9��0���4 �8 *�.�� ��� 0 � ��-�4 �80�-�<7�0�0��� ��- ���44��� ��<��� ?4�� ��4� 0 � 8�:���47��7�4;�70�:� -�;�70�- �� G��:�� �A ��- �� ��;��9�- 4�����40�����0+ ?G��:�� !A� ,-9��0���4 8�� ;�@, ��� 0 � ��00��2�0�� 4��:����0+ ��- � �� �� ���70��� ��0��D � ��4:�04 �8 0 � -�0������0��� �8 ������:7�4� �� 4�80
-���>4 ��� ;��4��0�- �� D���� !� ,;��0 8��� 0 � -�0� 8�� 7�����- ������8��9���- ��40��0 0�� ��0����- �+ :4��� ;�@,� �����4:�04 7����4;��- 2����D � *�.�� ������0 ��+ 0 ���8��� �� 4��� �4 ;��0�0+;�
�8 � ��2 ��- ;�2��8:� 7��44 �8 ;���<�-�4� 4:�40��0�4 8�� 2 �7
G��:�� �� G�:���47��7� 4;�70�:� �8 *�.�,�
G��:�� !� D������4�- -�9���;���0 8�� 0 � ���70��� �8 *�.�� ��-;�@, 2�0 ;���<�-�4� ��- �!=!�
-���70�- �;0���6�0��� 4 �:�- +���- 4:�40��0�4 2�0 ��7���4�-;�0��0����
�/��������� �������
������7��� 4��;��4 ��9�40���0�- �� 0 �4 40:-+ 2��� �;;�� Q:�7�� ������Q:�7�� 7���� ��- ������8��9���- ��40��0 0��� �F:�- 4��;��4 2��� -��:0�--���70�+ ?�+ � 8�70�� �8 �"""" 8�� -�0�70��� 2�0 ,.DE �� ;�@,� ��- �+ �
D���� �� @�����0��4 8�� 0 � -�0������0��� �8 ��:7�4� :4��� 0 � ;���<�-�4� 4:�40��0�4 ,.DE� *�.��� ��- ;�@,�
*�0 �- ���0 �8 ���0 �8 ,9�����- E�����40%�����40 �����-�0�70��� B�CB�C F:��0�8�7�0��� B�CB�C 40��-��- -�9��0��� BUCB7C 40��-��- -�9��0��� BUCB-C ����� B�C
,.DE�"�B�C �� �"�# !� �"�� !�# ��#%"�$ !� �"�� I !� �"��
,.DE��� �� �"�� $� �"�� !�� #�$%"�� $� �"�� I !� �"��
,.DE#$! �� �"�# !� �"�� ��� ��!%"�� !� �"�� I !� �"��
*�.�� �� �"�� !� �"�# $�� ���%!�# !� �"�# I !� �"��
;�@, !� �"�# �� �"�# ��$ ���%!�# �� �"�# I !� �"��
B�C ���7:��0�- �4 0 � 0��;�� 40��-��- -�9��0��� �8 0 � ����>� B�C ���7:��0�- �4 0 � 0��8��- 40��-��- -�9��0��� �8 0 � ����>� B7C H���0�9� 40��-��- -�9��0��� �8��� 0 4�;���0� -�0������0���4� �9�����- 8�� 0 � ������ ������ B-C H���0�9� 40��-��- -�9��0��� �8 ��� 0 4�;���0� -�0������0���4� 4�����40 ��- �����40 9��:� �80 � ������ ������ B�C E:�47��;04 7����4;��- 0� 0 � 2�9�����0 4 ?�� ������0��4A :4�- 8�� ; �0���0��7 ���4:�����04�
D���� !� H�4:�04 8�� 0 � -�0������0��� �8 ��:7�4� �� 4�80 -���>4� ,�� 9��:�4��8�� 0� 0 � 7��0��0 �8 ������:7�4��B�C
*�0 �- ,;;�� Q:�7� =����� Q:�7� ���� B���C ��40��0 0��B���C B���C B���C BU22��C
,.DE�"� !"��� "�� !���� ��� ����� "�� !"��� ��",.DE��� !"��� "�� !��"� ��� �!��� "�� !"��� ��$,.DE#$! !��"� "�� !��"� ��" �!�#� "�� !"�$� ��"*�.�� !!�"� "�� !���� "�� ���!� !�� !"�"� ��!;�@, !"��� !�� !���� ��� �"�"� ��# ���$� ���
B�C ��9��0���4 ��� 7��7:��0�- �4 0 � 40��-��- -�9��0��� �8 0 � ���� 9��:� �8��� 0 4�;���0� -�0������0���4�
�������������
������ ���� ��� � � ����� ��� ��� � � ���� �� ����� ����� ������� ���� ���� !""" "�#"�"�$$%""%$�"������ & �#��"'��"%" ����
����-�$��."#����� �� /$��$��� % �� ����������0���$��� /�����&1� 222 � ���� 3��#�&� � 4((3�� <����5 .����0 ���V����� ����� ��47 ��-0�(/���� ����6�� *��8��- 3������ D ���4 .���+�@�9�� .�-����>� ��- ���40 @���6��7 5
?;;A�����Q:��0���� 0 � ���70��� -���7���6�0��� ��02���7�������� ;�����0��4� �4 � ���-������ 7�4� 8�� 0 � 0 ���+ �87 ���7�� ���-����B�C �0 �77:�4 �88�7���0�+ ���+ �� 7��;�:�-4-�88�7:�0 0� 4+�0 �4�6� ��- 2�0 4;�7�8�7 40���7%40�������70����7;����F:�4�0�4� *�>��� :4� �8 7����8�<�- 7+7���:0���4 � ?M��� ?�4�A;���-���4A� �8 ;�������0�- -����4 � ?M��� ?�4�A�;���-�-����4%?4�7�A-�-�7� �-��-����4A� ��- ��4-��6���4%��4-��6���0�0��<�-�4 � ?M��� �=A� 0 � �88�70�9� �� ����7��Q:��0��� �� ����4 ��������0�7�0+ �� $�%$?!A� 7�0���4 �?M��A�B!C �� ��?�A%$?!A� 7�0���4 / ?M��� �=A�B$� �C ��- ����%�?�A� �����4 / ?M��AB�C �9� ���� ��4��9�-� ����� 2�
8�70�� �8 �"""" 8��*�.��A� D � ��40��0 0�� 2�4 2��� �- ��- -�44��9�- ����-�40����- 2�0�� ?"�� � �� �" � 2�0��A ��- -��:0�- �� 0 � 4��� 2�+�
,�� ���4:�����04 2��� 7�����- �:0 :4��� ��7��;��0� ���-��4�
��:7�4� �<�-�4� ?�=�A ���70��� ?�AN �" � �8 � 4��:0��� �8 �=� ?�� ��A�� �7�0�0� �:88�� ?�" �J ;�� ���J "�"��A 2��� �--�- 0� �"" � �8 ���:7�4� 4��:0���� ,80�� ��<��� 0 ���:� �+� 0 � 4��:0��� 2�4 ��7:��0�- 8���� ��� �0 $# ���
�=� ���70��� ?��AN �4 �� �:0 !" � �=� 4��:0��� ��- �" � ��:7�4�4��:0��� 2��� :4�-�
�=� ���70��� ?���AN �4 �� �:0 0 � �=� 4��:0��� 2�4 ;��;���- 2�0 ; �4; �0� �:88�� ?;� ���J "�"��A�
��:7�4� -�0������0��� :4��� @=� ��- ,.DEN �" � �8 � 4��:0���7��0������ @=� ?"�� ��A ��- ,.DE ?��� ��A �� �7�0�0� �:88�� ?�" �J;� ���J "�"��� 2��� ;�;�00�- 0� 0 � ��<0:�� �8 ���70��� �� ,80�� 0 � 4��;�� �- ���� ��<�- 0 ���:� �+ ��- ��7:��0�- 8�� �" ��� �0 ���� 0��;���0:���0 � ��4�����7� �8 0 � 4��;��4 2�4 ���4:��- �0 �"�� ���� ��- #$! ���
��:7�4� -�0������0��� :4��� @=� ��- ;�@,N �" � �8 � 4��:0���7��0������ @=� ?!�� ��A ��- ;�@, ?#�� ��A �� ������:� �:88��?�" �J ;� ���J "�"��� 2��� ;�;�00�- 0� 0 � ��<0:�� �8 ���70��� ��� ,80��0 � 4��;�� �- ���� ��<�- 0 ���:� �+ ��- ��7:��0�- 8�� �� ��� �0 ����0��;���0:��� 0 � 8�:���47��7� �8 0 � 4��;��4 2�4 ���4:��- �0 �<7�0�0�����- ���44��� 2�9�����0 4 �8 $!" ��- �"� ��� ��4;�70�9��+�
��:7�4� -�0������0��� :4��� @=� ��- *�.��N � �� *�.�� 2�4-�44��9�- �� �" � �7�0���0����� =8 0 �4 4��:0���� ��� � ��� �--�- 0� �4��:0��� 7��0������ @=� ?!�� ��A �� ; �4; �0� �:88�� ?�" �J ;� ���J"�"��A� G��� 0 �4 ��<0:��� �" � 2��� ;�;�00�- ��0� 0 � ��<0:�� �8���70��� ���� ,80�� 0 � 4��;�� �- ���� ��<�- 0 ���:� �+ ��- ��7:��0�-8�� �" ��� �0 ���� 0��;���0:��� 0 � 8�:���47��7� �8 0 � 4��;��4 2�4���4:��- �0 �<7�0�0��� ��- ���44��� 2�9�����0 4 �8 �#" ��- ��� �����4;�70�9��+�
H�7��9�-N ��7����� �� ���� BK��$��C
B�C �A �� �����0�� �� .��-��7>� �� ����� ���� ����� ������� �)*)� �#�!!� I !!�J �A @� (� D��7 �� � @� � :� �� � �00���� ����� ������� �)*���%,� !$" I !$$�
B!C �A E� *:����04:� �� D�>�4�>�� *� 17 �+���� �� 3���>�0�� ��D���>�� �� D�>� ���� �� ����""�' �))+� ��� �$ I !#J �A � ,�*��F:�6� �� .� �:�8��-� �������"��' �))�� �%� �$�� I �$���
B$C �A 3� 3� *S>����� (� D���9:�� ����� ������� �)*�� ��%� �"" I �"�J�A H� � � ��-4� �� �� .��-4��+� ������� �� �)�,� �),� �$ I �"$�
B�C �A 3� K��04:� �� = >:��� ����� ������� �)*�� �#�� �"� I ��$J �A �� ���:����:�0� @� (� .�����7� *� (:���:� ����� ���� �)+*� )#� �!�� I �!�$�
B�C �� �2���� @� 3� ��4�:;0�� ����� ���� ���� �)*,� ��#� $�# I $�!�B�C �A � ��4����� E� @���� *� �:��00�� �� E��9������� D� .���� ����� ,�
*��7 �4���� �������"��' �))�� ��� �$## I �$��J �A H� ����� 3:�0 ���44��0�0���� D�7 ��47 � 1��9��4�0S0 */�7 ��� �))��
B#C H� 3� .��4��+� �� � ��88����� *� � H:�;;��� (� �� �����+� ��������� �)*�� ,�� ���" I �����
B�C ,� ./�-0� 1� 3��40� ����� ���� �)))� ��� ���$ I �����B�C ,� ./�-0� 1� 3��40� ����� ���� �)))� ��� $""$ I $""#�B�"C ,.DE �4 �<�-�6�- 0� �� ��0��4��+ ����� ��-�7�� 7�0��� ��- 4 �24 1 %
�4 ��4��;0��� ��<��� �0 �"�� ���� ���� #$!� ��- ��� ���B��C D � ; ���� -���9�0�9� ;�@, �4 -�����6�- �� 0 � ;���<�-�4��7�0��+6�-
���70��� 0� 8��� 0 � 7����4;��-��� ��; ����� 2 �7 8�:���47�4 ����>����� ��-�� ?;� ���A 2�0 �<7�0�0��� ��- ���44��� ��<��� �8 $!$��- �"$ ��� ��4;�70�9��+�
B5C ��� 3� <���� @��8� ��� �� @���6��7 � ��� *� 3�������40�0:0 8/� =�����47 � � ���� :�- .��7 ���� -�� 1��9��4�0S0G����:��,����040��44� !�� #��"� G����:�� ?������+AG�<N ?���A#���!"$����#����� N ��40�;���6��7 T������>�7 �����:���8����:���-�
��� .� ���V����� @��8� ��� (� ����6���40�0:0 8/� @ +4�>���47 � � ���� -�� 1��9��4�0S0 G����:��,����040��44� !�� #��"� G����:�� ?������+A
@��9����6� ��� �� ��47 ��-0��40�0:0 8/� @ +4�>���47 � � ���� -�� 1��9��4�0S0 .�4��3����������40��44� �"� �"�� .�4�� ?E2�06�����-A
@��8� ��� D� .���+� ��;���� ��� @� .�-����>��40�0:0 8/� @ +4�>���47 � � ����� 1��9��4�0S0 G����:��@������4� �#"" G����:�� ?E2�06�����-A
B55C D �4 ;��Q�70 �4 ���� 4:;;��0�- �+ 0 � ��:047 � G��47 :��4�������47 �80� 0 � G��-4 -�� � ���47 �� ��-:40��� ��- .,EG,�� �� 0 ��>��;���� ��� � @���� ��- .� ���4�� 8�� 0�7 ��7�� �44�40��7��
E:;;��0��� ��8����0��� 8�� 0 �4 ��0�7�� �4 �9������� �� 0 ����:�-�� 00;N%%222�2���+�97 �-�% ���%����2��-0�% �� 8��� 0 � �:0 ���