1. PENDAHULUAN1.1 Latar BelakangRumput laut adalah bentuk poliseluler dari ganggang hijau (alga) yang hidup di laut dan tergolong dalam devisi Thalophyta. Tanaman ini tidak mempunyai akar, batang dan daun seperti lazimnya tanaman tingkat tinggi. Struktur tanaman secara kesuluruhan merupakan barang yang dikenal sebagai thallus (Buharaja, 1981). Rumput laut mempunyai beberapa kelas, salah satunya phalopycene (Istini et al., 2009).Rumput laut coklat merupakan salah satu komoditi laut yang melimpah dan memiliki potensi tinggi. Kurang kandungannya. Namun masih sedikit upaya yang dilakukan untuk memanfaatkan potensi rumput laut. Sargassum yang potensial untuk bahan obat-obatan adalah Sargassum polycistum karena mengandung iodium,protein, vitamin C danmineralseperti Ca, K, Mg, Fe, Cu, Zn, S, P dan Mn, anti kanker, anti tumor dan lain-lain. serta zat yang dapat mengontrol polusi logam berat (Yuwanita, 2011).Menurut Prangdimurti (2007), zat antioksidan adalah substansi yang dapat menetralisir radikal bebas. Radikal bebas merupakan jenis oksigen yang memiliki tingkat reaktif yang tinggi dan secara alami ada dalam tubuh sebagai hasil dari reaksi biokimia di dalam tubuh. Radikal bebas dalam merusak sel tubuh, apabila tubuh kekurangan zat antioksidan atau saat tubuh kelebihan radikal bebas.Antioksidan didefinisikan sebagai senyawa yang mampu menunda, memperlambat atau menghambat rekasi oksidasi pada makanan, obat yang dapat mengakibatkan ketengikan (rantydicy) pada makanan maupun kerusakan (degradasi) pada obat. Antioksidan dapat menghambat atau memperlambat oksidasi melalui dua jalur yaitu : (1) melalui penangkap radikal bebas (free radical scavenging). Antioksidan jenis ini disebut sebagai antioksidan dunter. Termasuk dalam jenis ini adalah vitamin E (-Tokoferol) dan flavonoid, dan (2) tanpa melibatkan penangkapan radikal bebas (Wulandari, 2009).Proses ekstraksi merupakan cara penyarian yang sederhana. Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisa dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk dalam rongga sel yang mengandung zat aktif (Indaswari, 2008). Hasil penelitian mengenai alga coklat telah banyak dilaporkan yaitu pada penelitian yang dilakukan oleh Suryaningrum et al., (2006).Menurut Halimah (2007), ada dua pertimbangan utama dalam memilih jenis pelarut, yaitu pelarut harus mempunyai daya larut yang tinggi dan pelarut kimia yang berbahaya atau tidak beracun. Pelarut yang paling adalah ethanol. Pelarut yang sering dilakukan dalam proses ekstraksi adalah aseton, etil diklorida,etanoldan methanol.Salah satu uji untuk menentukan aktivitas oksidan penangkap radikal bebas adalah metode DPPH (1,1-diphenil-2-2 picrilhidrazyl) (Blois, 1958). Metode DPPH memberikan serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap, selama itu metode ini lebih sering digunakan untuk melihat aktivitas antioksidan pada beberapa bahan makanan karena caranya mudah untuk diguanakan. Penangkapan radikal bebas akan menyebabkan penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah elektron yang diambil (Sunami, 2005).Menurut Muawanah (1996), penelitian ini berguna untuk mempelajari dan mengetahui efektivitas ekstrak Sargassum sp sebagai antioksidan dalam menghambat kerusakan awal emulsi minyak ikan dan untuk memperoleh gelar sarjana fakultas perikanan.Institut Pertanian, Bogor.Radikal bebas (free radicals) adalah molekul yang sangat reaktif karena memiliki elektron yang tidak berpasangan dalam orbital luarnya, sehingga dapat bereaksi dengan molekul sel tubuh dengan cara mengikat elektron dari molekul sel tubuh tersebut. Tubuh kita secara terus menerus mengalami pembentukan radikal bebas melalui proses metabolisme sel normal, proses peradanag, malnutrisi, respon terhadap sinar gamma, UV, asap rokok, alkohol, polusi, obat-obatan, radang dan luka, kelelahan, stress, depresi dan cemas, olah rasa berlebihan, kemoterapi/rontsen, peptisida/herbisida, insektisida, bahan-bahan pengawet dan lain-lain.Antioksidan adalah bahan yang dapat menghilangkan radikal bebas dengan melalui reaksi kimia sehingga dapat mengurangi terjadinyastressoksidasi. Peranan antioksidan yang berasal dari buah-buahan dan sayur dalam pertahanan terhadap stress oksidasi akibat penyakit kronik, baik dalam jangka pendek dengan mencegah kerusakan jaringan maupun dalam jangka panjang dalam menjaga kesehatan secara keseluruhan. Antioksidan dapat bersumber dari makanan, termasuk tokoferol, asam askorbik, vitamin A beserta prekursornya, betakaroten dan berbagai bahan tumbuhan lain seperti fitokimia, karetenoid, bioflavonoid dan flavonoid.

1.2 Rumusan MasalahDalam praktikum Metode Analisa dan Manajemen Laboraturium dengan materi antioksidan. Menurut Suryaningrum et al.,(2007), bahwasanya Sargassum banyak auksin, glberelin serta sitokinin yang berperan dalam memacu pertumbuahn tambahan spesies lain. Zat pengatur tumbuh tersebut berperan pada hampir semua proses pertumbuhan.1. Seberapa besar aktivitas senyawa antioksidan yang terdapat pada alga coklat, teh, Sargassum policystum dan Sargassum duplicatum?2. Senyawa dari golongan apa saja yang terdapat pada alga coklat (Sargassum policystum dan Sargassum duplicatum) yang berpotensi sebagai antioksidan ?

1.3 Tujuan Praktikum Tujuan praktikum Metode Analisa dan Manajemen Laboraturium adalah untuk mengetahui seberapa besar aktivitas senyawa antioksidan yang terdapat pada alga coklat (Sargassum policystum dan Sargassum duplicatum) dan the Untuk mengetahui kandungan senyawa aktif antioksidan yang terkandung pada alga coklat (Sargassum policystum dan Sargassum duplicatum) dan the

1.4 HipotesisHipotesis yang mendasari ini adalah :Ho : diduga pelarut metanol pada suhu ekstraksi tidak memberikan pengaruh terhadap antioksidan dari ekstrak Sargassum polycystumHI : diduga pelarut metanol pada suhu ekstraksi memberikan pengaruh terhadap antioksidan dari ekstrak Sargassum polycystum

1.5 Kegunaan PraktikumHasil praktikum diharapkan memberikan informasi kepada masyarakat, lembaga dan institusi lain mengenai manfaat senyawa antioksidan yang ada pada alga coklat, teh, Sargassum polycystum atau Sargassum duplicatum sehingga masyarakatIndonesiadapat memanfaatkan alga coklat (Sargassum polcystum dan Sargassum duplicatum) dan teh sebagai alternatif antioksidan alami yang sangat potensial.

1.6 Waktu dan TempatPraktikum Metode Analisa dan Manajemen Laboraturium tentang uji antioksidan dan dengan menggunakan metode DPPH untuk preparasi sampel dilaksanakan pada hari Senin, tanggal 23 Mei 2011 pukul 06.00 selesai dan dilakukan uji aktivitas senyawa antioksidan dengan metode DPPH pada hari Selasa tanggal 6 Juni 2011, pukul 08.00 selesai, dilaboraturium Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawjiya Malang.

2. TINJAUAN PUSTAKA2.1 Alga Coklat2.1.1 Sargassum PolycystumMenurut Shaby (2010), Sargassum polycystum merupakan salah satu spesies dari makroalga devisi Phaeopyta. Phaeopyta secara umum memiliki ciri-ciri bentuk thalus lembaran, bulat atau menyerupai batang, warna thalus coklat. Phaeopyta memiliki pigmen fotosintetik klorofil a dan c, xantofil dan diatoxantin. Cadangan makanan Phaeopyta berupa laminatan dan manitol. Dinding sel umumnya mengandung asam alginate dan asam fuanat. Ciri-ciri Sargassum polycystum tidak jauh berbeda dengan ciri-ciri umum Phaeopyta. Thalus silindris berduri-duri kecil mendarat, holdfast membentuk cakram kecil dengan diatasnya secara karakteristik terdapat perakaran/stolon yang timbun berekspansi kesegala arah. Batang pendek dengan percabangan tumbuh rimbun.Menurut Sith ITB (2011), klasifikasi Sargassum polycystum adalah :Divisi : PhaeopytaKelas : PhaeophyceaeBangsa: FucalesSuku : SargassaceaeMarga : SargassumJenis : Sargassum polycystumMenurut Pranoto (2009), Sargassum polycystum mempunyai kandunga gizi yang tinggi. Selain mempunyai gizi yang tinggi Sargassum polycystum menghasilkan alginat. Sargassum banyak mengandung pigmen klorofil a dan c, beta karoten, feofilin, violasanthin dan fukosantin, pirenoid dan lembaran fotosintesis. Selain itu juga mengandung cadanagn makanan berupa laminarin, selulase dan algin. Selain bahan-bahan tadi ganggang merah dan coklat mengandung yodium.Menurut Pranoto (2011), komposisi kimia Sargassum polycystum adalah:Tabel 1. Komposisi kimia Sargassum PplycystumKandungan JumlahYodium 0-5%Abu 52%Zat besi 32,4%Protein 5,4%Lemak 3%Karotenoid 9%

2.1.2 Sargassum duplicatumBerdasarkan hirarki taksonomi Sargassum duplicatum menurut Fahri (2009), adalah sebagai berikut :Kingdom : PlantaeDivision : PhaeophytaClass : PhaeophyceaeOrder : FucalesFamily : SargassaceaeGenus : Sargassum C. AgardnSpesies : Sargassum duplicatum J.AgVariety : Sargassum duplicatum J.Ag

Menurut Junianto (2006), Sargassum duplicatum memiliki ciri-ciri sebagai berikut : bentuk thallus umumnya silindris, percabangan rimbun mempunyai pepohonan di darat, bangun daun melebar, lonjong atau menyerupai pedang mempunyai gelembung udara (blender) yang umumnya soliter, panjangnya dapat mencapai tujuh meter dan warna thallus umumnya coklat.Alga Sargassum merupakan salah satu marga Sargassum yang termasuk dalam kelas Phaeophyceae. Sargassum tumbuh di perairan dikedalaman 0,5 10 m. diperairan Indonesia terdapat lebih 15 jenis alga Sargassum. Sargassum hidup didaerah perairan yang jernih yang mempunyai substrat batu karang. Sargassum dapat tumbuh subur pada daerah tropis suhu perairan 27,75 29,300C dan salinitas 32 33,5%. Alga Sargassum tumbuh berumpun dengan untalan cabang-cabang. Panjang tali utama mencapai 1-3 m dan tiap-tiap percabangan terdapat gelembung udara yang berbentuk bulat yang disebut bladder, berguna untuk menopang cabang-cabang thalli terapung kearah permukaan air untuk mendapatkan intensitas cahaya matahari (Kadl, 2008).Menurut Yurizal (1999), komposisi kimia Sargassum sp adalah :Tabel 2. Komposisi kimia Sargassum DuplicatumKomposisi Kimia (%)Karbohidrat 19,06Protein 5,53Lemak 0,74Air 11,71Abu 34,57Serat kasar 28,39

2.2 TehTeh merupakan salah satu minuman yang biasa di konsumsi bersama obat. Seduhan teh dikenal masyarakat sebagai minuman yang menyegarkan dan telah lama diyakini memiliki khasiat bagi kesehatan tubuh terutama pada teh hijau. Teh hiaju banyak mengandung antioksidan polifenol, alkaloid dan kafein (Oktavia, 2009).Teh merupakan minuman sangat populer dan banyak dikonsumsi masyarakat. Dimasyarakat dikenal berbagai jenis teh antara lain teh hijau dan teh hitam. Kedua jenis teh ini banyak dikonsumsi masyarakat, selain memiliki karakter sensori yang enak dan menyegarkan, teh mengandung senyawa yang berperan sebagai antioksidan, sehingga baik untuk kesehatan. Antioksidan teh berasal dari polifenol. Sebanyak 93% senyawa polifenol merupakan senyawa flavonoid. Komponen ini mampu menghambat reaksi oksidasi dan menangkap radikal bebas. Hal ini dikarenakan adanya gugus hidroksil pada struktur kimianya. Kapasitas antioksidan pada teh kemungkinan berasal dari komponenpolifenol yang dikandungnya. Dengan demikian dapat dihipotesiskan bahwa terdapat relasi antara total fenol dengan kapasitas antioksidan pada teh. Pengukuran kapasitas antioksidan yang digunakan adalah metode DPPH, sedangkan pengukuran total fenol dengan metode folin-cocalteau (Dewi et al.,2009).Teh didalam kehidupan masyarakat secara umum dikenal sebagai minuman, akan tetapi selain dikonsumsi dalam bentuk ekstraknya dapat ditambahkan dalam berbagai produk pangan sebagai antioksidan alami. Berdasarkan hasil penelitian terbukti bahwa dalam teh terdapat senyawa kafein yang berfungsi untuk menghambat terjadinya proses oksidasi pada beberapa jenis pangan. Senyawa kafein ini baik jika dibandingkan dengan antioksidan sintesis yang sudah banyak digunakan (Hukmah, 2007).Menurut Perva (2006), teh ternyata menyimpan potensi sebagai sumber mineral tubuh yang penting dalam berbagai proses metabolisme. Kandungan mineral tersebut muncul baik berupa makna maupun trate mineral. Kandungan sangat diperlukan sebagai nutrisi bagi tubuh sehingga kecukupan dalam makanan sehari-hari perlu diperhatikan. Adapun mineral yang terkandung dalam teh sebagai berikut :1. Magnesium sebagai pengatur elektrolit tubuh, karena reseptor metabolisme vitamin D dan pembentukan tulang2. Kalium merupakan mineral utama dalam menjaga keseimbangan elektrolit tubuh, turut berperan dalam metabolisme energy, transportasi membran, dan mempertahankan permeabilitas sel. Serta berfungsi dalam menyampaikan pesan syaraf otot (neuromuscular)3. Flour fungsinya paling dalam mempertahankan dan menguatkan gigi agar terhindar dari karies. Studi laboraturium di Jepang menemukan bahwa teh membantu mencegah pembentukan plak gigi dan membunuh bakteri mulut penyebab pembengkakan gusi.4. Natrium sebagai salah satu mineral utama, fungsinya dalam tubuh berperan erat dalam mengatur keseimbangan elektrolit5. Fe juga terkandung dalam teh, namun biovaillabitynya kurang sehingga tubuh memanfaatkannya secara maksimal6. Seng penting dalam proses metabolisme tubuh dan berperan erat dalam pertumbuhan dan perkembangan, sintesis vitamin A serta immune tubuh dan pembentukan enzim pemunah radikal bebas7. Mangan merupakan KO-enzim berbagai metabolic enzim dan juga sebagai enzim aktivator. Metabolik enzim tersebut (MUSOD) berperan penting dalam menghancurkan radikal bebas.8. Cu semakin penting perannya dalam berbagai metabolisme tubuh dan satu fungsinya sebagai pembunuh radikal bebas9. Trace mineral lain yang terkandung dalam teh adalah selenium yang merupakan salah satu mineral yang berperan dalam pembentukan enzim antioksidan glutation peroksidase. Selain itu, selenium juga sangat erat hubungannya dengan metabolisme yodium.

2.3 AntioksidanAntioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih elektron kepada radikal bebas. Sehingga radikal tersebut dapat diredam. Berdasarkan sumber perolehannya ada 2 macam antioksidan yaitu antioksidan alami dan antioksidan buatan (sintetik). Tubuh manusia tidak mempunyai cadangan antioksidan dalam jumlah lebih, sehingga jiak terjadi paparan berlebih maka tubuh akan membutuhkan eksogen. Antioksidan sintetik menyebabkan antioksidan alami menjadi alternatif yang sangat dibutuhkan (Kuncahyo dan Sunardi, 2007).Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat oksidasi dengan cara bereaksi dengan radikal bebas reaktif membentuk radikal bebas tak reaktif yang relatif stabil. Senyawa fenolik dan flavonoid merupakan sumber antioksdidan alami yang biasanya terdapat dalam tumbuhan. Adanya kandungan flavonoid mendorong untuk melakukan pengujian aktivitas antioksidan sehingga dapat digunakan sebagai antioksidan alami (Oktavia, 2008).Antioksidan dapat didefinisikan sebagai suatu senyawa yang dapat menunda, memperlama dan mencegah kerusakan atau ransiditas makanan yang dikarenakan proses desidasi antioksidan dapat menghambat atau memperlambat oksidasi melalui 2 jalur, yaitu (1) melalui penangkapan radikal bebas (free radicals scavenging). Antioksidan jenis ini disebut dengan antioksidan primer. Termasuk dalam jenis ini senyawa-senyawa fenolik seperti galat dan flavonoid. (2) tanpa penangkapan radikal bebas. Antioksidan ini disebut dengan antioksidan sekunder yang mekanisme melalui pengikatan logam ; menyerap sinar ultraviolet dan mendeaktivasi oksigen singlet. Antioksidan dapat menghambat atau menunda proses oksidasi dengan konsentrasi yang rendah (Pribudi, 2009).Antioksidan dapat bersumber dari zat-zat sintesis atau zat-zat alami hasil isolasi. Nutrisi antioksidan dapat diperoleh dari makanan sehari-hari seperti sayuran, buah-buahan, kacang-kacangan dan tanaman lainnya yang mengandung senyawa antioksidan bervitamin (seperti vitamin C, vitamin A, dan vitamin E), asam-asam fenolat (seperti asam kafeat) dan senyawa flavonoid (Sitombing et al.,2011).

2.3.1 Fungsi AntioksidanMenurut Astuti (2009), bertambahnya radikal bebas dan liat yang masuk kedalam tubuh akan mempersulit tubuh untuk mengatasi serangan radikal bebas. Antioksidan yang terbentuk dari luar sel tubuh salah satunya dari makanan. Antioksidan ini berfungsi untuk membantu ketidakmampuan sistem antioksidan tubuh.Fungsi utama antioksidan digunakan sebagai upaya untuk memperkecil terjadinya proses kerusakan dalam makanan. Makanan memperpanjang masa pemakaian dalam industri makanan, meningkatkan stabilitas lemak yang terkandung dalam makanan serta mencegah hilangnya kualitas sensori dan nutrisi dan dapat memperkecil terjadinya proses desidasi dari lemak minyak. Lipid peroksida merupakan salah satu factor yang cukup berperan dalam kerusakan selama penyimpanan dan pengolahan makanan. Antioksidan tidak hany digunakan dalam industri farmasi tetapi digunakan secara luas dalam industri makanan, industri petroleun, industri karet dan sebagainya (Kuncahyo dan Sumardi, 2007).Berdasarkan fungsinya antioksidan menurut Hariyatim (2003) dapat dibagi menjadi :1. Tipe pemutus rantai reaksi pembentuk radikal bebas dengan menyumbangkan atom H, misalnya vitamin E2. Tipe pereduksi, dengan mentransfer atom H atau oksigen atau bersifat pemulung, misalnya vitamin C3. Tipe pengikat logam, mampu mengikat zat peroksidan seperti Fe2+ dan Cu2+ misalnya flavonoid4. Antioksidan sekunder, mampu mendekomposisi hidroperoksida menjadi bentuk stabilMenurut Dr Burhan (2005), sistem pertahanan antioksidan secara fisiologis dan farmakologis bekerja dalam 3 kategori pencegahan (primer), pencegatan (sekunder), pemilihan (tersier). Sebagian besar antioksidan bekerja pada tingkat pencegatan, dengan menyingkirkan prooksidan terutama dari bagian-bagian sel yang sensitip. Secara fungsional mereka dapat dikelompokkan sebagai berikut :1. Antioksidan primer (mencegah pembentukan radikal bebas) : Superoksida dismutase (SOD) Glutation peroksida (GPx)2. Antioksidan sekunder (menangkap dan menetralisir radikal bebas) Vitamin E, C, carotene Asam urat, bilirubin, albumin\3. Antioksidan tersier (melakukan perbaikan) Enzim yang memperbaiki DNA Methionin suphoxide reductase

2.3.2 Sumber AntioksidanBerdasarkan sumbernya antioksidan dibagi dalam dua kelompok, yaitu antioksidan sintetik (antioksidan yang di peroleh dari hasil sinteak, reaksi kimia)dan antioksidan alami (antioksidan hasil ekstraksi bahan alami).1. Antioksidan SintetikAda empat antioksidan sintetik yang penggunaannya meluas dan menyebar diseluruh dunia,yaitu Buni Hidroksi Anisol (BHA), Buni Hidroksi Tolven (BHT), propil galat Tert-Buni Hidroksin Quinon (TBHQ)Gambar 3. Struktur kimia beberapa antioksidan sintetik2. Antioksidan AlamiMenurut Wulandari (2009), antioksidan alami didalam makanan dapat berasal dari (a) senyawa antioksidan yang sudah ada dari satu atau dua komponen makanan, (b) senyawa antioksidan yang berbentuk dari reaksi reaksi selama proses pengolahan, (c) senyawa antioksidan yang diisolasi dari sumber alami dan ditambahkan kemakanan sebagai bahan tambahan pangan. Senyawa alami yang ditambahkan kemakanan sebagai bahan tambahan pangan. Senyawa alami yang ditambahkan sebagai antioksidan antara lain: -karoten, karetenoid, vitamin C dan vitamin, ekstrak teh hijau, senyawa polifenol dan flavonoid, senyawa proslanidia serta senyawa kurkumin dan kurkuminoid lainnya.Menurut Burhan (2005), secara alamiah terdapat berbagai sistem pertahanan radikal bebas yangsering dikenal sebagai antioksidan :1. Enzim Antioksidan- Catalase- Glutathione Peroxidase- Glutathione Reductase- Superoxide Dismutase (Cu-Zn dan Mn)2. Ikatan Protein dan Logam- Ceruloplasmin- Ferritin- Lactoferrin- Mefallothelnein- Transferrin- Hemoglobin- Myoglobin3. Antioksidan Lain :- Tembaga- Glutathione- Mangan- Selenium- Seng

2.4 Mekanisme Kerja AntioksidanAntioksidan dapat menghambat atau menurunkan oksidasi dengan dua cara, yaitu dengan radikal bebas disebut antioksidan primer atau tidak melibatkan penangkapan radikal bebas, secara langsung disebut antioksidan sekunder. Antioksidan primer termasuk komponen fenolik seperti vitamin E (-tokofenol). Antioksidan sekunder mempunyai mekanisme yang bervariasi seperti peningkatan Ion logam, menangkap oksigen mengubah hidroperoksida menjadi spesies non radikal, mengabsorsi radikal UV atau deaktivasi oksigen singlet. Biasanya anioksidan sekunder hanya menunjukan aktivitas antioksidan ketika komponen mulai muncul.Antioksidan dapat mengahmbat atau memperlambat oksidai melalui dua jalur, yaitu: (1)melalui penangkapan radikal bebas (Free Radikal Scavenging). Antioksidan jenis ini disebut sebagai antioksidan primer. Termasuk dalam jenis ini adalah vitamin E ( tokofenol) dan flavonoid, dan (2)tanpa melibatkan penangkapan radikal bebas. Antioksidan ini disebut dengan antioksidan sekunder yang mekanisme pengikatannya melalui pengikat logam : menangkap oksigen : mengubah hidroksiperoksida menjadi spesies non radikal menyerap sinar ultra violet dan mendeaktivasi oksigen singlet (Wulandari, 2009).Menurut Hariyatmi (2003), mekanisme kerja antioksidan seluler adalah sebagai berikut :1. Berinteraksi langsung dengan oksidan, radikal bebas atau oksigen tunggal2. Mencegah pembentukan jenis oksigen relative3. Mengubah jenis oksigen negatif menjadi kurang toksik4. Mencegah kemampuan oksigen negative5. Memperbaiki kerusakan yang timbulMenurut Dr. Burhan (2005), secara biokemis antioksidan dapat digolongkan dalam kelompok dan bekejanya secara enzimatik dan non enzimatik :1. Enzimatik Gluthation peroksidasi (enzim yang mengandung serenium), menetralisir Hidrogen perokisda Gatalase (enzim yang mengandung Fe), menetralisir Hidrogen peroksida.H2O2 ? H2O + O2 Superoxide Dismutase menetralisis radikal superoxide (O2?) 2O2?- +2H+ ? H2O2 +O2Sumber: Suratmo (2004)Gambar 5. Contoh mekanisme reaksi senyawa antioksidan dengan metode DPPHMenurut Suratmo (2004), ada tiga langkah reaksi antara DPPH dengan zat antioksidan, dicontohkan senyawa monofenolat. Langkah pertama meliputi delokalisasi satu elektron pada gugus yang tersubtitusi para dari senyawa tersebut kemudian memberikan atom hidrogen untuk mereduksi DPPH. Langkah berikutnya meliputi dimerisasi antara dua radikal fenoksil, yang akan mentransfer radikal hidrogen yang akan bereaksi kembali dengan radikal DPPH. Langkah terakhir adalah pembentukan kompleks antara radikal arIL dengan radikal DPPH. Pembentukan dimer maupun komplek antara zat antioksidan dengan DPPH tergantung pada kestabilan dan potensial reaksi dari struktur molekulnya, seperti terlihat pada gambar diatas.

2.5 Ekstrasi Senyawa AktifEkstraksi adalah proses penarikan komponen atau zat aktif dengan menggunakan pelarut tertentu. Pemilihan metode ekstraksi senyawa dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu sifat jaringan tanaman, sifat kandungan zat aktif serta kelarutan dalam pelarut yang digunakan. Prinsip ekstraksi adalah melarutkan senyawa polar dalam pelarut polar dan senyawa non polar dalam pelarut non polar (Ummah, 2010).Ekstraksi adalah proses penarikan / zat aktif suatu simolisia dengan menggunakan pelarut tertentu. Demikian metode ekstrak senyawa bukan atom dipergunakan oleh beberapa faktor, yaitu sifat jaringan tanaman, sifat kandungan zat aktif, serta kelarutan dalam pelarut yang digunakan. Prinsip ekstraksi adalah melarutkan senyawa polar dalam pelarut polar dan senyawa non polar dalam senyawa non polar. Secara umum ekstraksi dilakukan secara berturut turut mulai dengan pelarut non polar (n-heksan) lalu pelarut yang kepolaranya menengah (diklormetan atau etilasetat)kemudian pelarut yang bersifat polar (metanol dan etanol) (Widjanarko, 2008).Menurut Utami (2009), ekstraksi adalah istilah yang digunakan untuk operasi yang melibatkan perpindahan suatu konstituen padat atau cair (solute) kedalam cairan lain yaitu solvent atau pelarut. Istilah ekstraksi padat cair terbatas pada kondisi dimana terdapat fase padat dan mencakup operasi seperti leading, uxiriation dan masking. Prinsip dasar ekstraksi adalah berdasarkan kelarutan, untuk memisahkan zat terlarut yang diinginkan komponen zat terlarut atau menghilangkan komponen zat terlarut yang tidak diinginkan dari fase padat, maka fase padat dikontakkan dengan fase cair. Pada kontak dua fase tersebut, zat terlarut terdifusi dari fase padat ke fase cair sehingga terjadi pemisahan dari komponen padat.Menurut Moeksin et al., (2007) keberhasilan ekstraksi dipengaruhi oleh beberapa faktor. Adapun faktor faktor tersebut antara lain ukuran bahan baku, keadaan bahan baku dan waktu ekstraksi.

2.6 PelarutPemilihan pelarut untuk ekstrasi harus mempertimbangkan banyak faktor. Pelarut harus menemukan syarat syarat sebagai berikut : murah dan mudah diperoleh, netral tidak mudah menguap dan tidak mudah terbakar, selektif dan tidak mempengaruhi zat berkhasiat. Pada penelitian digunakan beberapa pelarut berdasarkan tingkat kepolaranya yaitu aquadest, metanol, etanol dan aseton (Ummah, 2010).Menurut Hukmah (2007), ada dua pertimbangan utama dalam memilih pelarut yaitu pelarut harus mempunyai daya larut yang tinggi dan pelarut tidak berbahaya atau beracun. Pelarut yang paling aman adalah aseton, etil diklorida, etanol, heksana, isopropylalkoholdan metanol. Secara umum ekstrasi dilakukan secara berturut turut mulai dengan pelarut non polar (n-heksan) lalu pelarut yang kepadatannya menengah (diklorometan atau etil asetat) kemudian pelarut yang bersifat polar (metanol atau etanol).Menurut Purwanti (2009), metanol termasuk dalam menstrum (agen ekstraksi) golongan alkohol. Alkohol yang biasanya digunakan sebagai menstrum dalam ektraksi adalah golongan alkohol rendah atau yang memiliki rantai atom C pendek seperti metanol, etanol, propanol, dan butanol. Metanol lebih polar dibandingkan dengan etanol karena memiliki jumlah atom C yang lebih sedikit, sehingga senyawa yang terikat oleh kedua pelarut tersebut memilki tingkat kepolaran yang berbeda. Akan tetapi kedua pelarut tersebut termasuk golongan alkohol yang pada umunya bersifat non polar. Senyawa yang diikat oleh etanol lebih bersifat non polar dibandingkan senyawa yang terikat oleh metanol. Pada pelarut alkohol ini senyawa yang berkhasiat obat banyak tertarik atau terlarut.Menurut Andriyani (2009). Beberapa pelarut organik dan fisiknya dapat dilihat pada tabel 2.Tabel 3. Sifat-sifat PelarutPelarut Titik didih (0C) Titik beku Konstanta dielektrik bebyeDietil ester 35 -116 4,3Karbon disulfider 46 -111 2,6Aseton 56 -95 20,7Khlroform 61 -64 4,8Metanol 65 -98 32,6Terrahidrofaran 66 -65 7,6Di-iso propil eter 68 -60 3,9N-neksan 69 -94 1,9Karbontirraklorida 76 -23 2,2Etil asetat 77 -84 6,0Etanol 78 -117 24,3Benzena 80 5,5 2,3Sikloheksana 81 5,5 2,0Isopropanol 82 -8,9 18,3Air 100 0 78,5Dioksan 102 12 2,2Toluena 111 -95 2,4Asam asetat glacial 118 17 6,2M,N dimetil formanida 154 -61 34,8Dietilenaglikol 245 -10 37,7Sumber : Nur dan adijuwana (1989)2.7 Uji Aktvitas Senyawa AntioksidanMenurut Wulandari (2009), metode lain yang dapat mengukur potensi penangakap radikal antara lain:a. Pengujian akivitas antioksida dengan sistem linoneat tiolanatAsam linoneat merupakan asam lemak tak jenuh dengan 2 buah ikatan rangkap yang mudah mengalami oksidan membentuk peroksida. Peroksida ini selanjutnya mengoskidasi ion fero menjadi ion feri yang kemudian bereaksi dengan ammonium tiosianat membentuk kelompok feritiosianat (Fo(SCH)3).b. Pengujian dengan asam thiobarbiturat (TBA)Pengujian ini berdasarkan adanya malanoldehid yang terbentuk dalam asam lemak bebas tak jenuh dengan paling sedikit mempunyai tiga ikatan rangkap dua. Malanoldehid selanjtunya bereaksi dengan asam blubarbi turat membentuk produk homogen yang berwarna merah yang dapat diukur pada panjang gelombang 532 mm.c. Pengujian dengan sistem karoten linoleat pengujian ini, dilakukan dengan mengamati kecepatan terjadinya pemucatan warna karoten selain ini juga dilakukan dengan bilangan pora ansiclin dan pengujian dengan bilangan oktanoat.Metode yang paing sering digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan tanaman obat adalah metode uji dengan menggunakan radikal bebas DPPH. Tujuan metode ini adalah mengetahui parameter konsentrasi ekuivalen memberikan 50% efek aktivitas antioksidan (IC50). Hal ini dapat dicapai dengan cara menginterpresentasikan data eksperimental dari metode tersebut Metode DPPHMenurut Wulandari et al., (2009), senyawa DPPH adalah radikal bebas yang stabil berwarna ungu. Ketika direduksi oleh antioksidan akan berwarna kuning (difenil pikril hidrazil). Metode DPPH berfungsi untuk mengukur elektron tunggal seperti aktivitas transfer H-. Sekalian juga untuk mengambat radikal bebas, campuran reaksi berupa larutan sampel yang dilarutkan dalam metanol absolut dan di inkubasi pada suhu 37 0C selama 30 menit dibaca panjang 517 nm. Hasil perubahan warna ungu menjadi kuning slukiometrik dengan jumlah elektron yang ditangkap. Metode ini sering digunakan untuk mendeteksi kemampuan anti radikal suatu senyawa sebab hasil deteksi kemampuan anti radikal suatu senyawa sebab hasil terbukti akurat retiabel dan praktis. Selain itu sederhana cepat dan memerlukan sedikit sampel.Metode yang paling sering digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan tanaman obat adalah dengan menggunakan radikal bebas DPPH. Tujuan metode ini adalah mengetahui parameter konsentrasi yang ekuivalen dengan cara efek aktivitas (IC50). Hal ini dapat dicapai dengan cara menginterpresentasikan data eksperimental dari metode tersebut. DPPH merupakan radikal bebas yang dapat bereaksi dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat berguna untuk pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu ekstrak (Edhisambada, 2011) Menurut Astuti (2009), DPPH adalah radikal bebas yang stabil berwarna ungu ketika direduksi oleh radikal akan berwarna kuning. Metode DPPH berfungsi untuk mengukur elektron tunggal seperti aktivitas transfer hidrogen sekalian juga untuk mengukur aktivitas penghambat radikal bebas.Menurut Suryaningrum (2006), uji aktivitas antioksidan dengan menggunkan metode 1,1 diphenil, 2 pikrilhidrazil (DPPH) terhadap edible sampel seperti noni, kumbu, wakane dan nijiki menunjukkan bahwa rumput laut tersebut mengandung antioksidan yang cukup tinggi. Kandungan antioksidan pada rumput laut terutama terhadap berupa senyawa antioksidatif polifenol Kandungan Kimia Sargassum policystum.Menurut Praniato (2009), Sargassum policystum menghasilkan alginat. Alginat merupakan senyawa organik kompleks yang berbentuk dari polimer asam D mannunonat yang terdiri dan B-D mannurunat sehingga membentuk rumus (C6H12O6)n. Alginat berfungsi sebagai pemeliharaan bentuk jaringan pada makanan asam alginat tidak larut dalam air, tetapi akan mengembang sehingga dapat dimanfaatkan sebagai blinder. Selain mengandung saat yang tinggi dan saat bermanfaat bagi tubuh. Sargassum policystum juga mengandung beberapa unsur makromineral dan mikromineral seperti yang magnesium, kalsium, kalium, tembaga, seng, zat besi yang semuanya sangat bermanfaat bagi kelangsungan metabolisme.Rumput laut coklat adalah salah satu komoditi laut yang melimpah dan memilki potensi tinggi karena kandungannya, namun masih sedikit upaya yang dilakukan untuk memanfaatkan potensi rumput laut coklat sargassum yang potensial untuk bahan obat obatan adalah sargassum polityscum karena mengandung iodium, protein, vitamin C dan mineral sepertiCa, K, Mg, Na, Fe, Cu, Zn, S, P, dan Mn, antibakteri antikuman, sumber alginat. Fenol dan auxin serta zat merangsang pertumbuhan dan zat yang dapat mengontrol logam berat (Yuwanita, 2011).Alginat adalah salah satu jenis polisakarida yang terdapat dalam dinding sel alga coklat dan memegang peranan penting dalam mempertahankan struktur jaringan sel alga. Jenis alga coklat sebagai sumber bahan baku alginat berbeda beda disetiap negara produsen (Rasyid, 2010).Menurut Purba dan Nugroho (2007), Flavonoid adalah senyawa yang mengandung karbon C15 atas dua inti fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon cincin A yang memilki karakteristik bentuk hidrolisasi phloroglusinol atau revosinol dan cincin B biasanya 4, 3, 4 atau 3, 4, 5 terhidroksilasi. Pada tanaman tingkat tinggi, flavonoid terdapat pada semua bagian tumbuhan seperti akar, kayu, kulit, batang, daun, tepung sari, bunga, buah dan biji. Adapun alkoloid merupakan senyawa basa yang mengandung atom nitrogen pada heterosiklik. Alkaloid tersebar luas didunia tumbuhan. Alkaloid biasanya tanwarna, seringkali bersifat optis aktif dan kebanyakan berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotina) pada suhu kamar. Sedangkan senyawa fenol meliputi aneka ragam senyawa yang berasal dari tumbuhan, yang mengandung satu atau gugus hidroksil. Senyawa fenol cenderung larut dalam air karena umumnya mereka seringkali berikatan dengan gula sebagai glikosida dan biasanya terdapat pada vakuola sel.Menurut Hayati et al., (2010), tanin merupakan suatu senyawa fenol yang memilki berat molekul besar yang terdiri dari gugus hidroksi dan beberapa gugus yang bersangkutan seperti karboksi untuk membentuk kompleks kuat yang efektif dengan protein dan beberapa makromolekul.

3. METODE PRAKTIKUM3.1 Materi Praktikum3.1.1 Bahan Praktikum3.1.1.1 Sampel masing-masing KelompokPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium sampel yang digunakan diantaranya:- Sargassum duplicatum : digunakan sebagai sampel yang akan di uji antidioksidanya pada kelompok 1 dan 2 dengan suhu yang berbeda dengan kelompok 2 yaitu suhu rendah 40 C dan suhu ruang 270 C pada kelompok 1.- Sargassum polycystum : digunakan sebagai sampel yang akan digunakan di uji antidioksidanya pada kelompok 3 dan 4 dengan yang berbedea, kelompok 3 dengan suhu renda 40 C dan suhu ruang 270 C pada kelompok 4.- Teh : digunakan sebagai sampel yang akan digunakan di uji antidioksidanya pada kelompok 5 dan 6 dengan yang berbedea, kelompok 5 dengan suhu renda 40 C dan suhu ruang 270 C pada kelompok 6.3.1.1.2 Bahan Pelarut MaserasiPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium bahan pelarut maserasi yang digunakan diantaranya:- Metanol : digunakan sebagai pelarut yang sifat polarMenurut Hikmah dan Zuliyana (2010), metanol juga dikenal sebagai metal alkohol, wood alkohol atau spirtus, adalah senyawa kimia dengan rums kimia CH3OH. Metanol merupakan bentuk senyawa paling sederhana. Pada keadaan atmosfer, metanol cairan yang ringan, mudah menguap, mudah terbakar, dan beracun dengan bau yang khas (berbau lebih ringan dari pada etanol). Metanol digunakan sebagai bahan pendingin anti beku, pelarut, bahan bakar dan sebagai bahan additive bagi etanol industri.Pelarut metanol digunakan untuk mengambil komponen dengan berbagai tingkat kepolaran, sehingga komponen kimia dengan kepolaran yang rendah sampai yang tertinggi bias terekstrak semua. Glikosidanya dalam tumbuhan dapat ditarik dengan pelaru-pelarut organik yang bersifat polar seperti metanol dan etanol. Penggunaan pelarut metanol untuk mengambil semua komponen baik yang bersifat polar maupun non polar (Marsetya, 2009).Pelarut yang digunakan dapat melarutkan zat yang diingkannya, mempunyai titik didih yang rendah, murah tidak toksik dan tidak mudah terbakar. Kebanyakan pelarut organik biasa digunakan saat ini diketahui bersifat toksik dan berbahaya. Etanol dan metanol adalah sejenis cairan ringan yang mudah menguap dan terbakar. Tapi, pemilihan pelarut perlu dipertimbangkan untuk mendapatkan zat kimia tertentu yang diinginkan. Pelarut metanol mampu mengekstrak senyawa alkualid kuartener, kompos fenolik, karotenoid dan tannin (Andryanti, 2002).3.1.1.3 Bahan Uji DPPH dan FitokimiaPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium bahan bahan yang diuji DPPH dan Fitokimia diantaranya:- Metanol 100 ml : digunakan sebagai pelarut yang bersifat polar- Larutan DPPH : digunakan segai indicator untuk menguji ada tidaknya senyawa antioksidan- Aluminium foil : digunakan untuk menutup botol vial agar tidak terjadi oksidasi- Kertas label : digunakan untuk member tanda pada tiap perlakuan- Air : digunakan untuk mencuci perlatan yang selesai digunakanPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium bahan bahan yang diuji DPPH dan Fitokimia diantaranya1. Uji Flavonoid, bahan yang digunakan diantaranya:- ekstraksi Sargassum polycystum : digunakan sebagai sampel yang akan diuji flavonoidnya.- Serbuk Mg : digunakan untuk meningkatkan warna pada uji flavoid.- HC pekat : digunakan untuk menghidrolisis flavonoid, sehingga terjadi perubahan warna.- Kertas label : digunakan untuk member tanda pada tiap perlakuan.- Air : digunakan untuk mencuci alat yang sudah dipakai.- Tissue : digunakan untuk mengeringkan alat setelah dicuci.2. Uji Alkohol Meyer, bahan-bahan yang digunakan diantaranya:- ekstrak Sargassum polycystum : digunakan sebagai sampel yang akan diuji alkaloidnya.- Metanol : digunakan sebagai pelarut yang bersifat polar.- Air : digunakan untuk mencuci alat yang sudah dipakai.- Tissue : digunakan untuk mengeringkan alat setelah dicuci.- Pereaksi Meyer : digunakan sebagai pereaksi pengendap untuk alkohol.3. Pereaksi Meyer, bahan-bahan yang digunakan diantaranya:- HgC2 1,36 gr : digunakan sebagai bahan pembuat pereaksi meyer.- Aquadeast : digunakan untuk menghomogenkan larutan- Kl 5 gr : digunakan sebagai bahan pembuat pereaksi meyer danwager- Air : digunakan untuk mencuci alat yang sudah dipakai.- Tissue : digunakan untuk mengeringkan alat setelah dicuci.4. Uji Alkohol Meyer, bahan-bahan yang digunakan diantaranya:- Sargassum polycystum : digunakan sebagai sampel yang akan diuji alkaloidnya.- Metanol : digunakan sebagai pelarut yang bersifat polar.- FeC3 1% : digunakan sebagai bahan pembuat pereaksi meyer- Air : digunakan untuk mencuci alat yang sudah dipakai.- Tissue : digunakan untuk mengeringkan alat setelah dicuci.3.1.2 Alat-alat Praktikum3.1.2.1 Alat-alat EkstraksiPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium mengenai alat-alat yang digunakan diantaranya:- Camera digital : digunakan untuk membantu mendokumentasikan tiap perlakuan.- Gunting : digunakan untuk mencacah sampel.- Timbangan digital : digunakan untuk menimbang sampel dengan ketelitian 0, 01 gram.- Erlenmeyer : digunakan untuk meletakkan sampel dan larutan.- Corong : digunakan untuk membantu penyaringan dan memasukkan larutan dalam beaker glass.- Beaker glass : digunakan untuk tempat larutan sementara saat penyaringan.- Gelas ukur 100 ml : digunakan untuk membantu mengukur aquades yang dibutuhkan.- Nampan : digunakan untuk tempat meletakkan alat-alat.- Rotary evaporator : digunakan untuk menguapkan pelarut hasil ekstraksi- Baskom : digunakan untuk tempat mencuci sargassum policystum.- Kipas : digunakan untuk membantu mengeringkan sargassum policystum yang telah dicuci.3.1.2.2 Alat-alat DPPHPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium mengenai DPPH alat-alat yang digunakan diantaranya:- Beaker glass 250 ml : digunakan untuk tempat larutan sementara- Pipet volume 5 ml : digunakan untuk membantu mengambil larutan- Bola hisap : digunakan untuk membantu mengambil larutan dan pipet volume- Corong : digunakan untuk membantu penyaringan dan memasukkan larutan dalam beaker glass.- Botol vial : digunakan untuk tempat ekstrak sampel- Incubator : digunakan untuk menginkubasi dengan suhu 300 C selama 30 menit- Beaker glass 100 ml : digunakan untuk tempat larutan sementara.3.1.2.3 Alat-alat FitokimiaPada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium mengenai Fitokimia alat-alat yang digunakan diantaranya:- Tabung reaksi : digunakan untuk meletakkan sampel- Rak tabung reaksi : digunakan untuk meletakkan tabung reaksi- Pipet volume 5 ml : digunakan untuk membantu mengambil larutan- Bola hisap : digunakan untuk membantu mengambil larutan dan pipet volume- Timbangan digital : digunakan untuk membantu menimbang sampel yang dibutuhkan dengan ketelitian 0,01 gr- Spatula : digunakan untuk mengambil serbuk Mg.3.2 Materi Praktikum3.2.1 Metode EksperimenMetode eksperimen adalah prosedur penelitian yang dilakukan untuk mengungkapkan hubungan sebab dan akibat dua variabel atau lebih, dengan mengendalikan pengaruh variabel yang lain. Metode ini dilaksanakan dengan membahas secara sengaja (bersifat induse) kepada objek penelitian untuk mengetahui akibatnya di dalam variabel terikat (Zulnaidi, 2007).Pada praktikum Metode Analisa Manajemen Laboratorium yang telah dilaksanakan menggunakan metode eksperimen. Karena praktikum ini bertujuan untuk mengetahui uji antidioksida pada sampel sargassum policystum dengan perlakuan yang berbeda, serta mengetahui kandungan antidioksida pada sargassum policystum. Sehingga bermanfaat untuk kesehatan dan industri pangan.Menurut Megasari (2009), kelebihan metode eksperimen:- Menambah keaktifan untuk berbuat dan memecahkan sendiri sebuah permasalahan- Dapat melaksanakan metode ilmiah dengan baik Kekurangan metode eksperimen:- Tidak semua mata pelajaran dapat menggunakan metode ini- Murid yang kurang mempunyai daya intelektual yang kurang baik hasilnya.Metode yang digunakan adalah metode eksperimen, yaitu suatu metode mengadakan kegiatan percobaan untuk melihat suatu hasil atau hubungan kasual antara variabel-variabel yang diselidiki. Tujuan eksperimen adalah untuk menemukan hubungan sebab dan akibat antara variabel. Penelitian eksperimen adalah penelitian yang dilakukan dengan mengadakan manipulasi terhadap objek penelitian serta adanya konisol (Purwitasari, 2011).Proses penelitian ini menggunakan metode eksperimen menurut Arikunto (2002) dalam Firdaus (2009), adalah suatu cara untuk mencari hubungan sebab akibat (hubungan kasual) antara dua factor yang sengaja ditimbulkan dengan mengeliminasi, mengurangi dan menyisihkan factor-faktor lain yang mengganggu. Eksperimen ini selalu dilakukan dengan maksimal dengan maksud untuk melihat akibat dari suatu perlakuan.3.2.2 Variabel PraktikumMenurut Suryabrata (1989) dalam Yuniarto (2007). Variabel merupakan segala sesuatu yang akan menjadi variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas adalah variabel yang dipilih sebagai variabel yang sengaja dipelajari pengaruhnya terhadap variabel terikat, sedangkan variabel terikata dalah variabel yang menjadi pusat persoalan. Variabel penelitian dapat dibedakan menjadi: (1) variabel bebas (independent variabel), (2) variabel terikat (dependent variabel). Dalam hal ini sifat hubungannya adalah hubungan kausalitas.variabel bebas juga sering disebut variabel antecedent dan variabel terikat disebut qonsequent. Variabel bebas adalah variabel yang oleh peneliti diperkirakan menjadi penyebab munculnya atau berubahnyavariabel terikat. Sedangkan variabel terikat adalah variabel yang terjadi atau muncul atau berubah karena mendapat pengaruh atau disebabkan oleh variabel bebas. Diantara hubungan antara variabel bebas dan variabel terikat tersebut terdapat variabel-variabel perantara (moderator), variabel pengganggu (intervening variable) dan variabel lain (control variable) (Kartika, 2008).Variabel bebas yang digunakan dalam penelitian ini adalah suhu rendah (40C) dan suhu ruang (270C). sedangkan variabel terikat digunakan dalam penelitian ini adalah sargassum duplicatum, sargassum policystum dan teh.3.2.3 Rancangan PraktikumRancangan praktikum uji DPPH yang digunakan yaitu Rancangan Acak Lengkap (RAL) sederhana dengan dua perlakuan berbeda dimana sampel yang digunakan berbeda, masing-masing perlakuan diulang sebanyak 3 kali dan diuji daya hambatnya pada suhu maserasi yang berbeda yaitu suhu ruang (27 0C) dan suhu rendah (4 0C).Menurut Bambang (2005), dalam RAL tidak ada control lokasi yang diamati hanya pengaruh perlakuan dan galat saja. Sesuai untuk meneliti masalah yang kondisi lingkungan data bahan dan medianya homogeny atau untuk kondisi heterogen yang khususnya tidak memerlukan control local.Setelah didapatkan data dilakukan analisa data. Menurut Yitno Sumarno (1993) dalam Yuniarto (1993). Analisa data dapat memberikan jawaban gugus data mempunyai atau mengikuti sebaran tertentu atau bias tersebut berasal dari populasi yang sama atau tidak. Pengolahan data hasil praktikum menggunakan Analisa Sidik Ragam (Anova).Tabel 4 . Rancangan acak lengkapSampel Ulangan Rerata1 2 3A1A2PerlakuanA1 = suhu ruangA2 = suhu rendah3.3 Prosedur Praktikum3.3.1 Proses Ekstraksi3.2.2 Uji Antioksidan (DPPH)3.3.3 Uji Fitokimia3.3.3.1 Uji Flavonoid3.3.3.2 Uji Alkaloid dengan Pereaksi Mayer3.2.4 Parameter UjiParameter uji yang dilaksanakan adalah parameter kuantitatif pada hasil perhitungan IC50 dimana senyawa antioksidan berhasil memberikan penghambatan 50% karakter radikal bebas yang diekstraksi sampel. Hasil identifikasi fitokimia berupa senyawa Flavonoid, alkaloid dan total fenol. Menurut Hernani (2009), senyawa-senyawa kimia bahan alami mempunyai efek potensial untuk potensi kesehatan karena adanya campuran kompleks senyawa biokimia. Fungsi senyawa kimia tersebut sebagai substrak dalam reaksi stabil atau kofaktor dari enzim metabolik.3.2.5 Analisa DataUntuk mengetahui pengaruh perlakuan terhadap respon parameter yang diukur dilakukan analisa keragaman (ANOVA) dengan uji F pada taraf 5% dan 1% jika terhadap hasil yang berbeda nyata maka dilakukan uji BNT pada taraf 5% untuk mengetahui perlakuan terbaik dalam hal suhu maserasi yang digunakan.Menurut Yitno Sumarno (1993), dalam Yuniarto (1993), analisis data dapat memberikan jawaban gugus data mempunyai atau mengikuti sebaran tertentu atau bias mempunyai dua atau lebih contoh, maka dapat menunjukkan apakah data tersebut berasal dari populasi yang sama atau tidak. Sedangkan berdasarkan data pada hasil praktikum dapat dianalisis dengan analisa sidik ragam (Anova).4. PEMBAHASAN4.1 Hasil dan PembahasanPada praktikum Metode Analisa dan Manajemen Laboratorium pada proses ekstraksi dengan sampel sebanyak 50 gr dengan perbandingan antara sampel dengan pelarut yaitu 1:3 pada suhu pengkondisian yang pertama ekstraksi sampel dilakukan pada suhu ruang ( 27 0C) selama 324 jam, dan yang kedua dilakukan pada suhu rendah ( 4 0C) selama 324 jam. Ekstrak yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan menggunakan Rotary Evaporator pada suhu 40 0C. penggunaan suhu pada saat proses evaporasi dilakukan dibawah titik didih. Menurut Sudarmadji et al., (2003), suhu yang digunakan untuk pemekatan dengan menggunakan Rotary Evaporator sebaiknya dibawah titik didih pelarut, hal ini untuk mencegah terjadinya kerusakan komponen yang terkandung dalam ekstrak. Hasil ekstraksi dari Sargassum Polycystum dengan pelarut methanol bisa dilihat pada gambar dibawah ini.Gambar . Hasil ekstrak pada Gambar . Hasil ekstrak padaSuhu ruang (27 0C) Suhu rendah (4 0C)Bentuk dan warna ekstrak pelarut methanol pada suhu ruang (27 0C) dan suhu rendah (4 0C) setelah dievaporasi dengan Rotary EvaporatorTabel 5. Hasil Proses EvaporasiPelarut Hasil Proses EvaporasiSuhu 27 0C Suhu 4 0CBentuk Warna Bentuk WarnaMetanol Cair, terdapat endapan hitam Hijau kecoklatan Cair, sedikit terdapat endapan hitam Hijau kecoklatan4.1.1 ReandemenRendemen praktikum Metode Analisa dan Manajemen Laboratorium diperoleh perhitungan rendemen pada sampel, pada kelompok 3 dengan sampel Sargassum Polycystum yang diperoleh berat awal sebanyak 50 gr, dengan perlakuan suhu ruang (27 0C), setelah dilakukan ekstraksi sampel ditimbang untuk mendapatkan berat akhir. Berat akhir diperoleh sebanyak 32,74 gr, serta didapatkan pula rendemen ekstrak sebesar 65,48 %. Nilai rendemen ekstrak dinytakan dalam persen (%). Pada perlakuan suhu rendah (4 0C) dengan sampel Sargassum Polycystum diperoleh berat awal sebanyak 50 gr, setelah dilakukan ekstraksi sampel ditimbang untuk mendapatkan berat akhir. Berat akhir diperoleh sebanyak 35,70 gr, serta diperoleh hasil rendemen ekstrak sebesar 71,4%Tabel 6. Rendemen ekstrak Sargassum Polycystum pada suhu ruang (27 0C)Pelarut Berat Awal (gr) Berat Akhir (gr) % RendemenMetanol 50 gr 32,74 gr 65,48 %Tabel 7. Rendemen ekstrak Sargassum Polycystum pada suhu rendah(4 0C)Pelarut Berat Awal (gr) Berat Akhir (gr) % RendemenMetanol 50 gr 35,70 gr 71,4 %Diketahui dari hasil esktrak Sargassum Polycystum diperoleh % rendemen tertinggi pada suhu rendah yaitu 71,4%. Rendemen ekstrak senyawa bioaktif antioksidan yang diperoleh sampel Sargassum Polycystum pada suhu ruang (27 0C) dengan pelarut methanol didapatkan hasil pemekatan yang sempurna, yaitu berupa ekstrak kental. Hal ini berbeda jika dibandingkan dengan sampel Sargassum Polycystum yang diekstraksi pada suhu rendah (4 0C) dengan menggunakan pelarut yang sama, ekstrak yang didapatkan tidak kental karena masih berupa campuran antara ekstrak dan cairan yang bisa berupa pelarut ataupun berupa air. Timbulnya air diduga disebabkan oleh suhu rendah yang digunakan pada saat proses ekstraksi yang menyebabkan terjadinya pengembunan sehingga air dimungkinkan masuk kedalam tempat terjadinya proses ekstraksi, sehingga berpengaruh pada hasil ekstraksi dan evaporasi. Menurut Tensiska et al., (2007), kandungan air yang tinggi pada hasil ekstraksi akan membuat proses pemekatan menjadi sulit karena air memiliki titik didih yang lebih tinggi dibandingkan pelarut organic yang digunakan.4.2 Uji Aktivitas Antioksidan4.2.1 Uji Aktivitas Pada Suhu Ruang ( 27 0C)Pangujian senyawa aktivitas antioksidan pada Sargassum Polycystum dilakukan dengan menggunakan metode DPPH karena mudah, cepat, peka serta hanya memerlukan sedikit sampel. Menurut Sunarni et al., (2005), prinsip uji dengan metode ini yaitu DPPH berperan sebagai radikal bebas yang diredam oleh antioksidan dari bahan uji, dimana DPPH akan bereaksi dengan antioksidan tersebut membentuk 1,1-difenil-2-pikrilhidrazyl. Reaksi ini menyebabkan perubahan warna dari ungu pekat menjadi kuning atau kuning gelap yang dapat diukur dengan spektrofotometer VV-Vis pada gelombang 517 nm, sehingga aktivitas peredaman radikal bebas oleh sampel dapat ditentukan. Ditambahkan oleh Edhi Sambada (2011), DPPH merupakan radikal bebas yang dapat direaksikan dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hydrogen, dapat berguna untuk pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu ekstrak.Hasil pengujian aktivitas antioksidan dari ekstrak Sargassum Polycystum yang diekstraksi dengan pelarut methanol pada suhu ruang dapat dilihat pada table berikut :Tabel 8. Persamaan regresiSampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi % inhibisi Rata-rata1 2 3 1 2 3SargassumPolycystum 200 0,33 0,25 0,31 61,63 70,93 63,95 65,50100 0,40 0,32 0,37 53,49 62,79 56,98 57,7550 0,42 0,40 0,37 51,16 53,46 56,98 57,7525 0,49 0,49 0,42 43,02 48,83 51,16 51,62Persamaan Regresi Nilai IC50 Rata-rata1 2 3 1 2 3Y=0,244x+25,02 Y=0,266x+27,23 Y=0,21x+29,50 111,52ppm 85,60ppm 94,47,47ppm 102,955ppmHasil perhitungan rata-rata persentase penghambatan (%inhibisi) menunjukkan bahwa ekstrak Sargassum Polycystum yang diekstraksi dengan pelarut methanol pada suhu ruang didapatkan rata-rata % inhibisi terendah pada konsentrasi 25 ppm yaitu 51,62%, sedangkan rata-rata % inhibisi tertinggi pada konsentrasi 200 ppm yaitu 65,50%, jadi semakin tinggi pada konsentrasi ekstrak Sargassum Polycystum yang digunakan maka dihasilkan persentase penghambatan radikal bebas (% inhibisi) yang tinggi pula.Hasil perhitungan IC50 didapatkan garis persamaan garis yang diperoleh dalam bentuk y=6