9020 aseguramiento de la calidad
TRANSCRIPT
9020 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD/CONTROL DE CALIDAD
Introducción
1. Consideraciones generales
El énfasis en los microorganismos en las normas de calidad del agua y actividades de
aplicación y su función permanente en la investigación, control de procesos, y la
vigilancia del cumplimiento requieren el establecimiento, documentación, y el
funcionamiento eficaz de un sistema de calidad (QS). El QS establece una prueba de
medio ambiente y la operación de gestión para describir tanto una garantía de calidad
(QA) y la política o el programa de control de calidad (QC) y las técnicas y prácticas
operacionales. Estos están diseñados para demostrar la validez de los datos analíticos y
de garantizar el cumplimiento de los requisitos reglamentarios, las necesidades del
cliente, y las normas aplicables de la acreditación o certificación.
Las prácticas de laboratorio establecidas en la Sección 9020 no son obligatorias, sino
que representan las prácticas que se deben seguir. Cada laboratorio debe desarrollar su
propio QS adecuado a sus necesidades y, en algunos casos, como es requerido por los
organismos reguladores, organizaciones de normalización y certificación de laboratorio
o programas de acreditación.
Tienen documentos de laboratorio, las políticas de su sistema de calidad y los objetivos
en un plan de gestión de calidad o manual de calidad. El documento denota el
compromiso del laboratorio con el programa de control de calidad para la integración de
las actividades de control de calidad intra-e inter-laboratorio, la estandarización de los
procedimientos de operación de laboratorio y prácticas de gestión. También define
claramente las responsabilidades y obligaciones para asegurar que los datos sean del
tipo, calidad y cantidad requerida.
El programa debe ser práctico y sólo requieren una cantidad razonable de tiempo o se
anulará. Una vez que un programa de control de calidad se establece, aproximadamente
el 15% del tiempo de laboratorio en general debe ser dedicado a diferentes aspectos del
programa. Sin embargo, tiempo adicional puede ser necesario para el análisis de datos
más importantes, por ejemplo, los datos de medidas de ejecución. Cuando se administra
adecuadamente, un sistema equilibrado, aplicado concienzudamente la calidad será
optimizar la calidad de los datos, identificar pronto los problemas, y aumentar la
satisfacción con los resultados analíticos sin afectar negativamente a la productividad
del laboratorio.
Porque la medida de los análisis microbiológicos en constante cambio, los organismos
vivos, son inherentemente variables. Las herramientas de control de calidad a
disposición de los microbiólogos son diferentes de los utilizados por los químicos
debido a que muchas de las mediciones realizadas por los microbiólogos involucran
variables discretas en lugar de variables continuas utilizadas por los químicos analíticos.
Las variables categóricas son sólo valores enteros, mientras que las variables continuas
no se limitan a valores en particular, sino sólo por la precisión de la herramienta de
medición utilizados. Por lo tanto, las diferentes estadísticas y distribuciones de
probabilidad se utilizan para evaluar estos datos.
Los sistemas documentados de calidad puede variar entre los laboratorios como
resultado de diferencias en la misión de la organización, responsabilidades y objetivos,
el tamaño de laboratorio, capacidades y recursos, y habilidades del personal y
capacitación.
2. Directrices para un Sistema de Calidad
El laboratorio debe desarrollar, documentar y poner en marcha sus procesos para dar
lugar a condiciones experimentales controladas que cumplen con sus necesidades
específicas y la utilización prevista de los datos.
a. Responsabilidades de gestión: la gestión debe evaluar los riesgos asociados con los
errores, reconocer y apoyar activamente la necesidad de que el QS, involucra al
personal en el desarrollo y de operación del programa, asigna los recursos monetarios y
de personal, y asume un papel de liderazgo. La administración debe reunirse con el
supervisor del laboratorio y el personal para desarrollar y mantener un programa
integral, para establecer responsabilidades específicas para la gestión, supervisores y
analistas, y para mantener el conocimiento de las condiciones a través de la revisión
periódica y sistemática de las funciones de laboratorio. La alta dirección tiene la
responsabilidad general sobre el cliente final para el programa de QA / QC y las
actividades realizadas por el analista de laboratorio. El oficial de control de calidad, el
supervisor del laboratorio, y el analista de laboratorio pueden delegar responsabilidades
para llevar a cabo una función de sus deberes de trabajo individuales por la alta
dirección, sin embargo, la alta dirección es en última instancia, responsable del
programa de control de calidad y no puede eludir sus responsabilidades de gestión, por
delegación a un autor menor de la organización.
b. La garantía de calidad oficial/director de calidad: En los laboratorios grandes, un
oficial de control de calidad tiene la responsabilidad de la autoridad y la supervisión de
la ejecución del programa de control de calidad. Idealmente, esta persona tiene una
posición personal que depende directamente de la alta dirección y por lo tanto tiene
independencia operativa. El oficial de control de calidad debe tener una formación
técnica que incluye cursos en microbiología, estar familiarizado con todos los aspectos
del trabajo de laboratorio, y conocer y familiarizarse con el programa de control de
calidad y prácticas de control de calidad y técnicas estadísticas para la evaluación de los
datos. El oficial de control de calidad es responsable de iniciar el programa de control
de calidad, convincente dirección y el personal de su valor, y proporcionar apoyo
técnico y capacitación. Una vez que el programa de control de calidad está funcionando,
el oficial de control de calidad debe llevar a cabo revisiones frecuentes (semanales o
mensuales) con la dirección del laboratorio y el personal para determinar su
conformidad con el programa y para identificar y resolver problemas. El oficial de
control de calidad también informa periódicamente a la administración para asegurar de
nuevo de ING en las acciones necesarias para corregir los problemas que amenazan la
calidad de los datos. En pequeños laboratorios de estas responsabilidades se asignan a
uno o más de los empleados sobre una base a tiempo parcial o el personal podrá formar
una unidad de control de calidad.
c. Personal: el personal de laboratorio y de campo deben participar en la planificación
de la gestión del programa de control de calidad, la preparación de procedimientos
operativos estándar, y lo más importante, la ejecución del programa de control de
calidad y actividades de control de calidad en sus tareas diarias de recolección de
muestras, la realización de análisis, la realización de controles de calidad, y el cálculo e
informar los resultados. Los miembros del personal son los primeros en identificar
problemas potenciales y deben trabajar con el oficial de control de calidad y gestión /
supervisor para corregir y prevenir ellos. Es fundamental para el éxito del programa de
control de calidad que los miembros del personal de entender lo que se espera de ellos y
apoyar activamente el programa de control de calidad.
3. Objetivos del Sistema de Calidad
Los objetivos de QS incluyen el suministro de datos de calidad conocida, lo que
garantiza una alta calidad de desempeño de los laboratorios, el mantenimiento de la
evaluación continua de las operaciones de laboratorio, la identificación de debilidades
en las operaciones de laboratorio, la detección de necesidades de formación, mejora de
la documentación y de registros, el desarrollo de sistemas de información clara y
adecuada, y asegurar el cumplimiento con las regulaciones y los requerimientos del
cliente.
4. Elementos de un Manual del Sistema de Calidad
Cada laboratorio implementa un QS y desarrolla un plan de manejo escrito o manual
que describe las políticas del laboratorio y los planes para asegurar la calidad de su
trabajo para sus clientes. Actualizado regularmente, el plan es firmado por la dirección
superior y el oficial de control de calidad para indicar su aprobación. Para un pequeño
laboratorio, el propietario / operador firmará el plan.
Tener la alta dirección y el oficial de control de calidad firmar en un plan de manejo
escrito o manual que describe las políticas y actividades de laboratorio que hace la
gerencia superior responsable. Esto significa que el personal de apoyo, instrumentos de
análisis, y los materiales son en última instancia la responsabilidad de la alta dirección y
no pueden ser eliminados a través de la delegación a una autoridad inferior, tales como
el oficial de control de calidad.
El plan debe abordar los siguientes aspectos comunes básicos:
a. Declaración de política de calidad, que describe los objetivos específicos y el
compromiso del laboratorio y su gestión de calidad y la integridad de datos. Una
declaración de ética pueden ser incluidos.
b. Organización y estructura de gestión, describiendo los aspectos funcionales del
laboratorio y sus responsabilidades de gestión con un organigrama adjunto.
c. Políticas de personal, lo que indica cualificación específica y las necesidades de
formación y las responsabilidades del trabajo de los supervisores y analistas.
d. Requisitos del equipo y de instrumentos, lista de equipos críticos e instrumentos
disponibles, teniendo en cuenta los requisitos del laboratorio y la frecuencia de los
procedimientos de calibración y mantenimiento pre-ventative, y que aseguran una
funcionalidad aceptable antes que el equipo se ponga en servicio.
e. Especificaciones para el suministro, señalando los procedimientos para asegurar que
los reactivos y materiales son de calidad suficiente y aceptable para su uso.
f. Especificaciones para la subcontratación de ensayos y calibraciones, el
establecimiento de normas para la supervisión del laboratorio y la aceptación de los
productos.
g. Los procedimientos de muestreo (si se realiza en el laboratorio) y los criterios de
aceptación de la muestra, se describen los procedimientos para la recolección,
manipulación (por ejemplo, tiempo y temperatura), la aceptación y el seguimiento de las
muestras enviadas, y los procedimientos requeridos para la cadena de custodia, si los
datos pueden ser objeto de litigio.
h. Los métodos de análisis, el alcance de la lista para las pruebas de laboratorio, y que
denota la clase de acreditación / certificación de los distintos métodos y, por métodos
estándar o nuevo, los procedimientos del laboratorio de validación.
i. Analítica medidas de control de calidad, indicando los requisitos del laboratorio para
el aseguramiento de la medición, por ejemplo, método de verificación y la
documentación, la prevención de errores y controles analíticos en análisis repetidos, los
controles positivo y negativo, los controles de esterilidad, y las pruebas de verificación,
así como los métodos estadísticos utilizados .
j. Procedimientos operativos estándar (SOP), que enumera todos los procesos de
laboratorio genéricas y específicas operaciones de laboratorio de rutina, documentada y
firmada por la administración, los cuales están disponibles para los clientes bajo
petición y de fácil acceso para el personal.
k. Documentación de control y requisitos para conservar registros, la identificación de
los formatos de registros, copia impresa, por ejemplo, e-notebooks, y archivos de
computadora, y los procedimientos para asegurar la revisión de datos, la capacidad de
rastrear, y la rendición de cuentas, teniendo en cuenta los procedimientos para asegurar
la confidencialidad de los clientes, en su caso y otros requisitos, tales como el control,
seguridad, almacenamiento, tiempo de retención de registros, y la eliminación de los
registros de laboratorio. Cuando la confidencialidad y seguridad lo permiten, una copia
de seguridad de los registros se deben almacenar fuera del sitio.
l. Evaluaciones, descripción de los procesos del laboratorio para monitorear e informar
sobre la eficacia de su programa de control de calidad.
1) Las auditorías internas de las operaciones de laboratorio, realizados de forma
rutinaria, por lo menos una vez al año, por el oficial de control de calidad y supervisor.
Para un pequeño laboratorio, un experto externo puede ser necesaria. Estas auditorías
deben incluir todos los aspectos del labo-incluyendo laboratorio, por ejemplo, los
análisis realizados, los datos manipula-ciones, y la presentación de informes.
2) evaluaciones sobre el terreno por expertos externos para garantizar que el laboratorio
y su personal están siguiendo un programa de control de calidad aceptable. Este es un
componente necesario para el laboratorio de certificación o acreditación. Para los
laboratorios que no buscan reconocimiento, esta actividad es una sugerencia.
3) Capacidad de prueba (PT) estudios en los que participa el laboratorio. Estos estudios
de colaboración debe confirmar la capacidad de un laboratorio para generar datos
comparables aceptable para el laboratorio de referencia y otros laboratorios e identificar
los problemas potenciales. Estudios PT se realiza generalmente una vez o dos veces al
año.
m. Actividades preventivas y correctivas, los procedimientos de identificación
utilizados para determinar las causas de los problemas identificados y para registrar,
corregir y prevenir su repetición.
n. Servicio al cliente, describiendo el compromiso del laboratorio y actividades para
responder a las solicitudes y quejas del cliente, y para garantizar la confidencialidad de
los clientes y los derechos de propiedad.
Las directrices de control de calidad discutidos en 9020B y 9020C son recomendados
como material fuente útil de los elementos que deben abordarse en las políticas de
desarrollo de un programa de control de calidad y las actividades de CC. Información
adicional está disponible en varias organizaciones de normalización, tales como la
Asociación Americana para la Acreditación de Laboratorios (A2LA), AOAC
International Inc., Organización Internacional de Normalización (ISO), Nacional de
Medio Ambiente de Acreditación de Laboratorios de la Conferencia (NELAC), Instituto
de Nacional de Acreditación de Laboratorios Ambientales (INELA), y los Estados
Unidos Agencia de Protección Ambiental (USEPA).
9020 B. intralaboratorio Directrices de Control de Calidad
Control de calidad (QC) prácticas están diseñadas para asegurar que los procesos del
laboratorio están en control. Todos los laboratorios tienen algunas prácticas de control
de calidad intralaboratorio que se han desarrollado desde el sentido común y los
principios de la experimentación controlada para indicar eficacia del método y los
resultados de laboratorio. QS Un laboratorio pone en marcha las políticas de control de
calidad o de programas y actividades de control de calidad necesarias para minimizar
los errores sistemáticos y aleatorios como consecuencia de cambios en el personal,
instrumental, equipos, agentes de re-, materiales, métodos de muestreo y de análisis,
manejo de datos, y presentación de datos. Es especialmente importante que los
laboratorios que realizan sólo una cantidad limitada de control de calidad
microbiológica estricta prueba de esfuerzo. Una lista de las prácticas de control de
calidad clave se da en la Tabla 9020: I y se discute en ¶ 5. Otras fuentes de información
sobre las prácticas de control de calidad de laboratorio son disponible.1-10 laboratorios
deben abordar todas las directrices de control de calidad discutidos aquí, pero la
profundidad y los detalles pueden ser diferentes para cada laboratorio. Muchos de los
artículos mencionados aquí son también aplicables a otros laboratorios, tales como los
laboratorios químicos y radiológicos. Para los ensayos en los laboratorios de
microbiología Buenas Prácticas de Manufactura (GMP) / Buenas Prácticas de
Laboratorio (GLP) los reglamentos, ciertas prácticas de control de calidad será diferente
de los mencionados aquí.
1. Personal
Las pruebas microbiológicas deben ser realizadas por un microbiólogo o el técnico
profesional con un nivel adecuado de educación, formación y experiencia, en general,
las técnicas microbiológicas. Si no, un microbiólogo profesional debe proporcionar
supervisión para guiar y capacitar a los analistas en los procedimientos básicos de
laboratorio de microbiología para realizar sus funciones asignadas. El supervisor de
rutina debe evaluar y documentar las habilidades de los técnicos. La recogida de
muestras (si se realiza en el laboratorio), manejo de la muestra, los medios de
comunicación y la preparación de material de vidrio, esterilización, uso de batas
habitación limpia y requisitos de acceso, las técnicas de asepsia, las pruebas analíticas
de rutina, contar, el manejo de datos, y las técnicas de control de calidad para identificar
y eliminar los problemas deben ser estrechamente monitoreados. La administración
debe ayudar al personal de laboratorio para obtener un trabajo de formación y curso
para mejorar sus habilidades técnicas y avanzar en sus carreras. Un registro de
capacitación de los empleados y la puntuación de rendimiento obtenido mediante el
análisis de un solo ciego muestras se deben mantener. Demostración inicial de la
capacidad antes de generar los datos, y un curso de demostración de la capacidad de
cada método de análisis llevado a cabo se debe registrar.
2. Los criterios de bioseguridad
La bioseguridad es motivo de preocupación para todos los laboratorios microbiológicos
para proteger al personal de laboratorio y otros que pueden estar potencialmente
expuestos po-. Hay tres elementos que deben considerarse: las prácticas de laboratorio,
equipos de seguridad y diseño de las instalaciones. La evaluación de riesgos del trabajo
a realizar con cada agente biológico específico determinará la combinación adecuada de
estos elementos necesarios para cada laboratorio.
Los Centros para el Control de Enfermedades (CDC) y la Prevención de EE.UU.
Servicio de Salud Pública, clasifica los laboratorios de manipulación de agentes
biológicos peligrosos potenciales en cuatro niveles de bioseguridad. Los cuatro niveles
de bioseguridad (BSLs 1, 2, 3 y 4) consisten en una combinación de prácticas de
laboratorio y las técnicas, equipos de seguridad e instalaciones de laboratorio. Cada
combinación es especialmente adecuada para las operaciones realizadas, las rutas de
sospecha de transmisión de los agentes infecciosos, y la función de laboratorio o de la
actividad.
La siguiente es una breve discusión de los cuatro diferentes niveles de bioseguridad.
Agentes indígenas, peligrosos o exóticos que pueden causar enfermedades graves o
potencialmente mortales, no se de-descrito en los métodos estándar, por lo tanto, la
información detallada sobre las prácticas especiales, contención y las instalaciones para
BSLs 3 y 4 no se incluyen aquí. Para más información sobre todos los BSLs, protocolos
de revisión de los CDC.
a. Nivel de Bioseguridad 1 (BSL 1): Como se ha señalado por los CDC, BSL 1 es
adecuado para el trabajo con agentes bien caracterizados que no se sabe que causan la
enfermedad consistente en adultos sanos y de peligro mínimo potencial para el personal
de laboratorio y el medio ambiente. El trabajo se realiza generalmente en mesas de
trabajo abiertas usando prácticas microbiológicas estándar. Los agentes que figuran en
los métodos estándar que debe ser manejado bajo un BSL prácticas son las bacterias
coliformes totales y termotolerantes (fecales), E. coli, enterococos, hierro y azufre,
bacterias, actinomicetos y otros microorganismos no patógenos. Es bajo la discreción
del director del laboratorio lo que las prácticas de bioseguridad deben ser respetados en
función de las prácticas en cuestión. Las prácticas estándar y equipo de seguridad para
este nivel son los siguientes:
1) El acceso al laboratorio es limitado o restringido a la discreción del director del
laboratorio mediante la publicación de un signo, por ejemplo, "Zona restringida-Riesgos
Biológicos - El personal de laboratorio sólo" cuando los experimentos o en el trabajo
con las muestras están en curso. Asegúrese de que puertas y ventanas están cerradas
cuando el trabajo está progresando aséptica.
2) Personal de lavarse bien las manos con agua y jabón después de manipular materiales
viables, después de quitarse los guantes y antes de salir del laboratorio.
3) Comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, la aplicación de cosméticos, y
almacenar los alimentos para consumo humano no están permitidos en las áreas de
trabajo.
4) pipetear con la boca está prohibido.
5) Políticas para la manipulación segura de objetos punzantes se instituyen.
6) Las superficies de trabajo deben descontaminarse antes y después de cada uso y
después de cualquier derrame de material viable.
7) Todas las culturas, acciones y otros desechos regulados son descontaminados antes
de su eliminación mediante un método de descontaminación aprobado, como autoclave
y que la información es grabada.
8) Un programa de control de insectos y roedores, está en vigor.
Se recomienda que Batas de laboratorio, bata o uniforme debe usar para prevenir la
contaminación o suciedad de la ropa de calle. Se deben usar guantes si la piel de las
manos se ha roto o si una erupción cutánea. Todos los procedimientos deben ser
realizados de manera que no se producen aerosoles o salpicaduras.
b. Nivel de bioseguridad 2 (BSL 2): BSL 2 se basa en un BSL prácticas e implica
trabajar con los agentes de peligro potencial moderado para el personal y el medio
ambiente. Los agentes que figuran en los métodos estándar que requieren prácticas BSL
2 son los microorganismos patógenos descritos en las secciones 9260, 9510, 9610 y
9711. Este nivel se diferencia de BSL 1 en lo siguiente: personal de laboratorio tienen
una formación específica en el manejo de agentes patógenos, el acceso al laboratorio es
limitado cuando se está trabajando, extremar las precauciones se toman con artículos
contaminados aguda, y ciertos procedimientos en los que los aerosoles infecciosos
pueden ser creados se llevan a cabo en cabinas de seguridad biológica (BSC). Las
vacunas se debe prestar si está disponible.
Las prácticas estándar para este nivel de todos los enumerados para BSL 1 y otras
prácticas especiales, entre ellas las siguientes:
1. Un alto grado de precaución se toma siempre con los objetos contaminados cortantes,
incluyendo agujas y jeringas, portaobjetos, pipetas, tubos capilares y escalpelos.
2. Las superficies de trabajo deben descontaminarse al concluir los trabajos o al final del
día y después de cualquier derrame o salpicadura de material viable, mediante el uso de
desinfectantes que son efectivos contra los agentes de interés.
3. Culturas o residuos potencialmente infecciosos se colocan en un recipiente con la
etiqueta "residuos biológicos peligrosos" con una cubierta que evita las fugas durante la
recolección, manejo, procesamiento, almacenamiento, transporte o envío.
4. Cabinas de seguridad biológica, preferentemente de Clase II, o de otro equipo de
protección personal. se utilizan cada vez que los procedimientos con un gran potencial
para la creación de aerosoles infecciosos o salpicaduras se llevan a cabo y las altas
concentraciones o grandes volúmenes de agentes infecciosos que se utilizan.
5. Protección de la cara se utiliza para las salpicaduras anticipado o aerosoles de
materiales infecciosos en la cara cada vez que debe ser el microorganismo manipulado
fuera del BSC.
6. Capas de protección de laboratorio, batas o uniformes, y gafas de seguridad
designado para uso de laboratorio se usan, mientras que en el laboratorio y se retira y se
deja en el laboratorio antes de viajar a zonas fuera del laboratorio.
7. Se usan guantes cuando las manos pueden comunicarse con materiales
potencialmente infecciosos, superficies contaminadas, o el equipo.
c. Niveles de bioseguridad 3 y 4: BSLs 3 y 4 incluyen la colaboración con los agentes
indígenas, peligrosos o exóticos que pueden causar enfermedades graves o
potencialmente mortales, como resultado de la exposición por inhalación. Dado que los
agentes en estas categorías no se describen en los métodos estándar, prácticas
especiales, contención y las instalaciones para estos niveles se describen brevemente
aquí.
El personal debe ser entrenado en el manejo de materiales infecciosos. Todas las
prácticas anteriores deben ser seguidas. El acceso debe ser limitado y aseguró áreas. El
trabajo debe ser realizado dentro de los gabinetes de seguridad biológica por personal
vestido con ropa de protección adecuada y dispositivos. Nadie con heridas abiertas
deben entrar en el laboratorio. Una zona de paso donde el personal puede transformarse
en ropa de protección debe estar disponible entre las entradas desde el pasillo exterior y
el interior de laboratorio. Evita que ambas puertas se abran al mismo tiempo. Todos los
materiales potencialmente contaminados, tales como guantes, batas de laboratorio, etc,
deberán ser descontaminados antes de su eliminación o reutilización.
Nivel 4, como se señaló anteriormente para BSL 3, consiste en agentes biológicos, a
menudo exóticas, que son extremadamente peligrosos, tanto para el personal y / o el
medio ambiente. Todas las prácticas anteriores deben ser seguidas. El acceso al
laboratorio debe ser estrictamente controlada y situado en una zona claramente marcado
y retirado de las operaciones normales o en un edificio separado. Personal totalmente
debe desvestirse y ponerse ropa de laboratorio antes de entrar en las áreas de prueba y
deberán ser descontaminados antes de salir.
3. Instalaciones
Desarrollar una política de control ambiental para asegurar que las condiciones
ambientales no invaliden los resultados, afectan la calidad requerida de las mediciones,
ni afectan negativamente a personnel.12 factores que deben considerarse y seguimiento
para llevar a cabo se describen a continuación. Gran parte de esta información se aplica
a cualquier instalación de laboratorio.
a. Ventilación: Plan de bien ventilada laboratorios que se puede mantener libre de
polvo, corrientes de aire y cambios bruscos de temperatura. Instalación de aire
acondicionado y sistemas de temperatura y humedad para reducir la contaminación,
permitir un funcionamiento más estable de las incubadoras, y disminuir los problemas
de humedad con los medios de comunicación y la instrumentación. Ajustar las rejillas
de ventilación del sistema para que el flujo de aire no sopla directamente sobre las
superficies de trabajo. Cuando sea posible, el flujo de aire debe ser negativa en el
laboratorio (de modo que el flujo de aire es siempre en, más que por el laboratorio) para
evitar el riesgo de contaminación del exterior.
b. La utilización del espacio: Para garantizar la integridad de la prueba y la muestra y
minimizar la contaminación potencial de diseñar y operar el laboratorio para reducir al
mínimo el tráfico y los visitantes. No obstruya el acceso o puntos de salida.
Asegúrese de que hay espacio de trabajo suficiente para el volumen de trabajo a
realizar. Por ejemplo, mantener áreas de trabajo separadas para la recepción de
muestras, preparación y esterilización, descontaminación de los medios de
comunicación, material de vidrio y equipo, las pruebas y el cultivo y manejo de datos y
almacenamiento. Mantener el calor de generación de equipos, tales como autoclaves, en
una habitación separada de las incubadoras. El uso de una campana o cabina de
seguridad biológica para la distribución y la preparación de medios estériles, la
transferencia de cultivos microbianos, o trabajar con materiales patógenos se
recomienda. En los laboratorios más pequeños, puede ser necesario, aunque indeseable
poder, para llevar a cabo estas actividades en la misma habitación. Sin embargo, no
realizan estas actividades cerca de puertas abiertas o ventanas abiertas. Tener suficiente
espacio de almacenamiento disponible en el laboratorio para que los materiales pueden
ser almacenados apropiadamente.
c. Las áreas de laboratorio de banco: Proporcionar al menos 2 metros de espacio en la
mesa lineal por el analista y otras áreas para la preparación y actividades de apoyo.
Altura del banco debe ser razonable y cómoda para los técnicos. De stand-up de trabajo,
las dimensiones típicas de banco pueden ir desde 90 hasta 97 cm de altura y
profundidad 70-76 cm, y para sentarse a actividades tales como la microscopía y el
recuento de placas, los bancos pueden variar de 75 a 80 cm de alto. Especifique mesas
de trabajo de acero inoxidable, plástico epoxi, u otras superficies lisas, impermeables
que son inertes y resistentes a la corrosión con un número mínimo de costuras y libre de
grietas y hendiduras.
Instalar, incluso, una iluminación sin deslumbramiento con cerca de 1000 lux (100 ft-c)
la intensidad en la superficie de trabajo. Prueba con un fotómetro.
d. Paredes y pisos: Asegurarse de que las paredes están cubiertas con un acabado suave
que sea fácil de limpiar y desinfectar. Especificar los pisos de concreto liso, vinilo,
baldosas de asfalto u otras superficies impermeables, lavables sellados. Especificar las
superficies de techo que son suaves, no fibrosos, y con luces empotradas.
e. El trabajo del área de: Mantener altos estándares de limpieza en las áreas de trabajo.
Desinfectar las superficies antes y después de la prueba. Instituir una política regular de
mantenimiento preventivo de las áreas de trabajo y equipos tales como incubadoras y
refrigeradores. Esterilizar los suministros contaminados y los medios de comunicación
inmediatamente después de su uso. Evitar la acumulación de agua en una olla debajo del
refrigerador y limpie todos los filtros de ventilación.
Desarrollar un programa de vigilancia ambiental para monitorear la calidad del aire de
manera rutinaria, por lo menos mensualmente o más frecuentemente si el área es
utilizada o el análisis de riesgo biocontaminación indica la necesidad de un control más
frecuente. El uso de aire placas de asentamiento densidad donde se lleva a cabo el
trabajo aséptico. Este es un proceso de muestreo pasivo en el que las partículas se
depositan en la superficie del agar. Use muestreadores activos de aire si la evaluación de
riesgos indica posibles aerosol condiciones.4 RODAC (detección organismo replicar y
contando), las placas de contacto o el metodo1 hisopo puede ser utilizado semanalmente
o con mayor frecuencia para controlar la contaminación banco de superficie.
Los resultados promedio obtenidos en las pruebas durante un periodo de tiempo para
establecer los límites normales, es decir, establecer una línea base para esa ubicación. A
pesar de los límites de uniforme para la densidad bacteriana no se han establecido, cada
laboratorio puede utilizar estas pruebas para establecer una base para las áreas de
trabajo específicas, evaluar las tendencias, establecer niveles de alerta y acción, y tomar
las medidas apropiadas cuando sea necesario. El número de colonias en la placa de la
densidad del aire no debe exceder 160/m2/15 minutos de exposición (15
colonies/plate/15 min). Además de este sistema de vigilancia, el laboratorio podría
identificar los contaminantes recuperados con los sistemas de identificación automáticos
disponibles en el mercado.
Prevenir los efectos de sonido adversos y los niveles de vibración en el laboratorio.
Instalar y fácil de limpiar toldos en las ventanas de cristal grandes para evitar la
acumulación de calor.
f. Laboratorio de limpieza: salas de laboratorio Limpie y lave los bancos, estantes,
pisos, ventanas, luces, y las superficies expuestas de la tubería. Húmedo trapear los
pisos y tratar con una solución desinfectante semanales; no barrer en seco o barrido.
Limpiar mesas de trabajo y tratar con un desinfectante por lo menos una vez al día, o
más frecuentemente, dependiendo del nivel de bioseguridad requeridas para el trabajo
que realiza (ver 9020B.2). No permita laboratorio para llenarse. Guarde los suministros
y el papeleo fuera de mesas de trabajo.
Eliminar o cubrir cualquier tubería de arriba que no se puede limpiar de forma rutinaria.
Tiene jabón líquido para manos en un dispensador de acción de la gravedad y toallas de
papel disponibles en los fregaderos de laboratorio. No permita fumar o el consumo de
alimentos o bebidas en el laboratorio.
g. Electricidad: asegurar una fuente estable de electricidad, un número suficiente de
puntos de venta, interruptor de circuito (GFCI) protegido cuando sea necesario, y la
colocación de protectores de sobretensión. Una copia de seguridad de energía de
emergencia y sistema de alarma puede ser necesario cuando el trabajo es fundamental.
4. Equipos de laboratorio e instrumentación
Contar con procedimientos para verificar que cada elemento identificado del equipo se
ha instalado correctamente y está funcionando en un manner.13 consistente y
satisfactoria Verificar mediante la supervisión constante, el mantenimiento de rutina, y
un programa de calibración periódica que cada pieza de equipo o instrumento cumple
con las necesidades del usuario para la precisión y la minimización del sesgo.
Procedimientos escritos sobre el uso, operación, calibración y mantenimiento de
equipos e instrumentos pertinentes (ver 9020B.6) y mantener los manuales del
fabricante disponibles para su fácil recuperación. Realizar la calibración de los equipos
que utilizan patrones de referencia y mantenimiento de los equipos de forma regular
según lo recomendado por el fabricante o para obtener contratos de mantenimiento
preventivo en autoclaves, balanzas, microscopios y otros equipos críticos. Grabación
directa a todos los controles de calidad en los libros de registro permanente y mantener
la documentación. Desarrollar un sistema para "marcar" los problemas y las acciones
necesarias para su corrección.
Asegúrese de que el laboratorio cuenta con todo el equipo y los suministros necesarios
para la realización de pruebas ambientales y de calibración. Cuentan con un equipo
suficiente y suministros cuando sea necesario a fin de que habitualmente no se movió
del área de laboratorio a otro. Cuando el equipo está disponible sólo fuera de las
instalaciones, documento cómo el laboratorio se asegurará de que la calidad sea
satisfactoria. Para las pruebas moleculares, el equipo del laboratorio y suministros
necesitan ser destinada a gastos rooms.9 Mantener toda la documentación que
demuestra la determinación de la aceptabilidad de los equipos, instrumentos y
suministros, así como todos los análisis analíticos. Mantener los registros en un formato
de registro permanente, como un cuaderno, bloc de notas electrónico, o archivo de
computadora.
Utilice los procedimientos de calidad tras el control de la base aplicada, así como el
laboratorio de investigación (equipos necesarios para las pruebas especializadas que no
pueden ser enumeradas aquí):
a. Sensor de temperatura y dispositivos de grabación: Anualmente o, preferiblemente,
dos veces al año comprobar la exactitud de todas las temperaturas de trabajo de
detección de dispositivos, tales como líquido en vidrio termómetros, termopares y los
instrumentos de registro de la temperatura a la temperatura de uso en contra de un
certificado del Instituto Nacional de Estándares y Tecnología (NIST) o termómetro
NIST un
y conforme a las especificaciones del NIST. Registrar los resultados de la calibración,
junto con la fecha y firma del técnico, en un registro de control de calidad. Marca el
factor de calibración corrección necesaria en cada dispositivo de medición de
temperatura calibrado de manera que sólo con corrección de los valores de temperatura
se registran. Verificar la exactitud del termómetro de referencia certificados
especificados en el certificado de calibración o por lo menos cada cinco. Algunas
organizaciones de acreditación o agencias federales o estatales pueden requerir una
calibración más frecuentes.
Para fines de uso general termómetros graduados en incrementos de 0,5 ° C o menos.
Mantener la bombilla en el agua o glicerol para las incubadoras de aire y refrigeradores.
Por ejemplo, para un 44,5 ± 0,2 ° C baño de agua, use un termómetro de inmersión
total, amplia, por ejemplo, a corto y largo, graduado a 0,1 ° C. De las incubadoras de
convección de aire, utilice los termómetros, por ejemplo, rango, a corto y largo, con
bombillas inmerso en glicerol sellado en un frasco o tubo de ensayo con volumen
equivalente a los contenedores que se utilizan en las incubadoras. Registro de la
calibración con corrección de lectura de la temperatura en un registro de control de
calidad. Siempre que sea posible, dotar a las incubadoras y baños de agua con los
instrumentos de registro de la temperatura que proporcionan un registro continuo de
temperatura de funcionamiento.
Abstenerse, en lo posible, el uso de termómetros de mercurio para evitar la posible
liberación de mercurio al medio ambiente cuando el termómetro se rompe.
b. Balances: Localice los saldos en las zonas sin movimiento de aire rápido y balancea
el nivel de la empresa, incluso las superficies para evitar vibraciones. Relevel equilibrio
cada vez que se mudó a una nueva ubicación.
Siga las instrucciones del fabricante para la operación y el mantenimiento de rutina de
balanzas analíticas y de carga superior. Servicio de balances anuales o con mayor
frecuencia a medida que cambian las condiciones o problemas.
Antes de cada uso limpiar el balance con un cepillo suave y asegúrese de que está en
cero peso en vacío. Si es necesario a cero la pantalla, pulse el botón de tara. Use un peso
de papel o el peso de tara y los barcos antes de añadir los reactivos. Coloque el punto de
ser pesado en la sartén y leer el peso después de que el símbolo indicador de estabilidad
(si está disponible) aparece en pantalla. Sartenes limpias balance después de su uso y
limpie los derrames inmediatamente con un pañuelo desechable de laboratorio. Vuelva a
colocar los pesos si corroídos o caído. Utilice sólo una pinza de punta de plástico para
manejar pesos. Revisar el balance de rutina, preferiblemente todos los días antes de su
uso, con al menos dos pesos de trabajo que soporte el rango de uso normal. Compruebe
pesos mensuales trabajando con un conjunto de pesas de referencia de la conocida
tolerance14 (por ejemplo, ANSI / ASTM Clase 1 o Clase S NIST acompañado de
certificado correspondiente) para la exactitud, precisión y linealidad. Registrar los
resultados junto con la fecha y las iniciales del técnico. Recertificar pesos de referencia
como se especifica en el certificado de calibración o por lo menos cada cinco años.15,
16
Tenga en cuenta que algunas agencias reguladoras o los organismos de acreditación
pueden requerir recertificación más frecuentes de los pesos de referencia.
c. medidor de pH: Utilice un medidor, se graduó en 0,1 unidades de pH o menos, que
incluye la compensación de temperatura, ya que la respuesta del electrodo de pH
depende de la temperatura. Use medidores digitales, soluciones comerciales de
amortiguación, y los electrodos adecuados para un amplio rango de temperaturas. Un
electrodo de cabeza plana se puede utilizar para medir los medios sólidos de agar.
Calibrar el pH-metro con al menos dos soluciones buffer de pH certificado que soporte
el pH de la muestra que se está midiendo. El rango de temperatura más deseado para la
determinación de pH es de 25 ° ± 5 ° C. Tomar la medida del pH de la solución de
prueba cerca de la temperatura utilizada para calibrar el medidor.
Registrar los resultados de la calibración, la fecha y las iniciales del técnico. Soluciones
buffer Fecha en la botella y en el diario cuando se abre y cheque mensual en contra de
otro medidor de pH, si es posible. Inmediatamente después de su uso, deseche las
soluciones tampón o single-use/ready-to-use paquetes de pH de la solución utilizada
para calibrar metros. Después de una d, descartar todas las soluciones a partir de los
paquetes. Vuelva a colocar los contenedores de suministro buffer de pH en la fecha de
caducidad. Tienda electrodo inmerso en la solución recomendada por el fabricante. No
permita que los electrodos que se seque.
Medir y registrar la pendiente del medidor de pH después de la calibración por lo menos
una vez al mes, y de preferencia después de cada uso, para ver si el medidor no funciona
correctamente. Si el medidor de pH no tiene una función que calcula automáticamente
la pendiente, pero puede proporcionar el pH en milivoltios (mV), utilice la siguiente
fórmula para calcular la pendiente: Pendiente, en% = (mV a pH 7 - mV a pH 4 ) X
100/177. Si la pendiente es inferior al 95% o por encima de 105%, el electrodo o el
medidor requiere de mantenimiento.
Para más detalles de uso del medidor de pH y de mantenimiento, consulte la sección
4500-H + o seguir las instrucciones del fabricante.
d. Sistema de purificación de agua: Los sistemas comerciales disponibles que incluyen
una combinación de prefiltración, el carbón activado, resinas de lecho mixto, y de
ósmosis inversa con filtración final para producir agua de grado reactivo. Estos sistemas
tienden a producir la misma calidad del agua hasta que las resinas o carbón activado son
casi agotamiento y la calidad abruptamente se vuelve inaceptable.
Algunos componentes de desionización que automáticamente regenerar las resinas de
intercambio iónico están disponibles ahora. No almacene el agua de grado reactivo a
menos que un dispositivo de radiación UV comercial se instala y se confirma para
mantener la esterilidad.
Monitorear el agua de forma continua o reactivo cada día de uso con un medidor de
conductividad calibrado y analizar por lo menos una vez al año para los metales traza.
Determinación mensual de bacterias heterótrofas pueden indicar problemas potenciales
antes de que los parámetros de prueba. Aumento del número de bacterias en el sistema
pueden afectar los ensayos con bacterias, ya que representan las fuentes de nutrientes
para las bacterias estar aislado. La prueba de la calidad del agua se debe realizar
anualmente y cuando hay una reparación o un cambio en el sistema de abastecimiento
de agua. Esta prueba de la calidad bacteriológica no es necesario para el tipo II o mejor
el agua tal como se define en el Standard Methods (ediciones 18 y 19), la Sección
1080C, o medio-calidad del agua o, mejor, tal como se define en el Standard Methods
(Ediciones 20, 21, y en línea) , la Sección 1080C, o como se define por otros
ampliamente aceptado standards.17 mayoría de los sistemas utilizados en la actualidad
cumplen o superan estos estándares.
Sustituir los cartuchos en los intervalos recomendados por el fabricante basado en el
consumo estimado y la calidad del agua de la fuente. No espere a que el fracaso de la
columna. Si las bacterias de agua libre que se desea, y un dispositivo de radiación
ultravioleta no está disponible, incluye la filtración final aséptica con un filtro de
membrana de 0,2 JNM de poro y recoger en un recipiente estéril. Monitor de agua
tratada de la contaminación y cambiar el filtro si es necesario.
e. El agua sigue: Alambiques producir agua de buena calidad que caracteriza deteriora
lentamente con el tiempo como la corrosión, la lixiviación, y se producen
incrustaciones. Estas condiciones se puede controlar con mantenimiento y limpieza
adecuados. Alambiques eliminan eficazmente las sustancias disueltas, pero no se
disuelve gases o compuestos orgánicos volátiles. De agua recién destilada puede
contener cloro combinado y amoníaco (NH3). En el almacenamiento, NH3 y el CO2
adicional se absorben en el aire. Utilizar agua blanda, como la fuente de agua para
reducir la frecuencia de la limpieza del alambique. Vacíe y limpie todavía y el depósito
de acuerdo a las instrucciones del fabricante y su uso.
f. Aparato de medios mecánicos de dispensación: Compruebe el volumen de
distribución en una probeta al inicio de cada cambio de volumen y periódicamente a lo
largo corre extendida; registrar los resultados. Lave con un pequeño volumen de medio
antes de dispensar y calientes de la bomba de agua de grado reactivo a través de la
unidad de enjuague entre carreras. Fugas correcta, conexiones sueltas, o mal
funcionamiento de inmediato. Al final de la jornada de trabajo, descanso aparato en
partes, para lavar, enjuagar con agua de grado reactivo y seco. Lubricar las partes de
acuerdo a las instrucciones del fabricante o por lo menos una vez al mes.
g. Esterilización de aire caliente del horno: Prueba de rendimiento mensual disponible
en el mercado con tiras biológica de esporas de un microorganismo formador de
esporas, como atrophaeus Bacillus, preferiblemente con una densidad mínima de 1x106
esporas y se colocan en recipientes de vidrio similares a los elementos de la
esterilización. Use un termómetro de bulbo colocado en la arena, precisa en los 160 a
180 ° C rango para medir la temperatura, o una sonda termopar tipo, o un registrador de
temperatura continua de leer. Registrar los resultados y el contenido cuando está en uso.
El uso de calor que indica la cinta para identificar los suministros y materiales que han
sido expuestos a temperaturas de esterilización.
h. Autoclave: Registre elementos esterilizados y la temperatura de esterilización, junto
con el total de tiempo de ejecución (la exposición al calor), período de tiempo real en la
temperatura de esterilización, establecer y lecturas de la presión real, y las iniciales de la
persona responsable de cada ejecución cycle.18 Las nuevas unidades se puede imprimir
la mayoría de las de esta información en la cinta de forma automática. Para las unidades
más antiguas uso de un gráfico termómetro de registro es muy recomendable.
Para autoclaves nuevos un perfil de temperatura inicial puede llevarse a cabo para
determinar las diferencias en los distintos lugares dentro del autoclave. Para el uso
habitual, verifique la temperatura del autoclave semanales con un máximo registro de
termómetro (MRT) para confirmar que 121 ° C se ha alcanzado.
Prueba mensual de eficacia de la esterilización, con el tiempo de esterilización normal y
la temperatura de los medios de comunicación, con tal biológica stearothermophilus
Geobacillus comercialmente disponible en tiras de esporas, suspensiones, o cápsulas,
preferentemente a una concentración 1x106 y se colocan en vidrio con un líquido para
simular la esterilización en autoclave real el rendimiento en media.19 Con cambios en
los estándares, algunos de los indicadores biológicos pueden requerir un período más
largo en la temperatura de esterilización que se utiliza para la mayoría de los medios de
hidratos de carbono. Si un problema se ha señalado, el uso de indicadores biológicos
para tiradas autoclave que superen los 20 minutos, por ejemplo, la dilución con agua y
materiales contaminados.
El uso adicional de un indicador de vapor químico para cada ciclo es un método
práctico y rápido para mostrar si las condiciones mínimas de exposición se cumplieron.
El uso de calor que indica la cinta para identificar los suministros y materiales que han
sido esterilizadas. Comprobar la sincronización trimestral mediante el uso de un
cronómetro calibrado o señal horaria nacional. Mantenga autoclave limpia y libre de
residuos mediante la comprobación tanto de la trampa y los sellos.
i. Refrigerador: Mantenga la temperatura entre 2 y 8 ° C con bulbo del termómetro en
agua destilada o una solución de glicerol. Un perfil de temperatura inicial se sugiere.
Verificar y registrar la calibración con corrección de temperatura todos los días cuando
está en uso y limpiar anualmente o más frecuentemente si es necesario. Identificar y
almacenar los materiales de la fecha. Descongelar según sea necesario y desechar
materiales obsoletos mensuales. Libre de heladas unidades puede dar lugar a la
deshidratación rápida de contenidos multimedia almacenados. Refrigeradores y
congeladores deben ser a prueba de explosión si se utilizan para el almacenamiento de
materiales inflamables.
j. Congelador: Congelador rango de temperatura será determinada por la necesidad de
análisis, por ejemplo, el congelador de laboratorio estándar puede variar desde -10 hasta
-20 ± 5 ° C y un congelador ultra-fríos que pueden ir de -70 a - 90 ° C. Verificar y
registrar la temperatura diaria. Un termómetro de registro y sistema de alarma son muy
deseables. Identificar y almacenar los materiales de la fecha. Descongelar y limpiar al
menos una vez al año (cada seis meses si es necesario), deseche los materiales
obsoletos.
k. Equipos de filtración por membrana: Antes del uso inicial, montar unidades de
filtración y verificar si hay fugas. Desechar las unidades si las superficies se rayen el
interior. Lavar y enjuagar las asambleas de filtración tras su uso, envuelva en papel de
aluminio o tóxicos, y esterilizar. Cuando las marcas de graduación volumétrica se
utilizan para medir los volúmenes de muestra, verificar la exactitud de la graduación de
las marcas de inicialmente con una clase de una pipeta volumétrica o probeta graduada.
Registrar los resultados. Para esterilizado de un solo uso embudos comprobar uno por
lote o utilizar un porcentaje determinado, por ejemplo, de 1 a 4%, para la exactitud de la
marca de graduación volumétrica.
l. Lámparas de rayos ultravioletas: Cuando se utiliza, desconecte bombillas lámparas
mensuales y limpie con un paño suave humedecido con etanol, 70% methanol/30% de
grado reactivo de agua, o el uso de espectroscopia de grado 2-propanol en el horno, el
material puede ser recogida. Lámparas de prueba de tres meses con una luz apropiada *
(onda corta) UV metros y reemplazar las bombillas si la producción es inferior al 70%
del original. Por otra parte, exponer las placas de recuento en placa de agar difusión que
contiene 200 a 300 unidades formadoras de colonias (UFC) / ml de una suspensión de
bacterias seleccionadas, durante 2 minutos. Incubar las placas a 35 ° C durante 48 horas
y Colonias. Reemplace la bombilla si el recuento de colonias no se reduce al 99%.
PRECAUCIÓN: A pesar de onda corta (254 nm) la luz ultravioleta es conocida por ser
más peligrosa que la longitud de onda UV (365 nm, que se utiliza para detectar la
fluorescencia), ambos tipos de rayos UV puede dañar los ojos y la piel y,
potencialmente, son cancerígenos. 20 Proteger los ojos y la piel de la exposición a los
rayos UV. Considere la posibilidad de un mecanismo de bloqueo para que las luces de
laboratorio no se puede activar sin necesidad de apagar las luces de arriba UV si se
utiliza. (Ver Sección 1090B).
m. Biohazard gabinete de seguridad (BSC): Con el mantenimiento adecuado de Clase I
y II BSC, cuando se utiliza junto con las buenas técnicas microbiológicas, proporcionar
un sistema de contención eficaz para la manipulación segura de los microorganismos
moderado y de alto riesgo (nivel 2 de bioseguridad y los agentes 3). Ambos BSC de
clase I y II tienen velocidades hacia adentro frente a (75 a 100 pies lineales / min) que
proporcionan unos niveles comparables de contención para proteger a los trabajadores
de laboratorio y el entorno inmediato de aerosoles infecciosos generados en el interior.
CSB de clase II también protegen el material en sí mismo a través de alta eficiencia de
filtración de partículas de aire (filtros HEPA) del flujo de aire hacia abajo a través de la
superficie de trabajo (flujo laminar vertical). Procedimientos operativos estándar son los
siguientes:
1) Antes de su uso y después de su uso, de purga de aire de 10 a 15 minutos y limpie la
unidad con un desinfectante. Garantizar el flujo de aire hacia el interior con un pedazo
de tejido.
2) Introducir directamente en el gabinete y realizar el trabajo de una manera metódica
lento. Coloque el material dentro del gabinete - no en la parrilla delantera - y no
interrumpir o bloquear el flujo de aire laminar. Coloque la bandeja de descarte en el
gabinete.
3) Descontaminar interior del BSC después de la finalización del trabajo y antes de la
extracción. Permitir gabinete para funcionar de 10 a 15 minutos y luego se cerró off.21
Proporcionar las pruebas y la certificación de Clase I y II BSC in situ en el momento de
la instalación, en cualquier momento, el BSC se mueve, y al menos anualmente.
Mantener los gabinetes como lo indique el fabricante.
n. Baño de agua incubadora: Verifique que el agua del baño incubadoras mantener la
temperatura, por ejemplo, 35 ± 0,5 ° C o 44,5 ± 0,2 ° C. Use un termómetro de
inmersión total (¶ 4 bis, arriba) que los incrementos apropiados necesarios para probar
la temperatura de incubación. Cuando la incubadora está en uso, el seguimiento y
registro de calibración corregida por la temperatura dos veces al día.
Llene la unidad sólo con agua de calidad reactivo. Mantener el nivel de agua de modo
que está por encima del nivel superior del medio en tubos o frascos. Para un óptimo
funcionamiento, equipamiento baño de agua con una cubierta a dos aguas para evitar la
evaporación y con una bomba de circulación para mantener una distribución uniforme
de la temperatura. Utilice sólo acero inoxidable, recubierto de plástico, u otros
bastidores resistentes a la corrosión. Utilice las pantallas o los pesos para mantener los
materiales de la flotación. Baño de vaciar y limpiar cuando sea necesario para evitar la
acumulación de sales y el crecimiento microbiano y desinfectar antes de rellenar.
o. Incubadora (de aire, con camisa de agua o bloque de aluminio): Medir y establecer
que las incubadoras mantener la temperatura espacial adecuada y uniforme de prueba.
Deje suficiente espacio entre los elementos que permitan el flujo de aire sin
obstrucciones. No placas de Petri de sobrecarga ni apile más de cuatro platos de alta.
Verificar inicialmente que el frío los medios de prueba de muestra se incuban a la
temperatura de ensayo durante el tiempo necesario. Tenga en cuenta que las
incubadoras estática del aire tardará más en llegar a temperatura de incubación. Lleve
todas las muestras de frío en los medios de comunicación a la temperatura ambiente
antes de incubadoras de inserción y el uso de un tamaño suficiente para evitar un
llenado excesivo incubadoras con las muestras frías. Durante los períodos de uso del
cheque y el registro de calibración con corrección de la temperatura dos veces al día
(mañana y tarde, separadas por al menos 4 h) en los estantes en uso, o por lo menos uno
en el estante superior y uno en el estante inferior, a garantizar y registrar la temperatura
consistencia a través de la unidad. Si un termómetro de vidrio se utiliza, se sumergen
bulbo y el tallo en agua o glicerina a la marca de inmersión. Para obtener los mejores
resultados, utilice un termómetro y un sistema de alarma. Lugar en incubadora, en un
área donde se mantiene la temperatura ambiente entre 16 y 27 ° C (60 a 80 ° F). Por otra
parte, el uso bien aislado cita en las salas de incubadora con circulación forzada de aire.
Limpiar y desinfectar después incubadoras de forma rutinaria.
p. Microscopios: Verifique la iluminación de Kohler cada vez que se pone el
microscopio para su uso. Óptica limpia y la etapa después de cada uso con papel óptico
y microscopio tapa cuando no esté en uso. Más información está disponible en la
sección 9030 y elsewhere.22
Permitir que sólo los técnicos capacitados para utilizar microscopio de fluorescencia y
fuente de luz. Monitor de la lámpara de fluorescencia y sustituir en caso de una pérdida
significativa de la fluorescencia se observa, cuando el fabricante recomienda la
sustitución, o cuando una regla o un documento de orientación de laboratorio especifica
el uso de horas máximo, lo que ocurra primero. Lámpara de operación en tiempo
record / uso, eficiencia y alineación. Siempre alinear la lámpara después de bombilla ha
sido reemplazado. Uso conocido láminas positivas de fluorescencia como controles.
q. Medidor de conductividad: Las mediciones de conductividad son dependientes de la
temperatura y el efecto de la temperatura puede variar con diferentes soluciones. Por lo
tanto, calibrar metros mensuales utilizando certificados bajo nivel estándar a 25 ° C o
determinar la constante de celda
utilizando certificados bajo nivel estándar a 25 ° C. Cuando las soluciones deben ser
medidos a una temperatura diferente, utilice un medidor con compensación automática
de temperatura o de tomar la temperatura de la lectura de registro de la solución, y luego
la lectura correcta a 25 ° C con las fórmulas de la sección 2510B.5b (generalmente de
2% / ° C) .
r. Microondas: Las unidades varían en potencia y colocación de material aceptable, sin
embargo, las microondas han utilizado con éxito para derretir preesterilizado medios de
agar. Su uso en un tiempo mínimo y la posición de ajuste de la potencia. Compruebe la
unidad para la calidad y el rendimiento en comparación con los procedimientos
estandarizados de fusión mediante la realización de estudio de comparación.
s. Micropipetas: 23,24 micropipetas son de alta precisión oratoria laboratorio de
instrumentos para administrar volúmenes muy pequeños. El uso con puntas de precisión
suministrados por el fabricante y segura solución para el cono de la nariz para asegurar
un sello hermético. Mantener la coherencia en la acción de pipeteo como pre-remojo, la
liberación de émbolo, y la profundidad de inmersión de la punta (entre 1 y 3 mm).
Funcionar en una posición vertical y tienen tanto de la muestra y el equipo a
temperatura equivalente. Evitar el exceso de marcación de los límites recomendados de
la pipeta para evitar daños mecánicos. Siga las instrucciones del fabricante para realizar
el mantenimiento de rutina, tales como la limpieza, reemplazo de sellos, y re-
lubricación-y hacer que cada operador de pipeta de verificación de la exactitud y la
precisión del volumen dispensado a una frecuencia en relación con su uso, por ejemplo,
trimestralmente o antes si pipeta está mostrando signos evidentes de que es incorrecto o
si cambia la punta del fabricante. Calibrar al menos una vez al año ya sea en casa o
enviar al fabricante. Tenga en cuenta que la pipeta se calibra con agua, cambios en la
viscosidad del líquido puede dar lugar a un cambio en el volumen dispensado. Mantener
la documentación.
5. Suministros de Laboratorio
Mantener los registros y certificados de análisis del fabricante, la pureza, o nivel de
tolerancia, si se suministran, para todos los suministros de laboratorio.
a. Cristalería: El término "cristal" se refiere a vidrio de borosilicato y resistente al calor,
los materiales plásticos. Volumétricos de vidrio, pipetas, probetas graduadas, y vasos
con marcas de calibración debe tener una precisión de las tolerancias volumétricas
especificado. Sede estableció standards25 para la calibración de aparatos volumétricos
de laboratorio. Cristalería volumétrica es general, ya sea de clase A o clase B (sin
designar). La Clase A es la cristalería volumétrica más precisa. Determinar la tolerancia
una vez por lote o en un porcentaje fijo, por ejemplo, de 1 a 4%.
Antes de cada uso, examine la cristalería y deshacerse de objetos con bordes astillados o
grabado superficies internas. En particular, examinará con tapón de rosca de botellas y
frascos de dilución para los bordes astillados que podría escaparse y contaminar la
muestra, el analista, y el área. Inspeccione la cristalería después del lavado de cuentas
excesiva de agua, las manchas, y la nubosidad y vuelva a lavar si es necesario. Vuelva a
colocar la cristalería con la escritura excesiva, si las marcas no se pueden quitar. Ya sea
la cubierta de vidrio o cristal, con su tienda de abajo hacia arriba para evitar que el
polvo se asiente en su interior.
Realizar las siguientes pruebas para artículos de vidrio limpio;
1) pH check-Debido a que algunos productos de limpieza son difíciles de eliminar
por completo, revise de lotes de material de vidrio limpio para la reacción de pH,
especialmente si se remojan en álcalis o ácidos. Para probar la cristalería limpia
para un residuo alcalino o ácido añadir unas gotas de bromotimol 0,04% azul
(BTB) o el indicador de pH otros y observar la reacción de color. BTB debe ser
azul-verde (en el rango neutral aceptable).
Para preparar la solución de 0.04% el indicador azul de bromotimol, añadir 16 mL0.01
NNaOH a 0,1 g BTB y diluir a 250 ml con agua de grado reactivo.
2) Prueba de residuos de inhibidores de vidrio y plástico-Ciertos agentes humectantes o
detergentes utilizados en el lavado de cristalería pueden contener sustancias
bacteriostáticas, inhibidores o estimulantes que requieren de 6 a 12 lavados para
eliminar todos los rastros y asegurar la libertad de acción bacteriostática residual.
Siempre y cuando la prueba de azul de bromotimol que se está haciendo en cada lote de
material de vidrio, ejecute esta prueba antes del primer uso de un compuesto de lavado y
cada vez que un nuevo procedimiento de lavado se utiliza. Si la prueba de azul de
bromotimol no se hace siempre también ejecutar la prueba de toxicidad sobre una base
anual. Registrar los resultados. Aunque el procedimiento siguiente se describe el ensayo
de placas de Petri de residuos inhibitorios, es aplicable a otros tipos de vidrio o
recipientes de plástico.
a) Procedimiento de lavado y enjuague, seis placas de Petri de acuerdo con la práctica
habitual de laboratorio y designar como Grupo A. Wash seis placas de Petri que el
anterior, lavar 12 veces con porciones sucesivas de agua de grado reactivo, y designar
como Grupo B. Enjuague seis cajas de petri con detergente lavado con agua (en la
concentración de uso), aire seco, sin más aclarado, y designar como el Grupo C.
Esterilizar los platos en A, B, C y Grupos por el procedimiento habitual. De recipientes
de plástico esterilizado, establecido seis placas petri de plástico y designar como el
Grupo D.
Preparar y esterilizar a 200 ml de agar recuento en placa y mantener en un 44 a 46 ° C
baño de agua.
Preparar un cultivo de Enterobacter aerogenes se sabe que contiene 50 a 150 unidades
formadoras de colonias / ml. Las pruebas preliminares que sean necesarias para lograr
este rango de contaje. Se inoculan tres platos de cada grupo de ensayo con 0,1 ml y los
otros tres platos de cada grupo con la cultura de 1 ml.
Siga el método de recuento en placa heterotrófica (Sección 9215B) para todas las placas
inoculadas y se incuba a 35 ° C durante 48 h. Contar con placas de 30 a 300 colonias y
registrar los resultados en UFC / mL.
b) Interpretación de los resultados, la diferencia en el recuento promedio de las placas
en los grupos A a D debe ser inferior al 15% si no hay efectos tóxicos o inhibidores.
Las diferencias en el recuento de un promedio de menos del 15% entre los grupos A y
B, y superior al 15% entre los grupos A y C indican que el detergente de limpieza tiene
propiedades inhibitorias que se eliminan durante el lavado de rutina. Las diferencias
entre B y D más del 15% indican un residuo inhibitorio está presente y utensilios de
plástico no deben ser utilizados para los análisis microbiológicos. Un procedimiento de
lavado, equipos, o el suministro de detergente puede ser necesaria.
b. Utensilios y recipientes para la preparación de los medios de comunicación: Use
utensilios y recipientes de vidrio de borosilicato, acero inoxidable, aluminio, u otros
resistentes a la corrosión de materiales (véase la Sección 9030). No utilizar los
utensilios de cobre.
c. Botellas de agua de dilución: botellas de uso descritos en 99 ml y de vidrio de
borosilicato no reactivo o de plástico con tapón de rosca equipadas con cubiertas inertes.
Limpie antes de su uso. Botellas precargada con agua de dilución disponibles en el
mercado son aceptables. Antes del uso de cada lote o una prueba mucho realizar la
esterilidad, marque una por lote o por un porcentaje fijo, por ejemplo, de 1 a 4%, el pH
y el volumen (99 ± 2 mL), y examinar las botellas de agua de dilución de un
precipitado, descartar si está presente . Vuelva a limpiar las botellas con ácido si es
necesario, y rehacer el agua de dilución. Si se repite precipitado, obtener una fuente
diferente de las botellas. Vuelva a revisar el volumen a intervalos regulares para
determinar la tasa de pérdida de volumen en condiciones de explotación. Desechar por
fecha de vencimiento.
d. Botellas de muestra: El uso de boca ancha de vidrio de borosilicato no reactivo o
botellas de plástico con tapón de rosca (el cual debe contener los revestimientos) o
preparados comercialmente esterilizados bolsas de plástico con lazos de tamaño
suficiente para recoger la muestra que se necesita y aún así tener un espacio libre
suficiente para permitir que sacudir de la muestra en el contenedor. Limpiar y esterilizar
los biberones antes de su uso y, dependiendo del uso, añadir agente de decloración
suficiente para neutralizar el cloro residual (9060A.2). Mínima de prueba para una
botella de muestra esterilidad por lote se esterilizan en el laboratorio o en una botella de
muestra por lote comprado como esterilizado, o en un porcentaje fijo como el 1 y el 4%.
Documentar los resultados. Vuelva a esterilizar todo el lote o lotes, se produce el
crecimiento. Verificar y registrar la eficacia del agente de decloración, uno por cada
partida o lote. También, verificar la exactitud de la marca de 100 ml (si existe) y auto-
fluorescencia propiedades (si se utiliza la fluorescencia ción de pruebas), una por cada
lote. Registrar los resultados.
e. Multi-así bandejas † y selladores: Cuando se utiliza para estudios de crecimiento,
comprobar la esterilidad de múltiples bandejas y una por cada lote añadiendo
asépticamente 100 ml de caldo de soja tríptico u otro medio no selectivo, sello, e
incubar a 35 ± 0,5 ° C hasta 48 h. No indica el crecimiento de la esterilidad. Tenga en
cuenta que si los pozos se vuelven muy turbia (lo que indica condiciones no estériles),
podría haber producción de gas y explosión concomitante entre los pozos.
Evaluar el desempeño de sellado de la unidad de calor sellador mensual mediante la
adición de una o dos gotas de un colorante alimentario de color a 100 mL de muestra de
agua desionizada, ejecute a través de sellador, y comprobar visualmente cada pocillo de
fugas. Realizar la limpieza y el mantenimiento preventivo de sellador anualmente o más
frecuentemente si es necesario.
Placas de microtitulación se utilizan en una variedad de procedimientos analíticos, por
ejemplo, la hibridación de ADN y los estudios inmunológicos, y puede contener> 96
pozos. El laboratorio debe examinar los pozos de la bandeja para mantener la
coherencia y ejecutar los controles adecuados. El laboratorio puede ser necesario para
desintoxicar las placas si su uso requiere.
f. Grado reactivo agua: Use agua de grado reactivo para la preparación de soluciones y
medios de comunicación y para el enjuague final de la cristalería.
El agua debe ser demostrado estar libre de sustancias inhibitorias y bactericidas. La
calidad del agua puede obtenerse de un sistema de purificación de agua se diferencia
con el sistema utilizado y su mantenimiento. Ver es 4d y E anteriores. Los límites
recomendados para la calidad de los reactivos de agua para el laboratorio de
microbiología se dan en la Tabla
9020: II. Si estos límites no se cumplen, investigar y corregir o cambiar la fuente de
agua. Aunque la medición de pH del agua de grado reactivo se caracteriza por la deriva,
las lecturas extremas son indicativos de contaminación química.
1) Prueba de la calidad bacteriológica-Esta prueba, también conocida como la prueba de
aptitud del agua, se basa en el crecimiento de Enterobacter aerogenes en un mínimo de
constitución química definida de crecimiento medio. La presencia de un agente tóxico o
de una sustancia promotora del crecimiento va a alterar la población de 24 horas por un
aumento o una disminución del 20% o más en comparación con un control. Realizar la
prueba al menos una vez al año, cuando la fuente de agua de grado reactivo se cambia, y
cuando se produce un problema analítico. Esta prueba de la calidad bacteriológica no es
necesario para el tipo de agua II o superior, tal como se define en el Standard Methods
(ediciones 18 y 19), la Sección 1080C, o medio-calidad del agua o, mejor, tal como se
define en el Standard Methods (Ediciones 20, 21, y en línea ), la Sección 1080C. Prueba
para asegurar la calidad constante de esta agua para cumplir con estos estándares
alternativos. La prueba es compleja, requiere habilidad y experiencia, y no es fácil de
hacer de forma poco frecuente. Se requiere de un trabajo de más de 4 d, un agua ultra
pura de una fuente independiente como control, reactivos de alta pureza y la limpieza
extrema de los frascos de cultivo, placas de Petri, tubos de ensayo, pipetas y otros
equipos.
un aparato) y material de uso de vidrio de borosilicato de todas las medidas, aunque
preesterilizado placas Petri de plástico se puede utilizar en los pasos de galvanoplastia.
Enjuague en agua bidestilada recién a partir de un alambique de cristal y luego
esterilizar con calor seco, la esterilización por vapor a volver a contaminar estos
elementos especialmente limpiado. La sensibilidad y reproducibilidad dependerá en
parte de la limpieza de los contenedores de muestras, frasco, tubos y pipetas. A menudo
es conveniente dejar a un lado la cristalería nueva para uso exclusivo en esta prueba. El
uso de cualquier otra cepa de bacterias coliformes de tipo IMViC - - + + (E. aerogenes)
obtenidos a partir de un agua a temperatura ambiente o la muestra de aguas residuales o
la cultura de referencia.
b) Los reactivos, deben utilizarse únicamente reactivos y productos químicos de grado
ACS. La sensibilidad está controlada en parte por la pureza de los reactivos. Preparar
los reactivos en agua recién redestilado de un alambique de cristal de la siguiente
manera:
Solución de citrato de sodio: Disolver 0,29 g de citrato de sodio, Na3C6H6O7 • 2H2O,
en 500 ml de agua.
Solución de sulfato de amonio: Disolver 0,26 g (NH4) 2SO4 en 500 ml de agua.
Sal-mezcla: Se disuelven 0,26 g de sulfato de magnesio, MgSO4 • 7H2O, 0,17 g de
cloruro de calcio, CaCl2-2H2O, 0,23 g de sulfato ferroso, FeSO4 • 7H2O y 2,50 g de
cloruro sódico, NaCl, en 500 ml de agua.
Solución tampón fosfato / agua de dilución: Diluir la solución madre de fosfato buffer
(9050C.1a) 1:25 en el agua.
Hervir todas las soluciones de reactivo 1 a 2 minutos para matar las células vegetativas.
Las soluciones de tienda en esterilizar con tapón de vidrio de botellas en la oscuridad a
5 ° C durante un máximo de varios meses, siempre y cuando se ponen a prueba para
determinar la esterilidad antes de cada uso. Debido a que la solución de sal y la mezcla
se desarrollará una ligera turbidez dentro de 3 a 5 días como la sal de hierro se convierte
en estado férrico, preparar la solución de sal y mezcla sin FeSO4 para almacenamiento a
largo plazo. Para utilizar la mezcla, añadir una cantidad apropiada de sal de hierro
recién preparada y cocida recién. Deseche las soluciones que con una turbidez fuerte y
preparar una nueva solución. Desechar si la solución se vuelve turbia.
c) Las muestras-Para preparar las muestras de prueba recolectar 150 a 200 ml de agua
de grado reactivo de laboratorio y control (bidestilada) de agua estéril en frascos de
vidrio de borosilicato y dejar hervir durante 1 a 2 min. Evite ya hirviendo para evitar
que los cambios químicos.
d) Procedimiento de etiquetas y cinco frascos o tubos, A, B, C, D y E. Añadir las
muestras de agua, reactivos de los medios de comunicación, y el agua bidestilada a cada
frasco, como se indica en la Tabla 9020: III. Añadir una suspensión de E. aerogenes
(IMViC tipo - - + +) de la densidad de tal manera que cada frasco se contienen de 30 a
80 células / ml, preparada según se indica a continuación. Las densidades de células por
debajo de este rango de resultados de los ratios de inconsistentes, mientras que las
densidades por encima de 100 células / ml en consecuencia disminución de la
sensibilidad de los nutrientes en el agua de ensayo.
e) Preparación de la suspensión bacteriana-El día antes de hacer la prueba de aptitud de
agua destilada, inocular una cepa de E. aerogenes en un agar nutritivo inclinado con una
pendiente de aproximadamente 6,3 cm de largo contenido en un 125 - X 16 mm con
tapón de rosca tubo. Racha de toda la superficie del agar para desarrollar una película
continua de crecimiento e incubar 18 a 24 horas a 35 ° C.
f) La recolección de células viables-Pipet 1 a 2 ml de agua de dilución estéril de un
blanco de agua de 99 ml en los 18 - a 24 h la cultura. Emulsionar el crecimiento en la
inclinación por la vibración, entonces la suspensión pipeta de nuevo en blanco original
de agua de 99 ml.
g) La dilución de la suspensión bacteriana-Hacer una dilución de 1:100 de la botella
original en un blanco de agua en segundo lugar, una dilución 1:100 de la segunda
botella en un blanco de agua en tercer lugar, y una dilución 1:10 de una tercera botella
en un cuarto blanco de agua, agitando enérgicamente después de cada traslado. Pipetear
1,0 ml de la dilución cuarto (1:105) en cada uno de los frascos A, B, C, D y E. Este
procedimiento se debe producir una dilución final de los organismos a un rango de 30 a
80 células viables por mililitro de prueba solución.
h) Verificación de la densidad bacteriana, las variaciones entre las cepas del mismo
organismo, los diferentes organismos, medios de comunicación, y la superficie de pistas
de agar, posiblemente, será necesario ajustar el procedimiento de dilución para llegar a
un rango de densidad específica entre 30 y 80 células viables. Para establecer el rango
de crecimiento numérico de un organismo específico y medianas empresas, realizar una
serie de recuentos en placa de la dilución de terceros para determinar la densidad
bacteriana. Elegir el volumen adecuado de esta dilución en tercer lugar, que cuando se
diluyen en el 30 ml en frascos A, B, C, D y E, que contienen de 30 a 80 células viables /
mL. Si los procedimientos son estandarizados en cuanto a superficie inclinada y la
técnica de laboratorio, es posible reproducir los resultados en experimentos repetidos
con la misma cepa del microorganismo.
i) Procedimientos dificultades, los problemas en este método puede ser debido a: el
almacenamiento de la muestra de agua en suave vidrio contenedores o en envases de
vidrio sin revestimiento de las tapas de metal, el uso de productos químicos en la
preparación de los reactivos de grado analítico no-reactivo o no de los últimos
fabricación, la contaminación del reactivo con el agua destilada con un fondo de
bacterias (para evitar esto, hacer un recuento en placa heterotrófica en todos los medios
y los reactivos antes de comenzar la prueba de aptitud, como un freno a la
contaminación de la solución madre), la imposibilidad de obtener la densidad bacteriana
o elección errónea de dilución para obtener 24 horas de recuento en placa, retraso en
placas de vertido, y la prolongación del tiempo de incubación más allá de 26 horas
límite, que provoca una respuesta de crecimiento insensibilizados.
j) El cálculo para el crecimiento-la inhibición de sustancias:
recuento de colonias / ml, matraz B
Ratio =
recuento de colonias / mL, Frasco A
Una proporción de 0,8 a 1,2 (inclusive) no muestra las sustancias tóxicas, una
proporción de menos de 0,8 muestra un crecimiento sustancias inhibidoras en la muestra
de agua. Para las fuentes de nitrógeno y de carbono que promueven el crecimiento:
recuento de colonias / mL, Frasco C
Ratio =
recuento de colonias / mL, Frasco A
Para las fuentes de nitrógeno que promueven el crecimiento:
recuento de colonias / mL, Frasco D
Ratio =
recuento de colonias / mL, Frasco A
Para las fuentes de carbono que promueven el crecimiento de bacterias:
recuento de colonias / mL, Frasco de E
Ratio =
recuento de colonias / mL, Frasco A
No calcule los últimos tres relaciones cuando la primera relación indica una reacción
tóxica. Por estas razones un valor superior a 1,2 indica una fuente disponible para el
crecimiento bacteriano.
k) La interpretación de los resultados El recuento de frasco A después de 20 a 24 horas
a 35 ° C dependerá del número de organismos inicialmente plantado en el frasco A y la
cepa de E. aerogenes utilizados. Por esta razón, ejecutar el control, frasco A, para cada
serie de pruebas individuales. Sin embargo, para una determinada cepa de E. aerogenes
en las mismas condiciones ambientales, el número de terminales deben ser
razonablemente constante, cuando la planta inicial es el mismo. La diferencia en la
planta inicial de 30 a 80 será de unos tres más grandes de los 80 organismos
inicialmente inoculado en el frasco A, siempre que la tasa de crecimiento se mantiene
constante. Por lo tanto, es esencial que los cargos iniciales colonia en frascos A y B son
aproximadamente iguales.
Cuando la relación es superior a 1,2, supone que el crecimiento estimulante de
sustancias están presentes. Sin embargo, este procedimiento es extremadamente sensible
y ratios de hasta 3,0 tienen poca importancia en la práctica. Por lo tanto, si la relación es
entre 1,2 y 3,0, no hacer pruebas C, D y E, excepto en circunstancias especiales.
Por lo general, C frasco será muy bajo y frascos D y E tendrán una proporción de menos
de 1,2 cuando la relación entre matraz B al matraz A se encuentra entre 0,8 y 1,2.
Factores que limitan el crecimiento en un frasco son el nitrógeno y el carbono orgánico.
Una cantidad muy grande de nitrógeno amoniacal sin carbono orgánico podría aumentar
la proporción de D frasco por encima de 1,2, o la ausencia de nitrógeno con la
concentración de carbono podría dar porcentajes por encima de 1,2 en E frasco, con una
B, la relación entre 0,8 y 1,2.
Una relación inferior a 0,8 indica que el agua contiene sustancias tóxicas, y esta relación
se incluyen todas las tolerancias permitidas. Como se indica en el párrafo anterior, la
relación podría ir tan alto como 3.0 de 1,2 sin ningún tipo de consecuencias indeseables.
Medidas correctivas específicas no pueden ser recomendados para todos los casos de
aparatos defectuosos de destilación. Sin embargo, hacer una inspección cuidadosa de los
equipos de destilación y la producción de la revisión y manejo de agua destilada para
ayudar a localizar y corregir la causa de la dificultad.
Agua de alimentación a un todavía a menudo se pasa por una columna de ionización y
un filtro de carbón. Si estas columnas están bien cuidadas, la mayoría de los
contaminantes orgánicos e inorgánicos serán eliminados. Si el mantenimiento es
deficiente, el agua de entrada puede ser degradada a una calidad inferior a la del agua
del grifo primas.
El mejor sistema de destilación es de cristal de cuarzo o de alto contenido de sílice
contenido de borosilicato con resistencia térmica especial. Revestidas con estaño
imágenes fijas no son recomendables. Para la conexión de tuberías, el uso de acero
inoxidable, vidrio de borosilicato, o especiales tubos de plástico de cloruro de polivinilo
(PVC). Proteger los depósitos de almacenamiento de polvo.
1) Prueba de la sensibilidad-Tomando el cobre como una medida relativa de la toxicidad
del agua destilada, la sensibilidad máxima de la prueba es de 0,05 mg Cu / L en una
muestra de agua destilada.
2) El uso de pruebas para la evaluación de agua de grado reactivo, los medios de
comunicación, y las membranas-Cuando una nueva fuente de agua de grado reactivo o
un nuevo lote de medio de cultivo o de filtros de membrana se utiliza, la comprobación
de equivalencia de productos poniendo a prueba el lote actual en uso ( de referencia del
lote) en contra de la gran prueba con la cultura de referencia se recomienda. No siempre
es posible llevar a cabo la prueba de uso de nuevas fuentes de agua de grado reactivo, ya
que el sistema anterior ya no estarán disponibles.
a) Procedimiento de uso de un único lote de control de agua (agua bidestilada o agua
destilada pulidas por desionización), artículos de vidrio, filtros de membrana, o de otros
materiales necesarios para controlar todas las variables excepto el factor en estudio.
Realizar replicar verter o propagación de placa o membrana de filtro de placa en las
pruebas de referencia del lote y el lote de prueba, de acuerdo a los procedimientos en las
secciones 9215 y 9222. Como mínimo, hacer los análisis individuales en cinco muestras
de agua de diferentes positivo para el organismo a combatir o los controles de la cultura
de densidad conocida. Análisis repetidos y de muestras adicionales pueden ser probados
para aumentar la sensibilidad de la detección de diferencias entre la referencia y un
montón de pruebas.
Al llevar a cabo la prueba de uso de agua de grado reactivo, realizar las pruebas
cuantitativas de bacterias en paralelo con las conocidas de alta calidad del agua, control
de agua. Preparar la dilución / enjuague de agua y medios de comunicación con nueva
fuente de agua de grado reactivo y el control. Prueba con agua para todos los usos
(dilución, aclarado, la preparación de los medios de comunicación, etc.)
b) Contar y cálculos-Después de la incubación, las colonias de bacterias a partir de
comparar los dos lotes de tamaño y apariencia. Si las colonias en las placas de prueba de
muchos son atípicos o más pequeño que las colonias en las placas de referencia del lote,
el registro de pruebas de inhibición o cualquier otro problema, independientemente de
las diferencias cuentan.
Contar con placas y calcular la cuenta individual por 1 ml por 100 ml. Transformar el
recuento de los logaritmos y entrar en el registro de resultados transformado para los
dos lotes en columnas paralelas. Calcular la diferencia, d, entre los dos resultados
transformado para cada muestra, incluyendo el signo + o -, la media, d, y la desviación
estándar sd de estas diferencias (véase la Sección 1010B).
Calcular estadística de la t de Student, utilizando el número de muestras como n:
d
Estos cálculos se pueden hacer con diferentes paquetes de software estadístico para
computadoras personales.
c) Interpretación-Utilice el valor t crítico de la tabla de t de Student para la comparación
con el valor calculado. En el nivel de significación de 0.05 este valor es 2,78 para cinco
muestras (cuatro grados de libertad). Si el valor t calculado no exceda de 2,78, los lotes
no producen resultados muy diferentes y el lote de prueba es aceptable. Si el valor de t
calculada supera 2,78, los lotes de producir resultados significativamente diferentes, y el
lote de prueba es inaceptable. Los paquetes de software están disponibles para su uso en
ordenadores personales para realizar estos cálculos.
Si las colonias son atípicos o sensiblemente menor en el lote de prueba o la t de Student
supera 2,78, examinar las condiciones de prueba, repita la prueba, y / o rechazar el lote
de prueba y obtener otra.
g. Reactivos: 26 Porque los reactivos son una parte integral de los análisis
microbiológicos, la calidad debe estar garantizada. Use solamente productos químicos
de grado ACS o su equivalente porque las impurezas pueden inhibir el crecimiento
bacteriano, aportan nutrientes, o no produce la reacción deseada. El mantenimiento de
cualquier Material Safety Data Sheets (MSDS), siempre con los reactivos o las normas
y tener a disposición de todo el personal.
Productos químicos y reactivos de la fecha cuando se reciben y cuando abrió por
primera vez para su uso. Mantener registros de recepción, de caducidad, y posterior
elaboración. Durante la preparación de los reactivos a temperatura ambiente, los
reactivos a volumen en matraces aforados, y la transferencia para el almacenamiento de
buena calidad o de plástico inerte borosili cate-botellas de vidrio de borosilicato con
polietileno, o de otros tapones de plástico o tapas. Etiqueta con el nombre de los
reactivos preparados, la concentración, la fecha de preparación, el nombre del
preparador y fecha de caducidad si se conoce. Almacenar en condiciones adecuadas y
de descarte por fecha de vencimiento. Incluyen cultivos de control positivos y negativos
en cada serie de pruebas culturales y bioquímicas.
h. Tintes y colorantes: En los análisis microbiológicos, químicos orgánicos se utilizan
como agentes selectivos (por ejemplo, verde brillante), los indicadores (por ejemplo,
rojo fenol), y las manchas (por ejemplo, la tinción de Gram). Colorantes de los
proveedores comerciales varían de un lote a otro en medio de contraste por ciento, el
complejo colorante, insolubles, y los materiales inertes. Debido a los tintes para
microbiología debe ser de fortaleza y estabilidad para producir reacciones correctas, uso
de tintes sólo ha sido homologado por la Comisión de manchas biológicas. Compruebe
manchas bacteriológicos antes de su uso por lo menos una cultura de control positivo y
otro negativo y registrar los resultados. Para las manchas fluorescentes, prueba de
reactividad positiva y negativa de cada día de uso.
i. Los filtros de membrana y los cojines: La calidad y el rendimiento de los filtros de
membrana varían con el fabricante, tipo, marca, y mucho, como resultado de diferencias
en los métodos de fabricación, materiales, control de calidad, condiciones de
almacenamiento, y application.27
1) Especificaciones de los fabricantes de filtros de membrana y las almohadillas para los
análisis de agua debe cumplir con las especificaciones estándar para las características
de retención, recuperación, extraíbles, y velocidad de flujo.
Algunos fabricantes proporcionan información adicional a la requerida por las
especificaciones y certificar que sus membranas son satisfactorios para el análisis de
agua. Que informe de la retención, el tamaño del poro, el caudal, la esterilidad, pH,
porcentaje de recuperación y límites específicos para extractables químicas orgánicas e
inorgánicas. A pesar de las pruebas de la membrana de filtro estándar de evaluación se
han desarrollado para los fabricantes, un laboratorio puede realizar sus propias pruebas,
si lo desea.
2) El uso de pruebas de cada nuevo lote de filtros de membrana debe realizar de manera
satisfactoria en la prueba de uso para asegurar que no produce recuperaciones bajas, la
diferenciación de los pobres, o malformación de las colonias debido a la toxicidad,
composición química, o defectos estructurales. Para el procedimiento, véase ¶ f2)
anterior.
3) Pruebas de control de calidad estandarizados mantener inspeccionar cada lote de
membranas antes de su uso y durante la prueba para asegurarse de que son redondos y
flexibles. Críticamente para ver si mucha fragilidad se mantiene durante uno o más
años. Descartar un montón mostrando su fragilidad.
Número de registro de lote y fecha de recepción para mantener un registro de tiempo en
el laboratorio. Confirmar la esterilidad por ausencia de crecimiento en un filtro de
membrana se coloca sobre una toalla saturada con el caldo de triptona extracto de la
glucosa (o su equivalente no selectivo caldo o agar) e incubadas a 35 ± 0,5 ° C durante
24 h, o mediante la ejecución de un control de esterilidad para cada prueba de análisis
de ejecución.
Después de la incubación de la muestra, las colonias deben estar bien desarrollados con
el color y la forma apropiados según lo definido por el procedimiento de prueba. La
tinta de las líneas de división no debe canalizar el crecimiento a lo largo de la línea de
tinta, ni restringir el desarrollo de la colonia. Las colonias deben ser distribuidos
uniformemente a través de la superficie de la membrana. Rechazar mucho membrana si
estos criterios no se cumplen y, informar al fabricante.
j. Los medios de cultivo: Debido a los métodos de cultivo dependen de los medios de
comunicación debidamente preparados, utilizamos los mejores materiales disponibles y
técnicas consistentes en la preparación de los medios de comunicación, almacenamiento
y aplicación, y preparar el medio correcto para la aplicación deseada. Para el control de
calidad, el uso de medios preparados comercialmente disponibles, pero cada vez que
tenga en cuenta que estos medios pueden variar en calidad entre los fabricantes e
incluso entre lotes del mismo fabricante. Por esta razón, una prueba de uso se
recomienda para confirmar que el nuevo lote de medios de comunicación es equivalente
a los medios de comunicación más. También es la responsabilidad del laboratorio para
asegurar que los medios de comunicación cumplen con los requisitos microbiológicos
de promoción del crecimiento mediante la ejecución de la cultura, tanto controles
positivos y negativos que tiene una densidad estimada en tanto el lote de los medios
antiguos y los nuevos medios de comunicación mucho. El mantenimiento de cualquier
MSDS.
Para los medios de comunicación de las cantidades que no duran más de un año,
preferiblemente no más de 6 meses después de la apertura. Para los medios de
comunicación preparados comercialmente en cantidades tales que es utilizado por la
fecha de caducidad del fabricante. Utilice los medios de comunicación en una primera
en entrar, primero en salir. Cuando los medios prácticos, el orden en pequeñas
cantidades, por ejemplo, de 0,25 libras o 125 g, en lugar de botellas de 1 libra o 500 g,
para mantener la oferta sellada el mayor tiempo posible. Tipo de registro, la cantidad y
la aparición de los medios de comunicación recibidas, número de lote, fecha de
vencimiento, y las fechas de recepción y apertura de en un registro o archivo de
computadora, también la fecha de vencimiento y lugar de la fecha de apertura en el
recipiente. Verificar el inventario trimestral de reordenamiento.
Guarde todos los medios de comunicación en condiciones controladas para asegurar la
calidad hasta la fecha de vencimiento. Almacene el material deshidratado en un envase
herméticamente cerrado en un lugar fresco (15 a 25 ° C), seco, controlado por la
temperatura ambiente o secador de la luz solar directa. Deseche los medios de
comunicación que la torta de color o muestran otros signos de deterioro. Deseche los
medios de comunicación utilizados por la fecha de caducidad del fabricante. Un límite
de tiempo conservador para botellas sin abrir es de 2 años a temperatura ambiente. El
uso de los medios de comunicación ha caducado, no se recomienda.
Comparar la recuperación del crecimiento de los lotes que acaba de adquirir los medios
de comunicación en contra de un montón demostrado, a partir de cultivos de referencia,
preferentemente, o los últimos aislamientos en cultivo puro, o muestras naturales [véase
¶ f2) arriba], porque muchos-a-lot variabilidad puede ocurrir.
Use los frascos abiertos de los medios de comunicación dentro de 6 meses. Medios
deshidratados son higroscópicos, evitar el exceso de humedad. Botellas de cerca tan
firmemente como sea posible, inmediatamente después de su uso. Si apelmazamiento o
decoloración de los medios de comunicación ocurre, deseche los medios de
comunicación. Guarde los frascos abiertos en el desecador si está disponible.
1) Preparación de los medios de comunicación-Preparar los medios de comunicación en
recipientes limpios, que son al menos el doble del volumen del medio de preparación.
Prepare los medios de comunicación utilizando el reactivo de calidad del agua. Medir
los volúmenes de agua y los medios de comunicación con los egresados o pipetas
conforme a los estándares del NIST y APHA, respectivamente. No utilizar pipetas de
soplado. Use TD (para entregar) pipetas. Revuelva los medios de comunicación, en
especial agar, mientras se calienta. Evitar que se queme o hervir, mediante el uso de un
baño de agua hirviendo para lotes pequeños de los medios de comunicación y mediante
la continua atención a mayores volúmenes se calienta en una placa caliente o quemador
de gas. Utilizar preferentemente caliente de placas magnéticas combinaciones agitador.
Etiqueta y los medios de comunicación la fecha de preparación.
Verificar y registrar el pH de una parte de cada medio después de la esterilización. Este
es el pH real necesaria para un crecimiento adecuado. Ajuste de pH rara vez será
necesario cuando los medios de comunicación disponibles en el mercado se utilizan. Si
es necesario, realizar ajustes menores en el pH se especifica en la formulación con filtro
esterilizado NaOH 1N o HCl 1JV soluciones. Si la diferencia de pH es mayor a 0,5
unidades, descarte el lote y revisar las instrucciones de preparación y el pH del agua de
grado reactivo para resolver el problema. Si el medio se conoce como requiere el ajuste
del pH, ajustar el pH adecuado antes de la esterilización y el pH final de registro.
Valores incorrectos de pH puede ser debido al agua de calidad reactivo, el deterioro del
medio, o una preparación inadecuada. Revise las instrucciones para la preparación y
comprobar el pH del agua. Si el pH del agua no es satisfactoria, preparar un nuevo lote
de medio uso de agua de una fuente nueva (véase ¶ s 4d y e). Si el agua es medio
satisfactorio, remake y comprobar el pH, si el pH es de nuevo incorrecto, preparar el
medio con un lote diferente o fuente. Ciertos medios de aislamiento específico
elaborado con ácidos orgánicos o grasos se muestran cambios marcados en la
esterilización de pH siguientes.
Actividades de preparación de documentos, como el nombre del medio, el volumen
producido, el formato, el pH final, la fecha de preparación, y el nombre del preparador.
Registro de los problemas de pH en el libro de registro de los medios de comunicación e
informará al fabricante si el medio está indicado como la fuente de error. Examinar los
medios de comunicación preparado para un color raro, oscuro, o la precipitación, y las
observaciones de registro. Considerar las variaciones del tiempo de esterilización y la
temperatura como posibles causas de problemas. Si cualquiera de los anteriores se
produce, se elimina el medio.
2) La esterilización a esterilizar los medios de comunicación a 121 ° C como máximo
para el tiempo mínimo indicado. Siga las instrucciones del fabricante para la
esterilización de los medios de comunicación específicos. El tiempo de exposición
requerido varía con la forma y tipo de material, tipo de medio, la presencia de hidratos
de carbono, y el volumen. Mesa 9020: IV da las pautas para los elementos típicos. No
exponga los medios de comunicación que contienen hidratos de carbono a las elevadas
temperaturas de más de 45 min. Tiempo de exposición se define como el período
comprendido entre la exposición inicial al calor de su eliminación del autoclave. El
sobrecalentamiento de los medios de comunicación puede resultar en la degradación de
nutrientes. Mantener registros de impresión.
Retire el medio de autoclave esteriliza tan pronto como la cámara de presión llegue a
cero o, si es un modelo totalmente automático se utiliza, tan pronto como se abre la
puerta. Tenga mucho cuidado para evitar una ebullición más debido a los líquidos
sobrecalentados. No los medios de comunicación reautoclave.
Esterilizar soluciones sensibles al calor o los medios de comunicación por filtración a
través de un filtro de 0,2 JNM de poro de diámetro en una filtración estéril y aparatos de
recepción. Filtro y vierta medio en una campana de flujo laminar o flujo laminar del
gabinete de seguridad si está disponible. Esterilizar material de vidrio (pi-mascotas,
cajas de Petri, frascos de muestra) en un autoclave o en un horno de aire caliente de
esterilización (170 ± 10 ° C durante un mínimo de 2 h). Esterilizar el equipo,
suministros y otros materiales sólidos o secos que son sensibles al calor, al exponer al
óxido de etileno en un esterilizador de gas. Use tiras de esporas disponibles en el
mercado o suspensiones para comprobar el calor seco y la esterilización por óxido de
etileno.
3) El uso de agares y caldos-Temper agar fundido en un baño de agua a <50 ° C,
preferentemente de 44 a 46 ° C, hasta su uso, pero no por más de 3 h. Para monitorear la
temperatura del agar, exponer a una botella de agua u otro medio a la misma calefacción
y refrigeración condiciones que el agar. Inserte el termómetro en la botella de control
para determinar cuando la temperatura es adecuada para su uso en placas de colada.
Añadir soluciones sensibles al calor, por ejemplo, los antibióticos, al agar templado.
Preparación de los medios de comunicación por lo menos 2 días antes de las pruebas, se
recomienda que haya tiempo suficiente para la esterilidad y las pruebas de control de la
cultura positiva y negativa a realizar y leer. Si un medio de agar no se vierte, pero se
deja solidificar a su uso posterior, refundir los medios de agar en agua hirviendo, el
vapor que fluye, o en el microondas de baja potencia, el uso, y luego descarte el resto.
Agar se puede fundir una sola vez.
El volumen dispensado va a cambiar en relación con el tamaño de la placa de Petri y su
uso previsto. Invertir las placas tan pronto como medio de vertido se ha solidificado.
Manejar tubos de medios de fermentación estériles con cuidado para evitar la oclusión
de aire en Durham (interior) de los tubos, lo que produce falsos resultados positivos.
Examinar los tubos recién preparado para determinar que las burbujas de gas están
ausentes en los tubos de Durham.
4) El almacenamiento de los medios de comunicación-Preparar los medios de
comunicación en las cantidades que se utilizarán en la celebración de los plazos fijados
en la tabla 9020: V. Un nuevo medio es necesario para asegurar el aislamiento adecuado
de los microorganismos objetivo, especialmente para las bacterias estresadas o heridos a
través del proceso de desinfección.
Para preparado y listo para usar los medios de comunicación con fecha de vencimiento
mayor que el observado en la tabla, tiene la evidencia de suministro del fabricante de la
calidad de los medios de comunicación para ese período de tiempo prolongado de un
fabricante. Comprobar la facilidad de uso semanal de las pruebas de recuperación con
densidades conocidas de los controles de la cultura que también cumplen con los
requisitos de control de calidad control.
Control de contenido de humedad es importante porque la recuperación y la selectividad
puede ser modificada con un almacenamiento prolongado. Cuando los medios se
utilizan con fines de investigación, establecerá los medios de comunicación las fechas
de vencimiento y documentar los resultados. Proteger preparado en el laboratorio y la
compra de medios preparados que contienen los tintes de la luz, si se producen cambios
de color, deseche los medios de comunicación. Refrigere vertido placas de agar no se
utiliza en el día de la preparación. Para prevenir la deshidratación, el sello placas de
agar en bolsas de plástico u otro recipiente cerrado, si se llevará a cabo más de 2 d.
Placas tienda invertida con el fin de evitar la condensación de caer en el medio. En los
casos donde el condensado se ha formado, considere colocar placas brevemente en un
35-37 ° C incubadora. Para los medios de comunicación en tubos de ensayo apretar las
tapas antes de su almacenamiento. Pesar las placas o la marca de nivel de líquido en
varios tubos (10% de cada lote) después de la esterilización y el monitor de la pérdida
de líquido por peso o volumen almacenado por más de 2 semanas. Si la pérdida es del
10% o más, desechar el lote. Deseche todos los platos de petri con medios sólidos que
han sido almacenadas por más de 2 semanas; desecharlos antes si se seca, por ejemplo,
arrugada, agrietada, o picados.
Si los medios de comunicación son refrigerados, llevar a temperatura ambiente antes de
su uso y rechazar el lote si el crecimiento o falsos positivos están presentes. Preparados
caldos y agares estériles disponibles en el mercado puede ofrecer ventajas cuando los
análisis se realizan de forma intermitente, cuando el personal no está disponible para el
trabajo de preparación, o cuando el coste se puede equilibrar con otros factores de
operación del laboratorio. Comprobar el funcionamiento de estos medios de
comunicación tal como se describe en el ¶ s 5) a 7) a continuación.
5) El uso de pruebas Asunto tanto preparado en el laboratorio y la compra de medios
para la prueba de uso. Para el procedimiento, véase ¶ f2) anterior.
6) El control de calidad del preparado en el laboratorio de medios-Mantener en un libro
encuadernado un registro completo de cada lote de medio preparado en el laboratorio
con la fecha y el nombre del preparador, el nombre y número de lote del medio, la
cantidad de medio peso, el volumen de medio preparado, tiempo de esterilización y la
temperatura, ajuste de pH es necesario, pH final, y los preparativos de los componentes
lábiles. Comparar la recuperación cuantitativa de los nuevos lotes con los anteriormente
aceptables [¶ 5) anterior], con el microorganismo de interés. Incluir el control de
esterilidad y control de medios de control positivo y negativo de cultivo para determinar
la especificidad de todos los medios de comunicación como se describe a continuación.
Los controles de la cultura puede ser utilizado para detectar la promoción del
crecimiento y la selectividad media, y para controlar la técnica de los analistas.
Una buena práctica de laboratorio es desafiar a los medios de comunicación
periódicamente preparado con un número bajo de un microorganismo apropiado. El
crecimiento se vería afectada por los medios de comunicación de calidad y preparación
de los medios de comunicación, la esterilización, el tiempo de almacenamiento, y las
condiciones de almacenamiento.
7) El control de calidad de los medios de comunicación comprados preparado a la
expedición de productos listos para usar los medios de comunicación no debería
invalidar cualquiera de los medios de comunicación la celebración de los tiempos o las
condiciones descritas anteriormente. El fabricante debe proveer información de
validación si las condiciones de envío son de otra manera. Las fechas de registro de
recepción y de caducidad, número de lote, y luego medir y medianas registro.
Almacenar las instrucciones del fabricante y de descarte por fecha de vencimiento.
Comparación de la recuperación cuantitativa, como se indica en el ¶ 5) anterior, se
recomienda. Prueba cada nuevo lote de esterilidad y con cheques cultura control
positivo y negativo. Para comprar preparados los medios de comunicación que tienen
una mayor vida útil que las preparadas en el laboratorio, realizar estas pruebas con más
frecuencia.
6. Procedimientos Operativos Estándar (POE) 29 a 31
SOP genéricos y específicos son la columna vertebral de funcionamiento de un
laboratorio de análisis y están diseñados para prevenir las desviaciones derivadas de una
mala interpretación de un proceso o un método. Cada SOP específicos describe en una
manera paso a paso los detalles de una tarea o procedimiento que se realiza en forma
rutinaria, adaptada a los equipos propios del laboratorio, instrumentación y tipos de
muestras. Estas operaciones de laboratorio incluyen la preparación de reactivos,
agua de grado reactivo, normas, medios de cultivo, el uso apropiado de los saldos, las
prácticas de esterilización, procedimientos de lavado y eliminación de material
contaminado, así como los métodos de muestreo, análisis de muestras, la cadena de
custodia, mantenimiento de registros, y procedimientos para el control de calidad.
Simple cita de un método publicado analítico no es un POE, a pesar de que la
información se pueden consolidar en SOP propios del laboratorio.
SOP son únicas en el laboratorio y son escritas por la persona que está haciendo el
trabajo y firmado, aprobado por el supervisor, con la fecha de vigencia indicada. Siga el
SOP como está escrito y mantenerlos actualizados a través de revisiones de rutina y
accesible a todo el personal necesario. Cuando los cambios son necesarios, los
documentos y tienen el SOP fue recontratado. Mantener SOP obsoletos en los archivos
de una posible referencia futura. El uso constante de los PNT ayuda a asegurar que las
operaciones de uniforme. También proporcionan una herramienta de formación sólida y
un medio para determinar la competencia al realizar una evaluación.
7. Muestreo
El laboratorio en general, no está involucrado en la toma de muestras reales, pero el
personal necesita estar bien informado sobre los diferentes aspectos de la recogida de
muestras process.30
a. Planificación: Los microbiólogos deben participar en la planificación de los
programas de vigilancia que se incluirá un análisis microbiano. Ellos pueden
proporcionar una valiosa experiencia en la selección de los sitios de muestreo, muestreo
de profundidad, número de muestras y los análisis necesarios, la carga de trabajo, y los
suministros. De las aguas naturales, el conocimiento de las densidades microbianas
probable, y el impacto de los patrones de la temporada, el clima, las mareas y el viento,
las fuentes de contaminación conocidas, y otras variables, son necesarios para formular
el plan de muestreo más eficaz. Además, el microbiólogo puede indicar cuando
muestras idénticas serán necesarios, por ejemplo, cuando una nueva fuente de agua está
poniendo a prueba o una muestra se está recogiendo de un área diferente de la misma
localidad. De vigilar el cumplimiento, el plan de muestreo debe ser aprobado por el
Estado.
b. Métodos: Los planes de muestreo debe ser específico para cada sitio de muestreo y
sobre la base de diseños apropiados de muestreo estadístico. Orientación de muestreo
antes sólo puede ser de carácter general, la dirección de ING los factores que deben ser
considerados para cada sitio. SOP muestreo describir el equipo de muestreo, las
técnicas, la frecuencia y tiempos y condiciones, las reglas de seguridad, etc, que serán
utilizados en diferentes condiciones para diferentes sitios para garantizar la integridad
de la muestra y su representatividad. A partir de la información de estos planes de
muestreo SOP puede ser elaborado.
c. Aceptación de la muestra: El laboratorio debe determinar si la integridad de la
muestra, la celebración de las condiciones y el tiempo, y la documentación adjunta son
aceptables para el uso previsto de los datos resultantes.
8. Métodos Analíticos
a. Selección del método: los medios de comunicación, la temperatura, el tiempo a la
temperatura de incubación, y pequeñas variaciones en las técnicas son factores que
deben aplicarse de manera coherente para la recuperación microbiana apropiada para la
determinación cualitativa y cuantitativa. Para evitar cambios significativos en los
resultados, los métodos microbiológicos deben ser normalizados, de manera que
resultan de datos uniforme de varios laboratorios. Seleccionar los métodos analíticos
adecuados para el tipo de muestra de los métodos estándar u otras fuentes de
estandarizado métodos de
métodos y asegurar que los métodos han sido debidamente validada en un estudio de
varios laboratorios con los tipos de muestras de interés. El laboratorio debe validar
cualquier nuevo método o el método estándar para ser utilizado en el laboratorio y
cualquier método que se utiliza para una matriz no especifica este método.
b. Los objetivos de los datos: Examinar los métodos disponibles y determinar las
mejores que producen los datos de satisfacción de las necesidades del programa para la
precisión, el sesgo, la especificidad, la selectividad, límite de detección, y la eficiencia
de recuperación en las condiciones reales de ensayo. Los métodos que son rápidos,
baratos y menos mano de obra-son deseables, pero no si las medidas de verificación
están mucho tiempo o si los datos obtenidos no se reunirá con el programa o las
necesidades del cliente.
c. Control de calidad interno: por escrito los métodos analíticos de control de calidad
necesario contener los controles para asegurar la calidad de los datos, tales como el uso
de cultivos de control positivos y negativos, en blanco método de esterilidad, se replican
los análisis (de precisión), y cultivos de bacterias que tienen un nivel de densidad
conocida por los métodos cuantitativos.
d. SOP método: Como parte de la serie de SOP, proporcionar a cada analista con una
copia de los procedimientos analíticos escritos en forma gradual tal y como se van a
realizar y específico para el tipo de muestra, el equipo y los instrumentos utilizados en
el laboratorio.
9. Procedimientos analíticos de control de calidad establecidos para
Methods6-8, 18,32
a. Procedimientos generales de control de calidad:
1) Analista colonia contar la variabilidad de rutina para la evaluación desempeño, repita
cuenta con una o más muestras positivas por lo menos los resultados mensuales,
registrar y comparar los recuentos con las de otros analistas de pruebas de las mismas
muestras. Cuenta para replicar el mismo analista, deben ponerse de acuerdo dentro del
5% (dentro de repetibilidad analista de contar) y las relaciones entre los analistas deben
ponerse de acuerdo dentro del 10% (entre los analistas de la reproducibilidad de contar).
Si no están de acuerdo, iniciar investigaciones y cualquier acción correctiva necesaria.
Ver 9020B.13b de un cálculo estadístico de la precisión de los datos.
2) control positivo y negativo culturas-Use las culturas de referencia certificados. Para
cada lote de medio de recibido, cada lote de laboratorio preparado de medio, y cada lote
de medio preparado comprado, verificar la respuesta adecuada a las pruebas con
conocidos cultivos de control positivos y negativos para el organismo (s) bajo prueba.
Registrar los resultados. Obtener cultivos de referencia certificados de nivel nacional o
internacional reconocido o fuentes de referencia de las culturas impregnadas en discos o
cintas de establecer fuentes comerciales. De la cultura de referencia, la subcultura de
desarrollar una o más de trabajo principal stocks.33 minimizar las transferencias
posteriores, es decir, la transferencia a un nuevo medio para promover el crecimiento,
para asegurar que los cultivos de mantener la identidad fenotípica y genotípica y para
reducir la contaminación potencial. Comprobar periódicamente para asegurar la
viabilidad y el rendimiento. Para cada lote de medio, comprobar los procedimientos de
análisis de las pruebas con conocidos cultivos de control positivos y negativos para el
organismo (s) bajo prueba. Registrar los resultados. Ver Tabla 9020: VI ejemplos de
cultivos de ensayo. De un laboratorio de tratamiento de aguas residuales sin las
instalaciones para mantener un cultivo puro, el uso de un solo uso las tiras de la cultura
o someterse a otro laboratorio para su análisis.
3) Duplicar analyses34 ,35-cuantitativa de precisión de los resultados analíticos cuando
se cuentan las colonias de la placa se evalúa a través de análisis repetidos. Realizar
análisis duplicado por lo menos una vez al mes o más frecuencia como sea necesario,
por ejemplo, el 10% de las muestras cuando sea requerido por el método de análisis o
los reglamentos, una muestra por cada ejecución de prueba, o una muestra por semana
por un laboratorio que lleva a cabo a menos de 10 pruebas / semana. Una prueba de
funcionamiento se define como una serie ininterrumpida de análisis. Evaluar y registrar
los resultados. Un volumen de muestra adecuado es esencial. Balance de la frecuencia
de análisis repetidos contra el tiempo, esfuerzo y los gastos necesarios. Cuando el
laboratorio o el analista es el primer inicio de un método o de un método o una matriz
en la que una considerable variabilidad en los resultados que se espera, un mayor
esfuerzo tendrá que ser invertido en la realización de análisis repetidos. Análisis
repetidos de muestras ambientales puede resultar en cargos muy diversos y pueden ser
considerados sólo estimados.
4) La esterilidad comprueba los ensayos de esterilidad los medios de comunicación
antes del primer uso. Incubar un mínimo por lote o por un porcentaje fijo, por ejemplo,
de 1 a 4%, de laboratorio preparados y listos para su uso medio, el caldo o agar, a una
temperatura adecuada para la cantidad de tiempo que la prueba se llevaría a cabo, por
ejemplo, , 48 h para los coliformes, y observar para el crecimiento. Para las pruebas de
la enzima sustrato de tolerancia, de la esterilidad mediante la adición de los medios de
comunicación de paquetes de 100 ml de agua desionizada estéril e incubando a 35 ° C
durante 18 a 24 h. Ciertos granulado listo para usar enzima-sustrato medios de
comunicación no pueden ser estériles, pero sólo es libre de coliformes, el uso de caldo
no selectivo puede resultar en el crecimiento y la turbiedad, pero no debe producir una
reacción positiva.
Compruebe cada nuevo lote (o lotes, si comercialmente preparados) de agua tamponada
de esterilidad antes de usarlo por primera vez por la adición de 50 ml de agua a 50 ml de
un caldo de doble potencia (por ejemplo, de soja tríptico, de tripticasa de soja o caldo de
triptosa). Por otra parte, pasar asépticamente 100 ml o más de agua de dilución a través
de un filtro de membrana y el filtro de lugar en medio no selectivo. Incubar a 35 ± 0,5 °
C durante 24 horas y observar para el crecimiento.
Registrar los resultados. Si la contaminación se indica, deseche medio, anular todos los
datos asociados con ese lote, y compruebe que la fuente de contaminación. Solicitud de
nuevo muestreo inmediato.
Para las pruebas de filtro de membrana, controlar la esterilidad de todo el proceso
mediante el uso de reactivos estériles o como agua de dilución de la muestra al inicio y
al final de cada serie de filtración de muestras y de pruebas para el crecimiento. Con una
interrupción de la tramitación de más de 30 minutos utiliza nuevos embudos
esterilizados y repetir la prueba de esterilidad. Registrar los resultados. Si la
contaminación se indica, la nulidad de los datos asociados a ese lote y buscar la fuente.
Solicitud de nuevo muestreo inmediato y volver a analizar.
Para múltiples tubos y los procedimientos de presencia-ausencia, comprobar la
esterilidad de los medios preparados y agua de dilución como se describe anteriormente.
Si la contaminación se indica, determinar la causa y rechazar los datos analíticos de las
muestras analizadas con estos materiales. Solicitud de nuevo muestreo inmediato y
volver a analizar.
Para verter los procedimientos de la placa de comprobar la esterilidad mediante el
vertido de al menos una placa inoculado por lote o terreno de los medios de
comunicación y registrar los resultados. Si la contaminación se indica, determinar la
causa. Documento tanto del problema y las acciones correctivas y remuestreo solicitud.
Los laboratorios interesados en la identificación de contaminantes puede utilizar
cualquiera de los sistemas estandarizados de pruebas fenotípicas o genotípicas
procedimientos.
5) La precisión de methods33 cuantitativa, de 34 Calcular la precisión de los análisis
repetidos para cada tipo de muestra examinada, por ejemplo, agua potable, agua a
temperatura ambiente, o aguas residuales, de acuerdo con el siguiente procedimiento y
registrar los resultados:
Realizar análisis duplicado en los primeros 15 muestras positivas de cada tipo de matriz,
con cada juego de duplicados analizados por un solo analista. Si hay más de un analista,
incluyen todos los analistas regularmente se ejecutan las pruebas, con cada analista
realiza un número aproximadamente igual de pruebas. Registro duplicado análisis como
Z) 1 y D2. Calcular el logaritmo de cada resultado. Si cualquiera de un conjunto de
resultados duplicados es <1, añadir un tanto a los valores antes de calcular los
logaritmos. Calcular el rango (R) para cada par de duplicados transformado como la
media (R) de estos rangos. Ver cálculo de la muestra en la Tabla 9020: VII.
A partir de entonces, analizar el 10% de las muestras de rutina en ejecutar un duplicado
o por prueba. Transformar los duplicados y calcular su área de distribución que el
anterior. Si el rango es mayor que 3.27R, no es superior al 99% de probabilidad de que
la variabilidad de laboratorio es excesivo, en cuyo caso, deseche todos los resultados
analíticos desde la última verificación de precisión (véase la Tabla 9020: VIII).
Identificar y resolver el problema de análisis antes de realizar nuevos análisis.
Actualizar periódicamente repetir los procedimientos con los conjuntos más reciente de
15 resultados duplicados.
10. Verificación
La verificación es un proceso general que se utiliza para determinar si el método de
análisis microbiológicos funciona como se esperaba para proporcionar datos fiables. Si
el laboratorio encuentra un bajo porcentaje de verificación con un suministro de agua
determinada o de la matriz, otro método de prueba debe ser elegido. En su mayor parte,
los procedimientos de confirmación / verificación para el agua potable difieren de los de
otras aguas debido a los requisitos reglamentarios. El siguiente es un breve resumen,
más información se puede encontrar en los debates pertinentes de microorganismos
específicos o de un grupo de microbios.
a. De tubos múltiples de fermentación (MTF) métodos:
1) de coliformes totales procedimiento (9221B)
a) Llevar agua potable a través de pruebas de la fase confirmado solamente. El ensayo
se realiza no es necesario.
Para efectos de control de calidad, si normalmente no hay resultados positivos dentro de
un trimestre, analizar por lo menos una muestra positiva fuente de agua para confirmar
que los medios y procedimientos de laboratorio y equipo de producción de respuestas
apropiadas. Para las muestras con una historia de fuerte crecimiento sin gas en la
presunción de la fase tubos, llevar los tubos a través de la fase confirmado para
comprobar si hay falsos
las respuestas negativas de bacterias coliformes. Verifique todos los aspectos positivos
de coliformes (fecales) coliformes o E. coli.
b) Otros tipos de agua-La verificación puede lograrse mediante la realización de la fase
terminó con una frecuencia establecida por el laboratorio, como el 10% de muestras
positivas, o una muestra por cada ejecución de prueba, o un porcentaje determinado
dependiendo de la carga normal de trabajo de laboratorio. Para los grandes laboratorios
el análisis de un número significativo de muestras diarias, el 10% de muestras positivas
puede resultar en una carga innecesaria y un porcentaje menor puede ser utilizado.
2) estreptococos fecales procedimiento-La verificación puede ser realizado como se
indica en 9230C.5 a una frecuencia establecida por el laboratorio. El crecimiento de la
catalasa-negativos, cocos gram-positivos que aparecen como colonias de color marrón-
negro con halos de color marrón en agar bilis esculina a 35 ° C y en el cerebro-corazón
caldo de infusión a 45 ° C verifica los organismos como estreptococos fecales. El
crecimiento también en el 6,5% y el caldo de NaCl en el cerebro-corazón caldo de
infusión a 10 ° C indica que los estreptococos son miembros del grupo de Enterococcus.
b. Filtro de membrana métodos:
1) de coliformes totales procedimientos
a) agua potable-Swab toda la membrana o recoger cinco típicos y atípicos cinco
(nonsheen) colonias de muestras positivas en M-Endo LES-o un medio de agar Endo y
verificar que en 9222B.5f. También verifique los aspectos positivos de coliformes
fecales. Si no hay muestras positivas, prueba de por lo menos un conocido de agua
positiva fuente trimestrales de la muestra.
b) Otros tipos de agua-Verify positivos mensuales por recoger por lo menos 10 colonias
típicas y atípicas de una muestra de agua positiva como en 9222B.5f. Ajustar cuentas
basada en la verificación por ciento.
c) Para determinar los falsos negativos, elegir representante colonias atípicas de
diferentes tipos morfológicos y verificar que en 9222B.5f.
2) termotolerantes (fecales) coliformes procedimiento-Verify positivos mensuales por
recoger por lo menos 10 colonias de color azul a partir de una muestra positiva con
lauril triptosa caldo y el caldo de la CE como en 9221E.1b. Ajustar cuentas basada en la
verificación por ciento. Para determinar los falsos negativos, elegir representante
colonias atípicas de diferentes tipos morfológicos y comprobar como en la fase
presuntiva, 9221B.
3) Escherichia coli procedimiento
a) Agua potable-La verificación no es requerida.
b) Otros tipos de agua-Verify una muestra positiva mensual por recolección de colonias
bien aisladas, teniendo cuidado de no recoger medio, que puede causar una respuesta
positiva falsa. Realice la prueba de citrato y la prueba de indol como se describe en el
9225D, u otros procedimientos de identificación equivalente o sistemas. Incubar indol
prueba a 44,5 º C. E. coli es indol-positivas y no dan el crecimiento en citrato. Ajustar
cuentas de acuerdo al porcentaje de la verificación.
c) Para determinar los falsos negativos, elegir representante colonias atípicas de
diferentes tipos morfológicos y comprobar como en b) anterior.
4) estreptococos fecales procedimiento-Pick para verificar mensualmente por lo menos
10 colonias aisladas rojo de m-Enterococcus agar infusión cerebro-corazón (BHI) los
medios de comunicación y proceder como se describe en 9230C. Ajustar cuentas de
acuerdo al porcentaje de la verificación.
5) los procedimientos de enterococos-Pick para verificar mensualmente al menos 10
bien aisladas de color rosa a las colonias rojas con precipitado de color negro o marrón
rojizo de agar EIA. Transferencia a los medios de comunicación BHI como se describe
en 9230C. Ajustar cuentas de acuerdo al porcentaje de la verificación.
c. Enzima define las pruebas de sustrato:
1) de coliformes totales método de ensayo 9223
a) Agua potable-La verificación no es requerida.
b) No Otros tipos-el agua de confirmación / verificación paso es necesario. Pruebas
enzima-sustrato utilizar un sustrato definido en el que se inhibe el crecimiento
bacteriano noncoliform. La siguiente es una breve descripción para aquellos que deseen
llevar a cabo pruebas de verificación.
Para el total de los análisis de coliformes aséptica de transferencia de material a partir
de un determinado porcentaje (por ejemplo, 5%) del ONPG o CPRG positivo pozos y
ONPG o CPRG negativo pozos a mendo o EMB Levine u otros medios adecuados.
Racha de aislamiento. Prueba para la fermentación de la lactosa (un número de
coliformes puede ser lento o fermentadores de la lactosa no pueden fermentar la lactosa
a todos) o de / 3-D Galac topyranosidase por o-nitrophenyl-/3-D galactopiranósido
(ONPG) y la prueba de la citocromo oxidasa indofenol (CO) o prueba de la
identificación del organismo. Ver 9225D para la descripción de probar o utilizar otros
procedimientos de identificación equivalente o sistemas.
2) Para E. coli, E. coli análisis de verificación, si así se desea, se puede lograr mediante
la transferencia de material de forma aséptica a partir de un determinado porcentaje (por
ejemplo, 5%) MUG-positivos y MUG negativo pozos de MacConkey o EMB Levine u
otros medios adecuados . Racha de aislamiento. Verificar la confirmación de la reacción
MUG con EC + MUG o NA + MUG los medios de comunicación o E. coli
identificación bioquímica como se describe en el procedimiento de identificación
9225D u otros equivalentes o sistema. Ajustar cuentas de acuerdo al porcentaje de la
verificación.
3) Los enterococos-Verify colonias mediante la selección de 10 colonias típicas
(positivos) y 10 colonias atípicas (negativo) una vez al mes o una típica y atípica una
colonia de 10% de muestras positivas, lo que sea greater.36
11. Validación de nuevas o no estándar Methods37-43
Todos los métodos estándar, desarrollados por el laboratorio métodos, y los métodos
estándar que se utiliza en condiciones de prueba diferentes, por ejemplo, la matriz, debe
ser validado por el laboratorio antes de la recolección de datos con estos métodos.
Validación consiste en establecer y demostrar que los criterios de desempeño de un
método o proceso de datos precisos y fiables para su uso previsto. El término
"validación" se ha aplicado históricamente en el campo de la química. La validación se
aplica ahora a la microbiología, utilizando los mismos términos utilizados en química.
La principal diferencia es que, cuando las variables discretas se utilizan, por ejemplo,
recuentos de placas, las estadísticas diferentes que se aplican son diferentes y las
distribuciones de probabilidad se utilizan.
Para el microbiólogo basado en la cultura, la validación se centra en la idoneidad del
método de prueba o proceso para detectar y / o cuantificar un microorganismo
específico o grupo de microorganismos que tienen las características establecidas en la
matriz de interés. Para los métodos de cultivo-independientes, como los inmunoensayos
y técnicas de genética molecular, la misma necesidad que existe para demostrar el
control del proceso y la confianza en la fiabilidad de la información. Se trata
esencialmente de una prueba de concepto.
Para los métodos estándar de cumplimiento de obtener la validación de datos del
fabricante y / o el organismo regulador. Antes de que un método que se adopte por el
laboratorio, realizar pruebas en paralelo con la norma o procedimiento de referencia
para determinar la comparabilidad de los criterios de desempeño establecidos para la
norma y su idoneidad para el uso. Obtener al menos 30 puntos de datos positivos
durante el año para permitir una determinación estadística de equivalencia con el
método establecido o estándar antes de la sustitución con el nuevo método de uso
rutinario. Esto puede ser llamado una validación secundaria o cruz.
Para los métodos de desarrollo, tales como los métodos de investigación, establecer la
confianza en el método de análisis o proceso mediante la realización de estudios de
validación intralaboratorio completa en un número estadísticamente significativo de
muestras para asegurar la fiabilidad antes de la determinación final de la usabilidad.
Llevar a cabo estudios entre laboratorios (también llamados estudios de colaboración)
para validar el método de mayor uso. La siguiente es una breve discusión sobre la
validación del método microbiana y los criterios de desempeño deseado de calidad para
ser comprobada. Revisión de las referencias citadas para obtener más información y
para los programas relacionados con la validación del método microbiana.
Para determinar el efecto de la matriz en la recuperación de añadir una concentración
conocida de una cuantía prevista ambiente a una muestra de campo recogidos en el
mismo sitio que la original. Uso comercial ‡ o preparado en el laboratorio las
suspensiones de los microorganismos objetivo.
a. Los métodos cualitativos de prueba: La validación de los métodos de la presencia o
ausencia (en comparación con el crecimiento sin crecimiento) implican el
establecimiento de las características de funcionamiento del método en la matriz de
elección tales como:
1) La precisión y la precisión (repetibilidad y reproducibilidad) - Para las pruebas
cualitativas, el número de repeticiones tendría que ser muy grande para llegar a una
evaluación estadística de la comparación. Por lo tanto, estos indicadores de calidad de
datos en general, no están determinadas.
2) La especificidad / selectividad de la capacidad del método de prueba o proceso de
selección de preferencia o de distinguir el objetivo de organis-mos de las especies no-
objetivo en la matriz de elección en condiciones normales de laboratorio de análisis de
muestras, es decir, la aptitud para su uso. Métodos cualitativos para el crecimiento del
organismo de que es el indicador. Se determina mediante la verificación de todas las
respuestas, por ejemplo, pruebas de identificación microbiana.
3) Límite de detección, la menor densidad de microorganismos que pueden
determinarse con arreglo a las condiciones establecidas. Determinar mediante el uso de
las diluciones de cultivos de referencia y la medición de la recuperación entre
repeticiones de cada dilución.
4) La robustez, la medida de qué tan bien un método de prueba se puede realizar en
condiciones cambiantes. Esta prueba se lleva a cabo por el promotor inicial del método
y se determina por cambio de variables como el tiempo de la celebración de la muestra
o las condiciones, la temperatura de incubación, el pH del medio, y el tiempo de
incubación.
5) la repetición-el grado de acuerdo entre análisis repetidos o mediciones realizadas en
las mismas condiciones, por ejemplo, laboratorio, técnico, y el equipo. Use un
microorganismo objetivo o la densidad microbiana del grupo de tal manera que al
menos el 75% es decir, será positivo, de crecimiento, de modo que un número suficiente
de respuestas pueden ser detected44, ya sea para una prueba cuantitativa o cualitativa.
Esto puede servir como una medida de la incertidumbre.
b. Los métodos cuantitativos de prueba: Validación de un método o proceso relacionado
con la determinación numérica, por ejemplo, número de ejemplares por unidad de
volumen, consiste en determinar las características del método de rendimiento como se
señaló anteriormente, además de lo siguiente:
1) La precisión, el grado de acuerdo, o la falta de incertidumbre, entre lo observado y el
valor real. Se calcula mediante el uso de las culturas conocidas de referencia en el rango
previsto de las densidades del medio ambiente y la comparación de los resultados del
método de prueba para la de la referencia o el método estándar. Generalmente se
expresa como el porcentaje de recuperación.
2) La precisión / repetición-el grado de acuerdo entre análisis repetidos o mediciones
realizadas en las mismas condiciones, por ejemplo, laboratorio, técnico, y el equipo.
Use un microorganismo objetivo o la densidad microbiana del grupo de tal manera que
al menos el 75% será positivo, de modo que un número suficiente de respuestas pueden
ser detected44, ya sea para una prueba cuantitativa o cualitativa. Esto puede servir como
una medida de la incertidumbre.
3) Precisión / reproducibilidad-el grado de variabilidad en el mismo método o proceso
se lleva a cabo en otras condiciones, por ejemplo, más de un analista según el método o
procedimiento en otra área o habitación en el laboratorio y / o el uso de diferentes
equipos. Esto sirve como otra medida de la incertidumbre.
4) Recuperación / sensibilidad, la capacidad de un método de prueba para reconocer o
detectar el microorganismo objeto o componente del mismo en la matriz de elección.
Determinar mediante el análisis de un número suficiente de muestras utilizando al
menos dos niveles añade la suspensión del microorganismo objetivo, o bien aumentando
o disminuyendo el volumen de la muestra o la dilución analizados, seguido por la
determinación de confianza estadística.
5) el límite de detección menor densidad microbiana que se puede determinar.
Determinar mediante el uso de las diluciones de cultivos de referencia y la medición de
la recuperación entre repeticiones de cada dilución.
6) contar Límite superior: el nivel en el que las mediciones cuantitativas a ser poco
fiables, por ejemplo, debido al hacinamiento en una placa de agar. Determinar que el
anterior.
7) Range-el intervalo entre los límites de detección superior e inferior determinado que
el anterior.
12. Documentación y Registros
a. Plan de control de calidad: Plan de control de calidad del laboratorio o el compromiso
de manual de calidad de gestión de documentos con una política de control de calidad y
establece los requisitos necesarios para apoyar los objetivos del programa.
El plan describe las políticas generales, organización, objetivos y las responsabilidades
funcionales para la consecución de los objetivos de calidad y especifica las actividades
de control de calidad necesario para lograr la representatividad de los datos, la
integridad, la comparabilidad y compatibilidad. Además, el plan de control de calidad
incluye el plan del laboratorio de implementación para asegurar la máxima coordinación
y la integración de las actividades de control de calidad dentro del programa general
(muestreo, análisis y procesamiento de datos) y cumple con las regulaciones federales,
estatales y locales y los requisitos de acreditación en su caso.
b. Los registros de muestreo: Un SOP escrito para los registros de los procedimientos de
manipulación de las muestras al laboratorio para la toma de muestras, la aceptación, el
traslado, almacenamiento, análisis y eliminación. El registro de la muestra es más fácil
mantenerse en un archivo de computadora o en una serie de formularios impresos que se
pide al usuario para proporcionar toda la información necesaria. Es especialmente
importante que este registro sea exacta y completa si hay alguna posibilidad de que el
litigio puede ocurrir. Estos sistemas de registro se denomina "cadena de custodia" y
puede ser requerido por algunos programas federales o estatales para garantizar la
integridad de las muestras. Debido a que los laboratorios no siempre sabemos si los
resultados analíticos se utilizarán en futuros litigios, algunos mantienen la cadena de
custodia en todas las muestras. Los detalles sobre la cadena de custodia se encuentran
disponibles en la Sección 1060B y otra parte.1 un sistema de laboratorio que identifica
las muestras en el laboratorio y que está ligado al número de muestras de campo se
asegurará de que las muestras no se pueden confundir.
c. Registros: Un sistema de registro aceptable proporciona la información necesaria en
la toma de muestras y conservación, métodos analíticos, los datos en bruto, los cálculos
a través de los resultados reportados, y un registro de personas responsables de la toma
de muestras, la aceptación de muestras y análisis. Elija un formato aceptable para el
laboratorio y el cliente (el usuario de datos). Utilice formularios preimpresos si está
disponible. Asegúrese de que todas las hojas de datos están firmados y fechados por el
analista y el supervisor. El formulario de registro es preferible un cuaderno y páginas
numeradas, con las entradas en tinta y una sola línea trazada a través de cualquier
cambio con la corrección, así como las iniciales del grabador de corrección entró junto a
él, o en un archivo de computadora, por ejemplo, , un e-notebook.
Mantener registros de los análisis microbiológicos durante al menos 5 años en un lugar
seguro. Fuera de las instalaciones de almacenamiento se recomienda como copia de
seguridad de todos los registros. Datos que se espera para formar parte de una acción
legal se debe mantener por un período de tiempo más largo. Informes actuales de
laboratorio pueden mantenerse, o los datos pueden ser transferidos a los resúmenes de
tabla, siempre que la información se incluye lo siguiente: fecha, lugar y hora del
muestreo, nombre del recolector de muestras, identificación de la muestra, fecha y hora
de recepción de la muestra, la condición y la temperatura de la muestra recibió, fechas
de inicio y finalización de análisis de muestras; persona (s) responsable de la realización
de análisis, métodos de análisis utilizados, los datos en bruto, y los resultados calculados
de análisis. Compruebe que cada resultado se ha introducido correctamente en la hoja de
banco y rubricado por el analista.
Cuando un sistema de gestión de información de laboratorio (LIMS) es usado, verifique
que el software de entrada y salida y cálculos aritméticos. Una copia de seguridad todos
los datos de laboratorio en el disco o el sistema en papel para satisfacer las necesidades
del cliente y de laboratorio para la gestión de datos y presentación de informes.
Verificar los datos en las hojas impresas. Siempre copias de seguridad de datos
electrónicos por cinta o disco protegido o duro copy.44 Si el sistema (hardware o
software) se cambia, la transferencia de datos antiguos al nuevo sistema para que siga
siendo recuperable dentro del período especificado de tiempo. Datos que se espera para
convertirse en parte de una acción legal debe ser mantenido durante un largo periodo de
tiempo, consulte con el asesor legal del laboratorio. Otras orientaciones available.45-47
13. Manejo de Datos
a. Distribución de las poblaciones bacterianas: En la mayoría de químicos anal-
metanálisis la distribución de los resultados de los análisis sigue una distribución
normal (gaussiana) la curva, que tiene una distribución simétrica de los valores de la
media (véase la Sección 1010B). Distribución microbiana no son necesariamente
simétricas y raramente se adaptan a una curva de distribución normal. Los recuentos
bacterianos a menudo se caracterizan por tener una distribución sesgada a causa de
muchos de los valores bajos y unos pocos de alta. Estos ticas carácter conducir a una
media aritmética que es considerablemente más alta que la media. La curva de
frecuencia de esta distribución tiene una cola larga derecha, tal como se muestra en la
Figura 9020:1, y se dice que muestra asimetría positiva. La variación natural al azar en
la distribución de los microorganismos dentro de una muestra puede ser única en la
muestra y la matriz, y no una función de laboratorio performance.48 Además, los
recuentos microbianos obtenidos representan unidades formadoras de colonias (UFC),
que puede ser el resultado de una célula o múltiplos de allí, de 49 años como resultado
de la variación en el número de recuento de colonias en placas replicar o diluciones
múltiples.
Aplicación de las técnicas estadísticas más comunes requiere el supuesto de simetría
tales como la distribución normal. Por lo tanto, generalmente es necesario convertir los
datos sesgados de manera que una distribución simétrica parecido a los resultados de la
distribución normal. Aproximadamente una distribución normal se puede obtener a
partir de los datos de un sesgo positivo por convertir números a sus logaritmos, como se
muestra en la Tabla 9.020: IX. La comparación de las tablas de frecuencias para los
datos originales (Tabla 9020: X) y sus logaritmos (Tabla 9020: XI) muestra que los
logaritmos aproximada la distribución simétrica.
b. Medidas de tendencia central de la distribución asimétrica: La mejor estimación de la
tendencia central de los datos log-normal es la media geométrica. El término "media" en
la media geométrica es engañosa. Lo que se está determinando es la estimación de
máxima verosimilitud, que se basa en el modo o la frecuencia máxima de la curva de
distribución. Probabilidad de observar los resultados de múltiples diluciones se expresa
por un múltiplo de Poisson distribution.50, de 51 años la curva generada aparece
sesgada hacia la derecha, la característica es similar a la de un log-normal curva de
distribución. Esto resulta del hecho de que el recuento de colonias de la dotación de la
log-normal resultado de la curva de múltiples curvas de distribución de Poisson para
numerosos organismos que no son de interés y hacer que la curva de distribución para
ser más sesgada. Cuando la máxima verosimilitud approach52, de 53 años se utiliza la
maxima de estos organismos están distribuidos bajo la curva debido a los diferentes
organismos responden de manera diferente a los nutrientes y los medios de
comunicación. Este proceso se ve afectado por la temperatura, el pH y el tiempo de
incubación. El proceso de análisis de los datos de la frecuencia máxima se asegura de
que el organismo correcto es seleccionado para el recuento de colonias.
Cuando las curvas de la MPN para 1, 2, 3 y 4 tubos positivos de 5 tubos totales
incubadas se examinan, la log-normal gráfico de probabilidad está cerca de ser lineal (lo
que indica normalidad aproximada), pero se inclina hacia arriba y podría indicar
posibles curtosis , una nitidez, provocada por la medición de la probabilidad acumulada
en los extremos inferior y superior de la curva de distribución. El error está en los
valores extremos de las colas de la distribución porque la medición es difícil en los
valores extremos de la curva log-normal de distribución.
El log-normal suposición de probabilidad se confirma cuando el registro de valores se
representa en función de recuento de colonias NMP (número probable máximo) en log-
normal - de papel acumulado gráfico de probabilidad.
El uso de la media geométrica, de 54 años calcula como la raíz enésima del producto de
todos los valores de los datos, se basa en la probabilidad de una distribución de
probabilidad. La estimación de probabilidad se basa tanto en frecuencia de
observaciones de n y el recuento de una muestra aleatoria de n observaciones.
Cuando la razón de verosimilitud se observa antes y después de la transformación
logarítmica de la variable, x, se puede demostrar que las razones son las same.55 Por
medio de la relación de verosimilitud, las propiedades del producto se convierten en
propiedades de la suma, que son fáciles para entender y manejar.
El enfoque difiere de la probabilidad de las medias aritméticas ordinarias en que se
consideran tanto la frecuencia como variable de recuento de colonias, y no sólo la media
aritmética de los recuentos de colonias.
La media geométrica es el logaritmo de la inversa del registro promedio de las
probabilidades de un parámetro que se mide. Esto es muy diferente de la media del
MPN y por lo general le dará un número más bajo posible de una operación aritmética
average.56 La media geométrica de las estimaciones de máxima verosimilitud es una
mejor estimación de la media aritmética de los organismos vivos.
En la derivación de la Likelihood56 máximo de una distribución de probabilidad de
Poisson, el registro de los productos de la MPN puede ser demostrado ser una función
del registro de la frecuencia. Por lo tanto, los promedios geométricos se justifican como
el método para obtener una estimación de máxima verosimilitud de determinaciones
múltiples MPN.
c. "Menor que" (<) valores: Siempre ha habido incertidumbre en cuanto a la forma
correcta de incluir "menor que" los valores de cálculo y evaluación de los datos
microbiológicos, porque esos valores no pueden ser tratadas estadísticamente sin
modificaciones. Modificaciones propuestas implican cambios en tales números a cero,
la elección de los valores a medio camino entre el cero y el "menor que" el valor, o la
asignación de los "menos" valor en sí mismo, es decir, el cambio de <1 los valores a 1,
1 / 2, o 0.57,58
Hay razones válidas para no incluir "menor que" los valores, modificados o no. Si la
base de datos es bastante grande, con sólo un pocos de esos valores, la influencia de
estos valores inciertos serán mínimos y no ofrece ningún beneficio. Si la base de datos
es pequeño o tiene un número relativamente grande de "menor que" los valores, la
inclusión de formas modificadas de esos valores puede ejercer una influencia indebida
sobre los resultados finales y podría resultar en un sesgo artificial negativo o positivo.
Incluyendo "menor que" los valores es particularmente inapropiado si los valores son
<100, <1000, o superior, porque los valores reales desconocidos podrían estar en
cualquier lugar de 0 a 99,0 y 999, etc Cuando estos valores se observó en primer lugar,
ajustar o ampliar volúmenes de ensayo. La única excepción a esta advertencia sería
pruebas reglamentarias con el cumplimiento de los límites definidos, como los valores
mL <1 / 100 reportados para sistemas de agua potable, cuando el volumen de 100 ml se
requiere.