以食品衛生標準檢驗評估不同10倍稀釋體積

之序列稀釋法差異

摘要

衛生福利部公告之食品微生物檢測方法，其序列稀釋方法均為取10倍稀釋檢液以10 : 90序列稀釋法，執行定量或半定量食品中微生物之檢驗；為此，實驗室須預先製備含90mL無菌稀釋液之稀釋瓶，其有限的配製量限縮實驗室每批次檢驗量能。為簡化製備無菌稀釋瓶之程序，期望能縮小稀釋之總體積以執行食品微生物之檢驗，本研究以配對t檢定 (paired-t test, α = 0.05) 評估10倍稀釋檢液以1 : 9

序列稀釋法 (1 : 9 dilution) 與10 : 90序列稀釋法 (10 : 90 dilution)兩種稀釋體積法之間，對飲料類、冰品類之生菌數檢驗結果差異，並比較其大腸桿菌群及大腸桿菌檢驗結果值。結果顯示兩種稀釋體積法所得之生菌數、大腸桿菌群檢驗值並無顯著差異；但因該批檢體大腸桿菌均為陰性，尚無法評估大腸桿菌檢驗結果之差異性。經由統計分析，飲料、冰品類中生菌數、大腸桿菌群檢驗以10 : 90序列稀釋或以1 : 9序列稀釋操作，無顯著差異。

陳筱文 江紅思 楊舒秦 林冠蓁 許朝程 新北市政府衛生局

檢體 10倍稀釋檢液

50 mL

10 : 90與1 : 9序列稀釋法之菌數分布比較

* 依據衛福部公告方法取有效位數2位。

飲料類、冰品類之衛生標準檢驗結果比較

PBS

90 mL

PBS

90 mL

10 mL 10 mL

PBS

9 mL PBS

9 mL

1 mL 1 mL

10倍 100倍 1,000倍

對照組X

10 : 90

實驗組Y

1 : 9

生菌數

生菌數

Paired t-test

α = 0.05, 雙尾

PBS

90 mL

10 mL

PBS

9 mL

1 mL

?

調製菌液

(E. coli )

10倍 100倍 1,000倍

Serial Diluter

圖1. 以調製菌液比較10 : 90與1 : 9稀釋法之菌數差異實驗流程

圖2. 調製菌液之生菌數二重複精密度情形 * 依據衛福部公告方法取有效位數2位。

0.2108

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415161718

R =

| L

og值

1-L

og值

2 |

次別i

對照組Xi (10：90)

實驗組Yi (1：9)

精密度管制範圍

圖3. 以飲料、冰品類比較10 : 90與1 : 9稀釋法之檢驗結果實驗流程

* 最確數值之95%信賴區間。

目的

依據衛生福利部公告之食品微生物檢測方法，實驗室須預先製備含90mL無菌稀釋液之稀釋瓶，以執行10 : 90序列稀釋，其有限的配製量限縮實驗室每批次之檢驗量能；本實驗評估1 : 9序列稀釋與10 : 90序列稀釋之食品中生菌數、大腸桿菌及大腸桿菌群檢驗結果差異，期望1 : 9序列稀釋執行食品中微生物之檢驗時，能在不影響檢驗結果值前提下，提高實驗室每批次檢驗量能。

為評估10 : 90與1 : 9序列稀釋所得之菌數差異，首先以 E. coli

調製菌液執行18組生菌數檢驗，利用配對 t 檢定比較對照組 (10 : 90)

與實驗組 (1 : 9) 所得之生菌數結果有無統計上的顯著差異；其中實驗組使用「連續稀釋分注儀 (iNLABTEC Serial Diluter)」輔助執行1

: 9序列稀釋，實驗流程詳如圖1。

實驗結果如表1所示，平板之二重複平均值配對 t 檢定機率為0.09，生菌數結果配對 t 檢定機率為 0.34 (n = 18)，均大於 α 值 (α =

0.05)，顯示對照組與實驗組之菌數分布無統計上的顯著差異；其中二重複結果均在本實驗室之精密度管制範圍內 (如圖2)。

PBS

90 mL

10 mL

PBS

9 mL

1 mL

100倍 1,000倍

對照組X

10 : 90

實驗組Y

1 : 9

生菌數

E. coli Coliform

生菌數

E. coli Coliform

結果比較

PBS

90 mL

10 mL

PBS

9 mL

1 mL

100倍 1,000倍

Serial Diluter

圖4. 飲冰品、冷凍食品之生菌數二重複精密度情形

以飲料、冰品執行10 : 90與1 : 9序列稀釋之生菌數、大腸桿菌及大腸桿菌群檢驗結果差異評估，共收集56件檢體，其中100倍~1,000倍稀釋之生菌數落於計數範圍者共計11組，實驗流程如圖3；實驗組使用「連續稀釋分注儀」輔助執行1 : 9序列稀釋。

生菌數實驗結果如表2，平板之二重複平均值配對 t 檢定機率為0.15，生菌數結果配對 t 檢定機率為 0.41 (n = 11)，均大於 α 值 (α =

0.05)，顯示對照組與實驗組之生菌數檢驗結果無統計上的顯著差異；其中二重複結果均在本實驗室之精密度管制範圍內 (如圖4)。

部授食字第1021950329號公告修正之檢驗方法–生菌數

飲料、冰品之多管發酵法結果如表3

所示，56件之大腸桿菌檢驗結果均為陰性；其中序號42~56(共15件)之對照組與實驗組大腸桿菌群最確數值之95%信賴區間皆有互相重疊範圍，初步顯示對照組與實驗組之大腸桿菌群檢驗結果值無統計上的顯著差異。

結果與討論 本實驗顯示1 : 9與10 : 90序列稀釋所得之飲冰品生菌數、大腸桿菌群檢驗結果值無統計上的顯著差異；而收集之檢體其大腸桿菌檢驗結果均為陰性，故尚無法評估大腸桿菌檢驗結果差異。

在飲冰品之多管發酵法結果中，序號50、53、54之實驗組大腸桿菌群最確數值與對照組差異較大(如表3) ，其可能為操作造成之誤差，或是連續稀釋分注儀之無菌袋未妥適展開影響混合均勻度所致，我們認為仍有必要繼續評估以該儀器執行食品中大腸桿菌及大腸桿菌群之多管發酵法檢驗結果；但在連續稀釋分注儀之輔助下執行食品衛生標準之檢驗，確實有效提升實驗室每批次檢驗量能、檢液序列稀釋速率等，值得持續評估1 : 9序列稀釋之檢驗結果 。

表1. 以調製菌液比較10 : 90與1 : 9序列稀釋之生菌數及配對 t 檢定結果

表2. 飲料、冰品類10 : 90與1 : 9序列稀釋之生菌數及配對 t 檢定結果

部授食字第1021950329號公告修正之檢驗方法–生菌數、大腸桿菌群 部授食字第1021951163號公告修正之檢驗方法–大腸桿菌

di值對照組Xi

(10：90)

實驗組Yi

(1：9)di值

值1 值2 值1 值2

1 10x 92 83 87.5 97 97 97 -9.5 880 970 -90

2 10x 98 97 97.5 120 118 119 -21.5 980 1200 -220

3 10x 112 112 112 107 100 103.5 8.5 1100 1000 100

4 10x 140 129 134.5 149 137 143 -8.5 1300 1400 -100

5 10x 161 155 158 163 156 159.5 -1.5 1600 1600 0

6 10x 179 145 162 174 138 156 6 1600 1600 0

7 100x 52 56 54 61 69 65 -11 5400 6500 -1,100

8 100x 55 58 56.5 70 81 75.5 -19 5600 7600 -2,000

9 100x 54 62 58 44 60 52 6 5800 5200 600

10 100x 65 69 67 77 87 82 -15 6700 8200 -1,500

11 100x 66 72 69 70 84 77 -8 6900 7700 -800

12 100x 66 76 71 63 70 66.5 4.5 7100 6600 500

13 100x 66 75 70.5 60 65 62.5 8 7000 6200 800

14 100x 65 76 70.5 81 89 85 -14.5 7000 8500 -1,500

15 100x 73 76 74.5 53 66 59.5 15 7400 6000 1,400

16 100x 53 58 55.5 66 70 68 -12.5 7600 6800 800

17 100x 76 77 76.5 69 99 84 -7.5 7600 8400 -800

18 100x 78 81 79.5 76 82 79 0.5 8000 7900 100

-4.44 -211.67

10.62 911.37

-1.77 -0.99

0.09 0.34

平均値 d̅

標準差Sd

t 値

檢定機率P( t df=17 )

X̅i - Y̅i

paired t-test

α = 0.05

雙尾

平均値 d̅

標準差Sd

t 値

檢定機率P( t df=17 )

次別i稀釋

倍數 二重複 生菌數

測定值*

二重複

對照組Xi (10：90) 實驗組Yi (1：9)

Xi - Yi生菌數

測定值*平均值 X̅i 平均值 Y̅i

對照組

10：90

實驗組

1：9

對照組

10：90

實驗組

1：9

1 冰塊A 陰性 陰性 陰性 陰性

2 冰塊B 陰性 陰性 陰性 陰性

3 冰塊C 陰性 陰性 陰性 陰性

4 冰塊D 陰性 陰性 陰性 陰性

5 冰塊E 陰性 陰性 陰性 陰性

6 冰塊F 陰性 陰性 陰性 陰性

7 食用冰塊A 陰性 陰性 陰性 陰性

8 食用冰塊B 陰性 陰性 陰性 陰性

9 食用冰塊C 陰性 陰性 陰性 陰性

10 食用冰塊D 陰性 陰性 陰性 陰性

11 食用冰塊E 陰性 陰性 陰性 陰性

12 食用冰塊F 陰性 陰性 陰性 陰性

13 食用冰塊G 陰性 陰性 陰性 陰性

14 食用冰塊H 陰性 陰性 陰性 陰性

15 食用冰塊I 陰性 陰性 陰性 陰性

16 食用冰塊J 陰性 陰性 陰性 陰性

17 食用冰塊K 陰性 陰性 陰性 陰性

18 食用冰塊L 陰性 陰性 陰性 陰性

19 食用冰塊M 陰性 陰性 陰性 陰性

20 食用冰塊N 陰性 陰性 陰性 陰性

21 食用冰塊O 陰性 陰性 陰性 陰性

22 百香果冰沙A 陰性 陰性 陰性 陰性

23 紅茶冰沙 陰性 陰性 陰性 陰性

24 綠豆沙3 陰性 陰性 陰性 陰性

25 拿鐵冰沙 陰性 陰性 陰性 陰性

26 芒果冰沙A 陰性 陰性 陰性 陰性

27 芒果冰沙B 陰性 陰性 陰性 陰性

28 七巧歐蕾冰沙 陰性 陰性 陰性 陰性

29 百香果冰沙B 陰性 陰性 陰性 陰性

30 冰箤檸檬 陰性 陰性 陰性 陰性

31 蛋捲冰淇淋 陰性 陰性 陰性 陰性

32 小美冰淇淋 陰性 陰性 陰性 陰性

33 百吉冰沁蘇打 陰性 陰性 陰性 陰性

34 翡翠檸檬冰鎮 陰性 陰性 陰性 陰性

35 果汁星冰樂 陰性 陰性 陰性 陰性

36 檸檬雪花冰 陰性 陰性 陰性 陰性

37 冰炫風原味 陰性 陰性 陰性 陰性

38 德紐無鹽奶油 陰性 陰性 陰性 陰性

39 三峽蜜香紅茶 陰性 陰性 陰性 陰性

40 有機黑豆漿 陰性 陰性 陰性 陰性

41 紅豆牛奶冰 陰性 陰性 陰性 陰性

42 冰塊G 陰性 陰性 3.6 3.6

3.6 7.4

0.17~18* 1.3~20

44 芋頭雪花冰 陰性 陰性 9.2 9.2

45 牛奶雪花冰 陰性 陰性 23 23

46 綠豆沙2 陰性 陰性 23 23

23 43

4.6~94 9~180

48 紅豆雪花冰 陰性 陰性 43 43

49 綠抹茶冰沙 陰性 陰性 43 43

75 9.4

17~200 3.6~38

51 冰塊H 陰性 陰性 93 93

240 460

42~1,000 90~2,000

1,100 93

180~4,100 18~420

>1,100 240

420~-- 42~1,000

55 咖啡冰沙 陰性 陰性 >1,100 >1,100

56 仙草牛奶冰 陰性 陰性 >1,100 1,100

53 綠豆沙冰沙 陰性 陰性

54 冰豆漿 陰性 陰性

50 紅茶雪派 陰性 陰性

陰性 陰性52 奶酪雪花冰

43 芋頭三豆冰 陰性 陰性

47 綠豆沙1 陰性 陰性

序號 受測檢體

E. coli MPN/mL Coliform MPN/mL

表3. 飲冰品之多管發酵法結果

0.2108

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

綠豆

沙1

冰箤

檸檬

綠豆

沙2

果汁

星冰

樂

紅茶

雪派

綠豆

沙冰

沙

綠抹

茶冰

沙

冰豆

漿

咖啡

冰沙

芒果

冰沙

綠豆

沙3

R =

| L

og

值1

- L

og

值2

|

受測檢體

對照組Xi (10：90)

實驗組Yi (1：9)

精密度管制範圍

di值對照組Xi

(10：90)

實驗組Yi

(1：9)di值

值1 值2 值1 值2

1 綠豆沙1 100x 28 26 27 28 35 31.5 -4.5 2,700 3,200 -500

2 冰箤檸檬 100x 30 28 29 39 46 42.5 -13.5 2,900 4,200 -1,300

3 綠豆沙2 100x 29 40 34.5 39 45 42 -7.5 3,400 4,200 -800

4 果汁星冰樂 100x 34 41 37.5 30 26 28 9.5 3,800 2,800 1,000

5 紅茶雪派 100x 42 33 37.5 38 48 43 -5.5 3,800 4,300 -500

6 綠豆沙冰沙 100x 49 70 59.5 52 61 56.5 3 6,000 5,600 400

7 綠抹茶冰沙 100x 57 59 58 61 61 61 -3 5,800 6,100 -300

8 冰豆漿 100x 101 95 98 120 126 123 -25 9,800 12,000 -2,200

9 咖啡冰沙 100x 162 159 160.5 140 165 152.5 8 16,000 15,000 1,000

10 芒果冰沙 100x 167 169 168 185 206 195.5 -27.5 17,000 20,000 -3,000

11 綠豆沙3 1,000x 107 86 96.5 104 84 94 2.5 96,000 94,000 2,000

-6 -382

12.17 1,460.01

-1.64 -0.91

0.15 0.41

paired t-test

α = 0.05

雙尾

生菌數

測定值*Xi - Yi

序號i二重複

X̅i - Y̅i

稀釋

倍數受測檢體

平均值 X̅i 平均值 Y̅i

對照組Xi (10：90) 實驗組Yi (1：9)

二重複 生菌數

測定值*

平均値 d̅

標準差Sd

t 値

檢定機率P( t df=10 )

平均値 d̅

標準差Sd

t 値

檢定機率P( t df=10 )

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