人血清中总胆固醇的测定人血清中总胆固醇的测定

[[ 实验目的及要求实验目的及要求 ]] 学会利用氧化酶法测定血清中总胆固醇含量的原理和方法。学会利用氧化酶法测定血清中总胆固醇含量的原理和方法。 [[ 实验原理实验原理 ]] 胆固醇脂胆固醇脂 +H2O +H2O 胆固醇胆固醇 ++ 游离脂肪酸游离脂肪酸 胆固醇胆固醇 +O2 ⊿4-+O2 ⊿4- 胆甾烯酮胆甾烯酮 +H2O2+H2O2 2H2O2+4-AA+4-2H2O2+4-AA+4- 氯仿 醌亚胺（红色）氯仿 醌亚胺（红色） +4H2O+4H2O CEHCEH ：胆固醇脂酶 ：胆固醇脂酶 PODPOD ：过氧化物酶 ：过氧化物酶 CHODCHOD ：胆固醇氧化酶 ：胆固醇氧化酶 4-AA4-AA ：： 4-4- 氨基安替吡啉氨基安替吡啉 醌亚胺在醌亚胺在 500nm500nm 有特征吸收，且生成量与样本中的胆固有特征吸收，且生成量与样本中的胆固

醇含量成正比，可通过测定标准品反应生成的醌亚胺的吸醇含量成正比，可通过测定标准品反应生成的醌亚胺的吸光度值，计算出样本中胆固醇的浓度。光度值，计算出样本中胆固醇的浓度。

[[ 实验仪器及试剂实验仪器及试剂 ]]

试管 移液管 试管 移液管 UNICO-2000UNICO-2000 型分光光度计 恒型分光光度计 恒温水浴锅温水浴锅

标准血清 样本血清 蒸馏水 酶试剂盒标准血清 样本血清 蒸馏水 酶试剂盒

[[ 实验步骤实验步骤 ]]

按下表加入各反应物：按下表加入各反应物：

微升微升 空白管空白管 标准管标准管 样本管样本管

酶试剂酶试剂 20002000 20002000 20002000

蒸馏水蒸馏水 2020 ————

标准血清标准血清 ———— 2020 ————

样本血清样本血清 ———— ———— 2020

A500nmA500nm

各管混匀，各管混匀， 37℃37℃ 反应反应 6 min6 min ，以空白管校，以空白管校零。零。

A 样本

A 标准

× 标准血清浓度胆固醇含量 =