线粒体的提取

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Page 1: 线粒体的提取

1. 王维刚抓鸡 称重 采血 杀鸡 小鹃各取胸腿肉组织,剔除神经,脂肪及腱,置于冰的 IM(A)溶液中,放在天平上称重,各约 5 克,另取 2g 放入-20oC 中保存.

2. 小宋 取出组织放入器皿中细细的剪碎。3. 李艳( 兼负责计时 5min)添加 10mlNS(B)溶液,并用镊子将组织分散于溶液中,于

冰上放置 5min。4. 肖静静 将组织碎块取出放入含有 10ml IM+BSA(C) 的 50ml 的试管中,轻轻振荡,

等组织沉淀后,吸取出上清液,再向试管中加入 10ml IM+BSA(c)溶液中。5. 鲍江 匀浆。6. 置于冰上,等其它样品也准备好后进行以下步骤:

张玉俊离心及最后一步和赵利艳一起装样(血浆分装成四分)。高静、刘营生和刘磊进行以下步骤:

7. 配平后 500g,10min 离心。8. 将上清转入试管中,配平, 12000g 离心 10min。9. 去掉上清(用枪头取),向沉淀中加入 10mlIM+BSA 溶液(用预冷的小玻璃棒搅匀),

直至溶解。10. 配平后,12000g 离心 10min,弃上清液。11. 加 1.5mlSM 溶液悬浮沉淀,用小玻棒搅匀至溶解。 赵利艳取 75ul 溶液加入到含有425ulKRP 的 1.5ml 离心管中,剩下的分装成六份。整个提取过程保证在冰浴中。备:三个 10ml 的移液管及洗耳球、四个烧杯(用于第一步盛 A 溶液)、 制冰,,准备好离心管、培养皿(四个)、匀浆机、1000 的枪、配肝素、写 32 个管盛血液。