aktivitas inhibisi tirosinase dari ekstrak etanol …repository.ump.ac.id/6676/1/siti...
TRANSCRIPT
1
AKTIVITAS INHIBISI TIROSINASE DARI EKSTRAK ETANOL
BUNGA KEMBANG SEPATU (Hibiscus rosa-sinensis L)
SKRIPSI
Untuk memenuhi sebagian persyaratan
Mencapai Derajat Sarjana S-1
SITI NURYANTI
0908010033
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO
PURWOKERTO
2013
2
ii
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
3
iii
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
4
PERNYATAAN
Yang bertanda tangan dibawah ini, saya :
Nama : Siti Nuryanti
NIM : 0908010033
Program studi : Farmasi
Fakultas/Universitas : Farmasi/Universitas Muhammadiyah Purwokerto
Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi ini adalah hasil dari proses
penelitian saya yang telah dilakukan sesuai dengan prosedur penelitian yang benar
dengan arahan dari dosen pembimbing dan bukan hasil penjiplakan dari hasil karya
orang lain atau terdapat karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar
kesarjanaan disuatu perguruan tinggi, dan sepanjang pengetahuan penulis juga tidak
terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan orang lain kecuali
yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Demikian pernyataan ini, apabila kelak dikemudian hari terbukti ada unsur
penjiplakan, maka saya bersedia mempertanggung jawabkan sesuai dengan ketentuan
yang berlaku.
Purwokerto, Agustus 2013
Yang menyatakan,
Siti Nuryanti
iv
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
5
ABSTRAK
SITI NURYANTI. Aktivitas Inhibisi Tirosinase Dari Ekstrak Etanol Bunga Kembang
Sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L)
Dibawah bimbingan BINAR ASRINING DHIANI dan INDRI HAPSARI
Latar Belakang: Paparan sinar UV yang berlebih dapat mengakibatkan efek awal
berupa pigmen kulit yang semakin gelap (pigment darkening) dan diikuti dengan
kerusakan struktur kulit yang menyebabkan premature photoaging (penuaan dini).
Pigmen gelap pada kulit disebabkan karena tubuh memproduksi melanin dalam
jumlah yang banyak. Proses pembentukan melanin dikatalisis oleh enzim tirosinase.
Penghambatan terhadap tirosinase dan senyawa antioksidan sangat diperlukan dalam
sediaan kosmetik. Ekstrak etanol bunga kembang sepatu telah diketahui memiliki
aktivitas antioksidan yang baik, tetapi belum pernah dilakukan penelitian terhadap
penghambatan tirosinase.
Tujuan Penelitian: Untuk menentukan aktivitas inhibisi tirosinase dan nilai dari
ekstrak etanol bunga kembang sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L).
Metode Penelitian: Jenis penelitian ini adalah eksperimental dengan rancangan
randomized block design dengan menguji konsentrasi ektrak etanol 50, 100, 200, 400
dan 800 µg/mL yang terlarut dalam DMSO terhadap aktivitas tirosinase. Penurunan
aktivitas tirosinase ditandai dengan menurunnya intensitas warna coklat dari
pembentukan dopakrom. Penurunan intensitas warna coklat dapat diukur
absorbansinya menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 490 nm.
Hasil: Uji penghambatan terhadap tirosinase menunjukkan bahwa ekstrak etanol
bunga kembang sepatu mempunyai aktivitas penghambatan yang rendah
dibandingkan dengan kontrol positif hidrokuinon. Nilai dari ekstrak etanol
bunga kembang sepatu yaitu 493,1 µg/mL sedangkan untuk hidrokuinon 16,34
µg/mL. Dari hasil uji analisis KLT menunjukkan ekstrak etanol bunga kembang
sepatu tidak mengandung senyawa kuersetin, arbutin dan asam galat yang merupakan
senyawa yang telah terbukti dapat menghambat aktivitas tirosinase.
Kesimpulan: Ekstrak etanol bunga kembang sepatu mempunyai aktivitas
penghambatan yang rendah dengan nilai yaitu 493,1 µg/mL sedangkan untuk
hidrokuinon 16,34 µg/mL
Kata Kunci : Bunga kembang sepatu, inhibisi tirosinase, L-DOPA.
v
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
6
ABSTRACT
SITI NURYANTI. Tyrosinase Inhibition Activity of Ethanol Extract Hibiscus Flower
(Hibiscus rosa-sinensis L)
Under Supervision ofBINAR ASRINING DHIANI and INDRI HAPSARI
Background:Excessive exposure to UV rays can lead to the early effects of a
pigment darkening and followed by structural damage which causes premature skin
photoaging (premature aging). Pigment darkening caused bymelanin production in
significant amounts. Melanin formationis catalyzed by the enzyme tyrosinase.
Tyrosinase inhibitorand antioxidant compounds isnecessary in the
cosmeticspreparation. Ethanol extract of Hibiscus flower has been known to be
antioxidant agent, but there was noscientific reportson its inhibition of tyrosinase
Objective: This research was aimed to determine the inhibitory activity of tyrosinase
and the value of the ethanol extract of hibiscus flower (Hibiscus rosa-sinensis L).
Methods: The study design was an experimental with randomized block design to
test the concentration of ethanol extract 50, 100, 200, 400 and 800 µg/mL dissolved
in DMSO ontyrosinase activity. Tyrosinase activity was by determined decreasing the
intensity of the brown color which represented dopachrom formation. Decrease in the
intensity of the color brown can be measured using a microplate reader with
wavelength 490 nm.
Result:The results showed that the inhibition of tyrosinase ethanol extracts of
hibiscus flowers have a low inhibitory activity compared to hydroquinone as positive
control. value of the ethanol extract of the hibiscus flower 493.1 µg/mL, while
for hydroquinone 16.34 ug / mL. TLC analysis showed that the ethanol extract of the
hibiscus flower did not containedquercetin, gallic acid, arbutin which was reported as
tyrosinase inhibitor.
Conclusion:The ethanol extract of the hibiscus flower has a low inhibitory activity
with the value of 493.1 µg/mL, while for hydroquinone 16.34 ug/mL
Keywords:Hibiscus flowers, inhibition of tyrosinase, L-DOPA.
vi
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
7
PERSEMBAHAN
Skripsi ini saya persembahkan kepada :
ALLAH SWT, atas segala kuasa dan kehendak_Nya skripsi ini dapat selesai pada
waktunya.
Ayah (abdul munir) dan ibu (Halimah), yang selama ini tak henti-hentinya
memberikan kasih sayang mereka, support dan dukungan baik moral maupun
materi.
Muhlisin, mba tanti, jiyan dan masitoh, trimakasih atas dukungannya selama ini.
Lita, anggun trimakasih atas dukungan dan doanya.
Teman seperjuanganku, oyi dan amel, trimakasih atas kerja
samanya,semangatnya selama penyusunan skripsi hingga skripsi ini selesai.
Untuk wina,trimakasih ya selama ini sudah mau mendengarkan keluh kesahku,
trimakasih juga telah ikut membantu mencarikan bahan-bahan untuk penelitian
skripsi.
Teman-teman farmasi angkatan 2009 dan juga teman-teman ASSASAINS yang
tidak bisa aku sebutkan satu persatu namanya. Trimaksih atas kebersamaannya
selama ini.
Untuk teman-teman fiumi kost, lisna, mba pipin, oyi, winda,nunu, rena, yuni
arbanga, yuni, winda, rina, marina, siska, nunung, mba otih, umu, inasa.
Trimakasih atas kebersamaanya di fiumi.
vii
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
8
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat ALLAH SWT atas segala rahmat,
hidayah serta inayahNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian (skripsi)
yang berjudul “AKTIVITAS INHIBISI TIROSINASE DARI EKSTRAK ETANOL
BUNGA KEMBANG SEPATU (Hibiscus rosa-sinensis L)”. Skripsi ini disusun
untuk memenuhi syarat dalam memperoleh gelar S1 di fakultas farmasi Universitas
Muhammadiyah Purwokerto.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak, penulis tidak
dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Oleh karena itu pada kesempatan ini
penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H. Rektor Universitas Muhammadiyah
Purwokerto
2. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si.,Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
3. Binar Asrining Dhiani, M.Sc.,Apt selaku dosen pembimbing I, yang telah
memberikan bimbingan, arahan dan petunjuk dalam penyusunan skripsi ini
dengan penuh kesabaran, ketekunan, sehingga dapat diselesaikan dengan baik.
4. Indri Hapsari, M.Si.,Apt selaku dosen pembimbing II, yang telah memberikan
petunjuk dan motivasi yang tinggi, sehingga penyusunan skripsi ini dapat
terlaksana hingga selesai.
5. Seluruh dosen Fakultas Farmasi UMP yang telah memberikan ilmunya sehingga
dapat membantu penulis dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini.
6. Seluruh laboran Fakultas Farmasi terutama Mas Mamat, Mas Heri dan Bu Titi
terima kasih atas waktu, bantuan dan bimbingannya.
7. Bapak dan Ibu karyawan TU Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
Purwokerto yang telah membantu dalam hal administrasi.
8. Kedua orang tuaku tercinta yang telah memberikan dukungan moral, material dan
spiritual.
viii
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
9
9. Teman-teman satu angkatan farmasi 2009 dan juga teman-teman ASSASAINS
terimakasih atas do’a, dukungan serta kebersamaannya selama ini dalam suka
maupun duka dan untuk semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per
satu, terimakasih atas semua bantuannya.
Penulis telah berusaha semaksimal mungkin agar penyusunan skripsi ini dapat
tersusun dengan sempurna, namun penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dari
berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak akan berjalan baik. Dengan segala
kerendahan hati dan lapang dada, penulis menerima kritik dan saran yang
membangun dari para pembaca untuk kesempurnaan di masa datang.
Purwokerto, 27 Agustus 2013
Penulis
ix
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
10
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN .......................................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................. iii
SURAT PERNYATAAN ................................................................................... iv
ABSTRAK ....................................................................................................... . .. v
ABSTRACT .............................................................................................. ........... vi
HALAMAN PERSEMBAHAN ......................................................................... vii
KATA PENGANTAR ...................................................................................... .. viii
DAFTAR ISI ....................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv
...............................................................................................................................
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah .................................................................. 1
B. Perumusan Masalah .......................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian............................................................................... 3
D. Manfaat Penelitian ............................................................................ 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 4
A. Kembang Sepatu .............................................................................. 4
1. Sistematika Tanaman .................................................................. 4
2. Morfologi .................................................................................... 5
3. Kandungan Kimia Bunga Kembang Sepatu ............................... 5
4. Aktivitas Farmakologi ................................................................ 5
B. Melanin.......................................................................................... .. 6
x
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
11
C. Inhibitor Tirosinase .......................................................................... 7
D. Hidrokuinon ..................................................................................... 8
E. Senyawa Inhibitor Tirosinase .......................................................... 9
1. Asam Galat ................................................................................. 9
2. Arbutin ....................................................................................... 9
3. Kuersetin .................................................................................... 9
BAB III METODE PENELITIAN ................................................................... 11
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ....................................................... 11
B. Variabel Penelitian .......................................................................... 11
C. Definisi Variabel Operasional .......................................................... 11
D. Waktu dan Tempat ........................................................................... 13
1. Waktu ......................................................................................... 13
2. Tempat ....................................................................................... 13
E. Bahan dan Alat .................................................................................. 13
1 . Bahan ......................................................................................... 13
2. Alat ............................................................................................. 13
F. Cara Penelitian ...................................................................... .......... 14
1. Pengambilan Simplisia .............................................................. . 14
2. Determinasi Tanaman ................................................................. 14
3. Pembuatan Ekstrak ..................................................... ................ 14
G. Analisis Kualitatif dengan Menggunakan KLT ............................... 14
1. Identifikasi Senyawa Kuersetin.................................................. 14
2. Identifikasi Senyawa Arbutin.................................................. .. 15
3. Identifikasi Senyawa Asam galat.................................................. 15
H. Uji Penghambatan Melanin............................................................... 15
4. Pembuatan Buffer Fosfat 0,05M….......................................... … 15
5. Pembuatan Larutan Tirosinase ..................................………….. 15
6. Pembuatan Larutan L-DOPA ................................ ………......... 15
7. Pembuatan Larutan sampel .......................................................... 16
xi
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
12
8. Pembuatan Larutan Kontrol Positif……………………………. 16
9. Pengujian aktivitas Inhibisi Tirosinase………………………… 16
H. Analisis Data ..................................................................................... 17
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................... ........................ 18
A. Determinasi Tanaman ..................................................................... 18
B. Pengolahan Simplisia Bunga Kembang Sepatu ............................... 18
C. Pembuatan Ekstrak Bunga Kembang Sepatu .................................. 19
D. Organoleptis Ekstrak ....................................................................... 20
E. Analisis Kualtitaif Dengan Menggunakan KLT....... ....................... 20
1. Identifikasi senyawa kuersetin....... ............................................ 20
2. Identifikasi Senyawa Asam galat............................................... 21
3. Identifikasi Senyawa Arbutin..................................................... 21
F. Uji Penghambatan Melanin ....... ..................................................... 21
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................ .... 28
A. Kesimpulan ....................................................................................... 28
B. Saran ................................................................................................ 28
DAFTAR PUSTAKA................................................................................. ......... 29
LAMPIRAN.......................................................................................................... 34
xii
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
13
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1 Persentase Inhibisi hidrokuinon dan ekstrak etanol bunga
kembang sepatu .................................................................................... 23
Tabel 2 Persentase rendemen ekstrak etanol bunga kembang sepatu ............... 38
xiii
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
14
DAFTAR GAMBAR
halaman
Gambar 1 Bunga kembang sepatu ..................................................................................... 4
Gambar 2. Skema pembentukan melanin ........................................................................... 7
Gambar 3. Hubungan log konsentrasi hidrokuinon dengan persen
inhibisi...............................................................................................................
25
Gambar 4. Hubungan log konsentrasi bunga kembang sepatu dengan
persen inhibisi ...................................................................................................
25
xiv
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013
15
DAFTAR LAMPIRAN
halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi tanaman bunga
kembang sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L) .............................. 35
Lampiran 2. Jalannya penelitian ................................................................... 37
Lampiran 3. Perhitungan rendemen ekstrak .................................................. 38
Lampiran 4. Perhitungan pembuatan buffer fosfat pH 6,8 ............................ 39
Lampiran 5. Perhitungan pembuatan larutan L-DOPA ................................ 41
Lampiran 6. Perhitungan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Bunga
Kembang Sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L) dan
Hidrokuinon .............................................................................. 42
Lampiran 7. Hasil absorbansi hidrokuinon dan ekstrak etanol
bunga kembang sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L) .................. 46
Lampiran 8. Perhitungan persentase inhibisi ................................................ 48
Lampiran 9. Hasil perhitungan ............................................................ 59
Lampiran 10. Dokumentasi ............................................................................ 61
xv
Aktivitas Inhibisi Tirosinase..., Siti Nuryanti, Fakultas Farmasi UMP, 2013