（～８／２２）

冨永将大・川崎浩平・井山佳美

送受信班進行状況

AHL

求められること

①AHL合成量（合成速度）　を下げる

②感受性　を下げる

③発現量　を下げる

5 hours…

①AHL合成量、合成速度を下げる

　 → luxIの発現量を小さくする（ RBSを替える）

②感受性を下げる

　 →シグナル分子を替える

②出力量を下げる

→luxRの発現量を小さくする（ RBSを替える）

luxI(OHHL)

AHL

LasI(OdDHL)

cinIRhlI(BHL)

PNAS November 25, 2003 vol. 100 suppl. 2 14549–14554Fig2. Structures of different autoinducers.

ptet(R0040)

LasI(C0178)CinI(C0176)RhlI(C0170)

LasI+LVA(C0078)CinI+LVA(C0076)RhlI+LVA(C0070)

B0034PCR +

+

AHL合成装置

+ptet (J13002)+RBS(B0034)

orplac(J04500)+RBS(B0034)

BioBrick　パーツの準備（ AHL合成酵素）

Bba_ パーツ概要 プラスミド 2008 2007 2006

C0178 LasI pSB1A2 ‐ ○ ○

C0170 RhlI pSB1A2 ‐ ○ ○

C0076 CinI　+　LVA pSB2K3 × × ×

C0078 LasI　+　LVA pSB2K3 × × ×

C0070 RhlI　+　LVA pSB2K3 × ● ●

I9020 RBS+RhlI pSB1A2 ‐ △ △

I9030 RBS+CinI pSB1A2 ‐ △ △

S03154 RBS+LasI pSB1A2 ‐ △ △

「○」…ミニプレインサートチェック OK、「●」…PCRインサートチェック OK

「△」…保留、「× 」…DNA得られず、「‐」…未実施

BioBrick パーツ（プロモータ+RBS）

Bba_ パーツ概要 プラスミド 2008 2007 2006

J04500 pLac+RBS pSB1AK3 △ △ △

J13002 Ptet+RBS pSB1A2 △ △ △

「○」…ミニプレインサートチェック OK、「●」…PCRインサートチェック OK

「△」…保留、「× 」…DNA得られず、「‐」…未実施

2006年iGEMで、バンドの位置がおかしいことが確認されている

AHL合成装置 (luxI以外 )

ptet　 orplac

B0034

＋

lasIRhlI

Receiver(BBa_T9002)

ptet luxR plux GFP

ptet B0034 luxI+LVA

Sender(luxI)(BBa_S03623)

Cross-talkの確認

?

Cross-talkの確認

Receiver

Sender

Spot

①AHL合成量、合成速度を下げる

　 → luxIの発現量を小さくする（ RBSを替える）

②感受性を下げる

　 →シグナル分子を替える

②出力量を下げる

→luxRの発現量を小さくする（ RBSを替える）

ptet B0034 luxI+LVA

Sender(BBa_S03623)

①B0033(weaker)②B0032(medium)③B0031(weak)

①

②

③

時間

[AH

L]

PCR

AHL合成量を下げる

ptet B0034

Sender(BBa_S03623)

①B0033(weaker)②B0032(medium)③B0031(weak)

①

②

③

時間

[Lux

R]

PCR

luxR合成量を下げる

luxR

luxI

AHL

LasI

cinIRhlI

PNAS November 25, 2003 vol. 100 suppl. 2 14549–14554

TraI

Fig2. Structures of different autoinducers.