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欢迎参加岛津液相维修培训班

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• 采用 “ HPLC” 级溶剂• 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化

的溶剂• 对试样有适宜的溶解度• 溶剂粘度要小• 与检测器相匹配

流动相的选择流动相的选择

其他问题

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其他问题

• 水的等级– 纯化水– 蒸馏水– 去离子水

波长 (nm)

纯化水

去离子水

因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高

纯化水中去除了无机和有机的污染物

吸光吸光

率率

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其他问题

水 / MeOH 梯度

ODS 柱

鬼峰

Gradient C

urve

1 ml/min, 0-100% MeOHover 10 mins and hold for15 mins.

鬼峰的出现鬼峰的出现

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其他问题

• 溶剂的等级– HPLC 级– 优级纯– 分析纯

都经过蒸馏和 0.45u 的过滤 ( 除纤维毛 , 未溶解的机械颗粒

优级纯的纯度比分析纯大 , 但里面含有防腐剂和抗氧化剂

HPLC 级经过 0.2u 的过滤 , 且除去有紫外吸收的杂质

微量分析、梯度洗脱微量分析、梯度洗脱

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其他问题

甲醇 乙睛 正己烷

分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图

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其他问题溶剂的过滤 滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。 醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用

于水基溶剂。 尼龙 66 滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶

液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水

溶性样品和有机溶剂

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脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡

气泡对测定的影响： 1 ）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和

峰面积 2 ）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3 ）检测器中的气泡产生基线波动

其他问题

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SHIMADZU 脱气的目的

1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1 ）示差折射率检测器 * 使折射率变化 2 ） UV 检测器（ 200nm 以下） * 溶解氧气有吸收 3 ）荧光检测器 * 溶解氧气有消光作用

其他问题

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其他问题

脱气的方法

1. 超声波脱气法2. He 清除法3. 使用氟树脂膜的减压脱气法

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其他问题He 清除法

调压阀

排气阀

往送液泵

流动相

过滤器

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其他问题

氟树脂膜 真空室

往送液泵

真空泵控制器流动相

使用氟树脂膜的减压脱气法

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梯度洗脱法

梯度洗脱装置：梯度洗脱装置：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶

剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。

梯度洗脱：梯度洗脱：

优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测

量和提高分离精度

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梯度洗脱法的注意点溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差

梯度混合的溶剂互溶性要好

梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）

查看空白实验的数据。

遵守分析周期。（最初的分析数据不采用）

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样 品 处 理样 品 处 理

1. 使用流动相溶解样品 -- 减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 -- 保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀

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其他问题

缓冲液

选择缓冲液的步骤 1 . 确定最佳分离状态时的流动相 pH 2 . 选择具有与流动相的 pH 相近的 pKa 的缓冲液 （即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液） 3 . 确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 （在波长 210nm 附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）

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SHIMADZU 一些代表性弱酸的 pK

a

pK1 pK2 pK3

醋酸 4.87

柠檬酸 3.13 4.76 6.40

磷酸 2.16 7.2 1 12.32

其他问题

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缓冲液的使用

使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损

、阻塞 : 用纯水冲洗 30-60min （ 1ml/min ），再用甲醇

冲洗 30min 易受到细菌和霉菌的影响

不能直接用有机溶剂冲洗

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液相色谱容易出问题的部件

维护流程图

吸滤头

单向阀

柱塞密封圈

线路过滤器

手动进样器

检测器

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管线选择材料 不锈钢 Teflon

PEEK ( 聚醚酮 ) 尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.

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管线材料管线材料• 不锈钢 ( 可用于所有连接 )

– 能承受几千 kg/cm2 压力– 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 ( 尤其在 pH 小于 2 时 )

• PEEK ( 可用于所有连接 )– 能承受高达 250 kg/cm2 压力– 可在整个 PH 范围 (pH 1-14) 内使用 – 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等

• Teflon ( 用于柱后阻尼管、反应管和排液管 )– 化学惰性大– 能承受 5 kgf/cm2 压力

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材料：不锈钢烧结，孔径 10um

故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用 5％～ 20％的稀硝酸，超声波清洗， 再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断

吸滤头

液相色谱容易出问题的部件

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LC-10ATvp 泵：串联 式往复泵

LC-10ADvp 泵：并联式 往复泵

液相色谱容易出问题的部件

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液相色谱容易出问题的部件

单向阀结构

抛光面

透明塑料垫片

宝石球

吸液冲程 排液冲程出口单向阀

进口单向阀

泵头

流动相

单向阀原理吸液冲程 排液冲程出口单向阀

进口单向阀

泵头

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液相色谱容易出问题的部件

故障 1 ：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通措施： 1 ）用针筒抽出口单向阀以产生负压， 使宝石球与垫片分开 2 ）拆下单向阀，放入异丙醇或水中， 用超声波清洗

单向阀

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液相色谱容易出问题的部件

故障 2 ：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超 声波清洗

单向阀

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故障：密封圈磨损而导致 密封不良现象：系统压力波动大或 漏夜措施：更换密封

圈注意点： 更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆 复位 （ P－ SET ）

柱塞密封圈

流动相泵头清洗管路

柱塞杆

密封圈

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SHIMADZU 故障：堵塞

现象：系统压力波动大或压 力偏高措施： 5％稀硝酸，超声波清 洗判断依据：关闭排液阀，断开出口

管路，设定流速 1mL/min ，如压力 >3kgf/cm2 ，则可能堵塞。

线路过滤器

排液阀

压力传感器

线路过滤器

流动相

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液相色谱容易出问题的部件

进样器进样器• 自动进样器• 手动进样器• 原理：（六通阀）• 注入方式：• 1 ）全量注入• 2 ）部分注入

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液相色谱容易出问题的部件进样量和检测器响应的关系示意图

进样体积

检测器响应值

定量环体积的一半 3倍定量环体积

全量注入

部分注入

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手动进样器的原理图

装填状态 进样状态

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交叉污染的原因交叉污染的原因

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• 便捷的方法（不需清洗）• 1. 进样状态下插入微量注射器• 2.切到装填状态• 3. 注入样品• 4.切回到进样状态

手动进样法手动进样法

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• 操作注意点：• 1 ）插针应插到底• 2 ）进样应使用液相色

谱专用平头进样针• 3 ）清洗应使用专用针口清洗器

手动进样器

定子转子

塑料箍

弹簧 不锈钢套

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SHIMADZU 手动进样阀

故障：转子密封损坏 现象：漏液 原因： a 拧的太紧 b 样品太脏 c 针头损坏或不使用液相专用针

解决措施：更换转子密封，并在使用

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手动进样阀 故障：载样困难

原因： a 定量环堵塞 b 进样器污染

解决措施：清洗或更换定量环、进样器

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• 分析结果重现性好• 提高柱效• 降低柱压• 保证检测稳定性

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柱子 故障：系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、

分叉峰），保留时间的改变

解决措施：清洗

正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇 反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、 0.05M 稀硫酸

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液相色谱容易出问题的部件

峰产生有肩或分叉的原因

1. 柱子劣化 （进口处产生不均匀的空隙）2. 样品劣化 （生成氧化物、分解物等）

判断标准

所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化

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SHIMADZU 延长柱寿命方法：

倒冲柱 换过滤片 修补柱头

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液相色谱容易出问题的部件柱的补修

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SHIMADZU 填料的取出

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SHIMADZU 恢复例

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硅胶基底 聚合物基底pH 范围 2 - 7.5 宽范围有机溶剂 所有 有限制压力 〈 250 kgf/cm2 低压温度 宽范围〈 60C

色谱柱的类型及适用范围

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SHIMADZU分 析 柱 的 维 护

1. 在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下 (0.2-0.3 ml/min) 冲洗 30 mins ，长时间未用的分析柱也要同样 处理

2. 定期使用强溶剂冲洗柱子3 、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗4 、净化样品5 、分离条件6 、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯7 、使用预柱8 、避免流动相组成及极性的剧烈变化9 、避免压力脉冲的剧烈变化

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• 柱压低于 150kgf/cm2• 柱温在 40℃左右，最高使用温度为 50℃• 缓冲液 PH 使用范围为 2～ 7• 流动相有机溶剂比例过低 , 柱效下降快

硅胶在硅胶在 PHPH 为为 33 ～～ 44 时稳定性最好时稳定性最好碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。

ODSODS 柱的使用注意点：柱的使用注意点：

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紫外检测器

参比池

样品池

光线

光电倍增管

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更换氘灯（紫外检测器）

• 判断氘灯能量：

设定 220nm 波长，检查参比池能量，如 能量低于 800 ，需更换氘灯。

• 操作注意点：

不要用手直接接触氘灯表面

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液相色谱容易出问题的部件

故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定 250nm 波长，通甲醇或水，查看 SMPL EN 和 REF EN ，如两者相差较大，则样品池受污。

措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重， 拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。

紫外检测器

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示差折光检测器示差折光检测器

• 原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。

• 优点：通用型检测器，• 缺点：• 1 ）对温度变化敏感• 2 ）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测• 3 ）属于中等灵敏度的检测器

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液相色谱常见问题及其对策液相色谱常见问题类型 A. 压力异常（偏高、波动） B. 漏液 C. 保留时间漂移 D. 基线问题（漂移、噪声） E. 峰形异常

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现象：无压力，流动相不流动可能原因 1 、保险丝断或电源问题 2 、柱塞杆折断 3 、泵头内有空气或流动相不足 4 、单向阀损坏 5 、漏液 6 、压力传感器损坏 ( 流动相流动正常，但无压

力 )

压力异常

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现象：压力持续偏高或不断上升 1 、流速设定过高 2 、保护柱或柱子筛板堵塞 3 、流动相使用不当或有缓冲盐析出 4 、色谱柱选择不当 5 、进样阀损坏 6 、线路过滤器堵塞

压力异常

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压力异常

现象：压力持续偏低

1 、流速设定过低 2 、色谱柱选择不当 3 、柱温过高 4 、系统漏液

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现象：压力持续偏低

1 、流速设定过低 2 、色谱柱选择不当 3 、柱温过高 4 、系统漏液

压力异常

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压力异常

现象：压力波动可能原因 1 、泵头中有气泡 2 、单向阀损坏 3 、柱塞密封圈损坏 4 、脱气不充分 5 、系统漏液 6 、使用了梯度洗脱

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SHIMADZU漏液

接头处漏液

1 、接头处松动 2 、接头磨损 3 、接头被污染 4 、部件不匹配

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漏液

泵漏液

1 、单向阀松动 2 、泵密封损坏 3 、放空阀损坏 4 、接头松动（不要拧的太紧）

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漏液

泵漏液

1 、单向阀松动 2 、泵密封损坏 3 、放空阀损坏 4 、接头松动（不要拧的太紧）

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进样阀漏液 可能原因 1 、转子密封损坏 2 、定量环堵塞 3 、进样口密封松动 4 、进样针尺寸不合适 5 、废液管产生虹吸 6 、废液管堵塞

漏液

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检测器漏液 可能原因 1 、流通池垫片损坏 2 、流通池透镜破碎 3 、手紧接头处漏液 4 、进样针尺寸不合适 5 、废液管堵塞 6 、流通池堵塞

漏液

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保留时间漂移 可能原因 1 、柱温变化 2 、流动相组分变化 3 、色谱柱没有平衡 4 、流速变化 5 、泵中有气泡 6 、流动相选择不当 7 、键合相流失 8 、缓冲容量不够

保留时间漂移

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SHIMADZU 基线漂移

可能原因 1 、温度波动 2 、流动相不均匀 ( 脱气，使用纯度更高的溶剂 )

3 、流通池被污染或有气泡 4 、流通池窗口破裂 5 、流动相配比不当或流速变化 6 、柱子平衡（约 30－ 60min ）

基线问题

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SHIMADZU基线漂移

可能原因 7 、流动相污染，变质或由低品质

溶剂配成 8 、样品中有强保留的物质以馒头

样峰被洗出 9 、检测器没有设定在最大吸收波

长处

基线问题

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SHIMADZU 基线噪声（规则的）

可能原因 1 、流动相、泵、检测器中有气泡 2 、有地方漏液 3 、流动相混和不均匀 4 、温度影响（检测器和柱温差别太大） 5 、其他电子设备的影响

基线问题

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SHIMADZU 基线噪声（不规则的）

可能原因 1 、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 2 、有地方漏液 3 、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀 4 、流通池污染 5 、检测池能量不足 6 、系统内有气泡

基线问题

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SHIMADZU 前沿峰、拖尾峰

可能原因 1 、柱塞板堵塞 2 、色谱柱塌陷 3 、柱外效应 4 、干扰峰 5 、缓冲不足或不合适 6 、化学或次级保留（硅羟基效应）

峰形异常

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SHIMADZU 前沿峰、拖尾峰

可能原因 7 、重金属污染 8 、样品溶剂选择不当 9 、样品过载 10 、柱温过低

峰形异常

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SHIMADZU 分叉峰

可能原因 1 、保护柱或分析柱污染 2 、样品溶剂不溶于流动相

峰形异常

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SHIMADZU 峰展宽

1. 进样体积过大2. 流动相粘度过高3. 检测池体积过大4. 保留时间过长5. 柱外体积过大6. 样品过载

峰形异常

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SHIMADZU 峰变形

可能原因 1 、样品过载 2 、样品溶剂选择不当

峰形异常

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鬼峰

1 、进样阀残余峰2 、样品中未知物3 、柱未平衡4 、水污染5 、三氟乙酸氧化