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ADN PROVIRAL DE VIH ES EL BLANCO GENÉTICO ADECUADO PARA EL ESTUDIO DE
RESISTENCIA GENOTÍPICA A ANTIRRETROVIRALES EN PACIENTES CON
VIREMIAS DE BAJO NIVEL
FERRER P1, SOBARZO2 M y AFANI A1
1 Hospital Clínico Universidad de Chile. 2 Hospital Barros Luco, Santiago, Chile
INTRODUCCION
Existe un creciente interés por evaluar a pacientes VIH quedespués de un tiempo en terapia antirretroviral (TAR) no llegan aser indetectables manteniéndose con viremas de bajo nivel.
Lamentablemente actualmente no existen en el mercado ensayosgenotípicos que puedan realizarse con carga virales<1.000copias/mL que permitan evaluar la posible aparición de resistenciaen estos pacientes.
En estos casos se recomienda considerar al ADN proviral de VIHpara estudios de resistencia genotípica.
Evaluar la utilidad del ADN proviral de VIH como blanco para análisis de resistencia a antirretrovirales en pacientes en TAR con viremias de bajo nivel.
OBJETIVO
Materiales y Método
PR. Harrigan, et-al. J Clin Microbiol. 2012 Jun;50(6):1936-42.
8
Materiales y Métodos
Descontinuado a nivel mundial en diciembre de 2014
Secuenciación automática usando ReCallTM
10 muestras ® con CV entre 1.000 y 10.00010 muestras ® con CV entre 10.000 y 99.00010 muestras ® con carga viral >100.000
VALIDACIÓN
1 sola discrepancia 97% concordancia
Control Acrometrix® es diseñado para laboratorios que realizan test deresistencia genotípica a inhibidores de transcriptasa reversa y proteasade VIH.
100% de Detección
Secuenciación redundante
Llamado de basesConfiable
Este método automático es:
Rápido: Una semana
Bajo costo:
Eficiente: solamente 5% deresultados no reportables
Reproducibilidad: 100%
Validación con respecto aTrugene del 97%
Usado en centros de referencia deVIH
Automatic HIV Drug Resistance Genotyping With RECall:
TR/PRO.
PR. Harrigan, et-al. J Clin Microbiol. 2012 Jun;50(6):1936-42.
Se estudiaron un total de 75 pacientes adultos de los cuáles un75% fueron hombres quienes estaban confirmados deinfección por el virus VIH y bajo tratamiento antirretroviral almomento del test de resistencia.
En primer lugar se analizaron 10 muestras de pacientes quetuvieron una carga viral promedio de 20.000 copias/mL. Estospacientes fueron analizados simultáneamente en paralelo porADN proviral y ARN viral.
Posteriormente se estudiaron exclusivamente por ADN proviral65 pacientes en quienes el médico tratante sospechó de fallavirológica. Estos sujetos presentaron una carga viralpromedio de 258 (rango de 20-1083) copias/mL.
El Estudio
Resultados
De las 10 muestras analizadas en paralelo por ARN y ADN proviral encontramos que 9 (90%)coincidieron en número y tipo de mutaciones. De estas 9 muestras coincidentes 2 fueronsusceptible y 7 fueron resistentes.
Con respecto a la muestra discrepante por ARN encontraron más mutaciones de resistenciaque por ADN proviral. Las mutaciones K65R, L100I, Y115F, K219R, and F227L fueronsolamente detectadas en ARN.
Mientras que las mutaciones V108I and K70G fueron detectadas solo en ADN proviral.
En esta muestra las mutaciones coincidentes detectadas en ambos compartimentos fueron:K103N, M184V, H221Y.
En esta muestra la discrepancia en tipo y número de mutaciones provocó diferencias en elnivel de resistencia predicho para los siguientes antiretrovirales: ABC, D4T, TDF, ETR y RPV.Siendo mayor en número y nivel por ARN.
En la serie de muestras analizada por ambos compartimentos no se encontraron mutacionesasociadas a inhibidores de proteasa.
Con respecto a las 65 muestras analizadas exclusivamente por ADN proviralse encontró que 14 fueron resistentes (22%), 43 fueron susceptible (66%) and8 fueron no reportables (12%).
En las muestras resistentes las siguientes mutaciones fueron detectadas:M184V (13.8%), K103N (7.7%), M41L (4.6%), K70R (3.1%), V108I A62V, V90I,Y181C, M230I, T215Y, T215D, H221Y (1.5%).
En esta serie de muestras estudiadas por ADN proviral se pudierondetectar las mutaciones de resistencia a inhibidores de proteasa: I93L,N88T que dio baja resistencia a ATV/r.
Resultados
Seguimiento de un caso
La terapia se cambió a; Zidovudine (AZT) + Tenofovir (TDF) +Atazanavir/ritonavir (ATV/r). 4 meses después se evaluó la carga viral yresultó indetectable.
0
2
4
6
8
10
12
14
16
K103
NK6
5RM
184V
T215
FT2
15I
P225
HL7
4IK2
19E
L100
IK1
01P
V90I
V108
IK7
0TE1
38A
H22
1YK7
0RK1
01E
D67
NL7
4VA6
2VV1
06M
V179
DM
184I
V75M
T69D
T215
DK2
19Q
K70G
G19
0AA1
06I
G19
0EK1
03N
/…K7
0EY1
15F
K219
RT2
15Y
K101
P/…
D67
GT6
9CR
…Y1
81C
M41
LM
230I
RNA
DNA
Serie de mutaciones comparando ARN y ADN proviral
Nuestros resultados demostraron que el ADN proviral es un blanco adecuado para laprueba de resistencia a fármacos antirretrovirales.
Sin embargo, debido a la discrepancia encontrada entre amboscompartimentos, el ADN proviral parece ser adecuado sólo en casos deviremias <1,000 copias / mL.
Por lo tanto, no es aconsejable reemplazar el ARN por el proviral. Se recomienda eluso de ADN proviral sólo en los casos en que el análisis de ARN no es posible.
En las 65 muestras analizadas con virema <1.000 copias / mL, las mutacionesencontradas dieron resistencia a los fármacos 3TC, FTC, ABC, EFV, NVP, DDI quecoincidieron con el tratamiento de los pacientes.
Nuestros resultados sugieren que las viremias de bajo nivel pueden serestudiadas mediante ADN proviral ya que estas podrían estar asociadas a fallavirológica que puede ser detectada precozmente y de este modo realizar unaintervención terapéutica más precoz que asegure el éxito del tratamientoantirretroviral.
Conclusiones