a comparative study of the clinicopathological significance of e-cadherin and catenins (α, β, γ)...

5
ORIGINAL ARTICLE Vivian Chow á Anthony Po Wing Yuen King Yin Lam á George Sai Wah Tsao Wai Kuen Ho á William Ignace Wei A comparative study of the clinicopathological signi®cance of E-cadherin and catenins a; b; c) expression in the surgical management of oral tongue carcinoma Received: 14 February 2000 / Accepted: 6 June 2000 Abstract Purpose: E-cadherin and catenins are impor- tant epithelial adhesion molecules in normal epithelium. Loss of E-cadherin-catenin adhesion is an important step in the progression of many epithelial cancers. E- cadherin and catenins expression in carcinoma of the tongue were evaluated in relation to their clinicopatho- logical features and prognostic values. Method: Immu- nohistochemical staining was carried out with E- cadherin and a, b, c)-catenin monoclonal antibodies for 85 surgical specimens of oral tongue carcinoma, nine matched metastatic lymph nodes, and seven locally re- current tumours. Results: There was under-expression in 85% of E-cadherin, 94% of a-catenin, 89% of b-catenin, and 83% of c-catenin in the primary tumours. There was no correlation of E-cadherin/catenin expression with sex, age, cancer stage, and dierentiation. Nodal me- tastasis was found in 68% of patients with weak ex- pression of c-catenin compared with 9% with strong expression in primary tumours chi-square, P 0.02). E-cadherin was a signi®cant prognostic factor for sur- vival and recurrence; patients with weak E-cadherin expression had 53% 5-year survival compared with 85% with strong expression Wilcoxon, P 0.0159). Conclusions: Both E-cadherin and catenins were highly under-expressed in oral tongue carcinoma, metastatic lymph node, and recurrent tumour. c-catenin had pre- dictive value for nodal metastasis. E-cadherin was, however, a more important prognostic factor for re- currence and survival. Key words Oral á Tongue á Carcinoma á E-cadherin á Catenin Introduction E-cadherin and catenins are important epithelial adhesion molecules. E-cadherin protein is a 120-kDa transmembrane glycoprotein that is involved in calcium- dependent cellular adhesion. The extracellular domain of the E-cadherin of neighboring cells is in contact to keep the cells adhering together. Catenins are a family of proteins including the a- 102 kDa), b-88 kDa), and c-82 kDa) catenins. The cytoplasmic domain of E-cadherin binds directly to either b-catenin or c-catenin, whereas a-catenin links the E-cadherin-b, c)-catenin complex to the actin cyto- skeleton. The integrity of the adhesion function of E-cadherin also depends on an intact catenin system. Loss or reduction of E-cadherin-mediated adhesion is an important step in the development of invasion and metastasis in many epithelial carcinomas, including head and neck carcinomas Schipper et al. 1991; Bowlie et al. 1993; Mattijssen et al. 1993; Franchi et al. 1996; Takes et al. 1997; Andrews et al. 1997). Down-regulation of catenins expressions have been reported in many cancers Kadowaki et al. 1994; Shimazui et al. 1996; Jawhari et al. 1997; Richmond et al. 1997; Nakanishi et al. 1997; Zschiesche et al. 1997). The clinicopathological role of E-cadherin-catenins expression in oral tongue carcino- ma is, however, not well documented. The aim of the present study was to evaluate the expression of E- cadherin-catenin complex adhesion molecules in prima- ry oral tongue carcinoma, their matched metastatic lymph nodes, and recurrences. Patients and method The surgical specimens of patients who had primary surgical treatment of squamous cell carcinoma of oral tongue in Queen Mary Hospital between 1980 and 1996 were retrieved for the J Cancer Res Clin Oncol 2001) 127: 59±63 Ó Springer-Verlag 2001 V. Chow á A. P. W. Yuen &) á W. K. Ho á W. I. Wei Department of Surgery, The University of Hong Kong, Queen Mary Hospital, Pokfulam Road, Hong Kong, SAR China e-mail: [email protected] Fax: +852-2855-3464 K. Y. Lam Department of Pathology, The University of Hong Kong, Queen Mary Hospital, Hong Kong, SAR China G. S. W. Tsao Department of Anatomy, The University of Hong Kong, Queen Mary Hospital, Hong Kong, SAR China

Upload: vivian-chow

Post on 14-Jul-2016

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

�������� �����

������ ��� � ������ � ���� �������� ��� ��� � ������ ��� ��� ������� ���� �� � ������� ������ ���

� ��������� �� �� �� ��� ���������������� ����������� ��������� ��� ������� ����� �� ��������� � ��� � ��������������� �� ���� ���� � ��������

���� ���� �� �������� ���� ���������� � �� � ����

������� �������� !���"�� � � ���� # ��� $�%�!�� � �� �"�& �& ��"�# % $%&���&�# %�$�& �� �"�& �$'�%## %( !���"�� !���� ��"�# % # � $�%��� �#��� �"� ��%)��## % %( $� � �� �"�& �& �� ���#' !���"�� � � ���� # �*���## % ���� %$� %( �"��% )�� +��� ���&����� ��&�� % �% �"� � �& �%���"%!&%) ��& (������# � � ��%) %#� � ��&��#' ����� �$$�! %" #�%�"�$ ��& #�� ) +�# ���� �� %�� + �" !���"�� � � ,�- �- �.!���� $% %�&% �& � � �%� �# (%�/0 #��) ��& #��� $� # %( %��& �% )�� ���� %$�- �$���"�� $���#��� � &�$�" %��#- � � #��� &%��&&� ��!����� � ��$%��#' ������ �"��� +�# � ���!�*���## % /01 %( !���"�� - 2�1 %( �!���� - /21 %( �!���� -� � /31 %( �!���� �"� �� $��� ��$%��#' �"��� +�# % �%���&�� % %( !���"�� ����� �*���## % + �"#�*- �)�- �� ��� #��)�- � � � 4��� � �� % ' �%��& $�!��#��# # +�# (%� � �/1 %( ��� � �# + �" +��5 �*!���## % %( �!���� �%$����� + �" 21 + �" #��% )�*���## % �� $��� ��$%��# ,�" !#6����- � � �'��.'!���"�� +�# � # ) 7�� � ��%) %#� � (���%� (%� #��!� ��& � � ������� ��8 ��� � �# + �" +��5 !���"�� �*���## % "�� 031 0!���� #��� ��& �%$����� + �" /01+ �" #��% ) �*���## % ,9 &�%*% - � � �'��02.'������������ :%�" !���"�� � � ���� # +��� " )"&�� ���!�*���##�� %��& �% )�� ���� %$�- $���#��� �&�$�" %��- � � ������� � ��$%��' �!���� "�� ���!� �� �� ��&�� (%� %��& $���#��# #' !���"�� +�#-"%+����- � $%�� $�%��� � ��%) %#� � (���%� (%� ��!����� �� � � #��� ��&'

��� �� � ���& � �% )�� � ��� %$� � !���"�� ����

������ ����

!���"�� � � ���� # ��� $�%��� � �� �"�& �&��"�# % $%&���&�#' !���"�� ��%�� # � ���!5;���� #$�$��� � )&��%��%�� �"�� # �%&��� ��&� �$!���� �� � ��&&�&�� ��"�# % ' �"� �*�����&&�&�� �%$� %( �"� !���"�� %( � )"�%� ) ��&&# # �% ���� �%5��� �"� ��&&# ��"�� ) �%)��"��'

��� # ��� � (�$ &� %( ��%�� # �&�� ) �"��! ,��� 5;�.- �!,// 5;�.- � � �!,/� 5;�. ���� #' �"����%�&�#$ � �%$� %( !���"�� � �# � ����&� �%� �"�� �!���� %� �!���� - +"����# �!���� & 5# �"�!���"�� !,�- �.!���� �%$�&�* �% �"� ��� ���%!#5�&��% ' �"� ��)� �� %( �"� ��"�# % (� �� % %(!���"�� �&#% ���� �# % � ���� ���� #�#��$'

�%## %� ������ % %( !���"�� !$�� ���� ��"�# % #� $�%��� � #��� �"� ����&%�$� � %( ��# % � �$���#��# # $� � �� �"�& �& ���� %$�#- �&�� ) "���� � ��5 ���� %$�# ,<�" ���� �� �&' �22�8 :%+& � �� �&'�2238 =��� >##� �� �&' �2238 ��� �" �� �&' �22�8 ��5�#�� �&' �22?8 � ���+# �� �&' �22?.' ;%+ !��)�&�� % %(���� # �*���## % # "��� ��� ���%���� $� � �� ���#,@��%+�5 �� �&' �22�8 <" $�A� �� �&' �22�8 ��+"�� �� �&' �22?8 � �"$% � �� �&' �22?8 ��5� #" �� �&' �22?8B#�" �#�"� �� �&' �22?.' �"� �& �%���"%&%) ��& �%&� %(!���"�� !���� # �*���## % %��& �% )�� ���� %!$� #- "%+����- %� +�&& �%��$� ���' �"� � $ %( �"����#� � #���� +�# �% ���&���� �"� �*���## % %( !���"�� !���� �%$�&�* ��"�# % $%&���&�# �� $�!�� %��& �% )�� ���� %$�- �"� � $���"�� $���#��� �&�$�" %��#- � � ������� ��#'

������� ��� ������

�"� #��) ��& #��� $� # %( ��� � �# +"% "�� �� $��� #��) ��&�����$� � %( #6��$%�# ��&& ���� %$� %( %��& �% )�� C��� =��� D%#� ��& ���+�� �2/� � � �22� +��� ���� ���� (%� �"�

� � ��� ��# & � �%& ,����. ��?� 02E�3 � <�� )��!F��&�) ����

F' "%+ � �' G' 9' H�� ,�. � 9' @' D% � 9' �' 9� ;�����$� � %( <��)���- �"� I ���# �� %( D% ) @% )-C��� =��� D%#� ��&- G%5(�&�$ �%��- D% ) @% )- <�� " ��!$� &� �+��� J"5���'"5�'"5��*� K/0�!�/00!3���

@' H' ��$;�����$� � %( G��"%&%)�- �"� I ���# �� %( D% ) @% )-C��� =��� D%#� ��&- D% ) @% )- <�� " �

�' <' 9' �#�%;�����$� � %( � ��%$�- �"� I ���# �� %( D% ) @% )-C��� =��� D%#� ��&- D% ) @% )- <�� " �

$$� %" #�%�"�$ ��& #����' G�� � �# +"% "�� �� %� ��� %�"�����-���� %$� %( �% )�� ��#� %� L%%� %( $%��"- %� % !#6��$%�# ��&&���� %$� +��� %� �&���� �"� ���#� � #����' )"��!7�� ��!� � �# + �" �� $��� %��& �% )�� ���� %$� +��� � �&�#�� �" ##����' �$$� %" #�%�"�$ ��& #���� %( !���"�� � � ���� # +�#���� �� %�� (%� �"� /0 �% )�� ��$%��#- 2 $���"�� $���#��� � &�$�" %��#- � � ? $���"�� &%��&&� ������� � ��$%��#' �"��� +��� 0�$�&� � � 3� (�$�&� ��� � �#' �"� $�� � �)� +�# 0? ����# ,�� )���E/� ����#.' �"� I� ,�22?. ���"%&%) ��& #��)�# +��� �0 �� ,����- � ��- ���- � �3.- 3� �� ,�� ��- ? ��- ? ��.- �? �3 ,2 ��- 3��- 0 ��.- 2 �� ,� ��- � ��- � ��.- � � �&& ��� � �# +��� =�' �"���$%�� )���� #�%� ) #�#��$ %( :�� �# �� �&'- +" �" �&���# (��!����# %( 5���� A�� % - ��&��� �%&�$%��" #$- $ �%# #- ������ %( ��# % - � � &�$�"%�&�#$���� � 7&���� % �� �"� ��# �� (�% �%( �"� ��$%�� �%�&� %� �� �#�� ��& ��&� �" # ���" ��& #��� $� ,:�� �# �� �&'- �22�.' :�%���#M )��� ) ,:�%���# �2��- �2��. %( ��!$%�� � 4��� � �� % +�# �#�� �" # #����' �"� � 4��� � �� % %(�"�#� #6��$%�# ��&& ���� %$�# +�# �/ ,331. +�&&- 0� ,021.$%������- � � #��� ,/1. �%%�' �&& ��� � �# "�� �� $��� #��) ��&�����$� � � � 3� ��� � �# +��� �&#% ) �� �%#�!%����� �� ��� %!�"�����' �"� $ $�$ �%#�!%����� �� (%&&%+!�� %( ��� � �# �& ��+ �"%�� ��$%�� +�# �� $% �"# ,$�� � 00 $% �"#- $�* $�$�?3 $% �"#.'

�$$� %" #�%�"�$ ��& #�� ) +�# ���� �� %�� + �" �"� �� � !� %� �%$�&�* $$� %���%* ��#� ���" 6��' �"� #��� $� # +������ �� � �$$- ��+�*�� *�&� � (%� �0 $ - �"� ��"������� + �"��"� %&' �"� #& ��# +��� ������� + �" 31 "���%)� ���%* �� (%�3� $ �� �%%$ ��$��������' � � )� ���� ���& +�# ���(%�$�� ��$ ��%+��� � ����� ��4�� ,�D �.' 9� �#�� �"� $% %�&% �& � � !�%� �# !���"�� � � �!- �!- � � �!���� �� � � &�� % %( �����,��� #���� % ���%���%� �#- ��* )�% - @�'- I<�.' � ����� %

+�# ���� �� %�� %��� )"� �� � �' �"� #��� % # +��� ������� + �"#��% ���� � � �%�� (%� 3� $ ' <�� ) +�# ���(%�$�� �� �# )�� � !� %� ���)� �# ,F����#�� �: ���)� �#8 F���%� ���%��!�%� �#-.- 3-3�!� �$ %�� A � �- � � "���%)� ���%* ��' �"� #��!� % # +��� �%� ���!#�� �� �� =����M# "�$��%*�& (%� 3� #'

� #�$ 6�� � ��� �� #�%� ) #�#��$ # �#�� ���%�� ) �% �"��"������� #� � #�� ) ������ ,$�$��� %�# #�� ). % � (%��!�% � #��&� ,�- ���18 �- ��E�018 �- ��E0�1- 3- N0�.' 9��5 �*!���## % ,������ % %( �*���## % %� � ���!�*���## % . # ��7 ��(%� #��� $� # + �" #�%�� �- � %� �8 � � #��% ) �*���## % # ��7 ��(%� #�%�� 3'

��� ���

� )��� � &&�#�����# �"� $$� %" #�%�"�$ ��& ������!� �� %( !���"�� - � � ,�- �- �.!���� #' �"� $$�! %" #�%�"�$ ��& ��#�&�# ��� #"%+ ���&� �' �"���+��� � ���!�*���## % # /01 %( !���"�� - 2�1 %(�!���� - /21 %( �!���� - � � /31 �!���� ' �&&��� � �# "�� �� &��#� % � ��"�# % $%&���&� + �" +��5�*���## % ,�01 %( �&& (%�� $%&���&�#- ��1 %( �"���$%&���&�#- ��1 %( �+% $%&���&�#- � � �1 %( % � $%&!���&�.' � � ��� � �# �&#% "�� $���#��� � &�$�" %��#��� $� # (%� $$� %" #�%�"�$ ��& #����' �"� �D��#�&�# %( $���#��� � &�$�" %��# ��� #"%+ ���&� �'<��� ��� � �# �&#% "�� &%��&&� ������� � ��$%�� #��� !$� # (%� $$� %" #�%�"�$ ��& #����' �"� ��#�&�# %(������� � ��$%��# ��� #"%+ ���&� 3'

�"� �*���## % %( !���"�� +�# �%���&���� + �"�!���� ,�" !#6����- � � �'��.- ��� %� + �" �"� �! � ��!���� # ,�" !#6����- � N �'�0.' �"� �*���## % %( �"�

!��" #�$ �$$� %" #�%�"�$ ��& #�� ) %( %��& �% )�� ���� %$�'� !���"�� %( � �� $��� ��$%�� � �!���� %( %��& $���#��# #� �!���� %( � �� $��� ��$%�� �!���� %( � �� $��� ��$%��

��

�"��� ���� # � � %� �%���&��� ,�" !#6����- �&& + �"� N �'�0.'

�"� �*���## % %( !���"�� � � ,�!- �!- �!. ���� #� � %� �%���&��� + �" #�*- �)�- � 4��� � �� % - %����"%&%) ��& #��)� ,�&& + �" � ��&�� N�'�0.'

�%��& $���#��# # +�# ���#� � 03 ,��1. ��� � �#+"% "�� � �"�� �%# � �� $���#��� � %�� �� %����� % %� %��& ������� ��' �%��& $���#��# # +�# (%� � �/1,�/�?�. %( ��� � �# + �" +��5 �*���## % %( �!���� �%$����� + �" 21 ,0���. + �" #��% ) �*���## % ,�" !#6����- � � �'��.' �( �"� �� �& ��&&� �� ��5 ��� � �#-#���& ��& %��& $���#��# # E �# �� �� ��� �� �"� ���#!� �� %( $���#��� � %��# �"� �&��� �� ��5 � ##��� % #��� $� # %� %��& ������� ��# E +��� ���#� � 3�,031. ��� � �#' <���& ��& %��& $���#��# # +��� (%� � 0/1 ,3��00. %( ��� � �# + �" +��5 �*���## % %( �!���� �%$����� + �" �/1 ,����. %( #��% ) �*���## % ,�" !#6����- � � �'��.' �"� !���"�� - �!���� - � ��!���� # +��� %� �%���&���� + �" %��& $���#��# # %�#���& ��& %��& $���#��# # ,�" !#6����- �&& + �"� N �'�0.'

�"��� +��� �� ��� � �# +"% ����&%��� ������� ���(��� %����� % �� � $�� � %( � $% �"# ,�� )� � +��5#E0/ $% �"#.' �"� 7�#� # ��# %( �& ��& ������� �� +��� ��,��1. &%��&- �� ,�01. ��) % �&- � ,01. � #�� �- 3 ,01.&%�%��) % �&- � ,�1. ��) % �& + �" � #�� �- � � �,�1.&%��& � � � #�� �' �"� ������ �& ������� �� ���� +�#&%+�� (%� ��� � �# + �" #��% ) �*���## % ,�/1. �"� + �" +��5 �*���## % ,��1. %( !���"�� ,9 &�%*% -� � �'��.' �"� ������� �� ����# +��� ����#�� �� �&& # ��#

+ �" +��5 �*���## % %( !���"�� �%$����� + �"#��% ) �*���## % + �" �?1 ���#�# �01 (%� &%��& ��!����� ��- �/1 ���#�#�01 (%� ��) % �& ������� ��- � ���1 ���#�# �1 (%� � #�� � ������� ��' �"� �!- �!- � � �!���� # �*���## % "�� % # ) 7�� � �%���&�� % + �"������� �� ����# ,9 &�%*% - �&& + �" � N �'�0.'

�( �"%#� �� ��� � �# +"% "�� ������� ��#- �0 ��� � �#� ���+� � #�&��)� �����$� � �&�� ) �� #��)���- ��%$� �� #��)��� + �" ��� %�"����� � � �"�$%�"�����-� � � �"�$%�"�����' �� �"� &�#� (%&&%+!��- �2 ��� � �#"�� � �� %( ��$%�� � � ? ��� � �# +��� �& �� + �" ��!$%��' �"� %����&& 0!���� � #��#�!(��� ������ �& #��� ��&���� +�# 0?1'

G�� � �# + �" +��5 !���"�� �*���## % "�� � # )! 7�� �&� &%+�� 0!���� � #��#�!(��� ������ �& #��� ��& %(0�1 �%$����� + �" /01 (%� ��� � �# + �" #��% ) �*!���## % ,9 &�%*% - � � �'��02.' �"��� +��� % # ) (! �� � � 4��� ��# ���+�� #��� ��& ����# � � �*���## % #%( �!- �!- � � �!���� # ,9 &�%*% - �&& + �" � N �'�0.'�"� %�"�� (���%�# �"�� +��� (%� � �% "��� # ) 7�� ���%) %#� � ��&�� (%� #��� ��& �&���� ���= #��)�#,9 &�%*% - � O �'���. � � �� #��)� ,9 &�%*% -� � �'��3.' ��$%�� � 4��� � �� % � � #�* +�# %� �# ) 7�� � (���%� (%� #��� ��& ,9 &�%*% - �&& + �"� N �'�0.' =�&� ��� ��� � �&�# # + �" %* ��)��## % � �&�# # �&�� ) ���= #��)�#- �� #��)�# � � !���"�� #"%+�� �"�� % &� ���= #��)�# � � !���"�� +��� # ) 7�� � ���� �� � ��%) %#� � (���%�# (%� #��!� ��&'

��� ����

��� %$� %( �"� �% )�� "�# � �))��## �� ��"�� %��+ �" " )" � �� �� %( %��& $���#��# # ��� �"� ���&�#��)� ,H�� �� �&' �22?- �22/.' �%��& � � ��) % �& ��!����� ��# ���%� � (%� 201 %( �����$� � (� &���# �(���#��)��� � ��%� ��� %�"����� ,H�� �� �&' �22?- �22/.'�"� %����&& #��� ��& ���� ������#�� + �" ����# )#��)�# %( �"� �� ��� (�%$ ?01 (%� #��)� � �% ��1 (%�#��)� �F ,H�� �� �&' �22?.' �"� $� �)�$� � %( �% )������ %$� + && �� $��%��� + �" � ������ � ���#�� � )%( �� ��� � %&%)� � � ��%) %#� � $��5��#'

�"� ���#� � #���� #"%+�� �"�� !���"�� � � ����! # �*���## % +��� %(�� ������� %��& �% )��#6��$%�# ��&& ���� %$�' ���&� � #"%+# �"� & ����������� �+ %( !���"�� � � ���� # �*���## % "���� � ��5 �� ���#' �&�"%�)" "��� � � ��5 ���� %$�##"��� $� � �& �%���"%&%) ��& # $ &�� � �#- �� ��� � %&!%)� � � �����$� � %���%$�# ��� � 4��� � �� ��� %�## ��#' =%#� ���%��# & #��� ���&� � #��� �� $ *��)�%��# %( "��� � � ��5 ���� %$�# �� � ���#� # ��# + �"���� ��� ��&� �����$� � $%��& � �#' �&�"%�)" �"� #�$�&�# A�# $�� ������ &��)� #%$� ���%��# %( "��� � � ��5���� %$�#- �"� #�$�&� # A�# +��� �#��&&� ���� #$�&& �����" # ��' �"� ��7 � % %( � ���!�*���## % +�# �&#%6� �� ��� ��&�' �&& �"�#� (���%�# $ )"� &��� �% �"� ��!�%�� ) %( �% L �� ) ��#�&�# � � �% �&�# % # % �"� �%&�%( !���"�� � � ���� # ��&�� % �% � 4��� � �� % -

����� # �$$� %" #�%�"�$ ��& #�� ) ��#�&�# %( �� $��� ��$%��

*���## % �� # ��

!���"�� �!���� �!���� �!����

� 3� ,��1. 3� ,301. �? ,3�1. �0 ,031.� �3 ,�?1. 3� ,3?1. �2 ,3�1. �/ ,��1.� �0 ,�/1. �2 ,��1. �� ,��1. / ,21.3 �3 ,�01. 0 ,�1. 2 ,��1. �� ,�?1.

����� % �$$� %" #�%�"�$ ��& #�� ) %( $���#��� � &�$�" %��#

*���## % �� # ��

!���"�� �!���� �!���� �!����

� 3 E � E� 3 3 � �� 3 � � �3 E � E �

����� & �$$� %" #�%�"�$ ��& #�� ) %( &%��&&� ������� ���$%��

*���## % �� # ��

!���"�� �!���� �!���� �!����

� � E � �� � � � �� 3 � E E3 � 0 � 0

��

%��& $���#��# #- ������� ��- � � #��� ��& "��� � � ��5 ���� %$�#' 9 �" �"� #�&��� % %( � ���6����#�$�&� # A� �% 7 �� �% � # )&� # �� %( %��& �% )��- # )&����"%&%)� %( #6��$%�# ��&& ���� %$�- � � # )&������$� � %( �� $��� #��)��� �"� ���#� � #����- +��� ��" ��� $%�� �% 7�� � �% �&�# % #'

< $ &�� �% ���%��# %( %�"�� "��� � � ��5 ���� %$�#-!���"�� �%+ !��)�&�� % +�# (%� � �% �� � ���&���� � $%#� "��� � � ��5 ���� %$�# �&�� ) %��&�% )�� ���� %$�' !���"�� +�# %� �%���&���� + �"� 4��� � �� % %( %��& �% )�� ���� %$�' < �� $%#� %��&�% )�� ���� %$�# +��� � �"�� +�&& %� $%������&� � (!(��� � ���� ,2�1.- �"� ��� 4��� � �� % �% �%%�&� � (!(��� � ���� #��)� +�# � $�%��� �'

�"� � ##%� �� % %( �� ��� ��&&# (�%$ ���" %�"�� $��� ��&� �"� ���� %$� ��&&# �% ���� �% �"� #��%$� � �����&%� $���#��# #' 9� (%� � �"�� !���"�� +�# �# ) 7�� � ��%) %#� � (���%� (%� ������� �� � � #��� ��&'�"� ������� �� ����# +��� " )"�� �� �&& # ��# �&�� )&%��&- ��) % �&- � � � #�� � # ��#' �� � ����� �"�� �%+ !��)�&�� % %( !���"�� +�# � $�%��� � )� �� �$��5�� (%� � ##�$ �� % %( ���� %$� ��&&# (%� ��# % � � $���#��# # %��& �% )�� ���� %$�' �"� �*���## % %( !���"�� $���#��� � &�$�" %��# � � ������� ��#+���- "%+����- %� ���##�� &� $���"�� + �" �"� � �� !$��� ��$%��#' �"� #�$� 7 � )# "��� �&#% ��� ���%���� ����#� ���� %$� +" �" �"��� +�# ��� # � � � ���!�*���## % %( !���"�� �"� �� $��� ��$%�� �% �&&%+

����� ' � �������� ��� �+ %( !���"�� � � ���� # "��� � � ��5 ���� %$�#

���"%�# ��$��� %( ��� � �#,# ��#.

1 I ����*���## % ,��7 � % .

< ) 7�� ��%���&�� %

� # ) 7�� � �%���&�� %

<�" ���� �� �&'�22�

3� ,�� "��%�"��� *-�� %�%�"��� *-2 &��� *- 3 $%��".

/�1 !���"�� ,"����%)� %�# � � �)�� ��.

; 4��� � �� %

:%+ � �� �&'�223

�3 ,�? "��%�"��� *-3 %�%�"��� *-� &��� *- � $%��".

0�1 !���"�� ,"����%)� %�# � � �)�� ��.

; 4��� � �� % �!#��)�- �!#��)�- %��& $���#��# # ������� ��-#��� ��&

=��� >##� �� �&'�223

0� ,�? &��� *-�3 %��& ��� ��.

?�1 !���"�� ,O0�1 K�� ��&&.

; 4��� � �� % -#��� ��&

�!#��)�- �!#��)�- %��&$���#��# #

��� �" �� �&'�22�

�� ,&��� *. 3�1 !���"�� ,O��1 K�� ��&&.

�%��& $���#��# #

��5�# �� �&' �22? 3� ,&��� *. 301 !���"�� ,O0�1 K�� ��&&.

�%��& $���#��# #

� ���+# �� �&'�22?

3� ,�� $%��" � �%�%�"��� *- � &��� *-�� "��%�"��� *-� %�"��.

//1 !���"�� -2?1 �!���� -��1 �!���� -,O0�1 K�� ��&&.

; 4��� � �� % ,!���"�� .

������� ��- $���#��# #- #��� ��&

"%+ �� �&',���#� � #����.

/0 ,%��& �% )��. /01 !���"�� -2�1 �!���� -/21 �!���� -/�1 �!���� ,O0�1 K�� ��&&.

������� �� � � #��� ��&,!���"�� .- %��&$���#��# # ,�!���� .

<�*- �)�- #��)� � 4��� � �� % - %��& $���#��# # ,!���"�� -�! � � �!���� #.- ������� ��� � #��� ��& ,�!�!�!���� #.

����� ( � �������� ��� �+ %( ���� # %�"�� �� ���#

���"%� G�� � �# ,# ��#. 1 I ����*���## % ,��7 � % . < ) 7�� � �%���&�� % � # ) 7�� � �%���&�� %

@��%+�5 �� �&'�22�

�� ,�#%�"�)��&#6��$%�# ��&&���� %$�.

/�1 �!���� ,�2�1 K�� ��&&. �%��& $���#��# #� 4��� � �� %

�!#��)�

<" $�A� �� �&'�22�

�/ ,�&�������� # � % �&���� %$�.

3/1 �!���� - ��1 �!���� -��1 �!���� ,"����%)� %�#� � �)�� ��.

<��)�- )���� #��� ��&,�- �.

<��� ��& ,�.

��+"�� �� �&'�22?

/2 ,)�#�� ���� %���� %$�.

?�1 �!���� - �01 �!���� -?�1 �!���� ,"����%)� %�#� � �)�� ��.

; 4��� � �� % ,�.#��� ��& ,��.

; 4��� � �� % ,�- �. #��� ��&,�- �.

� �"$% � �� �&'�22?

22 ,��%#�������� %$�.

��1 �!���� ,"����%)� %�#� � �)�� ��.

��$%�� )���� #��� ��& =���#��# #

��5� #" �� �&'�22?

2� ,�#%�"�)��&�� ���.

?�1 �!���� - ?31 �!���� -//1 �!���� ,�2�1 K�� ��&&.

; 4��� � �� % -#��� ��& ,�.

<��)�- ����" %( ��# % - %��&$���#��# #- #��� ��& ,�- �.

B#�" �#�"� �� �&'�22?

��/ ,����#� �� ���. /�1 �!���� - ?/1 �!���� -?�1 �!���� ,�2�1 K�� ��&&.

�%��& $���#��# #

��

� ##�$ �� % %( �� ��� ��&&#- � � +"��� ��!�*���## % %(�"� !���"�� �%�&� �� (%� � $���#��� � # ��# ,:�5!"%&$ �� �&' ����.' �"� � ���& ) $��"� #$ %( �" # % �%4 #+ ��" %( !���"�� )� � �*���## % # #� && � 5 %+ '

�"� �*���## % %( �!���� ��� %� �! P �!���� +�# (%� � �% �� �%���&���� + �" �"� �*���## % %( !���"�� �" # #����' < $ &�� 7 � )# "��� �&#% ��� ���%���� %�"�� "��� � � ��5 ���� %$�# ,� ���+#�� �&' �22?.' �"� & �������� ��� �+ %( ���� # ���&� 0#"%+# �"�� �"��� +��� " )" � �� ��# %( � ���!�*���#!# % $%#� �� �"�& �& �� ���#' �"��� +���- "%+����- (�+���%��# % ���� # %��& �% )�� ���� %$�' �"� ���!#� � #���� #"%+�� �"�� �"��� +�# " )" � �� �� %(� ���!�*���## % %( �&& �"��� ���� # %��& �% )������ %$�- �"� � %��& $���#��# #- � � &%��&&� ������� ���$%��#' �"� 7 � )# +��� �%$��� �&� + �" $%#� %�"���� �"�& �& ���� %$�# �# #"%+ ���&� 0' �"� �*���#!# % %( ���� # %��& $���#��# # � � ������� � ��!$%��# �&#% � � %� ���##�� &� $���" + �" �"� � �� $���'�"� #�$� 7 � )# +��� �&#% (%� � ����#� ���� %$�,:�5"%&$ �� �&' ����.' �� � ����� �"�� ���� # �*!���## % �&#% "�� � % �%4 #+ ��" $��"� #$'

��� # "�� � � 4��� � �& �%���"%&%) ��& �%&� ��� %�# �� ���#' 9" &� �!���� "�� ���� �� �� ��&�� (%� %��& $���#��# # �#%�"�)��& ���� %$� ,@��%+�5 �� �&' �22�.- �!���� +�# (%� � �% �� $%�� $�%��� � %��& $���#��# # %��& �% )�� �� ��� �"� ���#� �#����' �!��� +�# �&#% ���� �� �� %( �"� ���#� �� %(#���& ��& %��& $���#��# # �"� �& ��&&� %��! �)�!� �� ��58 � $�� �� � �& ��&&� �#�(�& ��%) %#� � $��5�� �"� �% # ����� % %( +"��"�� �&��� �� �����$� � %( �"��� ��5 # ���##���'

� $� � �� �"�& �& ���� %$�# �&�� ) ���� %$� %(�"� %�#%�"�)�#- �&�����- #�%$��"- � � ��%#����- ����! # "�� ��%) %#� � # ) 7�� �� (%� #��� ��& ,@��%+�5 �� �&' �22�8 <" $�A� �� �&' �22�8 ��+"�� �� �&' �22?8� �"$% � �� �&' �22?8 ��5� #" �� �&' �22?.' D%+����-�&& �"��� ���� # +��� (%� � �% "��� % ��%) %#� �# ) 7�� �� (%� ������� �� � � #��� ��& %��& �% )������ %$�- �"� ��#�&�# �� ) # $ &�� �% %�"�� "��� � � ��5 �� ���# ,� ���+# �� �&' �22?.'

� �% �&�# % - !���"�� � � ���� # +��� " )"&�� ���!�*���##�� %��& �% )�� ���� %$� � � %��&$���#��# #' �!��� "�� ���� �� �� ��&�� (%� %��&$���#��# #' !���"�� +�# � $�%��� � ��%) %#� �(���%� (%� ������� �� � � #��� ��&'

�)���� ������� �"� #���� +�# #���%���� �� �"� @��%%� �� ��� ��#����" �� � � � �"� ��#����" )�� � %( �"� I ���# �� %(D% ) @% )'

����������

� ���+# �- �% �# �- D�&& +�&& �- @ #�&&� � ,�22?. *���## % %(�"� !���"�� !���� ��&& ��"�# % �%$�&�* �� $���

#6��$%�# ��&& ���� %$�# %( �"� "��� � � ��5 � � �"� � %��&$���#��# #' :� � � ��� ?0� ��?�E��/�

:%+& � �- �#& �9- �%&� � ��- �� �& ,�223. *���## % %(�"� ��&&!��&& ��"�# % $%&���&� !���"�� #6��$%�# ��&&���� %$� %( �"� "��� � � ��5' & ��%&��� )%& �/� �2�E���

:�%���# � ,�2��. <6��$%�# �� �"�& �$ %( �"� & �� � #���� %( 7��"� ���� � � �" ���!#��� ��#�#' ��=� ?�� �0�E���

:�%���# � ,�2��. = ��%#�%� � )��� ) %( �� ���' <��) & �%��"�$ ��� 2?�E2��

:�� �# =- @%��� ) D<- � &&� ) �- @>��"� $ � ,�22�. =�& )! � �� )��� ) %( �"� ���� ��# �� $��) # %( %��& #6��$%�#��&& ���� %$�# "�# " )" ��%) %#� � ��&��' � G��"%& ���� 3?0E3/�

:�5"%&$ �@- ��#&� � �=- :%���#� !;�&� �� ,����. ���*���## % %( !���"�� - �!���� - �!���� - ��� %� %( �!���� - $���#��� � � ##�� (�%$ ����#� �� ��� ��� � �#' � G��"%& �2���0E�2

��� �" �- ��&&% �- :%�� F- <� ���� = ,�22�. G��� �� % %(%���&� ��5 $���#��# # &��� )��& ���� %$�� �%&� %( ��%!& (���� ) ��&& ��&��� � � )� - =�:!�- � � !���"�� $$� %" #�%�"�$ ��& �����$ �� % ' & � ��� ��# ���/��E�/�/

��+"�� �- �%��� <- G%%&� <- �� �& ,�22?. �� %�$�& $$�! %����� � �� %( �"� !���"�� !���� �%$�&�* )�#�� � ���!� %$�� ��&�� % #" � + �" ��� � � #��� ��&' ��#��%� ���%&%)����� ��E0�

@��%+�5 �- <" %A�5 D- � %�� =- �� �& ,�22?. !���"�� � ��!���� �*���## % "�$� �#%�"�)��& �� ���' � ��� ��#0�� �2�E�2�

=��� >##� F- G����# D=- <�"�&5+ >5 �- �� �& ,�223. !���"�� �*���## % "��� � � ��5 #6��$%�# ��&& ���� %$� # �##%!� ���� + �" �& ��& %���%$�' � � � � ��� 00� 0/�E0/0

��5� #" H- ��" � �- �5 $%�% <- �� �& ,�22?. *���## % %( !���"�� - �!���� - �!���� - � � �&�5%)&%� �#%�"�)��&���� %$�# � � �# ��%) %#� � # ) 7�� ��' � �%&%)� 0�� �0/E��0

� �"$% � G�=- @���� � �5 # ��- ��)�(��" �- �� �& ,�22?.������ � !���"�� � � �!���� �*���## % ��%#������ ���� �%���&�� % + �" ��� � � #��� ��&' � ��� ��# 0?� 3�/2E3�23

<�" ���� �D- �� *� ID- :�"�� # �- �� �& ,�22�. !���"�� �*!���## % #6��$%�# ��&& ���� %$�# %( "��� � � ��5� ���#��%���&�� % + �" ��$%�� ��� 4��� � �� % � � &�$�" %��$���#��# #' � ��� ��# 0�� �3�/E�33?

<" $�A� �- <�"�&5� ��- � �%&� ��- �� �& ,�22�. G�%) %#� � ��&��%( ���"�� �##%� ���� $%&���&�# ,�- �- �!���� # � � ����. �&����� ��$%��#' � ��� ��# 0�� ��0�E��0/

��5�# �G- �� �% ) :- <�"��� ) - �� �& ,�22?. =��5��# (%� �#!#�##$� � %( %��& $���#��# # &��� )��& ���� %$�' ���"��%&��� )%& D��� ���5 <��) ��3� ���E��2

H�� �G9- 9� 9�- 9% ) H=- �� ) @ ,�22?�. %$���"� # ��� �&�# # %( ��#�&�# %( #��) ��& �����$� � %( %��& �% )�� ���� ! %$� D% ) @% )' " �#� =�� � ���� /02E/��

H�� �G9- 9� 9�- 9% ) H=- �� ) @ ,�22?�. &��� �� ��5� ##��� % ���#�# %�#����� % �"� #��) ��& �����$� � %( ���&�%��& �% )�� ���� %$�' D��� � � ���5 �2� 0/3E0//

H�� �G9- 9� 9�- ��$ �@- D% 9@- @+% ) ; ,�22?�. ��#�&�#%( #��) ��& #�&��)� %( &%�%��) % �& ������� �� %( ���� %$� %(�% )�� �(��� ��� %�"����� (� &���' � ��%& �" %& ���� )%&���� ??2E?/�

H�� �G9- ��$ @H- "� ��- 9� 9�- ��$ �@ ,�22/.& �%���"%&%) ��& � �&�# # %( &%��& #����� %( ���� %$� %(�% )��' �$ � <��) �?0� ���E���

B#�" �#�"� 9- <�"% �%� �- :�"�� # �- �� �& ,�22?. *���## % %(!���"�� � � ���� # ��# �� $�$$��� ���� %$�#'� � �� ��� ��# �?� 0��E0�/

�3