748.влияние различных факторов на результаты...
TRANSCRIPT
На правах рукописи
РодольфоуРамирес Родригес
ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА РЕЗУЛЬТАТЫ СУПЕРОВУЛЯЦИИ КОРОВ ДОНОРОВ,
КАЧЕСТВО И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ
03.00.13 - физиология человека и животных
Автореферат диссертации на соискания учёной степени
кандидата биологических наук
Дубровицы Московская область - 2000
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
J6)> pen. &\сОп7- pajf&pefi-tuA
Диссертаиионная работа выполнена в Российском университете дружбы народов и в отделе трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства (ВИЖ).
Научные руководители: доктор биологических наук, профессор II. II. СЕРГЕЕВ
доктор биологических наук, профессор И. А. ПОРФИРЬЕВ
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, А. М. ЧОМАЕВ
кандидат биологических наук, А. Н. НОВГОРОДОВ
Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт
племенного дела
I Защита диссертации состоится ^О " i&&tfft/ 2000r в 10:00 часов, на заседании диссертационного совет i Д.020.16 02 во Всероссийском научно-исследовательском институт -животноводства. Адрес: 142012. п. Дубровицы, Подольского района, Л.осковской области.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского
научно-исследовательского института животноводства.
Автореферат разослан " 2000г
У Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук . <е-<—-у В.П. ГУБАНОВА
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
ЦЕНТРАЛЬНАЯ НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА
Мо=к..свльскохоз . академии им. К. A. Tk^KDjjs
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА PfrpffiFtVg > f - с З е £ Актуальность темы.' Современные экономические условия дик
необходимость повышения интенсивности селекционной работы:' по: совершенствованию • племенных и продуктивных качеств животных, а также создания современных высокопродуктивных пород, линий и"гибридов скота, отвечающих требованиям постоянно меняющейся конюктуры рынка. Мощным средством интенсификации воспроизводства служит метод трансплантации эмбрионов. ' .•- .--•
Однако у крупного рогатого скота основным лимитирующим? фактором ' успешного развития и применения метода трансплантации является высокая степень- нарушений репродуктивной функции коров (около 40 'Л). . - . . - .
Существенным ограничением возможностей трансплантации зародышей является также низкая оплодотворяемость яйцеклеток и отклонения в их развитии после их оплодотворения с высоким процентом гибели эмбрионов. '' ' ' •"• ' ' •> * •" с' " '
Проявление фенотипических признаков имеет генетические и. внешние' компоненты, которые можно представлять соответственно как присущие и неприсущие организму; Если жизнеспособность или выживаемость эмбрионов рассматривать, как фенотипический признак, то гибель эмбрионов может происходить в результате дефектов в одном или обоих из этих компонентов или от взаимодействия между ними. Наблюдается три общие тенденции. Во-первых, независимо от метода оплодотворения, процент гибели эмбрионов всегда имеет место. Во-вторых, чем большему воздействию подвергается эмбрион, тем выше эмбриональная' смертность. В третьих, результативность пересадки повышается по мере совершенствования' метода, это предполагает, что некоторые негативные внешние факторы могут быть устранены.
Однако существо причин эмбриональной смертности изучены' недостаточно и вполне очевидно, насколько это важны для внедрения трансплантации е производство.' "
Эффективность применения трансплантации эмбрионов в практике селекции молочного скотоводства во многом зависит от правильного отбора коров-доноров по способности выделять достаточное число качественных эмбрионов после гормональной обработки и искусственного осеменения. Разработка возможных объективных тестов прогнозирования эмбриопродуктивности доноров имеет важное теоретическое и практическое значение для улучшения воспроизводства высокопродуктивных коров. •" , . . . .• . .••. .,,-••• .. .
В России, с 1991 года, происходит устойчивое' "сокращение 'поголовья" скота, сопровождающееся повышением доли коров в стаде и одновременном снижением их продуктивности. Это уменьшает возможности увеличения производства молока.; По данным ФАО популяция крупного рогатого скота в России к 1997 году составляла 39,696 млн. За 3 года, с-1994 года по 1997 году, численность крупного рогатого Скота сократилось на 9,3 млн.'голов
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
(19,5%). Удой на фуражную корову уменьшился на 536 кг. В нынешней экономической ситуации , при. отсутствий государственной „ поддержки появились серьезные симптомы разрушения i племенного животноводства». ..'.. . . Пересадка эмбрионов в частности важна в развивающихся странах, в том числе в Латинской Америке. На результаты трансплантации эмбрионов влияют и физиологические особенности доноров и реципиентов, а также квалификационная способность специалиста, осушесвляюшего процедуры., ( Известны исследования по изучению этих факторов в странах умеренного климата на животных европейского происхождения (Эрнст Л.К., Сергеев НИ 1989; Куанышбекоа Б М , 1990, Самоделкин А. Г., Гавриков A M , Сергеев НИ. 1996). Однако мало известны научно-обоснованные исследования этих факторов в тропических условиях
Зарубежные авторы отмечают, что несколько стран центральной и южной америки имеют .значительное количество скота и. что развитие животноводства способствует значительным образом улучшению в потребностях питания населения и экономики страны. Однако усилия по созданию государственных программ по трансплантации эмбрионов в большинстве этих стран не дали заметные результаты, и почти невозможно получить достоверную информацию.
; Популяция скота в Гватемале насчитывается 1734 млн. Работа по пересадкам эмбрионов , началась в 1976 г, С 1976 по 1978 гт. трансплантация эмбрионов проводилась на фермах, используя Gyt, Nelore и индо-бразилъские породы скота и было получено 400 стельностей. Между 1979 и 1980 rrv пересадки проводились на коровах брахманой, голштиной и бурой шведской пород. С 1983 по 1986 гг. сообщалось о 70 стельностей в результате трансплантации эмбрионов. Некоторые попытки проводились по пересадке..замороженно-оттаянньк эмбрионов.;
Относительно трансплантации эмбрионов у других сельскохозяйственных животных, в Латинской Америке были сделаны только отдельные попытки. Было сообщение о рождении ягнят, козлят и жеребят, но,число их незначительно. К сожалению исследования, не проводились на аборигенных видах, таких как южис-американские мозоленогие (лама, альпака, викунья), которые имеют большое значение в Перу, Боливии и Чили. . . . Несмотря на то, что некоторые страны имеют основные нормы контроля ввоза заболеваний путем ввозимых эмбрионов, нет четких, хорошо разработанных правил для эмбрионов и
. пересадок, что затрудняет международную коммерцию эмбрионов. . О продаже замороженных .эмбрионов зарубежного или отечественного происхождения
были сообщения только в газетах. К сожалению, невозможно узнать с уверенностью уровень коммерциализации замороженных эмбрионов. . . . . . . . .
Цель и задачи исследований. Целью настоящих •; исследований являлось повысить эффективность, синхронизации . охоты у.' коров-доноров и - телок-реципиентов до 95% и гормональное, индуцирование суперовуляции на 25%. Определить эффективность применение
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
фолдикулостимулирующего гормона и сурфагона для повышения опяодотворясмости яйцеклеток и выхода эмбрионов, пригодных для трансплантации у доноров при суперовуляции. '
Исходя из этого, были поставлены следующие задачи-. 1 изучить эффективность комбинированного применения биологически активных препаратов
при синхронизации охоты у коров доноров и телок реципиентов; 2 определить эффективности гипофизарных препаратов фолликулостимулирующего гормона
в сочетании с рилизинг-гормонамн при стимуляции овуляции у коров-доноров эмбрионов; 3 изучить влияние различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов; 4 : изучить влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции овуляции;
, 5 изучить влияние различных факторов на приживляемость эмбрионов при их пересадке телкам-реципиентам ' Научная новизна Усовершенствованы методы синхронизации охоты у коров и телок на
основе применения современных- гормональных препаратов.. Повышена эффективность индуцирования охоты до 86,&-90,0 % Определены факторы, влияющие - на показатели оплодотворяемости в индуцированную охоту и при суперовуляции. Разработаны методы овариостимуляции с целью ускоренного завершения послеродового периода . и периода восстановления после использования коров в качестве доноров эмбрионов. Изучены эндокринные факторы, лежащие в основе биотехнических методов управления половым циклом коров.. _.
Практическая значимость работы.
Усовершенствованные методы синхронизации охоты у коров и .телок. позволяют эффективно планировать и проводить индуцирование суперовуляции у доноров и экономически, эффективно проводитьэмбриопересадки реципиентам. -• •
Ускоренное восстановление репродуктивной функции лактируюших коров доноров после-извлечения, а также корректирование послеотельной воспроизводительной активности позволяет получать эмбрионы за период времени не превышающий экономически обоснованный сервис-период. •'.*- • •• ' . . . " ' " ' ' - • •
Апробация работы Материалы диссертации доложены на ежегодных научно-практических конференциях Российского университета дружбы народов (1998-1999). .
Публикации- По материалам диссертации опубликована 1 печатная работа в центральном журнале России " Племенное дело". • - • • • • • ' • . .
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на ИЗ страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов• собственных исследований,, обсуждения, выводов и практическое: предложение. Цифровой материал представлен в.12 таблицах, иллюстрирован 1 рисунок. Список литературы включает 120 источников отечественных и зарубежных авторов;
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
6
' ' • • • ' * 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ В качестве доноров эмбрионов были использованы высокопродуктивные племенные
коровы и телки черно-пестрой породы опытного хозяйства «Щапово», фермы «Кузенево» и фермы «Лукошкино» экспериментального хозяйства «Кленово-Чегодаево» ВИЖа Московской области, Реципиентами служили 417 телок случного возраста черно-пестрой породы живой массой 350-380 кг.
Для синхронизации охоты доноров и реципиентов и стимуляции овариальной активности были использованы лростагландины — Pg F2a, эстрофан, а также в сочетании с гипофизарными гормонами ФСГ фоллитропин и ГСЖК, гонадолиберины - диригисгран и сурфагон.
Доноры были обработаны на 10-12-й день или на 7-9-й день и 13-15-й день полового цикла, в зависимости от поставленного опыта,- гипофизарными гормонами ФСГ фоллитропин и ГСЖК. Перед обработкой инъецировали 2-х кратно тетравит в дозе^ по 10 мл по общепринятой схеме. Первая инъекция в деньобработки и вторая - через 48 часов после первой. Гонадолиберины и лютеинизирующий гормон вводили 48 • часов после применения простагландина, перед осеменением.
' На 7-ой день от первого осеменения — извлечение эмбрионов по методике ВИЖа. Первый день охоты принимается за «0» день полового цикла.
Обнаружение, оценка качества, кратковременное хранение эмбрионов, подготовка их к пересадке осуществились по методикам ВИЖа
Группа I 11
III. ,
Число животных 30 30
.30
Препарат Эстрофан
Эстрофан + СГЖК
. СГЖК + Эстрофан+ Сурфагон«
Доза " 500 мкг 500 мкг 15 мкг
1000 ИЕ 500 мкг 15 мкг
День введения препарата 10-12
7-9,13-15 '
7-9,13-15
1.2. СХЕМА ИССЛЕДОВАНИИ ПО СТИМУЛЯЦИИ ПОСЛЕРОДОВОЙ ОВАРИАЛЬНОЙ. АКТИВНОСТИ У КОРОВ
Группа•
I И
III t • :
. IV
. V - .
Число животных
50 30
50
; . ' 3 0 - ••.::
;-,:•;•- 50
Препарат '
-Фоллитропин + Сурфагон
ГСЖК + Сурфагон
Фоллитропин + PgF2a +
+ Сурфагон гсжк.
+ PgF2a + + Сурфагон
Доза
. 500 ИЕ 15 мкг
1000ИЕ 15 мкг
1000 ИЕ 500 мкг
1 15 мкг 1000 ИЕ 500 мкг 15 мкг
День введения препарата после отела
. . •5 12 • 5 12 12 -12 14
-II 13 15
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
7
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3 I Изучение эффективности комбинированного применения биологически активных препаратов
при синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реинпиентов, Целью синхронизации охоты коров является получение качественного индуцированного
цикла. Сурфагон - препарат способный, по имеющимся экспериментальным данным, в определенной степени корректировать гормональный фон, а также наряду с этим ослаблять или устранять последствия его нарушения. ' ' ' . • • • '
Провели сравнительные исследования эффективности комбинированного применения
простаглаилина в сочетании с гонадотропином и гонадолиберином на трех группах животных
(схема!) . , ; .-- ' " , . , . ' ' . ' ' Результаты опыта представлены в таблице. 1. В группе I, в которой . при синхронизации
охоты проводили только эстрофаном, и получили наилучшие результаты при обработке коров с 10 по 12-й день полового цикла, служила контролем. Животных опытных групп обрабатывали в период с 7-9 и 13-15-й день полового цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников. Группы II и III обработали простагландином эстрофаном в дозе 500 мкг в сочетании с ГСЖК в дозе 500 И Е. Животным группы III, перед первым осеменением дополнительно вводили синтетический гонадолиберин (сурфагон) в дозе 15 мкг.
Анализ результатов- опыта показал, что введение гонадотропинов положительно корректирует недостатки, связанные с неблагоприятными исходными факторами, на момент начала обработок. В группе II общее количество животных пришедших в охоту было 86,6 %; это близко к показателю в контрольной группе: 90,0 %. Количество животных, проявивших признаки: охоты в оптимальный 48-часовой интервал после применения простагландина - 66,7 %, оказалось также близко к показателю в контрольной группе - 70,0 %. Введение в комплекс синтетического гонадолиберина (сурфагона) увеличивало процент прихода в охоту до уровня в контрольной группе. При этом необходимо отметить, что большинство коров в группе III (83.4 %) пришло в охоту через оптимальные 48 часов после обработки против 70,0% в контроле.
Таким образом, введение в режим обработок с простагландинами' гонадотропинов улучшает результаты синхронизации охоты. Синтетический гонадолиберин корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях, и эффективность синхронизации охоты существенно возрастает. _ . ' . . , . .
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
X
1. ВЛИЯНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО МЕТОДА ОБРАБОТКИ КОРОВ-ДОНОРОВ НА , РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ
'• ' • • • ' ' '•• * Показатель
Число животных, П -% Пришло в охоту, П - %
В том числе через, П-°/о
24 часов 48 часов 72 часов
Не проявили признаков охоты, П - % Пригодные к индуцированию суперовуляции,!
П - %
I (контроль) Эстрофан
30-100,0 27 - 90,0 3 - 10,0
' 21 -70,0 3 - 10,0 3 - 10,0
27 - 90,0 •
Группа 11
Эстрофан + ГСЖК
30- 100.0 26 - 86.6
2-6.7 •20-66,7
4 - 13,2 4 - 13.3 24 - 80,0
III Эстрофан + ГСЖК
+ Сурфагон 30-100,0 27 - 90,0
2-6,6 25 - 83.4
-3 - 10,0
27 - 90,0
3 2. Определение эффективности гипофнзарных препаратов фолликулостнмулируюшего ' гормона в сочетании с рилизинг-гормонами при СТИМУЛЯЦИИ ОВУЛЯЦИИ У коров-доноров
Восстановление в послеродовой период воспроизводительной функции у коров является одной-из серьезных задач зооветеринарной службы. Чаще всего нарушения • этой функции возникают на почве задержания последа, атонии матки или заболевания яичников (персистентное желтое тело, гипофункция, киста и другие) и для их устранения используют различные лекарственные и гормональные препараты. При этом удается профилактировать послеродовые осложнения, но надежно гарантировать в короткое время восстановление воспроизводительной функции не удается, так как все применяемые препараты не моделируют тот гормональный фон, который характерен для стадии возбуждения полового цикла.
Испытали действие гонадотропинов в сочетании с гонадолиберинами, а также их сочетание с синтетическими простаглндинами при стимуляции овуляции у коров доноров после отела (схема
2).'-""."'';""_''." " '_', '"" [~'~' ' ' / " ' '. м. ' / ' . :
При клинических исследованиях контролировали наличие желтого тела беременности и развития фолликула.
Влияние введения препаратов на развитие овариальной активности после отела приведено в таблице 2. У опытных животных, в сравнении с контрольной группой, достигнуто более раннее наступление овуляции.-Первая овуляция после отела у животных экспериментальных групп наступила в среднем на 3,7-2,0 дня раньше, чем в контроле. При анализе.стимулирующего овуляцию действия обработок констатировали более выраженное действие в группах IV и V: число животных с овуляцией до 15 дней после отела возросло до 36,7-40,0 %; число животных с овуляцией после 15 дней после отела соответственно понизился до 63,3-60,0 %.
Для более детального анализа степени воспроизводительного статуса животных после проведения осеменения вывели показатели индексов осеменения (таблица 3). Окончательные
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
результаты наиболее благоприятные в группах; IV H"V', У 62,00-63,33 % животных достигла оплодотворяемосгь после 1-го осеменения; общая оплодотворяемосгь доведена до? 93,33-96,00 % и индекс осеменения до 1,65. При этом сервис-период сокращен до 72,3-67,5 дней.'* •""•';
Таким образом, это дает основание предполагать возможным вызывать суперовуляцию-в индуцированный после отела цикл или последующий спонтанный, т с есть более раннее после отела использование коровы в качестве донора. .'•-'• ' " ...•*•'•-
•2. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЕ ГИПОФИЗАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ • ' ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА В СОЧЕТАНИИ С РИЛИЗИНГ-ГОРМОИАМИ
ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ОВУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ
Группа
• • - . • • - : •
. .. -I
• < " i :•
• ш •••
IV
V
Препарат
. . . - ' - , - • •
-' • Контроль
Фоллитропин + Сурфагон
ГСЖК -+ Сурфагон
Фоллитропин + PgF2a+ • Сурфагон.
ГСЖК . + Pg F2a + Сурфагон 1
-Число живот
НЫХ '
if : •
50 30
50 •
30
50
Число животных с . , наличием в яичниках .
на день обработки Желтое • Желтое
. тело беремен
ности,' -. П.
. • ' . / • •
27 . 12 .
' • 2 7
16
2 6 - -1 - •- •
тело и -фолликула или только фолликула,
П - • ' • » • • • ' " '
' ' . : • : • • ' !
23 • д18'
23
• 1 4 '
• 24 . ..,•• .„ .
• • '' Срок ' • ' • •' ' • i : \
Интервал; .после отела, дней- '
л .
.,..,.. •> ." .... !"
20,1 ± 3,4 18,1 ±4,0
17,4 ±3,4
16,4 ±2,1
16,4 ±3,1 • • А ' : >
первой'овуляции ' * | • . . п > -1 • ,
'' Число животных
с овуляцией
.до 15 дней после отела;-П-%-
"10-20,0 6-20 ,0 . .
"19-38,0
11-36,7
20 -'40,0 v ' • • - , . . • - .
• '•* 1
Ч и с л о ЖИВОТНЫХ!
с овуляцией > после •>
15 дней " после , отела, .••
П-% 40 - 80,0 24 - 80,0
31-62,0
19-63,3
30-60,0 • : . . • ' •
3. ВЛИЯНИЕ ГОРМОНАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИИ У КОРОВ-ДОНОРОВ ПОСЛЕ ОТЕЛА НА, . ОПЛОДОТВОЯЕМОСТЬ, ИНДЕКС ОСЕМЕНЕНИЯ И СЕРВИС-ПЕРИОД
Группа
1 11
111 <. IV
V
Препарат,;
. ! Г . -
Контроль Фоллитропин • + Сурфагон •
ГСЖК + Сурфагон
Фоллитропин + PgF2a + Сурфагон
ГСЖК + PgF2a + Сурфагон
Число, Живот
ных '
50 30
. 50.
30
50
Оплодотворяемосгь после -1-гоосемё-'
-нения; П~У& ' 26 - 52,00 17-56,67
28 - 58,00, ,
19-63,33
31-62,00 .
• О б щ а я ••( оплодотворяе.-мость, П-%'
• • * . " 1 • • - . . * .
48 - 96,00 29 - 96,67
,49-98,00 .,
28-93,33
48-96,00
i Индекс осеменения,
1,95 1,70
,.. U S , .
1,65
1,65
Сервис-- » период,. , сутки
85,05 ± 44,05 75,6 ± 29,00
74,6 ±,42,65
72,3 ± 21,75
67,5 ± 21,75
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
10 .
3.3. Влияние различных факторов на уровеньсуперовуляиин и качество эмбрионов : • 3,3 1 Изучение влияния продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их качество
Процесс овуляции индуцированных к росту фолликулов затягивается во времени: Это подтверждается тем, что на 7-8 день индуцированного цикла после осеменения находят эмбрионы на разной стадии развития. . . , ; > , • • .- , s . . i r
Проведены исследования на 51 корове (таблица 4) после индуцирования суперовуляции фоллитропкном в синхронизированный (группе I) и спонтанный циклы (группе II) Выяснили, что у части коров-доноров охота продолжалась на второй и третьи сутки. Этих животных осеменяли, соответственно, З'и. 4 раза с интервалом 12 часов на всем протяжении охоты. Увеличению
. продолжительности охоты и кратности осеменения соответствовало увеличение числа овуляций на положительного.донора, с 7,5 до 8,7 в группе t и с 6,9 до 8,4 в группе II. Однако наилучшая оплодотворяемость-установлена при трехкратном - осеменении — 93,9 и 93,6 %. Увеличение продолжительности охоты до 36 часов и числа осеменении до 4 приводило к снижению оплодотворяемости яйцеклеток до 72 и 84,6 %, соответственно.' ,
Таким образом, оплодотворяемость яйцеклеток у коров-доноров повышается с увеличением продолжительности охоты от 12 до 24 часов, а следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3.. • ' . ' Дальше, было изучено влияние продолжительности охоты на стадию развития эмбрионов и их.-: качество; По .результатам; проведенного- опыта (таблица 5) установлено, что отклонение продолжительности охоты.от среднего показателя, то есть до 12 часов и ее увеличение до 36 часов, не влияет на показатели среднего числа клеточных структур на донора, но отмечается уменьшение'.числа эмбрионов пригодных-для. трансплантации. Причем число эмбрионов на близких стадиях развития (поздние морулы и ранние бластоцисты) колебалось в пределах 49,1-51,9 %. При наличии эмбрионов на стадии ранней и поздней морулы и поздней бластоцисты.
" - - , . , . . . • ' - ! , • • . > ' : ' . . . > ' • ' • • ' • ' . • - • - - •• f ; ч : , • ! • • • • • - . • • ' • • • • г - . '
число эмбрионов пригодных для трансплантации, снизилось до 11,1-23,1 %. Лучшие результаты . были••• получены от доноров, у которых охота длилась 12-24 часов Большинство эмбрионов i находились на", стадии • поздней морулы и • ранней^ бластоцисты. При этом пригодных для • трансплантации эмбрионов было почти в два раза больше, чем в других случаях (86,7 против 49,1
• • Й 5 1 , 9 « ) ; ' Л: . ^ ; . . ' ''•)": • • " . ' • - " . _. • • . - • • ~.''у. • . : ' ' • ' " . ' ; • '
Таким образом, количество эмбрионов; пригодных для трансплантации и стадия их-развития* у суперовулировавших- коров-доноров t в определенной/ степени' зависят от. продолжительности охоты. . •. • i -
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
4 ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ. И КРАТНОСТИ ОСЕМЕНЕНИЯ НА УРОВЕНЬ ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ ЯЙЦЕКЛЕТОК У КОРОВ-ДОНОРОВ
Продолжительность охоты,часов
12 24 36
12 24 36
Кратность осеменения Группа
Число коров %
Среднее число*"'
овуляции; Синхронизированный половой цикл 2 3 4
I 4 10 6
20 50
7,5 • • •• 3,0
30 | 8,7 Спонтанный половой цикл
2 3 4'
II 8 16 7
25,8 51,6 22,6
• 6 , 9 7,3 8,4
Оплодотворя-емость-
яйцеклеток, %
85,0 93,2 72,7
-> 85,0 93,6 84,6
5. ВЛИЯНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ОХОТЫ НА СТАДИЮ РАЗВИТИЯ ЭМБРИОНОВ И • ИХ КАЧЕСТВО
Продолжитель
ность охоты, Часов
<12
. 12-24
>24;'_
Стадия развития
извлеченных эмбрионов
Поздние' морулы и
ранние бластоцисты
Ранние и поздние. -
. морулы и* бластоцисты
Поздние морулы и •
ранние бластоцисты
Ранние и поздние -
морулы и бластоцисты
Поздние морулы и .
ранние бластоцисты
Ранние и поздние
морулы и ' бластоцисты
Число доноров, • п
11
3
23
5
И
W
Общее число клеточных структур
П
57
26
128
43
52
72
в том числе, эмбрионов•
• пригодных для трансплантации
П
28
6'
III
10 .
.27;
8
%
. 49, Г
1
23,1
86,7
; 23,3
51,9
11,1
' • • • ' • • :
'Число •• клеточных структур
на донора,: П
•5,2±1,3
8,7 ±1,1
5,6 ±1,4
" 8,6 ± 1,6 ;
4,7 ± 0,9
7,2 ±1,2
Число • Эмбрионов -
" пригодных для трансплантации
на донора, П
2,6±0,б
2,0 ±0,5
; " 4,8 ±0,6
• 2,0 ±0.3
. .2,5 ±0,4
6,8±0,2
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
12
3.3 2. Изучение влияния морфо-функцнонального состояния яичников, которое приходится на мдмент начала обработок на результаты синхронизации охоты -: ' '.'..' \ '. Изучали влияния.морфо-фуикционального;состояния яичников! которое приходится на
момент начала обработок на результаты синхронизации охоты. - У 90 коров трех групп охоту синхронизировали простагландином зстрофаном в дозе 500
мкг (таблица 6). Группы подбирали с учетом стадий полового цикла I группу сформировали из животных; находившихся на 7-9-й день полового цикла; II группу из животных, находившихся на 10-12-й день полового цикла, и III группу из животных,-находившихся на 13-15-й день полового цикла. В одном из яичников всех животных было диагностировано типичное желтое тело. Перед обработкой брали пробы крови для определения концентраций прогестерона ичстрадиола.
• ..Лучшие результаты показали животные II группы. Большинство из них пришло в охоту, f"̂ причем через равный интервал времени — 48 часов после инъекции эстрофана. До 24 w после 48 часов пришли в охоту лишь по 3 особи. Признаки охоты не проявили лишь 10 % коров У 90 % обработанных животных, то есть у всех пришедших в охоту, на 8-10-й день'индуцированного цикла диагностировали. желтое тело при отсутствии пальпируемого фолликула. . Это служило основным показателем для вызывания суперовуляции. '""' '
Результаты, полученные от животных других групп, оказались низкие.. Сроки прихода в охоту коров'в группах 11 иL III значительно варьировали. Не проявивших признаков охоты животных в группах I и III было 26,7 %. Пригодных же для использования в качестве доноров было меньше: 16,7% н 36,1 %, то есть в 5 и 2,5 раза меньше. •'•'•:
Анализ показателей гормональных профилей Показывает, что уровень прогестерона в крови животных групп I и Ш перед обработкой - 0,5-0,7 нг/мл - был низок и характеризовал отсутствие возможности быстрого лизиса под действием экзогенного простагландина. Тем не менее, такое функциональное состояние характерно для соответствующих периодов цикла, так как всего лишь 13,4 и 29,5 % коров в этих группах имели приемлемые концентрации прогестерона - в 1,8 и 2,0 нг/мл соответственно. Это в определенной степени обусловило 48-часовой интервал прихода этих животных в охоту,'и следовательно, физиологическое состояние их яичников, позволяющее стимулировать суперовуляцию. ' ~ ]' " > <v . . ; ~ ••
Сопоставление соотношений концентрации прогестерона и эстрадиола'с результатами синхронизации показывает, что характерное для середины лютеальной фазы, цикла (группа II) сочетание - высоких концентраций прогестерона и средних концентрации эстрадиола соответствовало оптимальному интервалу прихода коров в охоту - 48 часов. Сочетание более высокого значения эстрадиолаI с . более-, низким значением-•. прогестерона- соответствовало сокращению аналогичного интервала до 24 часов, а сочетания более низких концентраций как эстрадиола, так и прогестерона - увеличению интервала до 72 часов.'
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
'1Л • ~ *
Приемлемые результаты. 48-часовой интервал прихода животных в охоту и наибольший процент пригодных для последующего использования из них-'в-группах 1 и III-получены при соотношениях • близких к средним показателям концентрации .эстрадиола,, типичных для соответствующих стадий .цикла н.< удовлетворительных показательных прогестерона, подтверждающих секреторную активность желтого тела. Отклонения в сторону увеличения либо уменьшения от такой кониентрации эстрадиола при низких показателях прогестерона приводят либо к рассеиванию срока прихода в охоту животных в группах I и III, либо к её отсутствию во всех трех группах.,. ' . : • • \',
Таким образом, общее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников происходит из-за неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров, обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 13-го по 15-й день,полового цикла. При этом необходимо отметить,. что подавляющее большинство коров, пригодных для • индуцированной суперовуляции, оказались в числе пришедших, в охоту через 48 часов с после обработки. Применение простаглакдина Fj, вызывает лизис желтого тела в течение нескольких часов, затем овуляцию фолликула... При этом большинство особей; приходит, в охоту через >48 часов после инъекции препарата.•• Простагландин Fj« оказывает лютелитическое действие с 5-6-го по 15-16-й день спонтанного полового цикла. Однако обработка до 10-го и после-12-го дня цикла даже при наличии типичного желтого тела в яичниках не всегда обеспечивает полноценный и синхронный его лизис у части коров, что приводит к разбросу сроков прихода в охоту или ее отсутствию;
Данные по горьюнальноиу профилю перед проведением синхронизации половых циклов коров-доноров только простагландином служат ценным диагностическим тестом,' Оптимальными кониентрации прогестерона можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиола 28,9 пг/мд .̂.-i • •. •
, ,. 6. ВЛИЯНИЯ СТАДИИ ПОЛОВОГО.ЦИКЛА И ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ НА' -• РЕЗУЛЬТАТЫ СИНХРОНИЗАЦИИ ОХОТЫ
Группа
i
п=зо
II
П=30
Интервал от обработки до начала охоты,
в часах"
24 48
. 7 2 ЗСЕГО
' -24' • • • ,48"'. - •
J2, ,,..-
Число ' ••' ц животных ,. пришедших ":' на охоту
п 1 1 " 1 -
4 5 10 19 3
•21 ..з
%
13,3 16,7 33,4 63,3 10,0 70,0 10,0
•"' Гормональный профиль ' '" *...••.;• перед обработкой.. • •.
' ! . v ' • ' • •« ;' •
Прогестерон,'. нг/мл
,'•.. . ,.. ....... 0,5 ±0.3 1.8 ±0.2
< '0,8 ±0,1 ... ,
1,9±0.2 3,1 ±0 .3 '
- .1,5 ±0.3
Эстрадиол,. , пг/мл
18.0 ±1,4 19.6 40.1 20,6 ±0,1"
- •
31,9 ±2,0 28,9 ±1,7 26,0 ±2,0
' Числе ч .. ;При
инду! супе
П
-4 1
- .5 -3
' 2Г ) : . 3 ' :•
животных, годных и >"•'• дированию » . ровуляции
В % к числу животных, пришедших " в охоту•-•"
-13,4 3,3
.16,7 ... 10,0 70.0
1 >. 10,0- "
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
н Продолжение таблицы 6
Группа
Интервал от обработки до начала охоты,
в часах '
ВСЕГО < m
п=30 1 М" 48
72 ВСЕГО
ВСЕГО ПО 3 ГРУППАМ
Число -: животных • пришедших
на охоту •
П
27 U 4
. 4 19 63
%
90,0 36,7 13,3 13,3 63,3 70,0
• Гормональный профиль _ • • перед обработкой -
Прогестерон,' нг/мл
-0,7 ±0,3 2,0 ± 0,2
•0,7 + 0.1 --
Эстрадиол, пг/мл
-30,1 ±3,0 27,0 ±2,1 21,6 + 2.3
--
Число животных, '" пригодных к-
, . индуцированию . . суперовуляции -
П,
27 2; 9
. --Н 38
В % г числу животных,
пришедших в охоту •
90,0 6,6 29,5
-36,1 42,2 •
3.3 3 Изучение влияния исходного гормонального профиля на суперояуляторную реакцию . • яцчников и качество эмбрионов. •. . . . Проведен: опыт с • целью изучение .влияния-исходного гормонального профиля на
суперовуляторную реакцию яичников и качество эмбрионов. -• . . : _ В опыт брали животных, находящихся в состоянии спонтанного и индуцированного цикла к не. менее чем через-два. месяца после; отела, в группу I отобрали животных по наличию спонтанной • охоты; в г группу I I , - синхронизированной охоты Pg F2a/OKK. Животных обрабатывали фоллитропином/Pg F2o начиная с 10-го дня цикла по 4-дневной схеме. * Через 48 ;
часов после инъекции простагландина проводили-осеменения ректо-цервикальным методом на протяжении охоты с интервалом 12 часов двойными дозами' замороженно-оттаянной • спермы одного и того же. производителя. Перед началом обработок брали пробы крови для определения концентрации прогестерона и эстрадиола.-. ••••".
На основании клинических данных состояния яичников выделили'4 уровня реакции суперовуляции: 1-й уровень—12 и более желтых тел; 2-й уровень - 8-11 желтых тел; 3-й уровень -4-7 желтых тел; 4-й уровень - 3 и меньше желтого тела. Аналогично,- по реэультатам извлечения» пригодных для пересадки эмбрионов, выделили также четыре уровня:- 1-й уровень - 9 и больше эмбрионов; 2-й уровень - 5-8 эмбрионов; 3-й уровень - 1-4 эмбрионов; 4-й уровень - отсутствие пригодных для пересадки эмбрионов (таблице 7) • ,
. Затем сопоставили средние значения концентраций прогестерона и эстраднола в крови доноров с уровнем их реакции.
Полученные данные показывают, что в группе, коров, обработанных в индуцированный цикл (группа П)," каждому уровню реакции, как по количеству овуляции, так и по получению пригодных для пересадки эмбрионов соответствует определенный исходный гормональный фон. Наиболее отчетливо это • находит- выражение в: отношении концентраций прогестерона.• С повышением концентрации прогестерона, увеличивается число овуляций (от 3 при 1,2 иг/мл до 1?
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
1 5
- . . . - . , ' . . . . . . . . [_ 1 . „ , . . нг/мл)' Также увеличивается* выход числа нормальных эмбрионов (от О при 1,3 нг/мл до 9 при
. , . ' • : - * • ' " ' • ' . • • • •
4,0 нг/мл). Аналогичная корреляция наблюдается, и в группе 1. Необходимо отметить,'что средние значения исходных концентраций прогестерона в
группе II (с индуцированным циклом) выше аналогичных значений в группе I, обработанной в спонтанный цикл. Это по видиму, связано с увеличением обшей массы лютеальной ткани, образованной вследствие примененной схемы синхронизации. . , ,iv
Из.'проведенных данных следует,' что оптимальная; активность желтого • тела, предполагающая результативность гормонального индуцирования суперовуляции, обусловливает концентрацию прогестерона в крови доноров от 2,9 до 4,0 нг/мл. При всем этом возможны отступления от выявленной тенденции, связанные, вероятно, с индивидуальными особенностями обработанных животных и с тем, что число клеточных структур не взаимосвязано с исходной концентрацией прогестерона-при минимальных ее значениях. В то же время корреляция числа овуляций и неовулировавшых фолликулов даже с минимальными значениями прогестерона'имеет место. Взаимосвязь между исходными концентрациями эстрадиола и числом клеточных структур выявлена не была. .. • ; . - . . '-' •'• • * "
Таким образом, определение исходных концентраций прогестерона в крови коров-доноров • позволяет в определенной мере предсказывать об эмбриопродуктивности отбираемых животных.
7. ВЛИЯНИЕ ИСХОДНОГО ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ У КОРОВ-ДОНОРОВ НА СУПЕРОВУЛЯТОРНУЮ РЕАКЦИЮ ЯИЧНИКОВ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ .,
Показатель
Число '' овуляции ' (желтых • тел) • • Число
эмбрионов, пригодных • для-трансплан
тации
Уровень• реакций
Суперову-ЛЯЦИИ
>12 8-11 .••• 4-7 <3 > 9 5-8-1-4
Отсутствие-
Группа I ' спонтанный цикл ':' •
Число животных,.
п 15
- 25 30 ,. 12 8-15-15 6-
Прогестерон,*"
... нг/мл
3,1 ± 1,2 2,9 ±0,3 2,6 ±0,3 1,2 ±0,3
^ 3,4 ±0 .2 ' 2.9 ±0,4 2,5 ± 0,4 1,2 ±0,3
Эстрадиол, пг/мл
29,7 ± 2,6 :
24,7 ± 2.8 • 29,0 ± 2.0 26,7 ±2,3
'33,6 ±5,0 23,8 ± 2,3 26,0 ± 2,4 29,0 ± 2,8
Синхр
Число Живот-. н ы х , ••
П 26
• 40 . 30 16 12 • 23 . 17 16
Группа II. юнизированный цикл ГРй F2a-rC)KK) . •
Прогестерон,
. нг/мл -
4,0 ±1,7 3,2 ± 1,7 2.9 ± 0,7 1.2 ±0,8 4.0 ±1,9 3.4 ±0,7 2,8 ± 0,3 1,3 ±0,4
Эстрадиол, ' пг/мл -
23.5 ±1.6 19.8 ±1 ,4 ' 18,3 ±1,2 19,1 ±1,2 21,5 ±5,7
•20,6 ±1,5 17,3 ± 1,2 17,3 ±1,0
3 3.4. Влияние включения в схему обработок коров-донооов синтетических гонадолиберинов или лютеинизируюшего гормона на продолжительность охоты и качество эмбрионов -С учетом того, что колебания продолжительности охоты при гормональном индуцировании
суперовуляции коррелируют с ее показателями, а также литературных данных о том, что введение экзогенного гонадолиберина или лютеинизируюшего гормона оптимизирует продолжительность.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
охоты. и компенсирует возможный дефицит ЛГ, изучали влияния экзогенного гонадолиберина или лютеинизирующего гормона на продолжительность охоты и результаты суперовуляции. ;
При вызывании суперовуляции фоллихулостимулнрующим , ropM0HOM/Pg-F2o по четырехдневной схеме на четырех i-pynnax коров, через 48 часов после введения простагландина, переа первым осеменением животных опытных групп вводили синтетические гонадолибернны или ЛГ (таблица 8)
Животным группы I не вводили синтетические гонадолибернны, и она служила контролем, группе 1] ввели 0,5 г дигнетрана (Чехия); группе III 15 мкг сурфагона; группе IV 1000 ИЕ овогон-ТИО. В опытных группах (И -, I.V) осеменение проводили двукратно с интервалом ,12. часов .
Осеменение .коров .в контрольной группе проводили спустя 48 часов, после, введения простагландина, на протяжении охоты с интервалом 12 часов. ,
i • , Средняя продолжительность охоты коров групп II, III иДУ.составила соответственно 20,7;
18,0 и 19,0против,28,8 часов в контроле, В среднем, клеточных структур на донора было больше я группе 1. Однако, эмбрионы пригодных для трансплантации на донора были в пользу опытных групп. При этом следует отметить снижение числа дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток- Процент эмбрионов, пригодных для трансплантации, в опытных группах составил по^уплам: 74,6; 74,6 и 81,1 %, соответственно.- В то же времяхак в к«птх>ле 'г этот;,̂ .показатель - был :лишь-•<47;3,•%.'• i Количество дегенерированных эмбрионов и неоплодотворенных'яйцеклеток" в * контрольной, группе (28,0 и-24,7 %), более чем в два раза превышало аналогичные показатели в опытных группах; 11,9 и 13,5%-Н; Н,4и 11,9 % - Ш; 9,5 и 9,5%-IVсоответственно.•' . . . . . . ' ... ., - •„;..-'•• , . !
Таким образом, включение синтетических гонадолиберинов или ЛГ в схеме индуцирования суперовуляции корректирует процесс овуляции при возможных его нарушениях. При снижении
, 1 . . ' •. . . •_
числа ( извлеченных клеточных', структур, возрастает процент' эмбрионов, пригодных для трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает. .,
Проведен опыт по использованию определения концентрации ЛГ для выбора оптимального времени осеменения коров-доноров при суперовуляторном процессе (таблица 9). Исследования проводили на 19 коровах-донорах. ; . . ! . ' . • ' : '"•-••' - ' • " - . . ,
'.. Параллельно с определением-гормональных параметров регулярно использовали метод
ректальной пальпации яичников, начиная с момента инъекции простагландина и во время всей
продолжительностиэструса, . , г •' ' , " ' . . ' . . . • > • " • • • ' • • ; • : , . : . •. . Как.видно по данным таблицы 9, в интервале, до.41,0-42,0;часа после «HieKumrPg Fjo
наступает течка, а через 48,0 часов предовупяторный пик ЛГ.;; . . -,' . ,: . . . . ! • • • -Применение ректальной пальпации.показало, что после пика ЛГ интервал до качала
овуляций составляет , 20-24 . часа.,, Поэтому •, время осеменения необходимо определить: таким
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
образом, чтобы сперма, введенная в проводящую систему самки, завершила процесс капацитакии к моменту овуляторного процесса, то есть первое осеменение надо проводить через 48 часов после инъекции простагландина. • .' •- • ' • . . . • • . , • , .
8. ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК КОРОВ ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИВЕРИНОВ ИЛИ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА НА
ПРОДОЛЖИТЕЛНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ
Показатель
Число обработанных коров, п - %
Число положительных доноров, п - %
Средняя продолжительность охоты, часов
Получено клеточных
структур, п - % Получено
пригодных для трансплантации эмбрионов, п - %
Получено дегенерированных эмбрионов, п - %
Получено не оплодотворенных яйцеклеток п - %
Всего, В среднем
Всего, В среднем,
Всего, В среднем
Всего, > В среднем
I
КОНТРОЛЬ
13-100
13-100
• 28,8 ± 2,3
93 -100 7,1 ±0,6
44-47,3 3,4 ±0,8
26 - 28,0
2,0 ±0,8 23-24,7 1,8 ±0,7
Группы II
5,0 Г"•• ДИРИГЕС-;
ТРАНА 11 - 100
11-100
20,7 ±2,2 -
67 -100 '6,1 ±1,0
50-74,6 4,5 ±0,6
8 - 11,9
0,7 ±0,2 9-13.S 0,8 ±0,3
III 15МКГ
СУРФАГОНА
20-100
20- 100
••• 18,0 + 2,4 -ч
134-100 • 6,7 ± 0,7
100-74,6 5,0 ±0,7
18 - 13,4 • 0,9 ±1,4
16-11,9" 0,9 ±0,3
IV 1000 ИЕ овогон-
ТИО 13-100
13- 100
19.0 ±2,4
74 -100 5,7 ±0,8:
60-81,1 4,6 ±0,5
7-9,5
0,5 ± 0 , 5 ' • 7» 9,5 •<-0,5 ±0,1
9. ИНТЕРВАЛ МЕЖДУ ИНЪЕКЦИЕЙ ПРОСТАГЛАНДИНА. НАЧАЛОМ ЭСТРУСА И ПИКОМ ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА
Препараты' •
ФСГ - Р.ч F2ct ФОЛЛИТрОПИН — Р К F 2 0
Число ЖИВОТНЫХ,
П 9
• • • ю
Интервал времени от введения простагландина до начала эструса, часов
41,3 ±2,3 • 42,0 ±5,5
Интервал времени от введения простагландина до
пика ЛГ, часов 48,5 ± 3,0 48,1 ± 3.9
3.4 Влияние рилизинг-гормонов на гормональный фон крови при стимуляции ОВУЛЯЦИИ. . ., . Большое значение для прогнозирования,. понимания сущности и создания, приемлемых в
условиях практики методов корректировки процесса суперовуляции, в случае его нарушения,. имеет изученность гормональных профилей суперовулирующих. коров в ответ на действие -гонадотропных препаратов. . , , , ,-•..«• . - , . . . • . - .• - -ч
Были произведены исследования с.целью анализа.эндокринного аспекта, лежащего в основе стимулирования воспроизводительной активности. Для этого соответствие объединенных) показателей суперовуляции, вызванной фоллитропином/Pg F2a у коров в послеотельный период при наиболее типичных проявлениях спонтанных половых циклов. гормональным профилям
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
IX
отразили графически (рисунок I). Гормональные • исследования проиллюстрировали • причину неудовлетворительных
показателей суперовуляции,' индуцированной в первый половой цикл после родов: это низкая концентрация прогестерона перед обработкой (рисунок JA) Однако гормональное индуцирование активности функциональной деятельности яичников в послеотельныи период дало возможность получить удовлетворительные показатели суперовуляции (3-5 эмбрионов на донора) в индуцированный половой цикл и позитивные показатели (<$ эмбрионов) в последовавший спонтанный половой цикл (рисунки 1Б и 1 В).
Общепризнанно считать, что вызывание суперовуляции в первый после отела цикл оказывается безуспешным. В то же время наши исследования показали возможность вызывать положительные показатели суперовуляторной реакции. .
Большой интерес представляет выяснение роли эндокринных факторов, лежащих в основе воспроизводительной активности на протяжении послеопгельного периода.-' Наиболее показательна в этом отношении - низкая концентрация прогестерона. Это. происходит вследствие функциональной неполноценности желтого тела, что в свою очередь, вызвано отсутствием завершения инволюции • матки * и общей послеотельной перестройки (рисунок 1 А) Однако направленная стимуляция активности : функциональной г деятельности . яичников ведет к активизации восстановления репродуктивной функции в. целом. Значения концентрации прогестерона, аналогичным среднестатическим показателям, которые л являются нормой для соответствующего периода- спонтанных циклов, сформировавшихся' после окончательного завершения. послеотельного - периода,* свидетельствуют о наступлении' полной - нормализации половой функции (рисунки 1Б и 1В). * • ••
"Исследования показали, .что • пригодность коров для индуцирования ' суперовуляиии определяется градацией концентрации прогестерона в крови животного. Причем, показанием к началу обработки будет неуклонное повышение концентрации от базального значения в нулевой день цикла до'наивысшего значения, характерного для середины цикла.
Непосредственной причиной-" нарушений процесса суперовуляции .являются преждевременная или поздняя овуляций, отсутствие овуляции большого-или меньшего'числа фолликулов и сочетание этих нарушений. Они в свою очередь, обуславливают послеовуляторные сдвиги в гормональном балансе,. ответственном за регуляцию нормального оплодотворения и развития • эмбрионов. Своевременно зафиксированный • гормональный /дисбаланс позволяет нормализировать процесс путем введения препаратов гонадолиберина или ЛГ. '
"Таким образом, исследования указывают на состоятельность корректирования овариальной функции в ранний период после отела.* Показатели суперовуляиии вызванной в спонтанный цикл, последовавшей за индуцированным указывают на .тенденцию к последовательному улучшению
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
показателей Это говорит о более медленном процессе восстановления и стабилизации морфофункцнонального состояния* эндометрия и внутриматочной среды относительно срока стабилизации циклических процессов в яичниках. С другой стороны, очевидно, что, достигаемая за счет послеродовой овариостимуляции, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке.
т l i b
СШИПШНЫЙ 1DK-1
Оюатншы: -ретчльтзты)
J0 30 40 Лииосле отела
Дмм гмиж етдащ
El Обр^онш > ш а н — Л ижж пае»
Д м после «кем
Рисунок А Изменения концентрации прогестерона в крови у коров—доноров при индуцировании суперовуляции в послеродовой период.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
20 ,
3.S. Пересалка эмбрионов телкам-реципиентам Факторы, влияющие на их '" приживляемость .. ... . • >
Изучали влияния различных уровней суперовуляторного ответа коров-доноров и качества вымываемых эмбрионов на уровень приживляемости при пересадке телкам-реципиентам. Для этого были проанализированы результаты 274-х пересадок свежеполученных эмбрионов (таблица 10). - • • •
Пересаживаемые эмбрионы были извлечены за 2-3 часа до пересадок у 38 коров-доноров черно-пестрой породы. Дтя вызывания суперовуляции использовали ФСГ в дозе 45 мг, который инъецировали в течение 4-х дней убывающимися дозами.
Приживляемость установили путем ректальных исследований на стельность через три месяца после пересадки.
Процент эмбрионов хорошего и отличного качества при увеличении уровня суперовуляции достоверно снижался. При среднем уровне реакции (5-8 овуляции) он составил 33,0 и 29,0 %, при очень высокой реакции (от 13 до 16 овуляции) было получено лишь 10,0 и 28,0 % эмбрионов отличного и хорошего качества соответственно.
Эмбрионы получены при высоком уровне суперовуляции, приживлялись хуже, чем при низком и среднем: при очень высокой реакции - 28,0 % против 43,0 и 42,0 % при низкой и средней реакции. . .
Анализ приживляемости замороженко-оттаянкых эмбрионов (таблица 11) также показал, что при высоком уровне суперовуляции,-приживлялись хуже, чем при низком и среднем: эмбриопродуктивности донора 1-4 эмбрионов приживляемость составила 48,3 %, тогда как при эмбриопродуктивности от 9 и более только 30,4 %.- \
Важным фактором, влияющим на результаты эмбриопересадок у крупного рогатого скота, является физиологическое состояние желтого- тела яичника, которое обеспечивает соответствующий для данного периода полового цикла уровень прогестерона в крови. Доказано, что существует связь уровня приживляемости эмбрионов и концентрацией прогестерона в крови телок-реципиентов.
В таблице 12 приведены данные о влиянии качества > желтого тела яичников на лриживлияемость замороженно-оттаянных эмбрионов.
При использовании. реципиентов, у которых диагностировали отличное желтое тело яичника, приживляемость составляла 48,2 %, хорошее • 36,2 %, удовлетворительное - 28,8 %. -
Из приведенного следует, что средний уровень эмбриопродуктивности (5-8 овуляции) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы полученные от коров-доноров с низкой и средней
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
2!
эмбрнопродуктивностью. При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок-реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересалки ""
10 . ВЛИЯНИЕ УРОВНЯ СУПЕРОВУЛЯЦИИ И КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ НА ИХ ИРИЖИВЛЯКМОСТЬ '
Показатели. ;
• ' Число коров-доноров Получено эмбрионов
На донора Процент эмбрионов от числа овуляций
Извлеченные клеточные
структуры, % Эмбрионы
Отличные Хорошие
Удовлетворительные Де генерированные
Неоплодотворенные -яйцеклетки
Приживляемость после пересадки, %
•..- • - Число овуляции
отО до4-ч
. 6 17 2,8
70,0 + 11,1
57,0 ± 10.8 35,0 ±10,8
8,0 ± 4,2
43,0 ± 12,0
от 5 до 8
.7 . .-52 7,4
93,0 ± 3,5 33,0 ±4 ,3 29,0 ±4 ,3 15,0 ±3 ,1
6,0 ± 3,8
17,0 ± 1,3
42,0 + 6,8
. о т 9 до 12.
- - 13 86 6,6
55,0 ± 5,4-23,0 ± 2 , 7 27.0 ± 2,6 30,0 ± 2 , 8
13.0 ± 1 , 8
7,0 ±1 ,4 ' .
34,0 ±5 .1
. •• • От 13 до 16
12 „ 119 9,9
62,0 ± 4,5 10 ,0+1 ,4 28 ,0+ 1,5 36,0 ± 1 , 7
9,0 ± 0,8
17,0 ± 1 , 2 :
28,0 ±4 ,1 11. ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЗАМОРОЖЕННО-ОТТАЯННЫХ ЭМБРИОНОВ•••'. •
В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЭМБРИОПРОДУКТИВНОСТИ ДОНОРА
• • . - . • ' . . . . . . . . . . .
Оттаяно эмбрионов Нежизнеспособные
Процент от числа оттаянных Пересажено эмбрионов -Стельные реципиенты
Процент приживляемое™ •
Разовая эмбриопродуктивность " От 1 до 4 •
эмбрионов 33
... 4 • • 12.1
29 14
• 4 8 , 3 • •
О т 5 я о 8 эмбрионов
75 - - - . - • 7 - • • . ' • • ' •
9,3 68
• 24 •• • - ::35,3 • •- - -
• От 9 и больше эмбрионов
48 2
' 4,2 46
• • • . 14-30,4
12 ВЛИЯНИИ КАЧЕСТВА ЖЕЛТОГО ТЕЛА ЯИЧНИКА НА ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ ПОСЛЕ ПЕРЕСАДКИ
•Показатели
Пересажено эмбрионов Стельные реципиенты - •
Процент стельности
• • ' ' • • . . - • . - ' Качество желтого тела ••> . . • • - : . Отличное
33 16
. . .- 4 8 , 2 . . : ••• .
Хорошее 58
• • • • . . 2 1 - > •
36,2
Удовлетворительное 5 2 •••
• • • • > : • . 1 5 ".- ; •
. 28,8 . . . . . . • ; . . , 4. ВЫВОДЫ. .
1. При индуцировании охоты с целью получения синхронного течения индуцированного цикла у доноров и реципиентов, гонадотропины, вводимые в сочетании с простагландином, унифицируют овариальные процессы в период с 7-го по 15-й день цикла, что улучшает результаты синхронизации охоты.. Синтетический гокадолиберин корректирует* процесс овуляции: при возможных его нарушениях, и < эффективность синхронизации охоты. существенно возрастает.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
2. Введение в схемы овариости'муляции препаратов гонадолиберииа на 14-15 день после отела стимулирует первую овуляцию и становление регулярности половых циклов Вследствие этого на. более ранний срок можно передвигатьj • одноразовое получение эмбрионов от высокопродуктивных; лактирующих коров. Это позволяет ' максимально приблизить межотельный'интервал у лактирующих коров-доноров к экономически обоснованному для условий ' молочно-товарного производства межотельному . интервалу. А при возможных
' отклонениях функциональной деятельности яичников и эндометрия служит как лечебно-профилактическое. мероприятие Возможно ускорение, восстановления репродуктивной
. функции коров после'индуцирования суперовуляции:> ' 3. Рассеянность овуляций, оплодотворяемость яйцеклеток, количество эмбрионов пригодных для
трансплантации и стадия их развития у суперовулировавших коров-доноров в определенной степени зависят от продолжительности охоты. Оплодотворяемость яйцеклеток у коров-
. доноров повышается с увеличением продолжительности!охоты от; 12 до 24 часов, а t . . . . . j
следовательно, с увеличением кратности проведения осеменения до 3. 4. Данные, по гормональному профилю перед проведением*синхронизации половых циклов
коров-доноров только простаглаидином служат: ценным диагностическим тестом. Обшее снижение результативности синхронизации половых циклов у коров в период с 7-го по 15-й день спонтанного цикла при наличии хорошо выраженного желтого тела в одном из яичников происходит из-за. неудовлетворительных показателей гормональных профилей у коров,
... обрабатываемых с 7-го по 9-й день и с 15-го.по-15-й день полового цикла. Оптимальными-• " концентрации прогестерона можно считать 3,1 нг/мл и эстрадиола 29,9 пг/мл. ' •5. Определением исходных- концентраций прогестерона в1 крови коров-доноров позволяет
правильно оценить овариальную активность* после' отела и уточнять'данные клинического контроля перед синхронизацией охоты и индуцированием суперовуляции и в определенной мере предсказывать эмбриопродуктивности отбираемых животных.* ,
б. Включение синтетических гонадолиберинов или ЛГ в схему индуцирования суперовуляции, корректирует процесс овуляции при > возможных его нарушениях,- При снижении числа извлеченных клеточных > структур возрастает процент: эмбрионов пригодных для трансплантации. Эффективность вызывания суперовуляции существенно возрастает.
'7. Время осеменения необходимо определить таким образом, чтобы - сперма, введенная в проводящую систему самки, завершила процесс капацитации< к моменту овулягорного процесса, то есть ' первое - осеменение надо проводить через 48 ! часов после инъекции
' простагландина. ' " '" v
8. Показатели суперовуляшш, вызванной в спонтанный - цикл, последовавший за индуцированным, указывают на тенденцию к последовательному улучшению. С другой
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
21
стороны, очевидно, что достигаемая за счет послеродовой овариостнмупяцки, стабилизация функциональной деятельности яичников ускоряет восстановительные процессы в матке
9. Средний уровень эмбриопропуктивности (5-8 овуляши) позволяет получить большое количество эмбрионов отличного и хорошего качества и более высокий уровень приживляемости. При трансплантации замороженно-оттаякных эмбрионов более высокую приживляемость показали эмбрионы, полученные от коров-доноров с низкой и средней эмбриопродуктивностью При трансплантации особо ценных эмбрионов следует использовать телок'реципиентов, у которых диагностировано отличное или хорошее желтое тело в яичнике на день пересадки.
S. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРЕДЛОЖЕНИЕ С целью профилактики послеотелных расстройств и улучшения показателей
суперовуляции коровам донорам следует проводить раннее стимулирование активности яичников комбинированным применением гонадотропина, простаглаидина и гонадолиберина на 11-й, 13-й и 15-й день после отела соответственно.
б. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОПУБЛИКОВАНЫ В СТАТЬИ 1. Р. Рамирес, И. Порфирьев, Н Сергеев / ВЛИЯНИЕ ВКЛЮЧЕНИЯ В СХЕМУ ОБРАБОТОК
КОРОВ-ДОНОРОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ ГОНАДОЛИБЕРИНОВ И ОВОГОН-ТИО НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ОХОТЫ И КАЧЕСТВО ЭМБРИНОВ // Племенное Дело - 2000г.-№ 1. \ ) \
7 Лес****, *,->. 0/>9*>с<*"*-"f**,*. 7«" ttftC-Г/Ы/.
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»
Copyright ОАО «ЦКБ «БИБКОМ» & ООО «Aгентство Kнига-Cервис»