定序工作介紹定序工作介紹

工作流程工作流程菌的樣品

收件 當天養菌 14hrs

抽取 plasmid DNA (4hrs) ( 中午前完成 )

10 Day :

20 Day : 電泳檢視 (1hr)

添加 Big Dye 反應試劑 (2hrs) ( 下午 5~6 點完成 )

PCR 循環 cycle (4hrs)

酒精沉澱 (2hrs) 放置到 3730 機器中 (1run 需 2hrs) (12:00 pm 準時上機 )

30 Day :分析結果、上傳檔案、寄發 mail 、列印紙本

中班

晚班

分析人員

( 會依客戶的 primer Tm 值改變 annealing temperature)

PS. 若有抽不到 plasmid DNA 或 DNA 濃度太低時 即會判定重養或預養 ( 以單管養 3 ml) 抽取 DNA 的方式則採取以單管 Kit 的方式

PS. 若當天收回來的菌為客戶剛塗或剛點菌 ( 尚未有菌長出時會再培養箱內培養一天後再點在養菌盤中 此時會發 mail 告知客戶 Data 會 delate 並不表示菌有問題 )

工作流程工作流程

收件 ( 下午 3 點前 )10 Day :

20 Day :

添加 Big Dye 反應試劑 (2hrs) ( 下午 5~6 點完成 )

PCR 循環 cycle (4hrs)

酒精沉澱 (2hrs) 放置到 3730 機器中 (1run 需 2hrs) (12:00 準時上機 )

分析結果、上傳檔案、寄發 mail 、列印紙本

DNA 直接電泳檢視 (1hr) 中班

晚班

分析人員

Plasmid DNA & PCR product

PCR 純化 (30min~1hrs) 電泳檢視 (1hrs)

工作流程工作流程

收件 ( 下午 5 點後 )10 Day :

20 Day :

進行 Big Dye 反應 (2hrs) ( 晚上 8:00~)

PCR 循環 cycle (4hrs)

酒精沉澱 (2hrs) 放置到 3730 機器中 (1run 需 2hrs) (10:00am 準時上機 )

分析結果、上傳檔案、寄發 mail 、列印紙本 (12:00am ~ 6:00pm)

DNA 直接電泳檢視 (1hr) 中班

分析人員

Plasmid DNA & PCR product

PCR 純化 (30min~1hrs) 電泳檢視 (1hr)

早班

PS1. 3730 為 48 根毛細管，一次需花費 2 個小時

PS2. 固定上機時間為當日 12 pm ( 當日中午 Sample + 前日菌的 sample) 以及隔日 10 am ( 當日下午 sample)

PS3. 晚上機器可以跑的最大數量 : 2 盤半 (5 runs) 上午上機可以跑的最大數量 : 2 盤 (4 runs)

寄發郵件 ,上傳 GBST,聯絡客戶

Tm 值 : 做反應 , 分析

養菌樣品品質 , 反應

樣品種類樣品種類 純化方法與注意事項 純化方法與注意事項

ColonyColony

/Culture /Culture 請標明樣品名稱、菌種所含請標明樣品名稱、菌種所含 PlasmidPlasmid 及抗生素及抗生素種類與濃度。 種類與濃度。

Plasmid DNA Plasmid DNA 請標明請標明 DNADNA 純化所使用純化所使用 KitKit 之種類，並標示之種類，並標示DNADNA 濃度。濃度。 DNADNA 濃度須大於濃度須大於 0.1μg/μl0.1μg/μl ，一個，一個反應至少提供反應至少提供 10μl10μl 。 。

PCR product PCR product PCRPCR 產物濃度須大於產物濃度須大於 0.05μg/μl0.05μg/μl ，體積約，體積約 10μ10μll ，附上電泳照片及標明，附上電泳照片及標明 SampleSample 及及 DNA marDNA markerker 的量，並請於訂單上註明是否需要再純化。的量，並請於訂單上註明是否需要再純化。

Primer Primer 一次反應一次反應 PrimerPrimer 需要需要 1μl1μl ，濃度應大於，濃度應大於 50ng/50ng/μlμl 。 。

☆ 送件注意事項

定序結果分析

1. 依照反應單 Key-in 客戶資料夾 ( 訂單編號、單位名稱與實驗室主持人 )2. 將客戶 Data 分別放入資料夾中3. 以分析軟體分析客戶的結果4. 若需重做則填寫重做單並打電話告知客戶5. 將客戶的定序結果上傳至 GBST 系統6. 若有歸還樣品的部分，則在正副本上均以螢光筆標示 並將訂單正本交給實驗室人員處理

PCR product-1

Plasmid DNA-1

1

Plasmid DNA-1

2

時間 時間 4/44/4

早班早班 (( 一一 )) 早班早班 (( 二二 )) 午班午班 晚班晚班 行政助理行政助理 分析人員分析人員

9:00-9:00-12:0012:00

沉澱上機沉澱上機(( 前一天前一天 4/34/3 晚晚班之反應班之反應 ))

10:0010:00 準時放入準時放入37303730 機器機器

抽取菌的抽取菌的 4/34/3 養養菌的 菌的 Plasmid DPlasmid DNANA

將訂單正將訂單正副本蓋章副本蓋章 ,, 並填上並填上反應盤號反應盤號 ,, 貼電泳貼電泳圖圖 , , 寫光寫光碟片碟片 , , 協協助收件助收件 , , 發發 G-mail,G-mail, 燒光碟燒光碟 , , 列印紙本列印紙本

分析分析 4/34/3 早早班人員做班人員做的反應的反應 , , 上傳結果上傳結果至至 GBSTGBST

12:00-12:00-15:0015:00

填寫第一盤的填寫第一盤的反應單反應單 (( 菌的為菌的為主主 )) 與與 (( 重做的重做的部分部分 ))

填寫第二盤反應填寫第二盤反應單單 , , (( 重做的部重做的部分分 ))

LoadingLoading 電泳電泳 (plasmi(plasmid DNA & PCR producd DNA & PCR product)t)

純化純化 PCR productPCR product

將電泳圖貼在定序單將電泳圖貼在定序單上上

分析分析 4/34/3 早早晚班人員晚班人員做的反應做的反應 , , 上傳結果上傳結果至至 GBST, GBST, 填寫重做填寫重做單單

15:00-15:00-17:3017:30

做反應做反應 , , 找重找重做之樣品做之樣品 ,, 放放進進 PCRPCR 機器機器

做反應或養菌做反應或養菌 ,, 找找重做之樣品重做之樣品 ,, 放放進進 PCRPCR 機器機器

4/44/4 急件菌的抽取急件菌的抽取 plaplasmid DNA , smid DNA , 協助做反協助做反應應 , , 協助養菌協助養菌

發發 G-mail,G-mail, 燒光碟燒光碟 , , 列印紙本列印紙本

分析分析 4/34/3 晚晚班人員班人員做做的反應的反應 , , 上傳結果上傳結果至至 GBSTGBST

18:00-18:00-19:0019:00

Key-in sample Key-in sample namename

養菌養菌 協助收件協助收件 4/44/4

協助協助 Key-in sample nKey-in sample nameame

收件收件 ,4/4,4/4

Key-in sample,Key-in sample, 找重做之樣品找重做之樣品協助收件協助收件 分析分析 4/34/3 晚晚

班人員班人員做做的反應的反應 , , 上傳結果上傳結果至至 GBST, GBST, 填寫重做填寫重做單單

19:00-19:00-20:0020:00

LoadingLoading 電泳電泳 (plasmi(plasmid DNA & PCR producd DNA & PCR product)t)

純化純化 PCR product,PCR product, 將將電泳圖貼在定序單上電泳圖貼在定序單上

填寫反應單填寫反應單

20:00-20:00-24:0024:00

做反應做反應 (( 晚上收件進來晚上收件進來 ))

與沉澱上機與沉澱上機(4/4(4/4 當天早班的反應當天早班的反應 ))

24:0024:00 準時放入準時放入 37303730 機器機器

謝謝大家謝謝大家 !!