alat mikrobiologi

Pengenalan Alat dan Media

A. Alat

Untuk pemeriksaan mikrobiologi dilakukan peralatan, diantaranya sebagai berikut :

1. Mikroskop

a. Mikroskop cahaya

Gambar 1. Mikroskop monokuler

Gambar 2. Mikroskop biokuler

Bagian-bagian mikroskop cahaya :

Bagian statis : kaki mikroskop(base), tiang mikroskop, tangkai mikroskop(neck),

meja preparat(stage), makrometer(course focus), mikrometer(fine course),

pengatur meja preparat (coaxial stage controls)

Bagian optik : buluh teropong, lensa obyektif, lensa okuler(eyepiece)

Alat penerangan : lampu, diafragma, kondensor

Cara pemakaian mikroskop cahaya:

1. Membersihkan lensa dan cermin

2. Melihat sumber cahaya

3. Mencari medan penglihatan

4. Memasang preparat

5. Mengatur fokus

6. Paska penggunaan

Untuk pemeriksaan mikrobiologi digunakan pembesaran antara 600-1000 kali (lensa

okuler pembesaran 6 atau 10, lensa obyektif 100kali).

Untuk cara ini dibutuhkan

Minyak emersi

Lensa obyektif harus terendam dalam minyak emersi

Kondensor dinaikkan maksimal

Diagfragma dibuka selebar-lebarnya

b. Mikroskop lapangan gelap/dark field: Mikroskop ini digunakan untuk melihat sediaan

basah. Bakteri masih hidup sehingga dapat dilihat pergerakannya yang khas. Bakteri

tampak terang latar belakang yang gelap.

c. Mikroskop elektron

Dengan menggunakan seberkas elektron yang difokuskan dengan magnet maka

mikroskop elektron dapat menampakkan partikel-partikel secara terpisah yang terletak

kurang 0,001m satu terhadap yang lain. Virus dari garis tengah < 0,001- 0,2 m dapat

dengan mudah dilihat secara terpisah satu sama lainnya.

d. Mikroskop fase

Yang mendasari mekanisme cara kerja mikroskop adalah kenyataan bahwa gelombang

cahaya yang melalui benda-benda tembus cahaya, seperti sel, akan keluar lagi dengan

fase-fase yang berlainan tergantung pada sifat bahan yang dilalui. Suatu sistem optik

khusus dapat merubah perbedaan fase ini ke dalam perbedaan intensitas, sehingga

beberapa struktur terlihat lebih gelap dari yang lainnya, sehingga dapat digunakan untuk

memeriksa sel/bakteri hidup tanpa harus diwarnai terlebih dahulu.

2. Autoclave

Alat ini digunakan untuk mensterilkan bahan/alat/media dengan cara pemanasan basah

(moist heat)

Cara sterilisasi menggunakan autoclave (temperature 1210C selama 15 menit)

Isi autoklaf dengan aquades secukupnya(4-5cm)

Masukkan sampel yang akan disterilkan kedalam

dandang bagian dalam.

Penutup autoklaf diolesi vaselin tipis pada bagian luar

yang akan menempel di badan autoklaf, kemudian

tutuplah autoklaf dengan rapat, anak panah pada penutup

harus bertemu dengan garis di badan autoklaf.

Buka katup klep (posisi tegak lurus).

Nyalakan kompor atau listrik, tunggu sampai klep mengeluarkan uap dan mulai hitung

selama lima menit, kemudian tutuplah katup hingga posisi horizontal.

Tunggu sampai jarum menunjukkan angka 15 PSI (1210C), biarkan pada posisi tekanan

15 PSI selama 15 menit. Setelah itu matikan listrik atau api lalu buka klep.

Penutup autoklaf jangan dibuka dulu sebelum semua uap keluar.

Setelah itu buka penutup autoklaf.

3. Hot air sterilizer

Fungsi : untuk mensterilkan alat dengan cara pemanasan kering (dry heat). Untuk sterilasi

* 1600C selama 60 menit



4. Incubator

Fungsi :

Untuk mengeramkan mikroorganisme yang telah ditanam

pada media kultur.

Untuk menyimpan bahan pemeriksaan/spesimen

Untuk uji sterilisasi

5. Inspirator/koagulator

Fungsi : untuk memadatkan dan mensterilkan media yang mengandung protein dengan cara

pemanasan basah dimana media tersebut tidak dapat disterilkan dengan autoklaf, misalnya

pada media Loeffler atau PAI dan media LJ (Lowenstein jensen)

6. Refrigerator

Fungsi :

Menyimpan media steril yang siap pakai agar isi dan mutu media tersebut tidak

rusak/berubah

Menyimpan untuk sementara waktu bahan/spesimen yang belum sempat diperiksa

agar tidak mengalami perubahan.

Menyimpan cakram antibiotika yang belum dipakai agar tidak berubah

Menyimpan stok mikroorganisme.

7. Alat-alat lainnya

a. Timbangan

Mechanical scales (Neraca ohauss) Analytical scales

b. Colony counter

c. Centrifuges

d. Vortex

e. Anaerobic jar

f. Rak pewarnaan

g. Ose

h. Cawan petri

i. Glass beaker

j. Obyek glass & cover glass

k. Micropipette

l. Stirrer

m. Pipet Pasteur

n. Tabung

o. Jangka sorong

p. Pipet filler/Rubber bulb

B. Media

Dalam pemeriksaan laboratoris mikrobiologi penggunaan media sangat penting untuk

isolasi, identifikasi maupun diferensiasi. Sedangkan media kultur adalah adalah beberapa

nutrisi baik organik maupun anorganik yang dapat dalam bentuk cair, semi solid dan padat

yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Untuk mendapatkan suatu lingkungan

kehidupan yang cocok bagi pertumbuhan bakteri, maka syarat-syarat media, pembuatan

media harus memenuhi beberapa hal dibawah ini :

1. Susunan makanan

Dalam suatu media yang digunakan untuk pertumbuhan bakteri haruslah ada :

a. Air

b. Nitrogen

c. Sumber energy

d. Vitamin dan mineral

e. Gas

f. Solidifying agents

Gelatin

Agar-agar

2. Tekanan osmose

3. Derajat keasaman (pH)

4. Temperature

5. Sterilisitas

Penggolongan media

1. Berdasarkan jenisnya dibagi menjadi dua, yaitu;

a. Media Hidup

Terutama digunakan untuk menanam/mengisolasi virus, di samping itu sering

pula media hidup digunakan untuk mengetahui sifat-sifat tertentu dari bakteri

misalanya: untuk mengetahui jenis Escherichia coli yang patogen digunakan

tikus putih yang berumur 3-7 hari. Kebanyakan virus hanya dapat ditanam pada

bagian tertentu dari binatang, misalnya: ginjal kera, embryo ayam, dll

b. Media buatan

Adalah media yang dibuat, berasal dari kumpulan zat-zat tertentu (organik dan

anorganik). Untuk masing-masing bakteri membutuhkan susunan media yang

berbeda-beda.

2. Berdasarkan konsistensinya dikenal adanya :

a. Media padat (datar, padat miring, dan tegak)

b. Media setengah padat (semi solid)

Misalnya : SSS (semi solid sucrose medium), MIO (motility indol ornithine).

c. Media cair (ex: media gula-gula, media kaldu, kaldu pepton, kaldu darah)

3. Menurut isi dari media

a. Media basal

- Media basal padat : kaldu agar, TSA (tryptone soy agar)

- Media basal cair : air pepton,kaldu pepton

b. Media campuran

4. Berdasarkan tingkatannya dibedakan menjadi :

a. Media sederhana

Hanya mengandung zat-zat kimia yang sederhana, misalnya :

- Media larutan alkali pepton

- Media gula-gula

b. Media kaya

Mengandung zat-zat kimia sederhana dan zat organik tingkat tinggi seperti :

Serum, darah dan telur.

5. Menurut penggunaannya dapat digolongkan menjadi :

a. Media kaya

Digunakan untuk mendapatkan pertumbuhan bakteri yang tidak dapat tumbuh

dalam media sederhana (ex: Gonococcus, Pneumococcus dll).

Contoh : media agar darah, agar coklat, kaldu darah

b. Media ekslusif

Media ini dibuat khusus untuk bakteri tertentu, dapat berupa :

1. Membuat pH sangat alkalis :

- Media cair alkali pepton

- TCBS untuk isolasi Vibrio cholera

2. Menambahkan antibiotik tertentu :

- Chloramphenicol untuk jamur Sabourraud

- Kanamycine untuk bakteri anaerob Brucella agar darah

c. Media selektif

Media ini mempunyai susunan sedemikian rupa, sehingga kuman yang dicari

akan tumbuh dengan koloni yang khas.

Contoh : media tellurit yang digunakan untuk isolasi Corynebacterium

diphteriae, dimana koloni difteri akan berwarna hitam.

d. Media pembiakan

Media ini digunakan bila dalam suatu material, kuman yang dicari jumlahnya

sedikit dan atau terdapat kuman-kuman lain dalam jumlah besar. Oleh karena itu

material perlu dimasukkan ke dalam media pembiakan, agar kuman yang dicari

dapat tumbuh subur, sedang kuman yang lain akan terhambat pertumbuhannya.

Contoh :

- media SC (selenite Cystein) broth yang digunakan sebagai media

penyubur untuk salmonella,

- media alkali pepton cair yang digunakan sebagai media penyubur untuk

vibrio

e. Media untuk mengetahui sifat biokimiawi bakteri terhadap berbagai

macam zat

1. Media gula-gula

Contoh : glukosa, maltosa, laktosa, sakarosa, manitol, xylose dll

Yang perlu diamati apakah bakteri tersebut :

- Memecah gula-gula menjadi asam dan gas

- Memecah gula-gula hanya menghasilkan asam tanpa gas

- Tidak memecah gula-gula

2. Media darah

Dalam media ini dipelajari sifat-sifat bakteri terhadap darah,apakah bakteri

tersebut :

- Menghemolisa darah (-streptococcus)

- Hemodigesh terhadap darah (- streptococcus)

- Tidak berpengaruh terhadap darah (- streptococcus)

3. Media yang dapat digunakan mempelajari berbagai sifat bakteri, contoh :

a. KIA (Kliger Iron Agar)

Dalam media ini (bentuknya miring) di samping mempelajari reaksi

bakteri terhadap kmponen penyusun media juga diperhatikan adanya

produksi asam atau perubahan warna dari merah ke kuning, baik pada

daerah yang miring (slant) ataupun tusukan (butt). Dengan media KIA

dapat dipelajari;

Reaksi bakteri terhadap gula-gula (lactose dan dextrose) apakah bakteri

tersebut:

Menghasilkan asam dan gas

Tidak memecah kedua gula tersebut

Kemampuan bakteri membentuk H2S

Adanya ferri ammonium sulfat dalam media ini maka bila kuman

tersebut membentuk H2S akan diikat sebagai Ferri sulfid yang akan

terlihat berwarna hitam.

b. TSI (Triple Sugar Iron)

Prinsipnya media ini hampir sama dengan KI-Agar hanya perbedaan

pokok adalah dalam media TSI mengandung tiga macam gula yakni:

Dextrose, Lactose, dan Sucrose

c. SSS (Semi Solid Sucrose)

Dalam media ini dapat dipelajari:

Motility (pergerakan bakteri)

Reaksi bakteri terhadap sucrose

Di samping itu bila sucrose diganti dengan gula yang lain ( yang

diperlukan) maka dapat diketahui kelakuan bakteri terhadap gula

tersebut.

d. LIA (Lysin Iron Agar)

Dalam media ini dapat dilihat kelakuan bakteri terhadap:

- L.Lysine

- Kemampuan membentuk H2S

e. MIO (Manitol Indol Ornithine)

Dalam medium ini dipelajari :

- Pergerakan bakteri

- Kemampuan bakteri menghasilkan Indol

- Reaksi pemecahan ornithine

f. Media agar

Contoh:media agar padat miring

Disamping itu dewasa ini untuk menyimpan bakteri dalam jangka

waktu yang lama (juga virus), dapat ditempuh dengan menyimpan

bakteri pada suhu kira-kira -60oC (minus 60

oC).

Secara garis besar dan dipandang dari segi praktis, maka laboratorium Mikrobiologi membagi

media yang dipakai sebagai berikut:

1. Media transport

A. BGS (Buffered Glycerol Saline)

B. Cary dan Blair transport medium

C. Amies transport medium

D. Alkaline pepton water (air pepton alkalis)

E. Stuart transport medium

F. Kaldu pepton

2. Media untuk isolasi:

A. Kultur umum

1) Agar darah (untuk kultur dan angka kuman)

2) Agar coklat

3) DCLS (Deoxycholate Citrate Lactose Sucrose agar)

4) Media Tellurit

5) Media untuk pertusis (Bordet Gengou Agar)

6) Thayer Martin Medium

7) Mc.Conkey Agar

B. Penanaman Mycobacterium tuberculosa

Loewenstein medium

C. Penanaman bakteri anaerob

1) Brucella Agar Darah

2) Brucella Agar darah dengan kanamycin/antibiotik lain

3) Agar darah

4) Thioglycolat

5) Thioglycolat dengan antibiotik

D. Leptospira

Fletchers medium

E. Bagian Mikologi

Sabouraud

Sabouraud dengan chloramphenicol

F. Enterobacter

1) DCLS

2) TCBS

3) Mc.Conkey Agar

3. Enriched media (media penyubur)

A. Selenite Cystein Broth

B. Larutan alkali pepton

C. Kaldu darah

D. Thioglycolat

E. Gall kultur

4. Media untuk sensitivitas test

A. Mueller Hinton Agar

B. DST Agar

C. Supristol Agar

D. BHI (Brian Heart Infusion)

E. Agar Base

5. Media untuk identifikasi

A. Kultur umum

1) Media gula-gula

2) Deret media komplek untuk identifikasi kuman perut batang gram negatif

B. Enterobacter

1) KIA/TSI Agar

2) SSS

3) LIA

4) MIO

5) ACE (Acetat Agar)

6) Urea broth

7) MR (Methyl Red)

8) VP (Voges Proskauer)

Beberapa contoh media

Tryptic soy agar (TSA)

Tryptic soy agar, uninoculated

Type: General

Purpose: Cultivation of nonfastidious bacteria

Interpretation: Growth indicates nonfastidious bacteria present

Chocolate agar

Chocolate agar, uninoculated

Type: Enriched

Purpose: Cultivation of fastidious organisms such as Neisseria or

Haemophilussp.

Interpretation: Some organisms grow on chocolate agar that do

not grow on standard media

Thayer-Martin agar

Thayer-Martin agar, uninoculated

Type: Enriched and selective; contains three antibiotics -- colistin

(kills gram-negative coliforms), vancomycin (kills gram-positives),

and nystatin (kills fungi)

Purpose: To select for fastidious organisms, such as N.

gonorrhoeae, in patient samples containing large numbers of

normal flora, such as from the female genital tract

MacConkey (lactose) agar

MacConkey agar, uninoculated

Type: Selective and differential

Purpose: Contains bile salts and crystal violet which selects for

gram-negative enterics, differentiates lactose fermenters from

nonfermenters. Can include sugars other than lactose for further

differentiation (e.g., to differentiate enterohemorrhagic E. coli

(EHEC), which does not ferment sorbitol, from other E. coli types

which do)

Interpretation: Selects for nonfastidious gram-negatives; red

colonies indicate fermentation of lactose, white colonies indicate no

fermentation of lactose

Hektoen agar

Hektoen agar, uninoculated


Purpose: Detects lactose fermentation and H2S production, inhibits

nonenterics

Interpretation: Lactose fermenters are yellow or salmon while

nonfermenters colorless; H2S production causes black precipitate

Mannitol salt agar

Mannitol salt agar, uninoculated


Purpose: Selects for staphylococci, which grow at high salt

concentrations; differentiates Staphylococcus aureus from other

staphylococci

Interpretation: Staphylococcus aureus is yellow (ferments

mannitol), other staphylococci are white

Sheep blood agar

Sheep blood agar, uninoculated

Type: Differential and enriched

Purpose: Determine types of hemolysis (i.e., , , ) Interpretation: , partial clearing, green or brownish ring; , wide zone of clearing; , no clearing, nonhemolytic

Salmonella typhi Tube Indole = Negative

TSI slant = Alkaline / Acid, no gas production and

very weak hydrogen disulfide production

LIA slant = Lysine decarboxylase positive,

deaminase negative

MIO agar = Motility negative, ornithine

decarboxylase negative

Urea slant = Urease negative

Tube TSI slant LIA slant MIO Urea slant

Indole

TCBS untuk Vibrio cholera

Vibrio cholerae : Tumbuh

sebagai koloni berwarna kuning

Vibrio parahaemolyticus :

Tumbuh sebagai koloni

berwarna hijau

Staphylococcus aureus : Tidak

tumbuh

SS (Salmonella Shigela agar)

Salmonella typhi: Koloni tak berwarna dengan bagian

tengah berwarna hitam

Escherichia coli: Koloni berwarna merah muda

Citrat Agar

Citrat (+) : warna biru (Klebsiella pneumonia dan Proteus

mirabilis)

Citrat (-) : warna hijau (E. coli dan Shigella dysentriae)

KIA

MR (methyl red)

If the pH indicator (methyl red) is added to an aliquot of the

culture broth and the pH is below 4.4, a red color will appear

(tube on the left). If the MR turns yellow, the pH is above 6.0

and the mixed acid fermentation pathway has not been utilized

(tube on the right)

VP (Voges-Proskauer)

If the culture is positive for acetoin, it will turn brownish-red to pink (tube on the left). If the culture is negative for acetoin, it will turn brownish-green to yellow (tube on the left)

Tugas mahasiswa :

1. Amati dan gambarlah alat dan media yang ada dalam demonstrasi (warna gambar sesuai

dengan asli)!

2. Tuliskan fungsi dari masing-masing alat dan media tersebut !

3. Buat laporan praktikum masing-masing kelompok satu laporan dengan ketentuan sebagai

berikut :

Ditulis di folio bergaris (tulis tangan)

Terdiri dari :

o Judul praktikum

o Tujuan praktikum

o Dasar teori

o Alat dan bahan

o Hasil pengamatan

o Pembahasan

o Kesimpulan dan

o Daftar pustaka

Laporan dikumpulkan paling lambat seminggu setelah pelaksanaan praktikum.

Pemeriksaan Air Minum Secara Bakteriologis

A. Syarat kualitas air minum

Dari segi kualitas, air minum harus memenuhi persyaratan fisika, kimia, bakteriologis dan

radioaktif. Di Indonesia syarat kualitas air minum berdasarkan Kepmenkes RI adalah

sebagai berikut:

a. Syarat Bakteriologis

Adapun persyaratan bakteriologis air minum ditentukan oleh ada tidaknya

mikroorganisme patogen. Air minum harus bebas dari bakteri patogen karena bakteri

patogen dapat menimbulkan penyakit. Bakteri patogen biasanya berasal dari

kontaminasi tinja. Air minum tidak boleh mengandung E. coli (fecal coli) dalam 100 ml

air yang dianalisis. Kadar yang diisyaratkan dan tidak boleh dilampaui adalah sebagai

berikut:

Tabel 1. Syarat Bakteriologis Air Minum

No

Parameter Satuan Kadar maksimum

yang

diperbolehkan

1

2

3

Air Minum

E.coli atau fecal coli

Air yang masuk

sistem distribusi


Total Bakteri Coliform

Air pada sistem

distribusi


Total Bakteri Coliform

Jumlah per 100 ml

sampel

Jumlah per 100 ml

sampel

Jumlah per 100 ml

sampel

Jumlah per 100 ml

sampel

Jumlah per 100 ml

sampel

0

0

0

0

0

Sumber: Kepmenkes No.907/Menkes/SK/VII/2002 tentang persyaratan kualitas air minum

b. Syarat Fisik

Syarat fisik air minum adalah air minum tidak boleh berbau, tidak boleh berasa,

tidak boleh berwarna, dan jernih. Kadar yang diisyaratkan dan tidak boleh dilampaui

adalah sebagai berikut:

Tabel 2. Syarat Fisik Air Minum

Parameter Satuan Kadar maksimum yang

diperbolehkan

Keterangan

Warna

Rasa dan bau

Temperatur

Kekeruhan

TCU

-

0C

NTU

15

-

suhu udara 30C

5

Tidak berbau

dan berasa

Sumber: Kepmenkes No.907/Menkes/SK/VII/2002 tentang persyaratan kualitas air minum

c. Syarat Radioaktivitas

Syarat radioaktivitas air minum adalah air minum tidak boleh tercemar bahan-bahan

buangan radioaktif karena senyawa radioaktif yang memancarkan radiasi alfa () dan

beta () dapat membahayakan kesehatan manusia. Kadar yang diisyaratkan dan tidak

boleh dilampaui:

Tabel 3. Syarat Radioaktivitas Air Minum


diperbolehkan

Gross alpha activity

Gross beta activity

(Bq/liter)

(Bq/liter)

0,1

1 Sumber: Kepmenkes No.907/Menkes/SK/VII/2002 tentang persyaratan kualitas air minum

d. Syarat Kimia

Syarat kimia air minum yaitu air minum tidak boleh mengandung zat-zat yang

berbahaya dan beracun. Kadar yang diisyaratkan dan tidak boleh dilampaui oleh bahan

kimia yang kemungkinan dapat menimbulkan keluhan pada konsumen sebagai berikut:

Tabel 4. Syarat Kimia Air Minum Berdasarkan Bahan Anorganik


diperbolehkan

Ammonia

Alumunium

Klorida

Tembaga

Kesadahan

Hidrogen Sulfida

Besi

Mangan

pH

Sodium

Sulfat

Total zat padat terlarut

Seng

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

mg/l

1,5

0,2

250

1

500

0,05

0,3

0,1

6,5-8,5

200

250

1000

3 Sumber: Kepmenkes No.907/Menkes/SK/VII/2002 tentang persyaratan kualitas air minum

B. Pemeriksaan air minum secara bakteriologis

1. Standar Air Minum

Standar air minum yang dipakai adalah dari WHO (Edisi III thn 1971). Semua sampel

tidak boleh mengandung E. coli dan sebaliknya juga bebas dari bakteri Coliform. Standar

WHO tersebut adalah: (1) Dalam setiap tahun 95% dari sampel-sampel tidak boleh

mengandung Coliform dalam 100 ml; (2) Tidak boleh ada sampel yang mengandung E.

coli dalam 100 ml; (3) Tidak boleh ada sampel yang mengandung Coliform lebih dari 10

dalam 100 ml; (4) Tidak boleh ada coliform dalam 100 ml dari dua sampel yang

berurutan.

2. Frekuensi Sampling

Lebih baik sering mengambil sampel dan diperiksa dengan cara yang sederhana daripada

jarang mengambil sampel walaupun cara pemeriksaannya lebih lengkap. Pengambilan

sampel perlu ditingkatkan pada keadaan hujan deras terus-menerus, sangat panas,

kecepatan aliran berkurang, angin kencang, dan angin yang berdebu.

3. Metode Sampling dan Pengirimannya

Pada waktu sampling harus selalu dijaga agar tidak terjadi kontaminasi. Untuk itu

digunakan botol steril yang tertutup (screw cup) yang dibalut dengan celophan sebelum

diotoklaf. Bila sampel yang akan diambil adalah air yang telah diklorinasi, botol diberi

sedikit larutan Na2S2O3 misalnya 0,1 ml dari 3% Na2S2O3 tiap 100 ml air sebelum

disterilkan.

4. Pengujian Bakteriologis dari Air Minum

Pengujian bakteriologis terutama berhubungan dengan kesehatan konsumen dan

meniadakan bakteri patogen untuk air minum. Karena kuman patogen biasanya ada dalam

jumlah kecil, maka tidak sesuai bila yang digunakan sebagai standar untuk pengujiian

adalah ada atau tidaknya kuman patogen dalam air. Oleh karena itu adanya bakteri yang

berasal dari faeces dipakai sebagai indikator adanya kuman patogen dari kuman perut.

Kuman patogen dapat berasal dari manusia, binatang (piaraan atau liar), dan burung.

Walaupun demikian tidak dapat diasumsikan bahwa air dari persediaan yang tertutup

untuk pabrik (diisolasi) dan distok akan bebas dari kuman perut, walaupun biasanya

derajat kontaminasinya jauh berkurang. Yang biasa digunakan sebagai indikator dari

polusi faeces adalah E. coli, Streptococcus faecalis, Clostridium perfingens, dan virus

perut. Pemeriksaan bakteriologis air minum terdiri dari:

a. Pemeriksaan Kualitatif

Pemeriksaan ini mempunyai langkah-langkah sebagai berikut: 1) Uji

Presumptif (Presumptive Coliform Count), uji untuk mengetahui angka terkaan

tertinggi (Most Probable Number) kuman Colilform tiap 100 ml contoh air. Ada 2

metode yaitu; a) metode 155, digunakan bila contoh air yang akan diperiksa tampak

cukup jernih; b) metode 333, digunakan bila contoh air yang akan diperiksa tampak

cukup keruh; 2) Uji Eijkman (Differential Coliform Test), uji ini untuk mengetahui

angka terkaan tertinggi (Most Probable Number) kuman E. coli tiap 100 ml contoh

air; 3) Completed Test, uji ini dilakukan untuk menegakkan diagnosa akhir kuman

yang ditemukan pada Differential Coliform Test.

1) Uji Presumtif (Presumptive Coliform Count)/Metode 333

Pada metode ini terdapat tiga kelompok tabung reaksi yang berisi medium

cair laktosa atau medium cair Mac. Conkey modifikasi dan tabung Durham (tabung

kecil yang dimasukkan ke dalam tabung reaksi dengan mulut tabung menghadap ke

bawah). Kelompok pertama: terdiri dari 3 tabung reaksi dan ke dalam masing-masing

tabung reaksi yang telah berisi 10 ml medium, ditambahkan 10 ml contoh air.

Kelompok kedua: terdiri dari 3 tabung reaksi dan ke dalam masing-masing tabung

reaksi yang telah berisi 1 ml medium, ditambahkan 1 ml contoh air. Kelompok

ketiga: terdiri dari 3 tabung reaksi dan ke dalam masing-masing tabung reaksi yang

telah berisi 0,1 ml medium, ditambahkan 0,1 ml contoh air. Semua tabung reaksi

tersebut diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Bila tidak terdapat cukup gas

(

Biakan tiap tabung reaksi yang presumtif positif ditanam pada tabung reaksi

yang berisi medium cair Mac Conkey modifikasi dan tabung Durham. Kemudian

diinkubasi pada suhu 44oC selama 24 jam. Bila terdapat gas, dinyatakan positif dan

dianggap mengandung E. coli. Kemudian dicatat banyaknya tabung yang positif dari

masing-masing kelompok. Menggunakan tabel Mc Crady untuk mengetahui Most

Probable Number (MPN) kuman E. coli tiap 100 ml contoh air.

3) Completed Test

Biakan dalam tiap tabung pada nomor 2 yang positif, ditanam secara goresan

pada lempeng agar Eosin Methylen Blue (EMB). Kemudian diinkubasi pada suhu

37oC selama 24 jam. Koloni kuman E. coli pada medium agar EMB menunjukkan

gambaran metallic sheen. Terhadap koloni ini dilakukan penanaman secara goresan

pada lempeng agar nutrien. Setelah diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam,

lakukanlah pewarnaan gram terhadap kuman yang tumbuh. Bila kuman yang

diperiksa berbentuk batang gram negatif dan tidak membentuk spora, dikatakan

completed test positif.

b. Pemeriksaan Kuantitatif

Pada pemeriksaan ini dilakukan perhitungan terhadap semua kuman yang

tumbuh dari sejumlah contoh air yang diperiksa. Bila koloni kuman yang tumbuh

begitu banyak, hingga secara makroskopik tidak dapat dihitung, maka dipakai alat

penghitung koloni dari Quebeck.

1) Total Plate Count (TPC)

Satu mililiter contoh air yang tidak diencerkan ditanam pada lempeng agar nutrien

dengan metode tuang. Kemudian diinkubasi pada suhu 37C selama 24 jam.

Kemudian dihitung jumlah koloni kuman yang tumbuh (bila perlu digunakan

Quebeck Colony Counter). Bila koloni yang ditemukan antara 30-300, jumlah

tersebut menyatakan jumlah kuman tiap mililiter contoh air. Bila koloni yang tampak

sukar dihitung secara langsung, dapat digunakan kotak-kotak berarsir pada alat

penghitung koloni ini sebagai pembantu. Kemudian dihitung koloni kuman pada 10

kotak berarsir, kemudian dihitung rata-ratanya. Bila angka tersebut dikalikan luas

permukaan medium, dianggap menyatakan jumlah koloni kuman yang tumbuh pada

medium lempeng agar tersebut dan sekaligus menyatakan banyak kuman dalam

sejumlah volume bahan cair (1 ml contoh air) yang telah ditanam pada medium

lempeng agar itu.

Tabel 5. Persyaratan air minum menurut WHO

MPN Coliform

MPN E. coli

TPC

0/100 ml air

0/100 ml air

100 kuman/ml air

Tabel 6. Persyaratan air minum menurut Menteri Kesehatan RI

MPN Coliform

MPN E. coli

TPC

0/100 ml air

0/100 ml air

200 kuman/ml air

C. Media spesifik pembiakan E. coli

Eosin Metilen Blue

Media ini mengandung zat warna eosin dan metilen blue, juga mengandung laktosa.

Medium ini bisa membedakan kuman yang memfermentasi laktosa dan yang tidak

memfermentasi laktosa. E. coli menimbulkan warna metallic sheen, karena asam yang

dihasilkan akibat fermentasi laktosa akan membuat zat warna eosin dan metilen blue

mengadakan presipitasi dalam permukaan agar. Koloni kuman enterobactericeae yang

tidak memfermentasi laktosa tidak berwarna.

Gambar :

Cara kerja untuk menghitung MPN, uji coliform

Berdasar sifat coliform, maka bakteri ini dapat memfermentasikan laktosa menjadi asam dan gas

yang dideteksi oleh berubahnya warna dan gas dalam tabung durham. Nilai MPN ditentukan

dengan kombinasi jumlah tabung positif (asam dan gas) tiap serinya setelah diinkubasi.

Cara kerja :

1. Sediakan 9 tabung berisi LactoseBroth (9 ml tiap tabung) lengkap dengan tabung durham.

Atur kesembilan tabung menjadi 3 seri (seperti di gambar).

2. Kocok botol yang berisi air sampel.

3. Pindahkan suspensi air sample sebanyak 10 ml ke masing-masing tabung seri pertama,

secara aseptis.

4. Pindahkan suspensi air sampel sebanyak 1 ml ke masing-masing tabung seri kedua, secara

aseptis.

5. Pindahkan suspensi air sampel sebanyak 0,1 ml ke masing-masing tabung seri ketiga,

secara aseptis.

6. Inkubasi semua tabung pada suhu 37 C selama 48 jam.

7. Lihat tabung gas positif (asam dan gas ; harus ada keduanya), lalu hitung tabung positif

untuk tiap seri. Tulis kombinasi tabung positif tiap seri (misal : 3 2 1). Kombinasi angka

tersebut lalu dicocokkan dengan tabel MPN untuk seri 3 sehingga diperoleh jumlah mikroba

sebenarnya.

Tabel 7. MPN metode 333

Contoh :

Didapatkan kombinasi jumlah tabung positif : 312 maka jumlah bakteri coliform adalah 120 sel/100 ml.

Didapatkan kombinasi jumlah tabung positif : 330 maka jumlah bakteri coliform adalah 240 sel/100 ml.

Tugas mahasiswa :

1. Masing-masing kelompok membawa sampel air minum yang akan diperiksa !

2. Lakukan langkah-langkah seperti petunjuk dan amati !

3. Gambarlah alat dan media yang ada dalam demonstrasi (warna gambar sesuai dengan

asli)!

4. Buat laporan praktikum masing-masing kelompok satu laporan dengan ketentuan sebagai

berikut :

Ditulis di folio bergaris (tulis tangan)

Terdiri dari :

o Judul praktikum

o Tujuan praktikum

o Dasar teori

o Alat dan bahan

o Hasil pengamatan

o Pembahasan

o Kesimpulan dan

o Daftar pustaka

Laporan dikumpulkan paling lambat seminggu setelah pelaksanaan praktikum

alat mikrobiologi

Documents