63820359 reporte 3 bioquimica
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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA
ÁREA DE QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
SECCIÓN B
ING. ERWIN ORTÍZ
PRÁCTICA NO.3
PROPIEDADES QUÍMICAS DE PROTEÍNAS
BRENDA MARÍA MONTERROSO WAIGHT
200915024
GUATEMALA, 29 de agosto de 2011
A. OBJETIVOS
1. Identificar los distintos tipos de proteínas mediante pruebas
cualitativas de color y/o coagulación.
2. Determinar a partir de las pruebas realizadas, un grupo en
específico en las cadenas de las proteínas.
3. Determinar el mecanismo de funcionamiento de las distintas
pruebas cualitativas realizadas a las proteínas.
B. RESUMEN
En la práctica no. 3 se realizó distintas pruebas para identificar a los
proteínas a partir de cambios colorimétricos y físicos.
Para ello se realizaron 9 pruebas con 4 distintas proteínas: gelatina,
caseína, clara de huevo y peptona. Estas pruebas fueron: Prueba de Elrich
Diazo, de color o Biuret, Azufre Reducido, Test de Molish, precipitación con
NaCl, precipitación de azúcares, precipitación por FeCl3, precipitación por ácido
clorhídrico y precipitación por ácido nítrico.
Para determinar la positividad de cada reacción, se baso en los cambios de
color esperados y en otros casos observar si hubo o no coagulación de la
proteína, según la teoría esperada.
C. RESULTADOS
a. Prueba Erich Diazo
Tabla no.1
“Prueba de Erich Diazo”
Proteína Conclusión Gelatina Negativa
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Positiva
Fuente: Pruebas de Identificación
b. Prueba de Color
Tabla no.2
“Prueba de Color”
Proteína Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona negativa
Fuente: Pruebas de Identificación
c. Prueba de Azufre Reducido
Tabla no.3
“Prueba de Azufre Reducido”
Proteína Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Negativa
Clara de Huevo Positiva
Peptona negativa
Fuente: Pruebas de Identificación
d. Prueba de Molish
Tabla no.4
“Prueba de Molish”
Proteína Conclusión
Gelatina Positiva
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Positiva
Fuente: Pruebas de Identificación
e. Prueba de NaCl al 5%
Tabla no.5
“Prueba deNaCl al 5%”
Proteína Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Negativa
Clara de Huevo Positiva
Peptona Negativa
Fuente: Pruebas de Identificación
f. Prueba de Precipitación de Azucares
Tabla no.6
“Prueba de Precipitación de Azucares”
Proteína Conclusión
Gelatina Negativa.
Caseína Negativa
Clara de Huevo Positiva
Peptona positiva
Fuente: Pruebas de Identificación
g. Prueba de Precipitación (FeCl3)
Tabla no.7
“Prueba de Precipitación (FeCl3)”
Proteína Conclusión
Gelatina Positiva.
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Negativa
Fuente: Pruebas de Identificación
h. Prueba de Ácido (HCl)
Tabla no.8
“Prueba de Ácido (HCl)”
Proteína Conclusión
Gelatina Negativa.
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva.
Peptona Negativa
Fuente: Pruebas de Identificación
i. Prueba de Ácido (HNO3)
Tabla no.1
“Prueba de Ácido (HNO3)”
Proteína Conclusión
Gelatina Positiva.
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Negativa
Fuente: Pruebas de Identificación
D. PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
Prueba no. 1
Nombre de la Prueba
Erich Diazo
Criterio de la Prueba
La presencia de grupos imidazol o fenoles en una muestra se reconocen por la
reacción con el ácido diazobencenosulfónico (diazida del ácido sulfanílico), y forman
productos de sustitución de color rojo al alcalanizar la muestra. [Ref. no. 1, pág. 33]
Reacción
[Ref. no. 1]
Observación
Gelatina Se separo en dos fases.
Caseína Cambio a color rojo.
Clara de Huevo Cambio a color rojo.
Peptona Cambio a color rojo.
Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Positiva
Prueba no. 2
Nombre de la Prueba
Color
Criterio de la Prueba
Esta prueba se basa en la reacción de Sulfato de Cobre (CuSO4) con compuestos
que tengan dos o más enlaces peptídicos, en un medio alcalino (NaOH). El
producto es un complejo de color violeta, cuya intensidad depende de la cantidad
de enlaces peptídicos presentes. Este complejo de coordinación entre los iones
CU+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de
los enlaces peptídicos. Los dipéptidos y los aminoácidos dan esta prueba negativa.
[Ref. no. 1 ]
Reacción
Observación
Gelatina Color celeste dos fases.
Caseína Color púrpura y otra fase azul.
Clara de Huevo Dos fases, violeta e incoloro.
Peptona Color rojizo.
Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona negativa
Prueba no.3
Nombre de la Prueba
Prueba de Azufre Reducido o grupos SH
Criterio de la Prueba
La proteína se separa mediante un álcali del azufre de los aminoácidos, el cual al
reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.
Si aparece una coloración negra (de sulfuro de plomo) en el precipitado, la reacción
será positiva, indicando la presencia de azufre. [Ref. no. 4]
Reacción
Observación
Gelatina Dos fases: verde e incoloro
Caseína Se formo precipitado blanco.
Clara de Huevo Se formo varias fases sólidas: café, negro y rojo.
Peptona Formación de precipitado, color amarillo.
Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Negativa
Clara de Huevo Positiva
Peptona negativa
Prueba no. 4
Nombre de la Prueba
Prueba o Test de Molish
Criterio de la Prueba
Reacción cualitativa entre el aminoácido con el -naftol y el ácido sulfúrico, dando
como resultado positivo con un anillo violeta al determinar glúcidos. [Ref. no.7 ]
Reacción
Observación
Gelatina Se formó una fase morada.
Caseína Se formo un anillo morado en la interfase.
Clara de Huevo Anillo morado en la interfase.
Peptona Formación de anillo morado en la itnerfase.
Conclusión
Gelatina Positiva
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Positiva
Prueba no. 5
Nombre de la Prueba
NaCl al 5%
Criterio de la Prueba
De las proteínas globulares, las albúminas son solubles en agua pura, pero
también son solubles en soluciones salinas. Las globulinas son insolubles en agua
pura, pero se disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio.
Para permanecer en solución las globulinas necesitan cierta cantidad de sal, al
disminuir la concentración de sal, la globulina precipita. Las proteínas coaguladas
son insolubles en agua, solución salina, ácidos y álcalis diluidos. [Ref. no. 3]
Reacción
La reacción involucra un rompimiento de enlaces coordinados entre diferentes cadenas laterales de los aminoácidos constituyentes de la proteína en los cuales estos al romperse no regresan a su forma original lo que deriva en la perdida de la forma globular de la proteína.
Observación
Gelatina Se formó dos fases.
Caseína No hubo cambios.
Clara de Huevo No hubo cambios.
Peptona Se formo una fase de color amarillo..
Conclusión
Gelatina Negativa
Caseína Negativa
Clara de Huevo Positiva
Peptona Negativa
Prueba no. 6
Nombre de la Prueba
Precipitación de Azucares
Criterio de la Prueba
Si la proteína se encuentra en una solución a un pH mayor a su punto isoeléctrico,
tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el
producto (un proteinato del catión) precipita. En este caso al añadir el NaOH se
incrementa el pH, al añadir el CuSO4, la proteína reacciona y precipita. Calentar a
60oC, acelera la coagulación de las proteínas. [Ref. no. 1]
Reacción
proteína-COO-1 + Cu+2 2proteína-COO-1Cu+2 (Precipitado)
Observación
Gelatina Dos fases, una amarilla y se formó
precipitado. .
Caseína Se oscureció (morado).
Clara de Huevo Presento precipitado morado en el fondo.
Peptona Se formo precipitado morado.
Conclusión
Gelatina Negativa.
Caseína Negativa
Clara de Huevo Positiva
Peptona positiva
Prueba no. 7
Nombre de la Prueba
Precipitación de FeCl3
Criterio de la Prueba
Si la proteína se encuentra en una solución a un pH mayor a su punto isoeléctrico,
tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el
producto (un proteinato del catión) precipita. Para este caso se añade FeCl3 y se
calienta a 60 [Ref. no.1]
Observación
Gelatina Se formo precipitado amarillo.
Caseína Se formo precipitado blanco.
Clara de Huevo Dos fases, una transparente y otra naranja. En ambas fases hay partículas
en suspensión.
Peptona Amarillo claro.
Conclusión
Gelatina Positiva.
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Negativa
Prueba no. 8
Nombre de la Prueba
Ácido (HCl)
Criterio de la Prueba
Toda proteína si se encuentra a un pH por debajo del punto isoeléctrico, tiene
carga positiva, y reacciona con aniones de ácidos. El producto es insoluble en la
solución y precipita. [Ref. no.1]
Observación
Gelatina Color amarillo verdoso, una sola fase
Caseína Se formo precipitado blanco.
Clara de Huevo Dos fases, una líquida y una sólida
Peptona Una sola fase de color rojizo
Conclusión
Gelatina Negativa.
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva.
Peptona Negativa
Prueba no. 9
Nombre de la Prueba
Ácido HNO3
Criterio de la Prueba
Toda proteína si se encuentra a un pH por debajo del punto isoeléctrico, tiene
carga positiva, y reacciona con aniones de ácidos. El producto es insoluble en la
solución y precipita. [Ref. no.1]
Observación
Gelatina Dos fases: una sólida y una líquida, de
color amarillo lechoso.
Caseína Se formo precipitado blanco.
Clara de Huevo Se formo espuma amarillo lechoso.
Peptona Una sola fase de color amarillo claro.
Conclusión
Gelatina Positiva.
Caseína Positiva
Clara de Huevo Positiva
Peptona Negativa
E. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
En la práctica no. 3, se realizaron 9 pruebas cualitativas para identificar y
estudiar las propiedades de 4 proteínas: gelatina, caseína, clara de huevo y
peptona.
Las proteínas son cadenas de distintas secuencias de aminoácidos. A
los enlaces entre los distintos aminoácidos entre el grupo carboxilo y el grupo
amino se le conoce como péptido.
La primera prueba realizada fue la de Elrich Diazo, la cual se utiliza para
identificar el grupo imidazol o fenol, provocando un cambio de color rojo. Por
ello la prueba para la caseína, albúmina y peptona es positiva.
La segunda prueba realizada fue la de color o Biuret. Esta prueba
consiste en agregar CuSO4 a la proteína previamente alcanizada con NaOH.
En esta prueba las muestras de caseína y albúminca (clara de huevo) se
tornaron entre color morado y violeta por lo que se puede concluir que es
positiva. Sin embargo para el caso de la gelatina y la peptona, no hubo cambio
para la primera y el color cambio a rojizo para la segunda, por lo que la prueba
es negativa.
La tercera prueba es el test de azufre reducido, la cual identifica la
presencia de enlaces de azufre en la proteína a partir del precipitado de sulfato
de plomo de color negro-gris. Para este caso, la prueba es positiva solo para la
albúmina de la clara de huevo.
La prueba de Molisch es usado para la identificación de glúcidos y se
manifiesta por medio de la formación de un anillo de color morado en la
interfase. En la práctica la prueba es positiva para las 4 proteínas, lo que indica
que la presencia de glúcidos o carbohidratos en su cadena.
La prueba de NaCl, es una prueba de precipitación salina, que identifica
a las proteínas a partir de su solubilidad. Si la proteína es albúmina: es soluble
en una solución salina y por el contrario, si es globulina no es soluble en sal.
Las proteínas que son solubles en medio acuoso, forman puentes de
hidrógeno. Al agregar sal, ésta libera las moléculas de agua unidas a la
proteína y por lo que aumenta la interacción proteína – proteína y precipita.
En la práctica, para el caso de la clara de huevo, el resultado es positivo,
debido a que como es albúmina, soluble en solución salina, no presento
cambio.
Las pruebas de precipitación por metales, consiste en incrementar el pH
de la solución, para que la proteína se cargue negativamente, y así los iones
metálicos reaccionan con los grupos carboxilo de la proteína, los cuales la
hidrolizan para una posterior precipitación. En la práctica en la prueba de
precipitación de azucares se utilizo el sulfato de cobre con hidróxido de sodio; y
además se calentó la muestra a 60oC. El proceso de calentamiento se utiliza
para acelerar la coagulación de la proteína y así su precipitación, esto debido a
que por sí sola, la proteína en presencia del sulfato de cobre no precipita
inmediatamente, solo cambia a color violeta como se observa en la prueba de
Biuret o de color. Por lo tanto esta prueba es positiva para la clara de huevo
como para la peptona únicamente.
En la prueba de precipitación con cloruro férrico, la prueba dio positivo para la
gelatina, la caseína y la clara de huevo.
Las pruebas de precipitación por ácidos fuertes, consisten en agregar el
ácido a la proteína, para disminuir el pH debajo de su punto isoeléctrico para
cargar positivamente la proteína y con ello hidrolizar la proteína y provocar una
precipitación del producto entre la reacción con los aniones ácidos. Así para el
caso de la práctica, al utilizar ácido clorhídrico, la prueba fue positiva para la
caseína y la clara de huevo. En el caso del acido nítrico, la prueba fue positiva
para la gelatina, caseína y clara de huevo.
F. CONCLUSIONES
1. Las pruebas realizadas para identificar proteínas son de carácter
colorimétrico y de separación física.
2. La prueba de azufre reducido, se utiliza para identificar las proteínas que
poseen azufre en los enlaces de las cadenas de aminoácidos.
3. La prueba de Molish, fue la única prueba positiva para las cuatro
proteínas utilizadas en la práctica.
4. Las pruebas de precipitación al tratar con soluciones ácidas o bases, la
proteína se disuelve y se hidroliza, por lo que los enlaces peptídicos se
rompen para dar lugar a la coagulación de la proteína. En el caso de la
precipitación salina, la sal provoca un aumento en las interacciones
proteína-proteína por las cuales coagula.
6. REFERENCIAS
1. Manual de Experimentos de Laboratorio para Bioquímica. [en línea]
(28.08.11)
http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=8SAtkthrFEkC&oi=fnd&
pg=PR15&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos&
ots=oDjjqoo078&sig=JjvU8yogKnjSTEDRJMfzkO9WhhI#v=onepage&q&
f=true
2. Reconocimiento de Proteínas [en línea] (28.08.2011)
http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Prot
enas.htm
3. Prácticas de Bioquímica Descriptiva. [En línea] (28.08.2011)
http://books.google.com.gt/books?id=xv8LNjwigGQC&pg=PA168&dq=pr
ueba++de+acido+nitrico+en+proteinas&hl=es&ei=WyhbTpP4Jo6gtwe7vI
G7Dg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=3&ved=0CDQQ6AEwA
g#v=onepage&q&f=false
4. Laboratorio de Bioquímica: una visión práctica. [En línea] (28.08.2011)
http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=dAbMDrXcTHsC&oi=fnd
&pg=PA3&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos&
ots=ZCV8JvHpAF&sig=m1L-
zfSytpXomURxPDhG5Adk3O4#v=onepage&q&f=false
5. Reacción de molish. [en línea] (28.08.11)
http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch